重型再生障碍性贫血患者骨髓Ⅰ型树突细胞亚群的变化

目的　测定重型再生障碍性贫血 (SAA)患者在免疫抑制治疗前、后骨髓中Ⅰ型树突细胞(DC1)亚群 (CD11c CD1a 细胞、CD11c CD83 细胞 )的改变 ,评价CD11c CD83 细胞与Th1细胞、CD3 CD8 细胞及造血功能的相关性 ,探讨DC1在SAA发病机制中的作用。方法　以正常人为对照 ,用单克隆抗体及流式细胞仪检测发病期和恢复期SAA患者骨髓中Th1细胞、CD3 CD8 细胞、CD11c CD1a 细胞、CD11c CD83 细胞百分率及CD11c CD83 细胞 /CD11c CD1a 细胞比值的改变 ;评价CD11c CD83 细胞与Th1细胞、CD3 CD8 细胞及网织红细胞绝对值、中性粒细胞绝对值(ANC)的相关性。结果　正常人骨髓中Th1细胞、CD11c CD1a 细胞、CD11c CD83 细胞百分率及CD11c CD83 细胞 /CD1a CD11c 细胞比值分别为 (0 .4 2± 0 .30 ) %、(0 .38± 0 .2 9) %、(0 .37±0 .32 ) %、1.0 7± 0 .10 ,SAA患者发病期为 (4.87± 0 .5 4 ) %、(1.73± 0 .2 4 ) %、(3.38± 0 .5 6 ) %、2 .2 1±0 .32 ,SAA患者恢复期为 (0 .5 3± 0 .2 2 ) %、(0 .6 1± 0 .2 3) %、(0 .6 5± 0 .2 2 ) %、1.37± 0 .2 5 ;SAA患者发病期Th1细胞、CD11c CD1a 细胞、CD11c CD83 细胞百分率及CD11c CD83 细胞 /CD11c CD1a 细胞比值均显著高于正常对照     

共刺激分子与再生障碍性贫血的相关性研究进展

免疫介导的干/祖细胞破坏是大部分再生障碍性贫血（AA）的病理生理改变.AA患者经免疫抑制剂治疗后其自身造血功能可得到改善,此为异常免疫反应损伤造血干细胞最直接的证据.异基因骨髓移植治疗重型AA须用免疫抑制剂作预处理才能植活,大量体外实验证明,AA患者T淋巴细胞与造血功能衰竭密切相关,在急性AA患者T细胞常被激活,可抑制自身及异体祖细胞集落形成.T淋巴细胞CD40L异常表达,CD28表达增加,Fas抗原表达减少,均提示异常的免疫反应损伤AA的造血干细胞.共刺激分子CD40/CD40L,CD28：细胞毒性T细胞抗原4（CTLA-4）/B7,Fas/Fas与AA的关系日益引起重视.     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞亚群检测

再生障碍性贫血患者外周血Ｔ细胞亚群检测唐晓文邵景章张学光张毅李建勇郑列琳谢炜王爱青再生障碍性贫血（再障）患者对免疫抑制治疗有效以及细胞毒性Ｔ淋巴细胞对造血细胞的体外抑制作用等临床及实验室结果均支持细胞介导的免疫反应在再障发病中所起的作用，然而对Ｔ细胞...     

重型再生障碍性贫血患者淋巴细胞亚群B-7共刺激信号系统的变化

越来越多的证据表明再生障碍性贫血 (AA)尤其是重型再生障碍性贫血 (SAA)的发生、发展与T细胞介导的细胞免疫异常关系密切[1] 。T淋巴细胞的激活需要两个不同的信号 ,第一信号为抗原结合T细胞受体 (TCR) ,第二信号为T细胞上的另一受体与其配体结合 ,即共刺激信号 ,CD2 8/B7共刺激信号系统是其中最重要的一对共刺激信号。我们应用流式细胞术检测 34例SAA患者外周血淋巴细胞共刺激信号CD2 8及其配体CD80 和CD86的表达 ,探讨其在AA发病中的作用 ,观察其与临床治疗效果的关系。对象和方法1　对象　 34例SAA患者为本院血液科住院患者…     

重型再生障碍性贫血患者树突细胞亚群及其与淋巴细胞转录因子T-bet表达的相关性

目的 探讨树突细胞(DC)亚群和淋巴细胞转录因子T-bet、GATA-3表达在获得性重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫失衡中的意义.方法 采用流式细胞术检测29例SAA患者及16名健康人外周血DCI(HLA-DR+Lin-CD11c+)、DC2(HLA-DR+Lin-CD123+)数值及比例,半定量RT-PCR检测外周血T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达,ELISA法检测血浆IFNγ、IL-4水平.结果 SAA初治组、恢复组DC1占外周血单个核细胞比例分别为(0.44±0.24)%、(0.73±0.30)%,明显高于正常对照组[(0.29±0.10)%,P<0.05].三组DC2分别为(0.18±0.14)%、(0.28±0.20)%、(0.29±0.13)%,初治组低于对照组(P<0.05).SAA初治组、恢复组DC1/DC2比值分别为3.45±2.71、2.90±0.95,明显高于对照组(1.15±0.56),初治组与恢复组DC1/DC2比值差异无统计学意义(P>0.05).SAA初治组、恢复组及对照组T-bet的相对表达量分别为0.37±0.07、0.20±0.07、0.17±0.05,初治组明显高于恢复组和对照组(P<0.05).三组中GATA-3的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05).初治组T-bet/GATA-3比值为0.72±0.13,明显高于恢复组(0.33±0.08)和对照组(0.35±0.11).初治组血浆IFNγ/为(50.9±1.1)ng/L,明显高于恢复组[(49.7±0.9)ng/L]和正常对照组[(49.7±0.7)ng/L].T-bet表达与DC1/DC2比值、IFNγ水平呈显著正相关(r=0.445和r=0.402,P<0.01).结论 DC1/DC2和T-bet/GATA-3比值失衡可作为判断SAA患者免疫状态的指标.T-bet的相对表达量与SAA患者的病情有关,病情好转后T-bet/GATA-3恢复平衡.SAA患者DC亚群恢复迟于血常规恢复,因此不可过早停用免疫抑制剂.     

再生障碍性贫血患者外周血树突状细胞亚群分析

目的检测再生障碍性贫血(AA)患者外周血树突状细胞(DCs)亚群,并探讨其意义。方法采用免疫荧光三色标记流式细胞术检测14例AA患者外周血DCs亚群(DC1/CD11c+和DC2/CD123+),并以14例正常人作为对照。结果 AA患者外周血CD11c+DCs百分率为0.353±0.084,比健康对照组0.264±0.087明显增高(P0.05),CD123+DCs百分率为0.187±0.067,与健康对照组的0.140±0.064相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 AA患者外周血中DC1亚群占优势,导致向Th1样免疫反应偏移,可能与AA的发病有关。     

再生障碍性贫血患者T细胞亚群及细胞因子的检测

为了探讨再生障碍性贫血（再障）的免疫发病机制,阐明细胞免疫、细胞因子在再障患者中的变化。本文采用ＡＰＡＡＰ法和ＥＬＩＳＡ分别检测间患者及正常人外周血Ｔ细胞亚群、ＰＢＭＣ经ＰＨＡ培养上清中ＩＬ－２、ＩＬ－３和ＩＦＮγ水平,结果表明,再障患者外周血ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８降低,ＣＤ８升高,ＩＬ－２、ＩＦＮγ水平升高,ＩＬ－３水平降低,相关分析发现ＣＤ８与ＩＬ－３呈负相关,而与ＩＦＮγ呈正相关。据     

再生障碍性贫血患者T细胞亚群及细胞因子的检测

为了探讨再生障碍性贫血(再障)的免疫发病机制,阐明细胞免疫、细胞因子在再障患者中的变化.本文采用APAAP法和ELISA分别检测再障患者及正常人外周血T细胞亚群、PBMC经PHA培养上清中IL-2、IL-3和IFNγ水平.结果表明,再障患者外周血CD3、CD4、CD4/CD8降低,CD8升高;IL-2、IFNγ水平升高,IL-3水平降低.相关分析发现CD8与IL-3呈负相关,而与IFNγ呈正相关.据此认为细胞免疫功能异常及细胞因子网络失调在再障发病中起一定作用.     

再生障碍性贫血患者T细胞亚群检测的临床意义

本研究探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血T细胞亚群的变化及其与AA发病、免疫抑制治疗之间的关系;为AA患者合理选择治疗方案提供依据。以88例临床确诊为AA、并分别接受常规和常规联合免疫抑制治疗的患者为对象,采用三色免疫荧光抗体标记法和流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群及CD4 和CD8 比值,参考正常对照组水平将患者分为比值正常型、比值倒置型和比值超高型3个免疫亚型,分析和比较各亚型与病情、疗效之间的关系。结果表明:CD4 /CD8 比值正常型占39.8%、比值倒置型占44.3%、比值超高型占15.9%。免疫亚型、治疗方法与总有效率的关系为:单独常规治疗时,3个亚型组之间疗效无明显差异;当联合免疫抑制治疗时,比值正常型患者的总有效率与常规治疗相比无显著改变,而比值倒置型及免疫异常型(比值倒置型 比值超高型)患者有效率较同组常规治疗疗效均显著提高(84.2%vs45.5%及82.6%vs42.8%,p值均<0.05),也显著高于比值正常型患者(84.2%及82.6%vs52.6%,p值均<0.05)。结论:大多数AA患者存在严重的CD4 和CD8 比值失调,CD4 /CD8 异常既可表现为降低,也可以是异常增高,AA发病机制与免疫异常有密切相关性;T细胞亚群检测对临床了解病情和发病机制、合理选择治疗方案、提高诊断和治疗水平具有重要价值。     

减低剂量的脐血造血干细胞移植/输注治疗重型再生障碍性贫血21例临床研究

目的观察HLA基因位点不相合的非亲缘脐血造血干细胞移植（简称脐血移植）治疗重型再生障碍性贫血（SAA）的疗效。方法采用3~6个HLA基因位点相合的非亲缘脐血移植/输注治疗重型SAA患者21例。从血缘关系及HLA基因位点、SAA分型、患者体重4个方面进行研究。预处理方案：环磷酰胺50mg·kg^-1·d^-1×2d＋抗人淋巴细胞球蛋白15mg·kg^-1·d^-1/抗胸腺细胞球蛋白3mg·kg^-1·d^-1×5d。应用环孢素A预防移植物抗宿主病（GVHD）。结果5组患者均能达到造血快速重建,总的完全造血重建率达80.98%。根据SAA分型,21例患者中SAA-Ⅰ型16例,15例达到完全造血重建,1例死亡。SAA-Ⅱ型5例,2例完全造血重建,2例部分重建,1例死亡。体重〈60kg的SAA患者13例,11例完全造血重建,2例部分造血重建。体重大于60kg的SAA患者8例,6例完全造血重建,2例死亡。结论脐血移植/输注治疗SAA是一种有效的治疗方法,特别适合于SAA-Ⅰ型的低体重儿童,其配型要求无需十分严格,大体重儿童或成年人应用双份脐血同样可以达到很好的治疗效果。     

20例再生障碍性贫血的细胞因子和粘附分子的表达分析

目的 评价造血微环境中细胞因子对再生障碍性贫血（AA）发病的影响及其临床意义。方法 对20例AA患者及8名正常人用酶联免疫法检测骨髓和外周血中粒细胞集落刺激因子（G－CSF）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）水平；用免疫荧光法检测骨髓和外周血单个核细胞血小板内皮细胞粘附分子（CD31）、淋巴细胞归巢受体（CD44）抗原表达水平。结果 AA组骨髓及外周血G－CSF、TNF－α水平均明显高于正常对照组（P＜0.01)；而CD31、CD44抗原水平却明显低于正常对照组（P＜0.01)。相关分析发现：AA组骨髓及外周血中，G－CSF与外周血白细胞数有髓中粒系比例呈负相关；TNF－α与外周血白细胞数、血小板、血红蛋白及骨髓中粒系比例、红系比例、巨核细胞数均呈负相关；CD31^ 、CD44^ 细胞数与外周血白细胞数、血小板、血红蛋白以及骨髓中粒系比例、红系比例和巨核细胞数呈正相关。结论 造血微环境异常及细胞因子网络失调可能在AA发病中起一定作用。     

再生障碍性贫血患者幼红巨噬细胞黏附蛋白基因表达的探讨

目的:探讨再生障碍性贫血患者治疗前后骨髓和外周血标本单个核细胞中幼红巨噬细胞黏附蛋白(EMP)基因的表达。方法:抽取18例再生障碍性贫血患者治疗前后的骨髓和外周血标本,另选10例健康骨髓捐献者为正常对照组,均分离骨髓和外周血单个核细胞,分别提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测EMP mRNA。结果:再生障碍性贫血患者的骨髓和外周血中EMP表达水平分别显著低于正常对照组(P<0.05),而治疗后的表达显著增高(P<0.05)。结论:EMP mRNA可为再生障碍性贫血的诊断与治疗提供依据。     

慢性乙型肝炎患者自体树突状细胞疫苗回输后的免疫应答

目的　探讨自体乙肝疫苗致敏的树突状细胞 (DC)对慢性乙型肝炎 (CHB)免疫治疗的作用。方法　取患者外周血 2 0ml分离单个核细胞 ,加入重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rGM CSF)和白细胞介素 4 (IL 4 )进行DC体外扩增 ,于培养第 5天加入 5 0 μg/ml乙型肝炎疫苗 ,7天收获细胞。 34例慢性乙肝患者根据年龄和发病时间分为治疗 1、2、3组 ,皮内回输DC。对照组患者注射等量生理盐水 ,均每周 1次 ,连续 8次。于回输DC后 2周检测患者血清乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)含量。结果　培养可得到形态及功能典型的DC ,治疗 1、2、3组患者回输DC后血清HBV DNA拷贝数均显著低于对照组 (P <0 0 1) ,总应答率 5 8 8% (2 0 / 34) ,对照组输注前后没有明显差异 (P >0 0 5 ) ;治疗 1组与 3组相比HBV DNA定量拷贝数降低幅度有显著性差异 (P <0 0 1) ,治疗 1组与 2组、2组与 3组相比无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　经乙型肝炎疫苗致敏的DC回输患者后 ,其血清HBV DNA含量明显降低 ,且降低幅度与感染病毒时间和 /或患者年龄有一定关系。     

二例重型再生障碍性贫血患者血清体外加速正常人CD34+细胞凋亡的研究

目的：了解再生障碍性贫血患者血清中的造血抑制物及其与造血细胞过度凋亡之间的关系。方法：应用甲基纤维素体外培养法，亲和层析法，ＤＮＡ末端标记及流式细胞术分析观察２例重型再生障碍性贫血Ⅰ型（ＳＡＡⅠ）患者血清在体外抑制正常人骨髓造血祖细胞增殖及促进正常人ＣＤ３４＋细胞凋亡的作用。结果：２例患者血清在体外均可明显抑制正常人ＢＦＵＥ及ＣＦＵＧＭ的增殖，这种抑制活性存在于血清ＩｇＧ片段中，为非补体依赖性。患者血清及ＩｇＧ片段在体外均可加速正常人ＣＤ３４＋细胞凋亡，其中ＩｇＧ较血清的促凋亡作用更为显著（Ｐ均＜０．０１）。经研究证实这种ＩｇＧ可特异性吸附于ＣＤ３４＋细胞表面。经甲泼尼龙治疗后的恢复期血清上述作用消失。结论：某些ＳＡＡⅠ患者血清中存在促进ＣＤ３４＋细胞过度凋亡的造血抑制物ＩｇＧ，造血细胞过度凋亡是患者发病机制之一。甲泼尼龙对这类患者疗效显著     

异基因外周血造血干细胞移植治疗急性再生障碍性贫血--一例报告附文献复习

目的探索异基因外周血造血干细胞移植治疗急性再生障碍性贫血(再障)的疗效及其长期造血重建.方法1例急性再障患者,30岁,供者为其胞弟,HLA配型完全相合.动员方案G-CSF250?μg/d×6d.预处理方案环磷酰胺(CTX)50mg·kg-1·d-1×4d,抗胸腺细胞球蛋白(ATG)20mg·kg-1·     

Myeloid dendritic cells in severe aplastic anemia patients exhibit stronger phagocytosis

BackgroundA deeper understanding of the pathogenesis of severe aplastic anemia (SAA) is urgently warranted to achieve better therapeutic effects. The objective of this study was to investigate the phagocytosis of myeloid dendritic cell (mDC) in SAA patients.MethodsMyeloid dendritic cells were induced in vitro from bone marrow mononuclear cells from 26 SAA patients and 12 normal controls (HCs). The phagocytosis of mDCs was detected by flow cytometry using FITC‐Dextran (40KD), and its correlation with the immune status and severity of the disease was analyzed.ResultsThe phagocytosis of mDC from untreated SAA patients was significantly stronger than that from complete remission group and HC group (p < 0.05). There was no statistical difference between the latter two groups (p > 0.05). The phagocytosis of mDC from SAA patients correlated positively with the concentration of interleukin (IL)‐2 (r = 0.389, p < 0.05), and IL‐4 (r = 0.556, p < 0.05), negatively with CD4⁺/CD8⁺ ratio (r = −0.421, p < 0.05). It also had negative correlations with the level of hemoglobin (r = −0.393, p < 0.05), white blood cell (r = −0.436, p < 0.05), platelet (r = −0.431, p < 0.05), and reticulocyte (r = −0.447, p < 0.05). The phagocytosis of mDC does not correlate with the response to IST.ConclusionsThe increased phagocytosis of mDC in untreated SAA patients may contribute to abnormal activation of T helper (Th) and subsequent cytotoxic T lymphocyte (CTL) activation in these patients. It may be involved in the immune pathogenesis of SAA.     

抗淋巴细胞球蛋白联合环孢霉素A治疗重型再生障碍性贫血的临床研究

目的探讨进一步提高重型再生障碍性贫血（ＳＡＡ）疗效的方法。方法采用前瞻性同期对照研究方法,比较抗淋巴细胞球蛋白（ＡＬＧ）单用（ＮＩＳＴ方案）或联合环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）（ＩＳＴ方案）治疗ＳＡＡ的疗效。结果ＩＳＴ方案组不仅疗效（８３７％）显著高于ＮＩＳＴ方案组（５７６％）,且可降低早期死亡率、缩短脱离红细胞输注时间,治疗有效者骨髓ＢＦＵＥ和ＣＦＵＧＭ数量恢复更为良好。结论ＡＬＧ联合ＣｓＡ治疗ＳＡＡ疗效明显优于单用ＡＬＧ,且治疗有效者骨髓造血功能恢复更为完全。     

再生障碍性贫血患者血清对32D细胞凋亡及磷酸化蛋白激酶Cε表达的影响

目的 观察蛋白激酶Cε(PKCε)在再生障碍性贫血(AA)患者血清体外诱导小鼠髓系前体细胞(32D细胞)凋亡中的作用.方法 重型AA(SAA)患者血清、非重型AA(NSAA)患者血清及正常对照者血清分别与小鼠32D细胞孵育,用流式细胞术检测细胞凋亡指数,用蛋白免疫印迹法检测磷酸化PKCε(pPKCε)的表达.结果 血清孵育32D细胞0、12、24、36及48 h,饥饿4 h,SAA组和NSAA组pPKCε表达在24 h上升到最高水平,与正常对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05),血清孵育32D细胞24 h饥饿4 h后,SAA组pPKCε表达水平(0.90±0.10)较NSAA组(0.64±0.08)和正常对照组(0.54±0.08)明显上调(P值均＜0.05),NSAA组较正常对照组pPKCε表达水平也明显增加(P＜0.05),SAA组细胞凋亡率[(4.05±1.05)%]较正常对照组[(2.45±0.51)%]明显增加(P＜0.05),NSAA组[(3.24±0.56)%]较正常对照组无明显增加(P＞0.05).SAA组经同一份血清孵育的细胞的凋亡率与pPKCε表达水平之间有明显相关性(r=0.869,P＜0.05).结论SAA和NSAA患者血清均可诱导32D细胞pPKCε的表达,前者可导致32D细胞凋亡,后者对32D细胞凋亡无明显影响.