青天葵总DNA的提取与随机扩增多态性DNA反应条件的建立

目的 建立并优化青天葵样品总DNA提取方法及随机扩增多态性DNA(RAPD)反应.方法 采用改进的高盐低pH法提取青天葵鲜叶和药材样品,通过正交设计和均匀设计,改变反应体系和扩增程序优化随机扩增多态性DNA.结果 使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA,药材叶片含杂质较多,但都能用于RAPD.反应体系为:缓冲液2.0 μ1,0.5 μl dNTP(各2.5 mmol·L-1),0.8 μl Mg2+(25 mmol·L-1),0.5 μl引物(20 pmol·μl-1),0.2 μl Taq酶(5U·μ1-1),1 μl DNA(50 ng),1μl BSA(20 mg·ml-1),加双倍蒸馏水至20 μl.扩增程序为:94 ℃预变性3 min;94 ℃变性30 s,40 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,40个循环;72℃延伸5 min.结论 建立并优化了的青天葵样品总DNA提取方法及RAPD反应体系.     

植物中药材总 DNA 提取方法的比较

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术已经应用于中药材的鉴别,如何从多种或药材提取到总ＤＮＡ来进行相关性研究是一个关键的课题。从植物中提取基因组ＤＮＡ的方案众多,其中较垢方案有三类：（１）用苯酚－氯仿（变性蛋白）作为提取介质。（２）用ＣＴＡＢ（既能裂解细胞壁,又有去除多糖）作为提取杂质。（３）用高盐低ＰＨ介质作为提取介质。经过比较,我们认为第（３）套方案快捷、经济,达于基层单位应用。     

黄连药材DNA提取及RAPD反应体系的优化

目的探索黄连药材DNA的提取并对其RAPD反应体系进行优化。方法采用目前较为流行的苯酚法、CTAB法、高盐低pH值法,通过电泳、紫外分光光度仪检测及RAPD扩增效果确定黄连药材基因组DNA提取的最佳方法。结果CTAB法为黄连药材基因组DNA提取的最佳方法,建立了适合黄连药材的RAPD反应体系:25μL体系中内含1×PCRbuffer、2mmol/LMg2 、100~150μmol/LdNTP、20ng引物、40ng模板、1UTaq酶。结论CTAB法及黄连药材的RAPD反应体系可以用于黄连药材的RAPD分析。     

半夏基因组DNA的提取及鉴定

目的探讨不同DNA提取方法对半夏DNA质量及RAPD-PCR标记结果的影响。方法对用不同方法提取的DNA进行电泳、紫外吸收A260/A280和RAPD-PCR分析。结果不同方法提取的DNA质量和产率差异不显著,对RAPD结果无影响。结论半夏在DNA提取前加入氯仿对材料预处理,可获得较高质量的DNA进行PCR扩增。     

RAPD技术在中药材鉴定中的应用进展

随机扩增多态性DNA（random amplified pclymorphic DNA，RAPD）技术是1990年由Williams等发展起来的一项DNA分子标记技术。RAPD技术是建立在PCR技术的基础上．用一系列（通常数百个）不同的随机排列碱基序列的寡核苷酸单链（一般为10bp）作为引物，对所研究的基因组DNA进行单引物扩增。     

何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化

目的 确定适合何首乌RAPD-PCR的基因组DNA提取方法及最适宜反应体系.方法 通过改良的CTAB法提取何首乌基因组DNA,研究其用于RAPD-PCR的可行性.利用正交设计方法L16 (45),针对Tag酶,引物,dNTP,镁离子,模板设计了5因素4水平的正交实验,优化RAPD-PCR反应体系.结果 正交设计结果表明,可以得到几种不同的有效扩增反应体系组合.根据实际需求,最适宜的RAPD-PCR反应体系为20 μl,其中1×PCR buffer, Tag酶 1U,引物 1 μmol/L,镁离子 2 mmol/L,dNTP 300 μmol/L,模板 40 ng.结论 改良的CTAB法和正交优化得到的反应体系适合用于何首乌RAPD遗传多样性分析.     

药用植物泰山四叶参DNA提取方法的研究

目的 探讨不同DNA 提取方法对泰山四叶参DNA 质量的影响.方法 对提取的DNA 进行紫外光谱分析、总DNA 电泳及RAPD 分析.结果 不同方法提取的DNA 质量及产率存在显著差异.结论 结果表明改良CTAB 法和改良SDS 法较好.     

从高温高压蒸煮过的中华鳖甲和骨骼中提取及扩增DNA

为验证经高温加工过的鳖甲是否可以用ＤＮＡ分子标记鉴定,选取经高温高压蒸煮过的中华鳖鳖甲和骨进行ＤＮＡ提取,并用通用引物Ｌ１０９１和Ｈ１４７８扩增。结果表明经高温高压蒸者过的商业甲也可以提得较高质量的片段,同时还讨论了ＤＮＡ提取和扩增过程中应注意的问题,为分子遗传标记技术广泛应用于同类药材的鉴定和积累了基础资料。     

半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析

目的分析半夏种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对21份半夏种质资源进行检测。结果29个引物共得到162条扩增DNA片段,其中123条(75.9%)的片段具多态性,揭示了半夏居群间较丰富的遗传多样性。利用UPGMA法进行聚类分析表明,所有材料可划分为3类,根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论半夏种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。RAPD标记可作为构建半夏DNA指纹图谱的有效工具。     

随机扩增多态性DNA分子标记研究进展及在中药鉴定中的应用

随机扩增多态性DNA是一种兼稳定性和多态检出率高的DNA分子标记技术之一，本文综述了RAPD技术原理、操作过程、优势、不足和应对措施以及该技术的扩展、在中药分类、鉴定等中的应用。     

天麻总DNA提取的研究

采用CTAB、SDS两种提取法及液氮、玻璃砂两种研磨方法提取干天麻总DNA，并进行了比较，同时讨论了相关问题，为解决如何从天麻干品中快速提取总DNA进行了探索。     

沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化

目的:建立沉香的总DNA提取方法及r DNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系。方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2P2扩增r DNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序。结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260 nm/A280 nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高。不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA引物Taq DNA聚合酶d NTP。最佳反应体系为20μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-1,d NTP 0.5 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5 U。测序获得的目前片段长度230 bp,与Gen Bank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100%。结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考。     

中药何首乌总基因组DNA的提取

目的为获得高质量的何首乌总基因组DNA。方法采用CTAB法提取,对其提取方法进行改进。结果用改进的方法提取的样品DNA的OD260/OD280值在1.630~1.955之间,琼脂糖凝胶上主带清晰、降解较少,能完全被限制性内切酶EcoRⅠ和M seⅠ完全酶切,得到合适的AFLP指纹样式。结论改良的CTAB法提示提取何首乌DNA的理想方法,适合AFLP-PCR反应和其他分子生物学应用。     

影响总DNA提取因素的探讨

在中药生药学和栽培学研究领域,DNA分子标记技术正逐渐被广泛采用,并成为解决问题的常用手段之一。众所周知,提取得到优质的DNA是研究的前提,作者一直关注这方面的动向,同时也进行过这方面的综述和探讨[1-3]。最近,作者的课题组在进行雷公藤属3个种及种下多个居群之间遗传关系研究时,在从硅胶干燥的幼叶中提取总DNA的过程中,首次发现2个影响DNA提取的因素———实验样品量和2×CTAB提取体系中β-巯基乙醇的含量。1材料和试剂实     

五味子总DNA提取方法的比较

目的:建立一套适合从五味子种子中提取高质量DNA的方法,为进一步开展五味子分子鉴定奠定基础。方法:比较SDS法、高盐低pH值法以及改进的CTAB法,运用紫外光谱和电泳分析方法测定所得DNA样品的纯度与浓度。结果:3种方法中CTAB改良法所得DNA纯度最高,完整性好,且该方法稳定可靠。结论:CTAB改良法是适合从五味子中提取高质量DNA的方法。     

RAPD在商品中药鉴别中若干问题的探讨

以各地产西洋参为研究对象,对影响中药材随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）的若干问题进行探讨。研究发现,中药材ＤＮＡ模板的降解程度、纯度、浓度、Ｔａｐ酶的浓度,Ｍｇ＾２＋浓度以及循环参数等诸多因素皆会不同程度的影响扩增结果,同时推荐一个较为适用的循环参数。     

蒲公英总黄酮的提取工艺研究

目的:以咖啡酸为提取率指标,对不同干燥方法处理的蒲公英总黄酮的提取工艺进行研究。方法:采用正交试验优选蒲公英总黄酮的提取工艺。结果:蒲公英总黄酮的最佳提取工艺为晾干蒲公英,浸提剂使用甲醇,使用频率800 kHz的超声15 min,超声温度控制在80℃。结论:采用此工艺提取效果较好且操作简单。     

野葛种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析

目的:建立野葛RAPD分子标记技术并对野葛种质资源遗传背景进行探讨。方法:结合葛根素的测定,应用RAPD技术对11个产地野葛进行遗传多样性分析。结果:葛根素含量在3.26%~7.10%,8条引物共扩增出45条带,其中37条呈多态性,发现RAPD多态位点为82.22%,证明在野葛种质资源中存在较丰富的遗传多样性。结论:我国野葛具有明显的遗传分化,这些遗传分化是野葛种质资源筛选的关键。     

一种改良的镰形棘豆DNA提取方法

目的:建立适合DNA条形码分析的镰形棘豆DNA提取方法。方法:以镰形棘豆(Oxytropis falcate Bunge)叶片为材料,采用改良的DNA提取方法对其DNA进行提取,并用琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增对提取的DNA进行检测。结果:本方法提取的DNA,能够满足以PCR为基础的分子鉴定的基本要求。操作简便,需时短,成本低廉,适于DNA的大批量提取。结论:本方法适合DNA条形码研究的DNA提取。     

道地药材浙玄参的随机扩增多态性DNA研究

目的 探讨道地药材浙玄参与非道地药材之间遗传变异大小,并建立道地药材浙玄参的品质鉴定方法.方法 运用随机扩增多态性DNA(RAPD)法对产于浙江、山东、湖北的玄参科植物玄参进行了分子标记研究.结果 共筛选出9条有效引物,获得142条DNA带,通过聚类分析,构建DNA分子系统树图,确定不同居群间的亲缘关系.结论 同种异地药材所形成的不同居群,具有不同的遗传多样性特征.其中浙玄参与山东、湖北玄参存在较大遗传差异,说明浙玄参作为道地药材,具有自身独特的遗传特征.