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青天葵总DNA的提取与随机扩增多态性DNA反应条件的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 建立并优化青天葵样品总DNA提取方法及随机扩增多态性DNA(RAPD)反应.方法 采用改进的高盐低pH法提取青天葵鲜叶和药材样品,通过正交设计和均匀设计,改变反应体系和扩增程序优化随机扩增多态性DNA.结果 使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA,药材叶片含杂质较多,但都能用于RAPD.反应体系为:缓冲液2.0 μ1,0.5 μl dNTP(各2.5 mmol·L-1),0.8 μl Mg2+(25 mmol·L-1),0.5 μl引物(20 pmol·μl-1),0.2 μl Taq酶(5U·μ1-1),1 μl DNA(50 ng),1μl BSA(20 mg·ml-1),加双倍蒸馏水至20 μl.扩增程序为:94 ℃预变性3 min;94 ℃变性30 s,40 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,40个循环;72℃延伸5 min.结论 建立并优化了的青天葵样品总DNA提取方法及RAPD反应体系. 相似文献
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植物中药材总 DNA 提取方法的比较 总被引:50,自引:6,他引:44
随机扩增多态性DNA(RAPD)技术已经应用于中药材的鉴别,如何从多种或药材提取到总DNA来进行相关性研究是一个关键的课题。从植物中提取基因组DNA的方案众多,其中较垢方案有三类:(1)用苯酚-氯仿(变性蛋白)作为提取介质。(2)用CTAB(既能裂解细胞壁,又有去除多糖)作为提取杂质。(3)用高盐低PH介质作为提取介质。经过比较,我们认为第(3)套方案快捷、经济,达于基层单位应用。 相似文献
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黄连药材DNA提取及RAPD反应体系的优化 总被引:8,自引:0,他引:8
目的探索黄连药材DNA的提取并对其RAPD反应体系进行优化。方法采用目前较为流行的苯酚法、CTAB法、高盐低pH值法,通过电泳、紫外分光光度仪检测及RAPD扩增效果确定黄连药材基因组DNA提取的最佳方法。结果CTAB法为黄连药材基因组DNA提取的最佳方法,建立了适合黄连药材的RAPD反应体系:25μL体系中内含1×PCRbuffer、2mmol/LMg2 、100~150μmol/LdNTP、20ng引物、40ng模板、1UTaq酶。结论CTAB法及黄连药材的RAPD反应体系可以用于黄连药材的RAPD分析。 相似文献
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半夏基因组DNA的提取及鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
目的探讨不同DNA提取方法对半夏DNA质量及RAPD-PCR标记结果的影响。方法对用不同方法提取的DNA进行电泳、紫外吸收A260/A280和RAPD-PCR分析。结果不同方法提取的DNA质量和产率差异不显著,对RAPD结果无影响。结论半夏在DNA提取前加入氯仿对材料预处理,可获得较高质量的DNA进行PCR扩增。 相似文献
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目的 确定适合何首乌RAPD-PCR的基因组DNA提取方法及最适宜反应体系.方法 通过改良的CTAB法提取何首乌基因组DNA,研究其用于RAPD-PCR的可行性.利用正交设计方法L16 (45),针对Tag酶,引物,dNTP,镁离子,模板设计了5因素4水平的正交实验,优化RAPD-PCR反应体系.结果 正交设计结果表明,可以得到几种不同的有效扩增反应体系组合.根据实际需求,最适宜的RAPD-PCR反应体系为20 μl,其中1×PCR buffer, Tag酶 1U,引物 1 μmol/L,镁离子 2 mmol/L,dNTP 300 μmol/L,模板 40 ng.结论 改良的CTAB法和正交优化得到的反应体系适合用于何首乌RAPD遗传多样性分析. 相似文献
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半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的分析半夏种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对21份半夏种质资源进行检测。结果29个引物共得到162条扩增DNA片段,其中123条(75.9%)的片段具多态性,揭示了半夏居群间较丰富的遗传多样性。利用UPGMA法进行聚类分析表明,所有材料可划分为3类,根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论半夏种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。RAPD标记可作为构建半夏DNA指纹图谱的有效工具。 相似文献
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采用CTAB、SDS两种提取法及液氮、玻璃砂两种研磨方法提取干天麻总DNA,并进行了比较,同时讨论了相关问题,为解决如何从天麻干品中快速提取总DNA进行了探索。 相似文献
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沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立沉香的总DNA提取方法及r DNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系。方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2P2扩增r DNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序。结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260 nm/A280 nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高。不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA引物Taq DNA聚合酶d NTP。最佳反应体系为20μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-1,d NTP 0.5 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5 U。测序获得的目前片段长度230 bp,与Gen Bank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100%。结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考。 相似文献
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中药何首乌总基因组DNA的提取 总被引:1,自引:2,他引:1
目的为获得高质量的何首乌总基因组DNA。方法采用CTAB法提取,对其提取方法进行改进。结果用改进的方法提取的样品DNA的OD260/OD280值在1.630~1.955之间,琼脂糖凝胶上主带清晰、降解较少,能完全被限制性内切酶EcoRⅠ和M seⅠ完全酶切,得到合适的AFLP指纹样式。结论改良的CTAB法提示提取何首乌DNA的理想方法,适合AFLP-PCR反应和其他分子生物学应用。 相似文献
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RAPD在商品中药鉴别中若干问题的探讨 总被引:7,自引:3,他引:7
以各地产西洋参为研究对象,对影响中药材随机扩增多态性DNA(RAPD)的若干问题进行探讨。研究发现,中药材DNA模板的降解程度、纯度、浓度、Tap酶的浓度,Mg^2+浓度以及循环参数等诸多因素皆会不同程度的影响扩增结果,同时推荐一个较为适用的循环参数。 相似文献
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蒲公英总黄酮的提取工艺研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:以咖啡酸为提取率指标,对不同干燥方法处理的蒲公英总黄酮的提取工艺进行研究。方法:采用正交试验优选蒲公英总黄酮的提取工艺。结果:蒲公英总黄酮的最佳提取工艺为晾干蒲公英,浸提剂使用甲醇,使用频率800 kHz的超声15 min,超声温度控制在80℃。结论:采用此工艺提取效果较好且操作简单。 相似文献
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野葛种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:建立野葛RAPD分子标记技术并对野葛种质资源遗传背景进行探讨。方法:结合葛根素的测定,应用RAPD技术对11个产地野葛进行遗传多样性分析。结果:葛根素含量在3.26%~7.10%,8条引物共扩增出45条带,其中37条呈多态性,发现RAPD多态位点为82.22%,证明在野葛种质资源中存在较丰富的遗传多样性。结论:我国野葛具有明显的遗传分化,这些遗传分化是野葛种质资源筛选的关键。 相似文献
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