建立小鼠异位心脏移植模型

目的:建立小鼠腹腔异位心脏移植模型.方法:选用建康C57近交系小鼠和BALB/c近交系小鼠,参考大鼠心脏移植Ono式模型,并加以改良.同系移植组(n=20)供、受体均采用BALB/c小鼠;同种异品系移植组(n=20)供体为C57近交系小鼠,受体为BALB/c近交系小鼠.结果:成功建立了小鼠腹腔异位心脏移植模型,供心热缺血时间为(0.9±0.05)min,冷缺血时间为(34.8±0.7)min,手术成功率为90%.同系移植组小鼠心脏移植物获得长期存活(＞100 d);同种异品系移植组小鼠心脏移植物存活期为(7.5±0.1)d.结论:提高供心的摘取技术及受体的血管吻合技术是手术成功的关键.     

连续缝合间断打结吻合动脉在小鼠心脏移植中的应用

 目的  应用连续缝合间断打结法吻合动脉建立小鼠心脏移植模型。方法  近交系C57BL／6j (H-2b)、BALB／c (H-2d)小鼠各30只,建立小鼠腹部心脏移植模型 (C57BL／6j→BALB/c),连续缝合间断打结法端侧吻合供体升主动脉和受体腹主动脉;一针后壁先缝法连续吻合供体肺动脉和受体下腔静脉。观察移植心脏搏动持续时间及受体生存时间。结果  手术成功率90%(27/30),总手术时间 (91.77±6.70)min,动脉吻合时间 (24.63±1.67)min,静脉吻合时间 (15.17±1.80)min。供心中位存活时间8 天,病理组织学示典型排斥反应。结论  应用连续缝合间断打结法吻合动脉降低了小鼠心脏移植的手术难度,效果可靠,值得推广。     

小鼠异位心脏移植模型的建立

目的为方便现代移植免疫学研究,我们建立了小鼠异位心脏移植模型,为今后的器官移植研究打下基础.方法以C57小鼠为受体,Balb/c小鼠为供体,参照Ono法并加以改良,将供体升主动脉、肺动脉与受体腹主动脉和下腔静脉行端侧连续吻合. 结果正式试验25次,4例在72h以内死亡,其余21例均长期存活,手术成功率为84%. 结论在熟练掌握显微外科技术的基础上,处理好心脏移植的5个关键步骤,小鼠异位心脏移植模型即可顺利建立.     

小鼠颈部异位心脏移植模型的初步探索

目的 探讨初学者使用袖套法建立小鼠颈部异位心脏移植模型的技术要点与难点。方法 第1阶段选用C57BL/6小鼠随机分为供、受体,完成手术建模。术后供心复跳,小鼠活动正常,持续3天以上视为手术成功,3天内供心停跳或小鼠死亡视为手术失败,记录失败原因。第2阶段分为同系组(C57BL/6小鼠为供、受体)与模型组(BALB/c小鼠为供体、C57BL/6小鼠为受体),术后每天观察供心活动状态记录移植物存活时间(n=9);术后第7天移植心脏取材固定,HE染色,记录供心排斥反应病理分级(n=9)。结果 第1阶段解决了麻醉意外、手术操作不当、血管套管外翻失败、供心结扎口出血、静脉连接处淤血、环境温度过低和术后感染等问题后成功建模;第2阶段模型组较同系组移植物生存期明显缩短(P<0.01),排斥反应病理分级显著升高(P<0.01),模型组移植物心肌细胞损伤、间质水肿、出血,大量炎性细胞浸润,呈中到重度急性排斥反应表现。结论 使用袖套法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,省去了血管吻合这一技术难点,大大降低手术难度,其中0.4mm×0.5mm、0.8mm×1.0mm套管的选用值得推广与学习。     

近交系小鼠线粒体DNA多态性的研究

目的　分析BALB/c等八个近交系小鼠线粒体DNA(mtDNA)的多态性 ,探讨近交系小鼠的遗传监测方法。方法　PCR -RFLP技术 ,即PCR技术结合限制性内切酶片段长度多态分析 (restrictionfragmentlengthPolymorphism ,RFLP)。结果　mtDNAD -Loop、tR NAIle GIN Met、ND3基因片段经HaeⅢ、HinfⅠ、EcoRV、HindⅢ、HpaⅠ、BamHⅠ、ApaⅠ、NdeⅡ、XhoⅠ、XbaⅠ、AluⅠ、RsaⅠ、StuⅠ、DraⅠ、AvaⅠ、HaeⅡ 16种内切酶分别消化后 ,BALB/c、C3H、C57BL/ 6J、T739、DBA/ 2、TA2、6 15、BALB/c -nu/nu等小鼠均表现出相同的酶切格局 ,未发现多态性。结论　BALB/c、C3H、C57BL/ 6J、T739、DBA/ 2、TA2、6 15、BALB/c -nu/nu等近交系小鼠遗传背景较为狭窄 ,不同品系小鼠间遗传背景的差异远远低于动物种属间的差异     

小鼠腹部心脏移植模型的建立及技术改进

目的:探讨小鼠腹部心脏移植模型的建立及技术改进。方法:SPF级近交系雄性BALB/c、C57小鼠各50只,体重均在20-30g,C57小鼠作为供体,BALB/c小鼠为受体,利用改进方法行供体升主动脉与受体腹主动脉,供体肺动脉与受体下腔静脉吻合术建立小鼠腹部心脏移植模型,术后观察移植心脏的存活时间和急性排斥反应情况。结果:手术成功率80%,总手术时间(90±10)min;受体手术时间(72±3)min;动脉吻合时间(21.5±2.5)min;静脉吻合时间(20.5±5.5)min。移植术后未用任何免疫抑制剂,小鼠供心存活时间为(7.9±0.7)d,供心停跳后,移植心脏病理排斥反应分级为Ⅱ-Ⅲ级。结论:改进的腹部心脏移植方法简单,手术时间短,手术成功率高。     

非T细胞来源细胞因子在小鼠心脏移植急性排斥反应模型中的表达

目的研究急性排斥反应性细胞因子在小鼠心脏移植中的表达状况,进一步阐明器官移植急性排斥反应的复杂发生机制。方法采用C57BL/6和Balb/c近交系小鼠,建立小鼠腹腔异位心脏移植模型。随机分为Balb/c-Balb/c同基因对照组(A组)和C57BL/6-Balb/c急性排斥反应组(B组)两组,每组26只。分别于移植术后1、3、5、7 d各处死5只小鼠留取移植心脏标本,采用RT-PCR及W estern印迹方法动态检测组织中IL-15、IL-2、TNF-α及IFN-γ的表达状况,同时行HE染色检测。另外,A、B两组各保留6只小鼠设为亚组,观察移植心脏存活时间。结果A组移植心均获长期存活(>100 d),B组移植心存活时间为8.0 d±0.9 d(t=251.95,P<0.01)。A组各个时间点移植心均未发现排斥现象,B组术后第3天开始出现排斥反应。A组各时间点IL-15 mRNA与TNF-αmRNA呈弱表达,IL-2 mRNA与IFN-γmRNA无表达。B组IL-15 mRNA、TNF-αmRNA、IL-2 mRNA及IFN-γmRNA均明显升高,于第5天达到高峰。A组各时间点可见IL-15、TNF-α、IFN-γ和IL-2蛋白的低水平表达;B组IL-15与IL-2自术后第3天始、TNF-α与IFN-γ自术后第1天始,蛋白表达水平开始升高。结论多种细胞因子,包括非T细胞来源细胞因子,参与了同种异体急性排斥反应的发生。     

受体小鼠诱导一氧化碳延长同种移植心存活时间实验研究

目的 观察受体小鼠诱导一氧化碳(CO)对同种移植心存活时间的影响,并探讨其可能的机制.方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型(C57BL/6→Balb/c小鼠).受体小鼠自移植前1 d至移植后第6天(MC1周组)或至第13天(MC2周组)以二氯甲烷(MC)100 mg/kg体质量灌胃,或以同体积不含MC的橄榄油灌胃(Tx组).观测移植心存活时间,于移植后第6、10天检测受体血清TNF-α、IL-10的含量和移植心肌TNF-α、IL-10 mRNA 的表达及病理学改变.结果 受体以MC灌胃后血液中碳氧血红蛋白(COHb)浓度在3 h达到峰值;与Tx组比较,受体诱导CO(MC组)可以明显延长移植心存活时间,差异有统计学意义(P0.05).结论 受体小鼠诱导CO明显延长同种移植心的存活时间,其主要机制可能与CO降低受体血清TNF-α含量和移植心肌TNF-α mRNA表达有关.     

同种异体近交系小鼠原位气管移植模型的建立

目的:建立近交系小鼠同种异体原位气管移植模型.方法:供受体体质量配对后,C57BL/6 和BALB/c小鼠随机分为2组,每组各10对,A组为C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)组,B组BALB/c(供体) →BALB/c(受体)组,昆明种小鼠10对作为C组即KM(供体) →KM(受体)组. 利用颈前肌肉及周围组织被覆移植气管提供血供建立同种异体小鼠原位气管移植模型. 使用HE染色以及扫描电镜对同种异体小鼠原位气管移植模型进行评估,观察比较上皮积分、淋巴细胞计数以及无核软骨细胞/全部软骨细胞等指标.结果:A, B组全部存活,C组存活6只. A, C组移植气管均发生一定程度的排斥反应,B组无排斥反应发生. A, B, C三组上皮积分分别为: 1.094±0.120分,2.872±0.059分及0.995±0.444分;无核软骨细胞数/骨细胞总数比值分别为:(27.22±1.09)%, (10.60±1.01)% 及(31.40±6.43)%;淋巴细胞计数分别(20.18±1.31)个/HPF,≤5个/HPF及(22.55±4.87)个/HPF. A, B组及C,B组各项指标相比均有统计学意义,而A,C组相比则差异无统计学意义;且C组各数值离散程度均大于A组.结论:成功建立了C57BL/6(供体) → BALB/c(受体)小鼠原位气管移植模型. 近交系及封闭群模型均能反应移植气管的各种病理生理变化,但封闭群模型稳定性较近交系差.     

Balb／c 与 C57 BL／6小鼠海马皮层突触素表达的比较

目的：比较突触素在Balb／c 与C57BL／6小鼠海马各区中表达的差异。方法采用 Balb／c和C57 BL／6小鼠各10只,心脏灌注多聚甲醛固定后取脑,使用冰冻切片机切片,通过免疫组织化学染色,观察突触素在Balb／c和C57BL／6小鼠海马各区中的表达。结果突触素在Balb／c和C57BL／6小鼠海马皮层各区均有广泛表达,突触素在C57BL／6小鼠海马CA1区锥体细胞层中的表达强度高于在Balb／c小鼠相同区域的表达强度（ P＜0.05）,在Balb／c小鼠中CA3区锥体细胞层中的表达强度高于在C57BL／6小鼠相同区域的表达强度（P＜0.05）。结论突触素在Balb／c和C57BL／6小鼠海马各区表达的差异可能是其行为学差异的神经解剖学基础。     

Anergic cells induced by the blockade of CD40-CD154 and CD28-B7 costimulatory pathways act as potent immunoregulatory cells in vitro and vivo

Background This study was to evaluate whether anergic cells induced by the blockade of CD40-CD154 and CD28-B7 costimulatory pathways can act as potent immunoregulatory cells in vitro and prolong cardiac allograft survival after adoptive transfer.Methods Anergic cells were induced in vitro by the addition of anti-CD154 and anti-CD80 monoclonal antibodies (mAbs) to primary MLR (mixed lymphocyte reaction) consisting of BALB/c as responder and C3H as stimulator. Anergic cells were added to a newly formed MLR in assessing the regulatory capacity and antigen specificity of anergic cells. The ability of anergic cells to respond to antigen and/or exogenous recombinant mouse interleukin-2 (rmIL-2) was tested. For in vivo studies, anergic cells were intravenously injected into 3.0-Gy γ-irradiated BALB/c mice immediately after heterotopic abdominal cardiac transplantation. To prolong allograft survival, recipient mice injected with anergic cells received rapamycin therapy ［1 mg·day（-1）·kg（-1）］.Results Anergic cells strongly suppressed the proliferation of naǐve BALB/c splenocytes against the original (C3H) stimulator in a dose-dependent manner, but they failed to suppress the proliferation of naǐve BALB/c splenocytes against the third-party （C57BL/6J） stimulator. The anergic state was reversed by both original (C3H) stimulator and additional exogenous IL-2. In in vivo studies, untreated irradiated BALB/c mice rejected C3H cardiac allografts with a mean survival time of (8.6±1.1) days, whereas those injected with the anergic cells rejected the allografts with a mean survival time of (11.8±1.9) days, which was slightly longer than that of the untreated mice. The protocol based on anergic cells injection plus rapamycin therapy could prolong allograft survival significantly ［(29.6±4.4) days］. Conclusions Anergic cells induced by the blockade of CD40-CD154 and CD28-B7 costimulatory pathways can act as potent immunoregulatory cells in vitro, and prolong cardiac allograft survival after adoptive transfer in the presence of rapamycin therapy. This procedure might be clinically useful for prolonging allograft survival if optimal protocols are developed.     

胸腺修饰抑制鼠异体周围神经移植免疫排斥反应

目的:探讨胸腺内注射异基因抗原对异体鼠坐骨神经移植存活的作用。方法:自供体C57BL/6小鼠脾细胞中提取MHC抗原,注入受体Balb/c小鼠胸腺内,二周后移植供体C57BL/6小鼠坐骨神经。同时另设四组对照组,即自体神经移植组、异体神经移植组、冷冻后异体神经移植组、应用免疫抑制剂异体神经移植组。三周后行神经电生理检查、组织学检查、混合淋巴细胞培养及迟发性超敏反应的检测。结果:实验组优于异体神经移植组及应用免疫抑制剂异体神经移植组。结论:胸腺内注射异基因抗原可诱导对异体坐骨神经移植的免疫耐受。     

Induction of specific immunosuppression of cardiac allograft rejection with monoclonal antibodies to CD44, LFA-1 and ICAM-1

In the p~ess of allograft rejechon, the interactionbetween multiple adhesitin molecules Promotes the development Of the inflallnnatory ~on that leads to aliceddestruchon. Ih both aamal and hUInan models of aliced~splantation, the expression of adheSion molecules, including letlkocyte funchon-associated antigen-l (on-l ),intel'Cellular adhesion molecule-l (ICal-l ), vascularcell adhesion molecule~l (VCAM~l) and CD44 over thesurfaCe of the endothelial cells has been shown tO increasedwi al…     

小鼠11个品系20个微卫星基因位点的遗传分析

目的利用PCR对近交系小鼠11个品系的20个微卫星基因座进行遗传检测,为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法.方法用20个微卫星引物对11个品系近交系小鼠的基因组DNA进行PCR扩增.根据MMDBJ数据库信息,已知品系C3H、DBA、BALB/c和C57BL/6的多态性位点大小,由此可推知其他品系C57BL/6-Bg、C57BL/10、TA1、TA2、T739、M615和SCID的多态性位点大小.结果应出现的220条条带中有193条与预期的一致.结论利用这20个微卫星基因位点可以将11个品系的近交系小鼠区分开来,近交系小鼠具有丰富的遗传多样性,这些结果对于近交系小鼠的遗传检测具有重要指导意义.     

Effect of NK cells on GVHD in H-2 haploidentical bone marrow transplantation in mice

Objective To study the effect of natural killer (NK) cells on graft-versus-host disease (GVHD) after H-2 haploidentical bone marrow transplantation (BMT) in mice. Methods Murine model of H-2 haploidentical BMT was established by using Balb/c (H-2d) mouse as recipient, and Balb/c(H-2d)×C57BL/6 (H-2b) (H-2d/b) mouse as donor. Lethally irradiated Balb/c (H-2d) mice were transplanted with the bone marrow cells from Balb/c(H-2d)×C57BL/6(H-2b) (H-2d/b) mice containing donor spleen cells and/or NK cells. GVHD and survival rates were studied by observation of clinical manifestations and pathological changes. ResultsIn the group of bone marrow spleen cells, GVHD was induced in 90% mice; but in the group plus with low amount of NK cells,GVHD was induced in 20% mice; and in the group transplanted with high amount of NK cells, GVHD was induced only in 10% mice. Compared to the group transplanted only with BM plus spleen cells, the incidences of GVHD in the latter two groups decreased significantly (P＜0.01) and the survival rates at different periods of 15, 30, 45 and 60 days increased obviously (P＜0.01 ). Conclusion In mouse H-2 haploidentical BMT, alloreactive NK cells can reduce the incidence of GVHD and increase the survival rate.     

抗独特型抗体对小鼠移植低免疫反应状态的诱导作用

目的：探讨抗独特型抗体对小鼠移植耐受的诱导作用。方法：以C57BL/6小鼠脾细胞免疫BALB/c小鼠制备抗同种异品系抗体（Abl），Abl交联KLH后，免疫BALB/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体（Ab2），以此为移植受体，观察Ab2对小鼠心脏移植耐受的诱导作用。结果：Abl交联KLH和弗氏佐剂免疫可有效地诱导Ab2，与对照组相比，Ab2诱导组的小鼠移植物存活时间明显延长。结论：移植前在受体体内诱导产生以移植物抗原为模拟抗原的Ab2，可以对小鼠特异性低免疫反应状态起到有效的诱导作用。     

环孢霉素和供体脾细胞门静脉接种延长小鼠心脏移植存活

OBJECTIVE: To investigate the effect of portal venous inoculation of donor splenocytes combined with cyclosporin A (CsA) administration on cardiac allograft survival in mice. METHODS: Heterotopic cardiac transplantation between fully allogenic NIH/q and BALB/C strain mice was performed. A modified procedure of neonatal heart-in-ear transplantation, as originally described by Fulmer et al, was adopted. We prepared donor splenocytes from NIH/q or third-party C57BL/6 spleens for BALB/C recipients, which were injected preoperatively via the recipient portal vein or the systemic vein 1 week before the heart-in-ear transplantation. The recipients were subsequently treated with a short course of the immunosuppressive agent, CsA (4 mg/kg starting from 7 d before the operation till 5 d after it). RESULTS: Portal venous inoculation of donor splenocytes combined with CsA significantly prolonged cardiac graft survival (n=6, P<0.05) that reached 31.00+/-3.23 d, and 2 of the 6 allografts survived for more than 35 d. Donor splenocytes injected via the systemic vein or third-party C57BL/6 mice splenocytes injected via the portal vein did not prolong graft survival (P>0.05). CsA alone or portal venous inoculation of donor-specific splenocytes alone also prolonged graft survival (P<0.05), with mean graft survival time of 18.50+/-2.59 d and 16.11+/-1.97 d respectively. CONCLUSION: Combination of portal venous inoculation of donor-specific splenocytes and CsA can prolong murine cardiac allograft survival, which is donor antigen-specific.     

诱导抗独特型抗体抑制小鼠移植物排斥反应

目的 探讨抗独特型诱导对小鼠异位心肌移植排斥反应的影响。 Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备抗同种异品系抗体（Ａｂ１）,Ａｂ１交联ＫＬＨ后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体（Ａｂ２）,作为受体,观察Ａｂ２对小鼠异位心肌组织移植排斥反应的影响。结果 Ａｂ１交联ＫＬＨ和弗氏佐剂免疫可以有效诱导抗独特型抗体（Ａｂ２）,和对照组相比,Ａｂ２诱导组的小鼠移植物的存活时间明显延长（     

诱导免疫耐受抑制小鼠异体坐骨神经移植排斥反应的实验研究

目的 探讨胸腺内注射异基因抗原对异体鼠坐骨神经移植存活的作用。方法 自供体C57BL／6小鼠脾细胞中提取MHC抗原，注入受体Balb/c小鼠胸腺内，2周后移植供体C57BL／6小鼠坐骨神经。同时另设4组对照组，即自体神经移植组，异体神经移植组，冷冻后异体神经移植组，应用免疫抑制剂异体神经移植组；3周后进行神经电生理检查、组织学的检测。结果 实验组优于异体神经移植组及冷冻后异体神经移植组；接近于自体神经移植组及应用免疫抑制剂异体神经移植组。结论 胸腺内注射供体MHC抗原可诱导特异性坐骨神经移植耐受。     

供者NK细胞诱导小鼠MHC半相合骨髓移植的免疫耐受

目的：探讨纯化的供鼠NK细胞加入预处理方案与MHC半相合骨髓移植后免疫耐受的关系。 方法：制备（BALB/c^H-2d×C57BL／6^H-2b）CB6F₁^H-2d/b小鼠为受者,C57BL／6^H-2b的小鼠为供者。70只受者小鼠经致死剂量（9.0 Gy）照射后随机分为7组,每组10只。对照组：分别为单纯照射组、MHC半相合GVHD对照组、MHC半相合骨髓细胞移植组、同基因骨髓细胞移植组。实验组：CB6F₁^H-2d/b小鼠在完成照射后1 h内首先经静脉输注纯化后的MHC半相合供者NK细胞,分为1×106、5×105和2×105／只3个组,在照射后4 h移植MHC半相合骨髓细胞。以血像、体重、生存期和病理组织学等变化为观察指标并做组间比较。结果：①生存期：单纯照射对照组为(5.15±0.66)d,GVHD对照组为(15.80±1.93)d,其他组小鼠生存期均大于30 d。②病理学结果,MHC半相合GVHD对照组出现典型的GVHD病理表现,其他各组均无GVHD病理表现。 结论：在MHC半相合骨髓移植模型上证实,移植前将供鼠的纯化NK细胞加入移植预处理方案,能诱导免疫耐受。