黄芪甲苷抑制糖尿病大鼠足细胞凋亡的作用和机制研究

目的探讨黄芪甲苷（AS- IV）抑制糖尿病大鼠足细胞凋亡的作用及其机制,为糖尿病肾病的治疗开辟新途径。方法将体重180~220g健康雄性SD大鼠按配伍法分为正常对照组、糖尿病组和糖尿病AS- IV治疗组,每组10只,链脲霉素（STZ）腹腔注射法建立糖尿病大鼠模型,糖尿病AS- IV治疗组予AS- IV 10mg/（kg·d）治疗,共8周;糖尿病组予等量1%CMC混悬液;正常对照组不予处理。第8周末测量大鼠体重、24h尿白蛋白、血糖、糖化血红蛋白（HbA1c）、ALT、血尿素氮、肌酐水平;PAS、Masson染色,光镜观察肾脏病理变化;肾母细胞瘤基因1（WT-1）免疫组织化学染色观察肾小球足细胞密度变化,TUNEL染色观察足细胞凋亡,real- time PCR及Western blot测大鼠肾皮质凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及其mRNA表达的变化。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠血糖、HbA1c和24h尿白蛋白增高,肾小球足细胞数量减少,系膜增生,足细胞凋亡增加,Bcl-2及其mRNA表达下调,Bax及其mRNA表达上调,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。AS- IV可显著改善糖尿病大鼠蛋白尿,抑制肾小球足细胞数目减少、系膜区增生、足细胞凋亡,上调Bcl-2表达,抑制Bax表达。结论 AS- IV对早期糖尿病大鼠足细胞具有保护作用,可能与其调节凋亡蛋白Bcl-2和Bax,抑制足细胞凋亡相关。     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因的动态表达及抗菌药物干预效应

目的 探讨创伤弧菌（W）脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因Fas mRNA、细胞色素C（CytC）mRNA、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspases）-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的动态表达及头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星的干预效应.方法 制作大鼠W脓毒症模型（W组）和W脓毒症抗菌药物干预模型（AA组）,并设正常对照组（NC组）,同时采用RT-PCR法检测各组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达量的动态变化.结果 W组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA和Bax mRNA的表达量均较NC组增高.而各时点Bcl-2 mRNA表达量均较NC组下降（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12h时肝组织Bcl-2 mRNA表达量及9h时的Caspase-3 mRNA表达量仍高于NC组（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12、16h时的肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,染菌后12、16h时的Bax mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,而染菌后9、12、16h时的Bcl-2 mRNA表达量则较同时点W组增高（均P〈0.05）.结论 外源性、内源性凋亡途径均参与了W脓毒症肝细胞损伤过程;促/抗凋亡调节基因（Bax/Bcl-2）表达失衡可促进肝细胞凋亡;而抗菌药物则可有效抑制肝细胞凋亡,从而维持促/抗凋亡调节基因表达的平衡.     

高糖对小鼠足细胞黏附功能的影响及其机制研究

目的探讨高糖（HG）对体外培养的足细胞黏附功能的影响及其可能机制。方法将条件性永生的小鼠足细胞分为正常糖（NG）组、HG组及甘露醇高渗组,分别用荧光定量法和物理离心法检测足细胞黏附功能;同时应用实时定量PCR法及Western印迹法分别检测足细胞α3、β1整合素mRNA和蛋白表达水平。结果HG组足细胞与基底膜蛋白复合物间的黏附功能较NG组显著下降,且呈时间依赖关系（P〈0.05）;HG组足细胞α3、β1整合素mRNA及蛋白表达水平均较NG组明显下降,呈时间依赖关系（P〈0.05）。结论HG对体外培养的足细胞黏附功能具有明显抑制作用,可能与其下调α3、β1整合素表达水平有关。     

茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用机制的实验研究

目的探讨茉莉酸甲酯诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡的作用机制.方法琼脂糖凝胶电泳检测HepG2细胞凋亡,RT-PCR检测HepG2细胞中Bcl-2、BaxmRNA表达,免疫细胞化学检测HepG2细胞Bcl-2、Bax蛋白表达.结果MeJA作用HepG2细胞48h后：DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显典型＂梯＂状条带;细胞Bcl-2mRNA表达水平明显下降（P〈0.05）而BaxmRNA表达水平明显增高（P〈0.05）;Bcl-2蛋白在胞浆中表达水平明显降低（P〈0.01）而Bax蛋白表达水平显著增加（P〈0.01）.结论茉莉酸甲酯通过降低抑凋亡相关基因Bcl-2mRNA及蛋白的表达,上调促凋亡相关基因BaxmRNA及蛋白的表达,从而诱导HepG2细胞凋亡的发生.     

血管紧张素Ⅱ2型受体对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨激活血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）2型受体（ AT2 R ）对宫颈癌 Hela 细胞生长的影响。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,培养基中加入AngⅡ1型受体阻滞剂氯沙坦及不同浓度的AngⅡ（ A组：1×10-8 mol/L;B组：5×10-8 mol/L;C组：1×10-7 mol/L）激活AT2R,培养12小时、24小时、48小时、72小时;MTS法检测细胞活性,计算不同浓度的AngⅡ的细胞抑制率。实时荧光定量PCR检测B淋巴细胞瘤-2基因（bcl-2）、Bax mRNA水平,Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果激活AT2R后各组细胞活性随着培养时间的延长而降低,高剂量的AngⅡ组细胞活性更低。与对照组相比较,B组、C组Bcl-2 mRNA表达水平均明显下降（P〈0.05,P〈0.01）;C组与A组相比较Bcl-2 mRNA表达水平进一步下降（P〈0.01）。与对照组相比较,A组、B组、C组Bax mRNA表达水平均明显升高（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）;C组与A组相比较Bax mRNA表达水平进一步升高（P〈0.01）。 Western blot结果表明激活AT2R后与对照组相比较,A组、B组、C组Bcl-2蛋白表达水平均明显降低（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）;与A组相比较B组、C组Bcl-2蛋白表达水平进一步降低（P〈0.05,P〈0.01）。与对照组相比较,A组、B组、C组Bax 蛋白表达水平均明显升高（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）;与A组相比较B组、C组Bax蛋白表达水平进一步升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论宫颈癌细胞激活AT2 R后,上调Bax基因表达,同时下调抑Bcl-2基因表达,最终抑制宫颈癌细胞的生长和增殖,诱导其发生凋亡。     

高糖环境对体外培养胰岛细胞凋亡相关基因的调控

目的:观察高浓度葡萄糖对体外培养大鼠胰岛细胞凋亡相关基因的mRNA水平的调控效应.方法:应用自然沉降法和手挑法分离、纯化大鼠胰岛,分别在葡萄糖浓度为5.6 mmol/L(NG组)和25 mmol/L(HG组)的条件下培养1、3、5 d,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测胰岛细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bax mRNA表达.结果:(1)NG组中培养5 d组胰岛细胞Caspase-3 mRNA表达量较培养1 d和3 d组明显增高,但远比HG组低;(2)HG组中培养5 d组胰岛细胞Caspase-3和Bax mRNA水平明显增高,且呈时间-依赖关系.结论:Caspase-3、Bax表达在mRNA水平的上调可能是高糖促使胰岛细胞凋亡的一个重要机制.     

粒细胞集落刺激因子对脑出血Bcl-2、Bax表达的影响

目的 通过探讨粒细胞集落刺激因子（G-CSF）作用于脑出血后凋亡调控基因的变化,评价G-CSF对脑出血细胞凋亡的影响机制.方法 将SD大鼠分为对照（Sham）组、脑出血（ICH）组、干预（CSF）组,每组各25只,后两组分为5个亚组,每亚组5只.采用自体尾动脉血造大鼠脑出血模型,TUNEL法及免疫组织化学法检测凋亡细胞及凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达.结果 ICH组凋亡细胞及Bcl-2、Bax较Sham组均增多（P〈0.01）;CSF组的凋亡细胞、Bax阳性细胞较ICH组均减少（P〈0.01）,Bcl-2阳性细胞增多（P〈0.01）;ICH组TUNEL细胞与Bax/Bcl-2表达呈负相关.结论 G-CSF可能通过控制凋亡调控基因Bax/Bcl-2的比率变化来调节脑出血血肿周围的细胞凋亡,为治疗脑出血提供可靠的分子靶点.     

温肾化痰方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块模型Orai1、 Caspase、Bax、Bcl-2等基因及其相关蛋白表达的影响*

目的观察温肾化痰方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块模型Orai1和Caspase3、Caspase9、Bax及Bcl-2等基因及其相关蛋白表达的影响。方法建立ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块模型，随机分成空白对照组、易损斑块组、阳性对照组、温肾化痰方低、中、高剂量组。13周后麻醉处死小鼠，采用RT-PCR技术检测主动脉平滑肌细胞Orai1、Caspase3、Caspase9、Bax及Bcl-2等基因的表达情况，并采用Western blot法检测主动脉窦Orai1、Caspase3、Caspase9、Bax及Bcl-2等蛋白表达变化。结果与空白对照组相比，易损斑块组Orai1、Caspase3、Caspase9、Bax mRNA及蛋白表达水平明显上升（P＜0.01），而Bcl-2 mRNA及蛋白明显下降（P＜0.01）。与易损斑块组相比，阳性对照组与温肾化痰方各剂量组均能下调上述基因（不包括Bcl-2）mRNA及蛋白表达水平，以及同时能上调Bcl-2的mRNA及蛋白表达，且中药剂量越高，调节效果越明显。与阳性对照组相比，温肾化痰方高剂量组下调Orail、Caspase3、Caspase9、Bax mRNA及蛋白水平以及上调Bcl-2 mRNA及蛋白水平的作用基本一致。这两组小鼠的上述基因及蛋白表达与空白对照组相比，统计无显著性差异。结论温肾化痰方能对应调节相关基因及蛋白表达从而干预易损斑块的形成及进展，进而起到保护心血管的作用。     

红枣色素通过调控miR-29b-3p/MST1表达对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及机制

目的探讨红枣色素对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及其机制。方法设正常对照组(NG)(5 mmol/L D-葡萄糖),高糖处理(HG)组(30 mmol/L D-葡萄糖),HG+红枣色素-低组(30 mmol/L D-葡萄糖+50 mg/L红枣色素)、HG+红枣色素-中组(30 mmol/L D-葡萄糖+150 mg/L红枣色素)、HG+红枣色素-高组(30 mmol/L D-葡萄糖+250 mg/L红枣色素);将miR-NC、miR-29b-3p、anti-miR-NC、anti-miR-29b-3p分别转染至未经任何处理的MPC5细胞中,记为miR-NC组,miR-29b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-29b-3p组;将miR-NC、miR-29b-3p、si-NC、si-蛋白激酶1(MST1)染至单纯30 mmol/L的D-葡萄糖处理的MPC5细胞中,记为HG+miR-NC组,HG+miR-29b-3p组、HG+si-NC组、HG+si-MST1组。将anti-miR-NC、anti-miR-29b-3p转染至30 mmol/L的D-葡萄糖和250 mg/L红枣色素处理的MPC5细胞中,记为HG+红枣色素+anti-miR-NC组、HG+红枣色素+anti-miR-29b-3p组,均采用脂质体法。qRT-PCR检测miR-29b-3p和MST1 mRNA的表达水平;Western Blot检测蛋白表达;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD活性和MDA含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与NG组比较,HG组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著降低,MST1 mRNA的表达水平显著升高,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著降低,Bax、MST1表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05);与HG组比较,不同浓度红枣色素的高糖处理组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平逐渐显著升高,MST1 mRNA的表达水平显著降低,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax、MST1表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示,miR-29b-3p组小鼠足细胞中MST1蛋白的表达水平(0.21±0.03)显著低于miR-NC组(0.42±0.04);anti-miR-29b-3p组小鼠足细胞中MST1蛋白的表达水平(0.87±0.08)显著高于anti-miR-NC组(0.40±0.04),差异均有统计学意义(P0.05)。与HG+miR-NC组比较,HG+miR-29b-3p组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著升高,SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05);与HG+miR-NC组比较,HG+si-MST1组小鼠足细胞SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著升高,Bax、MST1表达水平显著降低,凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。与HG+红枣色素+anti-miR-NC组比较,HG+红枣色素+anti-miR-29b-3p组小鼠足细胞中miR-29b-3p的表达水平显著降低,SOD活性显著降低,MDA含量显著升高,Bcl-2、Nephrin、Podocin表达水平显著降低,Bax、MST1表达水平显著升高,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论红枣色素对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡有保护作用,其机制可能与调控miR-29b-3p/MST1及SOD和MDA活性有关。红枣色素可作为治疗肾损伤的药物,miR-29b-3p、MST1可成为肾损伤治疗的靶点。     

莱菔硫烷对人肝癌HepG-2细胞Bcl-2与Bax基因转录及蛋白表达的影响

目的：研究莱菔硫烷（Sulforaphane,SFN）在体外对HepG-2细胞Bcl-2、Bax基因转录和蛋白表达的影响,探讨SFN诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的机制。方法：不同浓度SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48 h,采用SRB法测定SFN对HepG-2细胞增殖的影响;激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测SFN作用后的细胞凋亡率;Western blot法和RT-PCR法检测SFN在蛋白和mRNA水平上对Bcl-2和Bax表达的影响。结果：SFN对HepG-2细胞的GI50为9.40μmol/L,TGI为26.68μmol/L;10、20、40μmol/L的SFN作用于HepG-2细胞48 h后,激光共聚焦显微镜下呈现典型的凋亡细胞形态,细胞凋亡率分别为（27.42±0.43）%、（46.53±0.35）%和（58.92±0.48）%（P〈0.01）;细胞内Bcl-2蛋白和mRNA表达水平均显著降低（P〈0.01）,而20、40μmol/L的SFN作用后细胞内Bax蛋白和mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）,Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA均随SFN剂量的增加显著降低（P〈0.01）,且变化趋势均呈一定的剂量依赖关系。结论：SFN能抑制HepG-2细胞的增殖,诱导HepG-2细胞凋亡,可在翻译和转录水平下调Bcl-2、上调Bax的表达,这可能是SFN诱导HepG-2细胞凋亡的主要机制之一。     

槲皮素对人卵巢癌细胞-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨槲皮素对人卵巢癌细胞-3(ovarian carcinoma cell,OVCAR-3)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将对数生长期的OVCAR-3细胞随机分为对照组和槲皮素组。对照组细胞给予培养基常规培养,而槲皮素组细胞加入槲皮素(160μmol·L~(-1))。各组细胞培养48 h后,利用噻唑蓝检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖;流式细胞仪检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,RT-PCR检测细胞受体型酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导与转录激活因3(STAT3),B细胞淋巴因子2(Bcl-2),人Bcl-2相关X蛋白(Bax)信使mRNA表达水平。免疫蛋白印记法检测各组OVCAR-3细胞中STAT3,磷酸化受体型酪氨酸激酶2(p-JAK2),磷酸化信号传导与转录激活因3(p-STAT3),Bax,Bcl-2蛋白的变化,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。结果:MTT检测结果显示槲皮素组与对照组相比,人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖率明显下降(P0.05)。流式细胞仪检测显示槲皮素组OVCAR-3细胞凋亡率较对照组明显升高(P0.05)。RT-PCR检测显示槲皮素组与对照组JAK2和STAT3信使mRNA表达水平无明显差异,而槲皮素组Bax信使mRNA水平比对照组明显增高,槲皮素组Bcl-2信使mRNA水平比显著低于对照组。Western blotting检测显示,槲皮素组的JAK2和STAT3蛋白表达与对照组比较,无明显差异(P0.05),而槲皮素组的p-STAT3,p-JAK2和Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组(P0.05),槲皮素组的Bax表达显著高于对照组(P0.05)。Caspase3活性试剂盒检测结果显示,槲皮素组Caspase3活性表达水平显著高于对照组。结论:槲皮素能明显抑制人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖,促进人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活JAK2/STAT3信号传导通路。     

七氟烷后处理对大鼠在体心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的影响

目的研究七氟烷（sevoflurane）后处理对大鼠在体心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法 SD雄性大鼠60只,随机分为5组（n=12）：假手术组（P组）、缺血再灌注组（ischemia-reperfusion,IR组）,小、中、大剂量组（S1、S2、S3组）,建立心肌缺血再灌注模型。光镜下观察各组心肌组织病理变化,检测心肌细胞中Bax、Bcl-2蛋白含量、心肌细胞凋亡指数（AI）。结果与P组相比,IR组、各S组心肌Bax与Bcl-2、AI均显著升高（P〈0.05）,Bcl-2/Bax显著降低（P〈0.05）;与IR组相比,各S组Bax与AI均显著降低（P〈0.05）,Bcl-2与Bcl-2/Bax均显著升高（P〈0.05）;S1组与S3组各指标间无明显差异（P〉0.05）;与S1、S3组相比,S2组Bax与AI均显著降低（P〈0.05）,Bcl-2与Bcl-2/Bax均显著升高（P〈0.05）。结论七氟烷后处理可通过调节Bax与Bcl-2的表达,提高Bcl-2/Bax来发挥心肌保护作用,且中剂量组效果更明显。     

邻苯二甲酸二乙基己酯体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响

【目的】通过对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯（di-2-ethylhexylphthalate,DEHP）染毒,探讨DEHP体外对大鼠卵巢颗粒细胞Bax和Bcl-2基因表达及细胞凋亡的影响。【方法】体外分离和原代培养未成熟大鼠卵巢颗粒细胞,用不同浓度的DEHP（10、50、nnmol／L）染毒24h。荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2基因mRNA表达水平,Weas[ernblot检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】与对照组比较,大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降（P〈0．05）,Bax基因mRNA和蛋F1表达增加（P〈0．05）,同时细胞凋亡率增加（P〈0．05）,呈浓度依赖关系。【结论】DEHP可通过下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达而诱导大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵巢功能。     

柴芩平胃胶囊对反流性胃炎胃粘膜细胞凋亡及调控基因的影响

[目的]观察柴芩平胃胶囊（CQPC）对反流性胃炎模型大鼠胃粘膜细胞凋亡及调控基因的影响.[方法]Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,CQPC高、中、低剂量组（剂量分别为16.66、8.33、4.17g/kg）,小柴胡冲剂组（10g/kg）;除假手术组外,均采用B-Ⅱ式胃部分切除（胃空肠吻合）术复制大鼠反流性残胃炎模型,各组按设计剂量灌胃给药,连续4周;分别采用ELISA、原位杂交、免疫组化方法观察CQPC对胃粘膜细胞凋亡及调控基因p53 mRNA、Bax和Bcl-2表达的影响.[结果]模型组结果显示胆汁反流可引起模型大鼠胃粘膜细胞凋亡增加,野生型p53 mRNA、Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与假手术组比较具有显著性差异（均P＜0.05或P＜0.01）;高、中、低剂量CQPC均可减少胆汁反流引起的细胞凋亡,减少野生型P53 mRNA、Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达（均P＜0.05或P＜0.01）.[结论]柴芩平胃胶囊治疗反流性胃炎的作用机制,可能与减少胃粘膜细胞凋亡,调节各种凋亡调控基因的表达有关.     

抑制细胞周期素依赖性蛋白激酶5对小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)在高糖刺激体外培养小鼠足细胞中的表达及抑制Cdk5表达对高糖诱导足细胞凋亡的影响。方法 (1)体外培养条件性小鼠足细胞,分为正常糖组、甘露醇组、高糖组,高糖组按不同刺激时间分为0、6、12、24、48h5组,应用蛋白质印迹(Western blot)法检测足细胞中Cdk5蛋白表达水平。(2)应用Cdk5miRNA干扰质粒抑制足细胞中Cdk5基因的表达水平。分别设立:NG组(正常糖);HG组(高糖);HG+S组(高糖+Scrambled阴性质粒);HG+C组(高糖+Cdk5miRNA质粒)。以上各组细胞培养48h后,应用流式细胞术和末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)法检测足细胞凋亡水平,Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和分裂型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的蛋白表达水平。结果与正常糖组相比,高糖刺激后,足细胞中Cdk5的蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。Cdk5miRNA干扰质粒能显著抑制足细胞中Cdk5的表达水平。与HG组和HG+S组相比,HG+C组足细胞凋亡率显著降低(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2蛋白表达比率也有明显降低(P<0.05)。结论高糖刺激可以增加足细胞中Cdk5蛋白的表达水平;抑制Cdk5表达可以降低高糖刺激诱导的足细胞凋亡。     

PTEN基因表达对甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞凋亡以及ERK和AKT表达的影响

  目的  探讨PTEN基因表达对甲状腺癌BCPAP细胞和FTC133细胞凋亡以及信号通路蛋白ERK和AKT表达的影响。  方法  BCPAP细胞和FTC133细胞经PTEN-pCMV6转染和si-PTEN RNA干扰后，光镜下观察细胞形态变化，MTT检测细胞活力，Annexin V-FITC和PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot检测Caspase 8、9、12、3、Bax、Bcl-2、ERK和AKT的表达水平，分析PTEN基因的不同表达与甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞凋亡以及信号通路蛋白表达的关系。  结果  与对照组相比较，甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞在PTEN基因过表达时，光镜下均出现细胞变形、体积缩小、核固缩等凋亡改变，细胞活力降低（P < 0.01），细胞凋亡率增加（P < 0.01），凋亡蛋白Caspase 8、9、12、3以及促凋亡蛋白Bax表达量增加（P < 0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达量减低（P < 0.01），ERK和AKT表达量均较对照组减低（P < 0.05），ERK的相对表达量在FTC133细胞的减低程度显著高于BCPAP细胞（P < 0.01），AKT的相对表达量减低程度在BCPAP和FTC133，差异无统计学意义（P > 0.05）；PTEN基因干扰表达减低时，光镜下BCPAP和FTC133细胞数目、细胞形态、体积及细胞核形态变化、细胞活力和细胞凋亡率变化，差异无统计学意义（P > 0.05）；凋亡蛋白Caspase 8、9、12、3以及促凋亡蛋白Bax表达量减低（P < 0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增加（P < 0.01），FTC133细胞ERK和AKT表达量分别较空白对照组均为增高（P < 0.01），BCPAP细胞ERK表达量较对照组增高（P < 0.01）。而AKT表达量与对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05），ERK的相对表达量增高程度在BCPAP和FTC133，差异无统计学意义（P > 0.05），AKT的相对表达量在FTC133细胞的增高程度显著高于BCPAP细胞（P < 0.05）。  结论  PTEN基因可促进BCPAP和FTC133细胞凋亡，线粒体途径、死亡受体途径和内质网激活通路均参与BCPAP和FTC133细胞凋亡的过程，ERK在PTEN基因调控BCPAP细胞凋亡发挥重要作用，而AKT和ERK均参与PTEN基因促进FTC133凋亡的过程。     

冬虫夏草提取液对NRK-52E缺血再灌注损伤时 凋亡及TLR-4表达的干预作用

目的：观察体外缺血再灌注损伤（IRI）时大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）凋亡情况和Toll样受体4（TLR-4）基因表达,以及冬虫夏草提取液对其干预作用。方法：将体外培养的NRK-52E分成对照组、模型组和冬虫夏草干预组,均以去除培养基后经10-10 mol/L抗霉素A刺激1 h后恢复培养基的方法,模拟IRI过程。在多个时间点,以流式细胞仪检测凋亡率, RT-PCR法检测凋亡相关基因（Bax,Bcl-2）和TLR-4基因的表达变化。结果：与对照组相比,模型组细胞凋亡率明显增高(P＜0.01),Bax mRNA表达上调(P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05)以及TLR-4 mRNA表达上调(P＜0.05)。冬虫夏草干预可明显影响缺血再灌注损伤时Bax,Bcl-2的表达,降低凋亡水平,并能减轻TLR-4高表达程度(均P＜0.05)。结论：NRK-52E 在IRI时有明显的细胞凋亡,以及TLR-4基因表达异常。冬虫夏草提取液可能通过抗凋亡和影响TLR-4表达减轻肾IRI。     

重组人生长激素对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制

目的探讨重组人生长激素（rhGH）对肝癌细胞MHCC-97H的作用及机制。方法以无血清培养液诱导肝癌细胞MHCC-97H凋亡,再以浓度为0μg/L（GH0组）、5μg/L（GH5组）、25μg/L（GH25组）、50μg/L（GH50组）、100μg/L（GH100组）和500μg/L（GH500组）的rhGH完全培养液进行培养,MTT法观察MHCC-97H细胞生长情况,流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期和细胞增殖指数,RT-PCR和Western blotting法分别检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达情况。结果与GH0组比较,GH25组、GH50组、GH100组和GH500组MHCC-97H细胞增殖明显,S期细胞百分比和细胞增殖指数显著增加（P〈0.05）;GH25组、GH50组和GH100组细胞凋亡率显著降低（P〈0.05）,Bax mRNA和蛋白表达显著降低（P〈0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增加（P〈0.05）。结论 rhGH体外显著促进肝癌细胞MHCC-97H增殖,并通过调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达来抑制无血清培养液诱导的细胞凋亡。     

紫杉醇对黑色素瘤细胞Bcl-2／Bax基因和蛋白水平影响及机制研究

目的检测紫杉醇对黑色素瘤细胞B16-F10细胞凋亡相关因子Bcl-2／Bax基因和蛋白水平的影响,探讨紫杉醇治疗黑色素瘤的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR和westernblot法检测紫杉醇对B16一F10细胞Bcl-2／Bax基因和蛋白水平的改变,以p—actin作为内参照。结果4pM紫杉醇对B16一F10细胞24h的Bcl-2／Bax基因和蛋白水平表现出明显的改变。与对照组相比,紫杉醇组Bcl-2基因mRNA水平相对量由（0．43土0．09）下降到（0．27士0．08）,两组有显著性差异（P〈0．05）。Bax基因mRNA水平相对量由（O．25士0．06）增加到（O．57士0．05）,两组差异有统计学意义（Pd0．01）。紫杉醇时B16-F10细胞Bcl-2蛋白相对表达量由（O．64士0．03）下降到（0．35士0．04）,两组差异有统计学意义（P〈O．05）。Bax蛋白的相对表达量由（O．41士0．02）增加到（O．73±0．03）,两组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论紫杉醇对可通过改变Bcl-2／Bax基因和蛋白水平发挥促进凋亡的作用。紫杉醇可能作为黑色素瘤治疗的策略之一。     

二氢青蒿素对膀胱癌T24细胞株的抑制作用及其机制研究

目的探讨二氢青蒿素体外抗膀胱癌T24细胞株活性及相关机制。方法采用体外培养的T24细胞株为研究对象,流式细胞仪检测二氢青蒿素作用后T24细胞凋亡率,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达变化。结果二氢青蒿素能够诱导T24肿瘤细胞凋亡（P〈0.01）,且呈剂量-效应关系;二氢青蒿素还可引发T24肿瘤细胞Caspase-3活性水平升高（P〈0.05或P〈0.01）,促凋亡蛋白Caspase-3、Bax高表达（P〈0.01）,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低（P〈0.01）,且均呈现时间-效应关系。p53表达水平无显著改变（P〉0.05）。结论二氢青蒿素具有明确的抑制膀胱癌T24细胞株的效应,其机制可能是激活非依赖于p53的Bcl-2家族介导的细胞色素C途径,进而引发T24细胞凋亡。