血清IL-17水平及其基因多态性与HBV感染临床转归之间的关系研究*

目的 探讨血清白介素（IL）-17水平和IL-17-197A/G基因单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒（HBV）感染临床转归之间的关系。方法 2015年3月~2017年8月在我院就诊的乙型肝炎肝硬化40例,慢性乙型肝炎120例,无症状慢性HBV携带者60例和自限性HBV感染者80例。采用酶联免疫吸附试验检测血清IL-17水平,使用全自动生化仪检测血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBIL）水平,采用多聚酶链反应结合荧光探针DNA扩增技术检测血清HBV DNA载量,使用单核苷酸检测试剂盒检测IL-17-197A/G基因单核苷酸多态性。结果 乙型肝炎肝硬化组血清IL-17水平显著高于慢性乙型肝炎组、无症状慢性HBV携带者组和自限性HBV感染组（F_3,296=102.8,P均<0.05）;慢性乙型肝炎组血清IL-17水平显著高于无症状慢性HBV携带者组和自限性HBV感染组（P均<0.05）;在乙型肝炎肝硬化组,血清高HBV DNA载量组（>1×10⁵ copies/mL）血清IL-7水平更高（t=5.1,P<0.05）,血清ALT>40 U/L组血清IL-7水平更高（t=10.7,P<0.05）;在慢性乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组,血清AST>40 U/L组血清IL-7水平更高（t=24.5,P<0.05;t=22.4,P<0.05）,血清TBIL>20 μmol/L组血清IL-7水平更高（t=7.3,P<0.05;t=12.8,P<0.05）;肝硬化患者IL-17-197 AA、AG和GG基因型分别为75.0%、10.0%和15.0%,等位基因A分布频率为57.5%,G分布频率为42.5%,而慢性乙型肝炎患者则分别为25.8%、16.7%、57.5%和34.2%、65.8%,组间差异显著（P<0.05）,乙型肝炎肝硬化组以IL-17-197 AA基因型和A等位基因分布频率为主,慢性乙型肝炎组以GG基因型和G等位基因分布频率为主,HBV携带者组以AA基因型和A等位基因分布为主,自限性HBV感染者以GG基因型和G等位基因分布为主。结论 宿主免疫水平和遗传背景的相互作用决定了HBV感染的临床转归,IL-17在乙型肝炎病毒感染慢性化进程中发挥了重要作用。IL-17-197A/G位点的AA基因型和A等位基因可能是HBV易感的宿主基因,增加了HBV感染的不良转归。     

血清IL-17水平及其基因多态性与HBV感染临床转归之间的关系研究

目的探讨血清白介素(IL)-17水平和IL-17-197A/G基因单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染临床转归之间的关系。方法 2015年3月～2017年8月在我院就诊的乙型肝炎肝硬化40例,慢性乙型肝炎120例,无症状慢性HBV携带者60例和自限性HBV感染者80例。采用酶联免疫吸附试验检测血清IL-17水平,使用全自动生化仪检测血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,采用多聚酶链反应结合荧光探针DNA扩增技术检测血清HBV DNA载量,使用单核苷酸检测试剂盒检测IL-17-197A/G基因单核苷酸多态性。结果乙型肝炎肝硬化组血清IL-17水平显著高于慢性乙型肝炎组、无症状慢性HBV携带者组和自限性HBV感染组(F_(3,296)=102.8,P均0.05);慢性乙型肝炎组血清IL-17水平显著高于无症状慢性HBV携带者组和自限性HBV感染组(P均0.05);在乙型肝炎肝硬化组,血清高HBV DNA载量组( 1×10~5 copies/mL)血清IL-7水平更高(t=5.1,P 0.05),血清ALT 40 U/L组血清IL-7水平更高(t=10.7,P 0.05);在慢性乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组,血清AST 40 U/L组血清IL-7水平更高(t=24.5,P 0.05; t=22.4,P 0.05),血清TBIL 20μmol/L组血清IL-7水平更高(t=7.3,P0.05;t=12.8,P0.05);肝硬化患者IL-17-197AA、AG和GG基因型分别为75.0%、10.0%和15.0%,等位基因A分布频率为57.5%,G分布频率为42.5%,而慢性乙型肝炎患者则分别为25.8%、16.7%、57.5%和34.2%、65.8%,组间差异显著(P0.05),乙型肝炎肝硬化组以IL-17-197 AA基因型和A等位基因分布频率为主,慢性乙型肝炎组以GG基因型和G等位基因分布频率为主,HBV携带者组以AA基因型和A等位基因分布为主,自限性HBV感染者以GG基因型和G等位基因分布为主。结论宿主免疫水平和遗传背景的相互作用决定了HBV感染的临床转归,IL-17在乙型肝炎病毒感染慢性化进程中发挥了重要作用。IL-17-197A/G位点的AA基因型和A等位基因可能是HBV易感的宿主基因,增加了HBV感染的不良转归。     

干扰素-α/β受体基因多态性与HBV感染结局的关系

目的：探讨IFN-α/β受体基因多态性与HBV（乙肝病毒）感染不同临床转归之间的相关性。方法：应用基因测序检测80例自限性HBV感染者（SR组）和220例慢性持续性HBV感染者（PC组）[包括无症状HBV携带者（AsC组）88例和进展性肝病者132例（慢性乙型肝炎76例、肝硬化56例）]的IFN（干扰素）-α/β受体基因-568G→C、-408C→T两个位点的多态性,比较各组间基因型和等位基因频率。结果：①-568G→C位点多态性中,PC组总GG基因型频率比SR组显著升高,差异有显著性意义（P〈0.05）。等位基因G的频率,进展性肝病组均显著高于SR组（P〈0.05）。②-408C→T位点多态性中,进展性肝病组总CC基因型显著高于SR组（P〈0.05）,而肝硬化组和慢性乙型肝炎组之间,SR组和AsC组之间差异均无显著性。结论：IFN-α/β受体基因-568G→C、-408C→T两个位点的多态性,与HBV感染不同结局之间有关,携带-568G→C GG基因型和G等位基因的HBV感染者容易发展为慢性,G等位基因更趋向于进展性肝病,而携带-408C→T CC基因型患者则容易进展为慢性乙型肝炎甚至肝硬化。     

脑梗死患者ICAM-1基因K469E及IL-6基因-174 G/C多态性研究

目的探讨脑梗死与细胞间黏附分子-Ⅰ(ICAM-1)基因K469E多态性及白介素-6(IL-6)基因-174G/C多态性的相关性。方法运用多聚酶链式反应技术(PCR)检测177例脑梗死患者及112例对照者ICAM-1基因K469E多态性及IL-6基因-174G/C多态性各等位基因频率。结果脑梗死患者ICAM-1基因的K469E多态性与对照组比较,KK纯合子频率显著低于对照组(40.7%vs55.4%,P=0.015),KE杂合子频率显著高于对照组(48.6%vs35.7%,P=0.032),E等位基因频率亦显著高于对照组(35.0%vs26.8%,P=0.038),KE和EE基因型与KK基因型的比值比为1.808(95%CI,1.121～2.917)。脑梗死患者组和对照组IL-6基因-174G/C多态性均为GG型纯合子,未检测出C等位基因。结论ICAM-1基因K469E多态性的E等位基因携带者可能患脑梗死的风险增加。     

2型糖尿病血管并发症患者细胞间黏附分子-1基因多态性研究

目的研究细胞间黏附分子-1（ICAM-1）469K〉E基因多态性位点等位基因分布频率及其与2型糖尿病（T2DM）血管病变的关系。方法采用聚合酶链式反应（PCR）方法检测62例T2DM血管并发症患者ICAM-1469KK、KE及EE基因型出现的频率。并检测其空腹血糖（BS）、甘油三酯（TG）、糖化血红蛋白（HbAIc）、血浆游离ICAM-1（sICAM-1）和总胆固醇（TC）水平，并与70例无血管并发症的T2DM患者及121例正常对照组比较。结果KK、KE、EE3种基因型在3组中的分布频率有明显差异（，=6．313，P=0．043）．DM血管病变组等位基因E的频率明显高于对照组和无血管病变组（P〈0．01），T2DM血管病变组ICAM-1469E等位基因携带者sICAM-1水平明显高于K等位基因携带者（P〈0．01）。结论ICAM—1469E等位基因与DM血管病变及ICAM-1水平升高有关。     

干扰素-α/3受体基因多态性与HBV感染结局的关系

目的:探讨IFN-α/β受体基因多态性与HBV(乙肝病毒)感染不同临床转归之间的相关性.方法:应用基因测序检测80例自限性HBV感染者(SR组)和220例慢性持续性HBV感染者(PC组)[包括无症状HBV携带者(AsC组)88例和进展性肝病者132例(慢性乙型肝炎76例、肝硬化56例)]的IFN(干扰素)-α/β受体基因- 568G→C、- 408C→T两个位点的多态性,比较各组间基因型和等位基因频率.结果:①- 568G→C位点多态性中,PC组总GG基因型频率比SR组显著升高,差异有显著性意义(P＜0.05).等位基因G的频率,进展性肝病组均显著高于SR组(P＜0.05).②- 408C→T位点多态性中,进展性肝病组总CC基因型显著高于SR组(P＜0.05),而肝硬化组和慢性乙型肝炎组之间,SR组和AsC组之间差异均无显著性.结论:IFN-α/β受体基因- 568G→C、- 408C→T两个位点的多态性,与HBV感染不同结局之间有关,携带- 568G→C GG基因型和G等位基因的HBV感染者容易发展为慢性,G等位基因更趋向于进展性肝病,而携带- 408C→T CC基因型患者则容易进展为慢性乙型肝炎甚至肝硬化.     

乙型肝炎病毒前C区、C启动子区、前S2区基因突变与慢性肝病的相关性

近年研究发现，乙型肝炎病毒（HBV）前C区nt1896位G→A、C启动子区（CP）nt1762、nt1764双突变、以及前S区基因突变与慢性肝炎患者病情活动和慢性化、疾病严重程度有一定关系。为此，我们分别检测无症状HBV携带者、慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者血清HBV DNA基因序列，对前C、CP、前S2区域的突变情况与HBV不同感染状态的关系作一探讨。     

APOBEC3G基因多态性与HBV感染后疾病转归的关系

目的 研究中国汉族人群载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因多态性与慢性乙型肝炎和肝硬化的关系.方法 应用焦磷酸测序,检测202例HBV感染自然痊愈者(对照组)、217例慢性乙型肝炎患者和216例乙型肝炎肝硬化患者APOBEC3G基因rs8177832位点多态性,确定其基因型及等位基因分布.同时通过建立DNA池技术初步对APOBEC3G基因的另外4个标签单核苷酸多态性位点(tagSNP)rs17000736、rs17496046,rs9622924和rs2899313进行疾病相关性的初步筛选;HBV DNA检测采用实时定量PCR.结果 rs8177832在中国汉族人群中以A/A为主要存在形式,其基因型频率和等位基因频率在对照组、慢性乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组中的分布差异无统计学意义.慢性乙型肝炎组中携带G等位基因的患者HBV DNA水平为6.25 log10拷贝/ml,携带A等位基因的患者为5.54 log10拷贝/ml,t=2.111,P=0.036.rs17000736和rs9622924两位点在中国汉族人群中分别只有G/G和C/C一种单一基因型存在,rs17496046和rs2899313两位点分别以G等位基因和A等位基因为主,这4个tagSNP(rs17000736、rs17496046、rs9622924和rs2899313)在对照组、慢性乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组中等位基因频率差异均无统计学意义.结论 汉族人群APOBEC3G基因中rs8177832位点的多态性可能与HBV的复制有关,但这5个tagSNP可能与HBV感染后疾病的进展无关.     

广东地区原发性肝癌与乙型肝炎病毒基因型的相关性

目的研究广东地区原发性肝癌（HCC）与HBV基因型的相关性。方法2003至2005年慢性HBV感染相关肝脏疾病患者共298例，其中HCC73例，肝硬化（LC）53例，慢性乙型肝炎（CHB）91例，无症状HBV携带者（ASC）81例。采用PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析及克隆测序方法对血清HBVDNA进行基因分型，比较各组患者HBV基因型的分布及临床特征。结果298例患者基因型分布为B型142例，占47．65％；C型156例，占52．35％。HBVC基因型在HCC患者分布明显高于其他对照组（X^2=45．20，P〈0．01）。HCC组中男性比例明显高于女性；HCC和LC组平均年龄显著高于其他组。结论广东地区HBV相关性肝病HBV基因型主要为C型和B型，HBVC基因型感染可能为HCC的高危因素之一。     

乙型肝炎病毒DNA基因分型与相关慢性肝病关系的临床研究

人类感染不同基因型乙型肝炎病毒(HBV)及受宿主因素的不同影响，可引起不同的慢性肝脏疾病，包括慢性无症状乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)、慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化(LC)及肝细胞癌(HCC)等。我们分析了我院264例慢性HBV感染者的HBV基因型，旨在探讨HBV基因型与HBV感染相关肝病的相互关系及临床意义。     

Susceptibility to active decompensated cirrhosis is associated with polymorphisms of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in chronic HBV carriers

Intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) plays an important role in the pathogenesis of viral hepatitis B. Several inflammatory diseases are associated with distinct polymorphisms of the ICAM-1 gene. The aims of this study were to analyse the association of ICAM-1 polymorphisms G241R and K469E with susceptibility to active decompensated cirrhosis in chronic hepatitis B virus (HBV) carriers. The polymorphisms at codons G241R and K469E of ICAM-1 were analysed by sequence-specific primer polymerase chain reaction (PCR-SSP) in 572 unrelated chronic HBV carriers and 157 unrelated healthy HBV non-infected blood donors. There were significantly increased frequencies of R at codon 241 and E at codon 469 in patients with active decompensated cirrhosis (38.3% and 58.3%), compared with patients with chronic hepatitis B (CHB; 21.9% and 46.5%) and chronic asymptomatic HBV carriers (AsC; 12.6% and 40.3%). The frequencies of R241-E469 haplotype and genotypes carrying at least one R241-E469 haplotype were significantly higher in patients with active decompensated cirrhosis than those in patients with CHB (38.3% and 63.3%vs 21.9% and 36.7%), and significantly higher in patients with CHB than those in AsC (21.9% and 36.7%vs 12.6% and 23.3%). The ICAM-1 polymorphisms at codons G241R and E469K were associated with the disease susceptibility, and susceptibility to active decompensated cirrhosis is significantly increased in chronic HBV carriers carrying at least one R241-E469 haplotype.     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染患者外周血单个核细胞中叉头状螺旋转录因子（Foxp3）mRNA表达及其与HBV感染后转归的关系。方法应用实时RT-PCR方法检测19例急性乙型肝炎、50例慢性乙型肝炎、21例乙型肝炎后肝硬化、15例慢性乙型重型肝炎和15例正常对照组外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达,应用ELISA法检测其血清中白细胞介素（IL）-10、转化生长因子β（TGF-β）含量,并观察它们与Foxp3 mRNA的相关性。结果急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化、慢性重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平高于正常对照组（P〈0.05）,重型肝炎Foxp3 mRNA水平高于其他各组（P〈0.05）。HBV感染各组IL-10、TGF-β含量较正常组明显升高（P〈0.05）,急性乙型肝炎组IL-10含量较慢性乙型肝炎组明显升高（P〈0.05）;急性乙型肝炎组TGF-β含量与肝硬化组、重型肝炎组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,其他各组两两比较差异有统计学意义（P〈0.05）。IL-10、TGF-β与Foxp3 mRNA表达水平无相关性。结论急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化、慢性重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平高于正常人,重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平高于其他各组HBV感染者,表明Foxp3参与了HBV发病过程,外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平可能与疾病预后密切相关。     

乙肝病毒感染者淋巴细胞亚群失衡与细胞免疫功能紊乱的临床研究

目的 研究不同临床类型乙型肝炎病毒（HBV）感染淋巴细胞亚群变化情况,探讨HBV感染与细胞免疫紊乱关系.方法 以364例HBV感染患者作为研究对象,41例健康体检人员作为对照,比较急性肝炎组（78例）、慢性肝炎组（244例）、肝硬化组（42例）淋巴细胞亚群变化及不同HBV DNA载量HBV感染患者淋巴细胞亚群变化.结果 慢性肝炎组、肝硬化组CD3＋、CD4＋、CD8＋均明显降低,其中肝硬化组下降较为显著,组间差异有统计学意义（P＜0.05）,慢性肝炎组CD4 ＋/CD8＋明显降低与对照组和急性肝炎组差异均有统计学意义（P＜0.05）,急性肝炎组CD8＋明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,慢性肝炎组、肝硬化组CD3、CD4＋、CD8＋与急性肝炎组、对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;HBV-DNA高载量组与低载量组淋巴细胞亚群比较,CD8＋较高,CD4＋/CD8＋较低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 慢性肝炎及肝硬化均存在一定程度的细胞免疫功能低下,对患者淋巴细胞亚群的监测及患者免疫功能评估有重要的临床应用价值.     

甘肃地区人群雌激素受体α-29位基因多态性与HBV感染转归的关系

目的了解甘肃地区人群雌激素受体ERα-29位多态性与HBV感染后果的关系,从基因水平上探讨慢性乙型肝炎(CHB)的发病机制。方法选取2011年8月-2012年5月在本院就诊的102例CHB患者、106例HBV感染自愈者采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测其雌激素受体ERα-29位多态性。用基因计数法计算检验人群的等位基因频率,进行Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验。应用非条件Logistic回归分析将混杂因素进行调整。基因型及等位基因频率比较采用行×列的χ2检验。结果 CHB患者雌激素受体基因ERα-29位多态性的TT基因型和T等位基因频率(62.7%、82.4%)明显高于HBV感染恢复期患者(48.1%、69.8%),差异有统计学意义(χ2=4.502,P0.05;χ2=4.478,P0.05);CC基因型和C等位基因频率(12.8%、17.6%)明显低于后者(19.8%、30.2%),差异有统计学意义(χ2=27.219,P0.05;χ2=4.478,P0.05);T等位基因HBV感染慢性化的风险是C等位基因的2.018倍(OR=2.018,95%CI:1.047~3.891)。结论雌激素受体ERα-29位TT基因型和T等位基因可能是HBV感染慢性化的遗传易感基因。     

细胞间黏附分子-1基因多态性与冠心病相关性研究

目的:研究细胞间黏附分子-1(ICAM-1)469K/E及241G/R多态性位点等位基因分布频率及其与冠心病(CHD)的关系。方法:选择197例湖北地区健康汉族人(对照组)及103例CHD患者(CHD组),应用等位基因特异性PCR(巢式PCR),对每个个体的基因型进行鉴定。同时,采用酶法、免疫比浊法及酶联免疫吸附试验对研究对象血脂和ICAM-1水平进行检测。结果:2组间除性别、年龄及体质指数无明显差异外,其他各项指标如吸烟、总胆固醇、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、ICAM-1均差异有统计学意义(P<0·01);241R等位基因的分布频率分别为0·039及0·030,因其频率太低,无法建立其与血脂及CHD间的联系;469K/E位点,CHD组稀有等位基因E的频率明显高于对照组(χ2=4·549,P<0·05),KK、KE、EE3种基因型在2组中的分布差异有统计学意义(χ2=6·313,P<0·05),且2组中KK、KE、EE3种基因型的TG与ICAM-1水平差异有统计学意义(P<0·01)。结论:ICAM-1469E等位基因与CHD患者TG及ICAM-1水平升高有关,可能是该地区人群CHD的危险因子。     

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞受体β链V区谱型差异研究

目的 探讨外周血T细胞受体（TCR）β链V区（BV）CDR3区谱型差异在慢性HBV感染者炎症发生中的作用。方法研究对象为9例慢性HBV感染无症状携带（AsC）者（AsC组）和12例活动期慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者（CHB组）,分别采集其外周血,肝素钠抗凝,分离单个核细胞,提取RNA并应用RT-PCR扩增TCR BV的CDR3区基因24个家族,采用免疫指纹技术进行TCR BV各家族基因扫描和谱型分析。结果 两组外周血淋巴细胞TCR BV谱型均发生不同程度单克隆性、寡克隆性及偏峰性克隆增生,CHB组发生谱型偏移的TCR BV家族个数及CDR3谱型发生单克隆性和寡克隆性偏移家 族总数均显著多于AsC组（P〈0.05）。结论 CHB患者外周血T细胞克隆性增生程度高于AsC患者,此可能与慢性HBV感染者炎症的发生机制相关。     

乙型肝炎肝硬化失代偿期与酒精性肝硬化失代偿期患者血小板参数变化的临床分析

目的探讨不同HBV DNA水平乙型肝炎肝硬化失代偿期与酒精性肝硬化失代偿期血小板计数（PLT）及血小板平均体积（MPV）变化的临床意义。方法对36例健康人、38例HBV DNA〈105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失代偿期患者、36例HBV DNA〉105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失代偿期患者及31例酒精性肝硬化失代偿期患者的外周血PLT及MPV进行测定及分析。结果与健康人相比,乙型肝炎肝硬化及酒精性肝硬化患者PLT均下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;与酒精性肝硬化失代偿期患者相比,HBV DNA〉105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失代偿期患者PLT下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;不同HBV DNA水平的乙型肝炎肝硬化失代偿期患者PLT均下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。与健康人相比,酒精性肝硬化失代偿期、HBV DNA〉105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失代偿期患者MPV均下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;与酒精性肝硬化失代偿期患者相比,HBV DNA〉105拷贝/ml乙型肝炎肝硬化失偿代期患者MPV下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;不同HBV DNA水平的乙型肝炎肝硬化失代偿期患者MPV变化,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论乙型肝炎肝硬化失代偿期患者高载量HBV DNA对血小板参数降低有一定的影响。