五羟色胺诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的作用与机制研究

目的 主要研究五羟色胺(5-HT)诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的作用与机制.方法 组织块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMC),细胞增殖试验检测5-HT对PASMC的作用,流式细胞仪检测细胞周期,免疫组化试验检测PCNA表达.结果 5-HT诱导大鼠PASMC增殖试验证实在5-HT 10-9～10-5mol/L的剂量范围内,大鼠PASMC的促增殖作用对其具有剂量依赖性.流式细胞仪结果证实PASMC可由G1期向S期转化,免疫组化法证实5-HT可促进PASMC中PCNA的表达.结论 5-HT可促进PCNA的表达,进而加速PASMC由G1期向S期转化,达到促PASMC增殖的作用.     

红景天甙抑制兔缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的作用

目的　观察红景天甙 (salidroside,Sal)对缺氧状态下兔肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖、DNA合成和细胞周期的影响 ,并初步探讨其作用机制 .方法　应用离体培养的PASMC,采用四唑盐 (MTT)比色法实验、3H-胸腺嘧啶核苷(3H- Td R)参入和流式细胞仪技术 ,观察 PASMC的增殖、DNA合成和细胞周期的变化 .结果　缺氧 2 4h可直接刺激PASMC,使其3H- Td R的参入量显著增加 (P<0 .0 1 ) ,MTT吸光度 (A)增加 (P<0 .0 5 ) ;钙通道阻滞剂 verapamil可抑制缺氧的这种刺激作用 ;流式细胞仪分析显示缺氧 2 4h PASMC的 G2 /M期细胞比例与常氧对照组相比明显增加 (P<0 .0 1 ) ,G0 /G1 期细胞比例明显减少 ;在缺氧的 PASMC培养液中加入 Sal(0 .2～ 3.2 μmol· L- 1 ) ,PASMC的 3H- Td R参入量与 MTT的 A值与单纯缺氧组相比显著下降 ,Sal(6 .4μmol· L- 1 )可增加 G0 /G1 期细胞比例 ,减少 G2 /M期细胞比例 (P<0 .0 5 ) ;缺氧状态下 ,Sal与 verapamil合用并不增加对PASMC的抑制效应 .结论　缺氧可直接刺激 PASMC的增殖及 DNA合成 ,其作用机制可能与 PASMC内 Ca2 浓度增加有关 ,Sal可抑制缺氧对 PASMC的增殖及 DNA合成的促进作用     

比那地尔与肺动脉平滑肌细胞的增殖和凋亡

目的:研究钾通道开放剂比那地尔(Pin)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和凋亡的作用.方法:通过非核素标记细胞增殖检测、3H-TdR掺入、形态学、流式细胞术等方法研究Pin对大鼠PASMC增殖和凋亡的作用.结果:25～500 μmol/L的Pin呈剂量依赖性地减少大鼠PASMC的细胞数和DNA合成,500 μmol/L的Pin显著减少S期和G2/M期的细胞比例,增加G0/G1期细胞的比例.50～500 μmol/L的Pin呈剂量依赖性地增加大鼠PASMC的凋亡率.结论:钾通道开放剂抑制大鼠PASMC增殖并促进其凋亡.钾通道开放剂可能成为今后预防和控制低氧性肺动脉高压血管重建的有效药物.     

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的观察蝎毒抗癌多肽(APBMV)对CNE-2Z细胞生长周期和p53表达的影响.方法采用流式细胞仪双标法.结果APBMV处理CNE-2Z细胞48h后,进入S期的细胞明显减少,处于G1期和G2期的细胞明显增多,APBMV16mg/L处理CNE-2Z细胞48h后,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为59.7%、32.3%和7.9%,空白对照组的百分比分别为53.3%、45.2%和1.5%,二者比较差异有显著性(P<0.01或P<0.001).空白对照组CNE-2Z细胞P53蛋白24h和48h表达量处于较高水平(27.23±0.93)和(31.67±1.75),经APBMV处理24h或48h后,P53蛋白表达量明显下降,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论APBMV能够阻止CNE-2Z细胞周期的移行,并抑制抑癌基因p53的表达.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对肾间质成纤维细胞P16蛋白表达的影响

目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠（sodium tanshinone ⅡA sulfonate, DS - 201）对人肾间质成纤维细胞（human renal interstitial fibroblasts, hRIFs）体外增殖以及P16表达的影响,试阐明其在延缓肾间质纤维化过程中作用的具体环节,为中药丹参治疗肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）提供理论和实验依据。方法：用四甲基偶氮唑（MTT）法检测对照组与不同DS - 201浓度组hRIFs的增殖活性。免疫细胞化学技术检测0 mg/ml、0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml DS - 201孵育hRIFs 72 h后P16的表达。结果：与对照组相比,各DS - 201组hRIFs细胞由均一的梭形变成椭圆形甚至圆形;随着用药浓度增高,hRIFs抑制率明显增高;P16表达增强,平均光密度值显著增加,组间差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：DS - 201可能通过促进P16的表达从而抑制hRIFs通过G1 / S关卡,使细胞阻滞于G0 / G1期,进而抑制细胞增殖。     

软肝冲剂对四氯化碳肝硬化大鼠P21mRNA表达的影响

目的探讨软肝冲剂对四氯化碳肝硬化大鼠P21mRNA表达及细胞周期各时相DNA含量的影响,从mRNA、DNA水平探讨软肝冲剂阻止肝硬化的作用机理.方法采用RT-PCR及流式细胞计数仪分别检测四氯化碳肝硬化大鼠P21mRNA表达、DNA含量.结果软肝冲剂能降低四氯化碳肝硬化大鼠P21mRNA 表达,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),大剂量组的疗效与小剂量组比较无明显差异(P>0.05).正常肝组织P21mRNA呈相当低水平表达,其表达相对值为(0.17±0.06)U.定量DNA图像分析发现模型组中处于G1期的细胞数要明显多于其它各组(P<0.01),软肝冲剂大剂量组中处于G1期的细胞数要明显少于软肝冲剂小剂量组(均P<0.01).结论软肝冲剂能调节P21基因表达,调节细胞周期,促进肝细胞再生,抑制肝纤维化、肝硬化的形成.     

香烟烟雾提取物对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及蛋白激酶C的相关作用

目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)对人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响及蛋白激酶C(PKC)信号转导途径在其中所起的作用.方法 ①不同浓度的CSE作用于人PASMC 24 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测PASMC增殖,锥虫蓝排斥法检测活细胞率.②PASMC与PKC激活剂PMA预孵24 h或与PKC抑制剂Ro31-8220(简称Ro)预孵30 min,然后暴露于5%CSE 24 h,采用MTT法、流式细胞术、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学染色等方法观察细胞增殖的变化.③5%CSE作用于PASMC 24 h,采用RT-PCR和Western blot方法分别检测PKC-α mRNA和蛋白的表达.结果 ①20%和30%的CSE对PASMC有细胞毒性作用;5%和10%CSE不影响PASMC的活细胞率;MTT检测结果示5%CSE组PASMC的吸光度(A)值较对照组明显增高.②5%CSE组PASMC 的MTT A值、增殖指数(PI)、S期细胞分数(SPF)、PCNA阳性表达率增高,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05).PMA 5%CSE组和Ro 5%CSE组以上指标均降低,与5%CSE组比较,差异有显著性意义(P<0.05),与对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05).③5%CSE组PKC-α mRNA和蛋白表达量增加,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05).结论 高浓度的CSE对PASMC有细胞毒性作用,低浓度(5%)的CSE则能促进PASMC的增殖.PKC特别是PKC-α可能在CSE促人PASMC增殖的信号转导机制中起重要作用.     

CD44v在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨细胞粘附因子(CD44v)在胃癌细胞中的表达及临床意义.方法采用EnVisionTM免疫组化法检测65例胃癌细胞和胃切缘黏膜细胞中的CD44v表达率,并进行临床病理分析.结果胃癌组的CD44v表达率明显高于胃切缘黏膜组(P<0.01),中、低分化组胃癌细胞的CD44v表达率高于高分化组(P<0.05),伴有淋巴结转移的胃癌细胞CD44v表达率明显高于无淋巴结转移的胃癌细胞(P<0.05),Ⅲ～Ⅳ期组的胃癌细胞的CD44v表达率高于Ⅰ～Ⅱ期胃癌细胞(P<0.05).结论检测胃癌的CD44v表达水平,可为临床提供判断胃癌患者临床分期和预后的参考指标.     

3p21.3区域肺癌相关基因RASSF1A的抑癌功能研究

目的观察将野生型RASSF1A通过质粒载体pcDNA3.1导入不表达该基因的非小细胞肺癌(NSCL)细胞系A549后,肺癌细胞生物学特性的变化.方法通过脂质体Lipofectamine2000将质粒载体pcDNA3.1,pcDNA3.1-RASSF1A分别转染入A549细胞系中,通过流式细胞仪检测瞬时转染该基因对细胞周期的影响以及是否诱发凋亡;通过绘制细胞生长曲线,MTT检测,以及集落形成实验来分析稳定转染细胞的生物学特性;同时分析稳定转染RASSF1A对A549细胞裸鼠转移能力的影响.结果瞬时转染RASSF1A使细胞周期阻断在G1/S期(P<0.001);稳定转染该基因的细胞其增殖能力和集落形成能力均显着下降(P<0.01),同时裸鼠转移能力也明显被抑制(P<0.01).结论野生型RASSF1A基因的外源性表达能显著抑制肿瘤细胞的生长和转移,提示该基因在肺癌的发生发展中发挥重要作用.     

Rho激酶在缺氧性肺动脉平滑肌细胞中的表达

目的：探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及其中Rho激酶表达的影响。方法：分别在常氧和缺氧12、24和48h条件下体外培养大鼠PASMC，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞周期，同时用蛋白印迹杂交（Western blot）检测Rho激酶的表达情况。结果：PASMC比色吸光度A值缺氧12h增大，24h最高，48h下降但仍高于常氧对照组；流式细胞术分析细胞周期，G2／M期细胞缺氧组均显著高于常氧组；Western blot结果分析各缺氧组Rho激酶表达明显高于常氧组。结论：缺氧诱导PASMC增殖，促使细胞进入有丝分裂期，同时，Rho激酶表达的增强可能是缺氧诱导PASMC增殖的重要机制之一。     

DDPH对缺氧内皮细胞条件培养液致肺动脉平滑肌细胞PDGF mRNA表达的影响

利用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针，原位检测ＤＤＰＨ［１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷酸盐］对缺氧内皮细胞条件培养液致猪ＰＡＳＭＣＰＤＧＦ基因表达的影响。实验分６组：常氧、低氧无血清培养液组（Ｎ、Ｈ组），常氧、低氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ、ＨＥＣＣＭ组），ＮＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ、ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组。用自动图像分析仪检测各组细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链杂交产物的平均光密度（ＯＤ）值。结果：ＨＥＣＣＭ组ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别是ＮＥＣＣＭ组的１．４０、１．４９倍（Ｐ＜０．０１），分别是Ｎ组的１．８倍、１．７倍（Ｐ＜０．０１），ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组ＰＤＧＦ－Ａ、－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别为ＨＥＣＣＭ的０．７３倍、０．６５倍（Ｐ＜０．０１），与ＮＥＣＣＭ组相比，均无显著差异。提示ＤＤＰＨ在ＰＤＧＦ基因转录水平抑制ＨＥＣＣＭ诱导的ＰＡＳＭＣ的增殖。     

DDPH和生长因子对肺动脉平滑肌细胞凋亡的作用

运用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）和流式细胞分析术（FCM）检测经1－（2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烯盐酸盐（DDPH）、血小板源性生长因子（PDGF）、碱性皮纤维细胞生长因子（b-FGF)、低氧内皮细胞条件培养液（HECCM）作用后，肺动脉平滑肌细胞（PASMC）凋亡的变化；结合FCM对各组PASMC生长周期的分析，比较不同因素对PASMC的影响差异。结果发现：DDPH组平滑肌细胞（SMC）凋亡指数显著高于对照组，PDGF、b-FGF、HECCM各组SMC凋亡指数显著低于对照组；PDGF、b-FGF、HECCM3组通过生长限制点G1／S（S＋G2／M期）细胞的比率均显著高于对照组，尤以PDGF组最高，而DDPH组低于对照组。提示：DDPH能够抑制PASMC增殖并诱导其凋亡，而PDGF、b-FGF等生长因子则起相反作用。     

DDPH抑制HECCM促PASMC增殖时第二信使变化的研究

采用MTT比色、荧光技术和放免技术观察了猪肺动脉低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)和1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙胺基)丙烷盐酸盐(DDPH)对猪肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖、第二信使([Ca2+]1和cAMP)的影响。结果显示①HECCM促进PASMC增殖,而DDPH可抑制之,抑制率为77．46％。②HECCM升高PASMCs内[Ca2+]i,而DDPH可对抗此作用。③HECCM组PASMCs内cAMP含量明显低于对照组(NECCM组),而HECCM+DDPH组PASMCs内cAMP与NECCM组无显著性差异。     

多胺在低氧内皮细胞条件培养基促猪肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

在低氧条件下，猪肺动脉内皮细胞（PAEC）对猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖调控，是研究低氧性肺动脉高压时肺动脉结构重组的重要内容。应用MTT比色法、DNA荧光测定法，观察了低氧PAEC条件培养基（HECCM）中多胺促PASMC增殖的作用。结果表明，在PAEC培养液中加入鸟氨酸脱梭酶抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO），可阻止HECCM促PASMC增殖的效应。故认为低氧刺激PAEC产生的多胺亦是HECCM中促PASMC增殖的一个重要因子。     

RG50864对血小板衍生生长因子诱导的肺动脉平滑肌细胞DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响

为研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂ＲＧ５０８６４ 对血小板衍生生长因子 （ＰＤＧＦ） 诱导的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ） ＤＮＡ 含量及增殖细胞核抗原表达的影响, 应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞, 用流式细胞仪分析ＲＧ５０８６４ 对ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣＤＮＡ百分含量及增殖细胞核抗原的变化。结果表明： 与对照组相比, ＲＧ５０８６４ 处理组可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ增殖细胞核抗原表达的荧光强度及荧光指数 （Ｐ＜ ０．０１）, 增加ＰＡＳＭＣ生长周期中的Ｇ０／Ｇ１ 期的ＤＮＡ百分含量, 抑制Ｓ期及Ｇ２Ｍ 期的ＤＮＡ 百分含量 （Ｐ＜ ０．０１）。ＲＧ５０８６４ 可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ增殖细胞核抗原表达,抑制ＰＡＳＭＣ周期Ｓ期及Ｇ２Ｍ 期ＤＮＡ 百分含量,阻止ＰＡＳＭＣ周期由Ｇ０／Ｇ１ 期向ＤＮＡ合成的Ｓ期及Ｇ２Ｍ 期转化     

PDGF在低氧内皮细胞条件培养基促猪肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

为了探索低氧条件下猪肺动脉内皮细胞 (PAEC)对猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖调控关系 ,应用MTT比色法 ,DNA荧光测定法观察了外源性 PDGF促 PASMC增殖作用 ,以及 Suram in抑制 PDGF促增殖作用的效应 ,并在此基础上研究了猪肺动脉内皮细胞条件培养基 (HECCM)中 PDGF促 PASMC增殖的作用。结果表明 ,HECCM促 PASMC增殖作用的效应可被 Suramin部分抑制 ,由此证明 ,PDGF是低氧刺激 PAEC产生的一种促 PASMC增殖的重要因子。     

RG50864对PDGF诱导的PASMC DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响

目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ含量及增殖细胞核抗原表达的影响。方法：应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,用流式细胞仪分析ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣＤＮＡ百分含量及增殖细胞核抗原的变化。结果：与对照组相比,ＲＧ５０８６４处理组可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ增殖细胞核抗原表达的荧光强度及荧光指数（Ｐ＜０．００１）,增加ＰＡＳＭＣ生长周期中的Ｇ０／Ｇ１期的ＤＮＡ百分含量,抑制Ｓ期及Ｇ２Ｍ期ＤＮＡ百分含量（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．００１）。结论：ＲＧ５０８６４可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ增殖细胞核抗原表达,抑制ＰＡＳＭＣ周期Ｓ期及Ｇ２Ｍ期ＤＮＡ百分含量,阻止ＰＡＳＭＣ周期由Ｇ０／Ｇ１向ＤＮＡ合成的Ｓ期及Ｇ２Ｍ期转化。     

Effects of DDPH on HECCM-induced Proliferation and Immunophenotypes of the Pulmonary Vascular Pericytes

Muscularization of non- muscular arterioles of in-tra- acinar pulmonary arteries is an important mor-phological feature of pulmonary vascular structuralremodeling ( PVSR ) during the development ofchronic hypoxic pulmonary hypertension[1] .In Chi-na,to explore the cell origin of muscularization ofnon- muscular arterioles,the cell culture of pul-monary vascular pericytes was firstestablished at ourlaboratory[2 ] .Resentstudiesin vitro[3] suggested thathypoxic endothelium cell conditioned medi…     

C-myc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＤＮＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％（Ｐ＜０．０５）,２１．６％和１４．７％（Ｐ＜０．０１）,３６．３％和２７．２％（Ｐ＜０．０１）;对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达抑制率分别为７１．３％（Ｐ＜０．０５）,８０．７％（Ｐ＜０．０５）,９２．５％（Ｐ＜０．０１）;５０μｇ／ｍｌ反义核酸对Ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达抑制率是７９．７％,１０、２０μｇ／ｍｌ组无抑制作用。Ｃ－ｍｙｃ反义核酸能显著抑制内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖,其作用系依赖反义核酸的序列特异性和剂量依赖。     

蛋白酶体抑制剂MG132对人子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞增殖、凋亡和周期的影响

【摘要】 目的 了解蛋白酶体抑制剂三肽基乙醛（Z-Leu-Leu-Leu-cho, MG132）抗人子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞的活性,研究MG132治疗人子宫内膜癌的潜在应用价值。方法 用不同浓度的MG132(0,0.2,0.5,1.0 μmol/L)处理HEC-1B和Ishikawa细胞24 h、48 h,采用MTT法检测MG132对HEC-1B和Ishikawa细胞增殖的影响;应用流式细胞术分别检测0.5 μmol/L MG132处理24 h后两种细胞的凋亡率和细胞周期分布。结果 MG132能抑制HEC-1B和Ishikawa细胞增殖,在本研究浓度范围内MG132浓度增高对两种细胞的抑制作用增强（P<0.01）,48 h抑制作用强于24 h(P<0.01),Ishikawa细胞对MG132的敏感程度大于HEC-1B细胞。MG132处理HEC-1B和Ishikawa细胞后凋亡率均增加（P=0.000）,细胞周期分析显示HEC-1B细胞G2期细胞比例增加（P<0.05）,Ishikawa细胞G1和G2细胞比例增加（P<0.05）。结论 蛋白酶体抑制剂MG132对HEC-1B和Ishikawa细胞有增殖抑制、诱导凋亡和阻滞细胞周期的作用。MG132可能成为潜在的子宫内膜癌化疗药物。