灯盏花素对低氧肺动脉平滑肌细胞蛋白激酶Cα mRNA表达影响的观察

采用原位杂交技术观察了灯盏花素在整体水平对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)及离体低氧培养猪ＰＡＳＭＣ蛋白激酶Ｃα(ＰＫＣα)ｍＲＮＡ表达的影响 ,以从分子水平探讨灯盏花素对低氧性肺动脉高压治疗作用的机制。材料与方法　选用体重 2 0 0～ 3 0 0ｇ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,分为正常对照组、低氧 5ｄ、14ｄ和 2 8ｄ组各 6只 ,每天低氧前腹腔注射生理盐水 2ｍｌ;灯盏花素治疗组 18只 ,每天低氧前腹腔注射灯盏花素 [中美合资黑龙江迪龙制药有限公司生产 ],4ｍｌ/ｋｇ。低氧方法参照我们以往的方法[1] ,按孙波等[2 ] 的方法测定并记录…     

洛沙坦对蛋白激酶C在慢性缺氧大鼠模型肺动脉胶原表达作用的影响

目的　观察洛沙坦对蛋白激酶C(PKC)在慢性缺氧大鼠模型肺动脉胶原表达作用的影响。方法　将二级SD大鼠分为 3组 :A组 (正常对照组 )大鼠室内常规饲养。B组 (单纯缺氧 4周组 )大鼠置于常压低氧舱中 ,舱内充入氮气 ,使氧浓度维持在 (1 0 0± 0 5) % ,每天 8h ,每周 6d ,连续 4周 ;大鼠每天缺氧前用 2ml蒸馏水灌胃。C组 (洛沙坦干预组 )缺氧条件同B组 ,大鼠每天缺氧前用洛沙坦 (洛沙坦 50mg/kg溶于 2ml蒸馏水 )灌胃。采用透射电镜、放射活性测定法、免疫组化、原位杂交等方法观察 3组大鼠肺细小动脉超微结构、肺组织PKC活性、肺动脉管壁PKC免疫组化及Ⅰ、Ⅲ型胶原和Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的变化。结果　 (1 )B组大鼠平均肺动脉压、右心室重量比显著高于A组(P <0 0 1 ) ,C组显著低于B组 (P <0 0 1 )。 (2 )光镜下可见B组大鼠肺血管管壁厚度占血管外经的百分比、管壁面积占管总面积的百分比显著高于A组 (P <0 0 1 ) ,C组显著低于B组 (P <0 0 1 )。电镜下可见B组大鼠肺动脉胶原纤维较A组明显为多 ,C组较B组明显为少。 (3)B组大鼠肺组织细胞PKC总活性、胞膜PKC活性、胞质PKC活性及胞膜PKC活性占PKC总活性的百分比显著高于A组(P <0 0 1 ) ,C组上述指标均显著低于B组 (P <0 0 1 )。 (4)免疫组化显示 ,B     

蛋白激酶C与低氧性肺动脉高压

蛋白激酶C（PKC）是细胞膜后住处转导通路之一，在细胞的生长、增殖、代谢等各方面发挥重要作用。了解CK信息通道在低氧性肺动脉高压发病中的作用，有助于探索低氧性肺动脉高压新的防治方法。     

慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺动脉内蛋白激酶Cα的膜转位和蛋白表达量的影响

目的 通过观察慢性低氧所致肺动脉高压对大鼠肺动脉内蛋白激酶Cα(PKCα)的膜转位和蛋白表达量的影响,初步探讨PKCα在慢性低氧诱导大鼠肺动脉高压的发生和发展过程中所起的作用.方法 采用慢性常压低氧[氧浓度(10±0.1)％]大鼠肺动脉高压模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14 d和21d组,检测大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),肺组织苏木精-伊红(HE)染色,应用蛋白免疫印迹和免疫组织化学的方法检测PKCα膜转位和蛋白表达水平的变化.结果 ①低氧1d、3d、7d、14 d和21d组与正常对照组相比,RVSP和RV/(LV+S)比值均明显增加(P＜0.05),低氧暴露3d、7d、14 d和21 d后大鼠肺动脉壁明显增厚;②PKCα的蛋白表达量在慢性低氧1d、3d、7d和14 d后比正常对照组明显下降(P＜0.05).结论 PKCα蛋白表达量的下调可能参与了慢性低氧诱导的大鼠肺动脉高压的发生和发展过程.     

蛋白激酶C对低氧猪肺动脉平滑肌细胞结构型一氧化氮合酶mRNA表达作用的探讨

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）信号传导通道对低氧猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）结构型一氧化氮合酶（cNOS)mRNA表达的影响。方法 采用逆转录－聚合酶链（RT－PCR）方法测定了低氧条件下猪PASMC中PKC－α和cNOS mRNA表达情况,并观察了PKC激活剂和抑制剂对cNOS mRNA表达的影响。结果 低氧48、72h PKC-α mRNA的表达明显升高（P＜0．01）,cNOS mRNA的表达明显降低（P＜0．01）,cNOS mRNA的表达与PKC－α mRNA的表达呈显著负相关（P＜0．001）。PKC激活剂豆寇酸佛波醇乙酯（PMA）可使cNOS mRNA在低氧PASMC中的表达进一步降低,而KC抑制剂RO 31－8220的作用相反,使cNOS mRNA的表达明显升高（P＜0．01）。NO激活剂左旋精氨酸（L－Arg)和抑制剂N^ω－硝基－L－精氨酸甲酯（L－NAME）对PKC-α mRNA的表达无明显影响。结论 PKC可抑制cNOS mRNA在低氧PASMC中的表达。PKC在低氧性肺动脉高压的形成机制中的作用可能是通过抑制cNOS mRNA在PASMC的表达和对NO的调控来实现的,PKC信号通道可能作用在NO的上游,但其机制还有待于进一步的研究。     

灯盏花注射液对大鼠低氧性肺动态高压作用的实验研究

低氧性肺动脉高压对肺心病的发生发展起着十分重要的作用 ,因此降低肺动脉高压是该病防治的关键环节 ,我们将有关灯盏花注射液对低氧性肺动脉高压大鼠影响的实验结果报告如下。材料与方法　雄性ＳＤ大鼠 30只 (温州医学院动物实验中心提供 ) ,随机分为 3组 ,每组 10只 :①对照组 :常压常氧下常规饲养 ;②低氧组 :将动物置于自制常压低氧箱内 ,控制箱内氧浓度为 (10 0± 0 5 ) % ,二氧化碳浓度 <1 5 % ,箱内以无水氯化钙吸收水蒸气 ,钠石灰吸收ＣＯ2 ,每天低氧 10ｈ ,每周 6ｄ ,共 4周。每日于低氧前腹腔内注射 1ｍｌ生理盐水 ;③灯盏花组 …     

蛋白激酶C对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控钾通道的作用

蛋白激酶C(PKC)在缺氧性肺动脉高压的发病机制中起着重要的作用。但PKC对正常和慢性缺氧肺动脉平滑肌细胞(PASMC)上电压门控钾离子通道(Kv通道)的影响尚少报道。我们的研究旨在探讨PKC对慢性缺氧PASMC膜上Kv通道的作用，以进一步阐明缺氧性肺动脉高压的发病机制。     

灯盏花素在气道黏液高分泌大鼠模型中的治疗作用

目的研究灯盏花素在气道黏液高分泌疾病中的治疗作用。方法采用中性粒细胞弹力酶雾化吸人法制作大鼠气道黏液高分泌病理模型,以灯盏花素注射液为干预因素,生理盐水为对照,分别以RT-PCR、ELISA法检测各组气道上皮黏蛋白的表达情况,wester nblot检测蛋白激酶C（PKC）的蛋白水平,放射活性法测定PKC的活性。结果灯盏花素治疗组中的黏蛋白基因转录及蛋白表达水平明显低于对照组,同时伴有组织中蛋白激酶C（PKC）蛋白水平及活性的降低。结论灯盏花素能在一定程度上抑制大鼠气道黏液高分泌,其作用是通过抑制PKC活性而实现。     

蛋白激酶C α mRNA在低氧猪肺动脉平滑肌细胞的表达及对细胞增殖的作用

我们最近发现蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)参与正常肺血管张力的调控[1,2 ] ;低氧可使肺动脉ＰＫＣ蛋白水平表达增高[3] ,且可使ＰＫＣ对肺血管张力的调控作用明显增强[4 ] 。但有关低氧对肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)在ｍＲＮＡ转录水平表达的影响以及ＰＫＣ对ＰＡＳＭＣ增殖的影响的研究报道尚较少见 ,我们对此进行探讨。材料与方法　取幼年猪肺动脉主干 ,刮去内皮细胞 ,将中膜肌层切割成小组织块 ,接种在培养瓶内 ,待贴壁后 ,加入含 10 %胎牛血清的Ｍ199液 ,置 37℃ ,ＣＯ2 培养箱内培养。生长融合的ＰＡＳＭＣ以 1∶1的 0 2 5 %胰蛋白酶和 0 …     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉内PTEN蛋白表达的变化

目的 通过观察慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉内人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）蛋白表达水平的变化,初步探讨PTEN在慢性低氧性肺动脉高压的发生、发展过程中所起的作用.方法 将6周龄健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组,除对照组外,其他各组先建立慢性低氧肺动脉高压大鼠模型,然后检测各组大鼠右心室收缩压（right ventricle systolic pressure,RVSP）和右心室肥厚指数（right ventricle hypertrophy index,RVHI）,采用HE染色观察肺动脉病理学改变,采用Western blot技术检测肺动脉内PTEN蛋白的表达水平.结果 ①与正常对照组（23.76±0.82）mmHg相比,低氧暴露1d、3d、7d、14 d、21d后RVSP均明显上升（P＜0.05）;RVHI低氧3d、7d、14 d、21d组均较正常对照组（100％）明显上升（P＜0.05）;低氧暴露3d、7d和21d组肺动脉中膜明显增厚、管腔明显变小.②PTEN和p-PTEN在正常对照组和低氧各组均有表达.低氧各组肺动脉内PTEN蛋白的表达较对照组下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;而p-PTEN蛋白与PTEN总蛋白表达量的比值随低氧时间的延长有上升趋势,且在慢性低氧21d组（1.71±0.25）较正常对照组（1.00）明显增高（P＜0.05）.结论 PTEN蛋白表达的降低和p-PTEN蛋白表达的增高可能参与了大鼠慢性低氧性肺动脉高压的发生和发展过程.     

银杏叶制剂对缺氧性肺动脉高压的影响及其与蛋白激酶C …

OBJECTIVE: To elucidate whether the mechanism of relieving hypoxic hypertension by ginkgo biloba involves attenuation of the function of protein kinase C(PKC) signal channel. METHODS: 1. Wistar rats were randomly divided into control(C), hypoxic(H) and ginkgo biloba treatment(GB + H) (200 mg.kg-1.d-1, orally) groups (n = 7). Each rat was first measured mean pulmonary arterial pressure (mPAP), mean systemic arterial pressure (mSAP) and the ratio of the weight of right ventricle to that of left ventricle plus septum [RV/(LV + S)], than two main pulmonary artery rings were isolated to exposed to PDBu(a specific activator of PKC) to observe the time-response curve and the dose-response curve in response to 500 nmol/L PDBu and 10-11,000 nmol/L PDBu respectively to evaluate the function of protein kinase C signal channel. 2. Intrapulmonary artery rings of human(IARH) from pneumolobectomy were randomly divided into PDBu, RO318220 (inhibitor of PKC) + PDBu and ginkgolide B(BN52021) + PDBu groups(n = 6), the IARH of three groups were exposed to 1-25 nmol/L PDBu to achieve dose-response curves respectively. RESULTS: (1) mPAP, RV/(LV + S) of the H group were greater than those of C and GB + H groups respectively (P < 0.05). mPAP of GB + H group was greater than that of C group (P < 0.05). In PA experiments, the function of protein kinase C of H group was higher than those of C and GB + H groups respectively(P < 0.05). (2) In IARH experiments, the function of protein kinase C of PDBu group was higher than those of RO318220 + PDBu and BN52021 + PDBu groups respectively(P < 0.05). CONCLUSIONS: Ginkgo biloba can reduce chronic hypoxic pulmonary hypertension and relieve the hypertrophy of right ventricle, which is partly related to attenuation of the function of PKC signal channel.     

灯盏花素对低氧大鼠肺动脉压和肺小动脉Rho激酶的影响

目的 观察灯盏花素对低氧大鼠肺动脉压、肺小动脉Rho激酶ROCK Ⅰ和ROCK Ⅱ及Rho激酶mRNA的影响,探讨灯盏花素预防低氧性肺动脉高压的作用和机制.方法 将18只健康雄性SD大鼠分为健康组、低氧组和灯盏花素预防组.以常压低氧法复制肺动脉高压模型,以微导管法测定平均肺动脉压(mPAP).分离大鼠心脏,测量右心室(RV)及左心室加室间隔(LV+S)的重量,以RV/(LV+S)代表右心肥厚指数.应用图像分析技术测定肺小动脉管壁厚度占外径的百分比和管壁面积占总面积的百分比,反映肺血管重塑情况.应用免疫组化法测定肺小动脉Rho激酶蛋白的表达,原位杂交法测定肺小动脉Rho激酶mRNA的表达.结果 低氧组大鼠mPAP为(27.3±5.0)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),明显高于健康组的(16.0±0.6)mm Hg(t=6.74,P<0.05),灯盏花素预防组mPAP为(19.83±1.47)mm Hg,明显低于低氧组(t=4.28,P<0.05);低氧组RV/(LV+S)及肺小动脉厚度指数明显高于健康组(t=3.43,P<0.05),灯盏花素预防组低于低氧组(t=2.39,P<0.05);低氧组ROCK Ⅰ和ROCK Ⅱ免疫组织化学阳性染色(1.29±0.08和1.63±0.24)明显高于健康组(1.17±0.09和1.30±0.16),灯盏花素预防组(1.18±0.10和1.30±0.12)明显低于低氧组(t值分别为3.96,5.85,3.90,5.82,均P<0.05);低氧组ROCK Ⅰ mRNA和ROCK Ⅱ mRNA原位杂交阳性染色(分别为1.37±0.13和1.59±0.31)明显高于健康组(1.22±0.09和1.2±10.15),灯盏花素预防组(1.23±0.13和1.22±0.06)明显低于低氧组(t值分别为4.00,6.02,3.94,5.83,均P<0.05).结论 灯盏花素具有明显预防低氧性肺动脉高压和降低Rho激酶及Rho激酶mRNA的作用.     

肾上腺髓质素对低氧大鼠肺动脉压的调节作用

目的　探讨肾上腺髓质素 (ADM)对肺循环的影响及低氧大鼠肺组织和血浆ADM浓度的变化。方法　将 5 0只Wistar大鼠分为对照组 (10只 )和低氧组 (40只 ) ,低氧组大鼠采用常压低氧处理 3周建立大鼠肺动脉高压模型 ;以微导管法检测大鼠平均肺动脉压 (mPAP) ,采用图像分析技术测定大鼠肺小动脉壁增厚情况 ;以放射免疫法测定大鼠肺组织及血浆ADM浓度 ;另将 30只低氧组大鼠分为 3个小组 (每组 10只 ) ,分别给予剂量为 0 5nmol/kg、1 0nmol/kg和 2 0nmol/kg的ADM静脉注射 ,观察其对大鼠肺动脉压和股动脉压的作用。结果　低氧组大鼠mPAP(30± 4 )mmHg (1mmHg =0 133kPa) ,与对照组 [(16± 3)mmHg]比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ;图像分析表明 ,低氧大鼠存在明显的肺小动脉壁增厚 ;低氧组大鼠血浆ADM浓度 [(2 88± 2 4 )pg/ml]与对照组 [(16 8± 2 5 )pg/ml]比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ,低氧组大鼠肺组织匀浆ADM浓度 [(2 319± 2 38)pg/g]与对照组 [(115 3± 12 7)pg/g]比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ,两者均与大鼠mPAP呈正相关 (r分别 =0 5 6 7、0 6 12 ,P均 <0 0 1) ;低氧组大鼠经静脉注射ADM后 ,其肺动脉压出现显著降低 (P <0 0 1) ,维持时间为 5～ 15min ,同时其体动脉压亦有所下降 ,其效应呈     

蛋白激酶C及其亚型对钙通道的调节功能

吡喹酮是目前治疗血吸虫的惟一特效药,但其作用靶点及机制仍未完全阐明,研究表明吡喹酮的作用靶点町能为钙通道.钙通道可受多种因素的调控,该文综述了蛋白激酶C及其亚型对钙通道的调控作用,为阐明吡喹酮的药物作用机制以及进一步研发抗血吸虫新药提供了思路.     

肺间质病患者肺泡巨噬细胞蛋白激酶C活性的变化

目的 探讨肺间质纤维化时蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性的变化。方法 应用放射生测定法检测９名健康者和１５例特发性肺间质纤维化９ＩＰＦ）患者支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中肺泡巨噬细胞（ＡＭ）的ＰＫＣ活性。结果 ＩＰＦ患者ＢＡＬＦ中ＡＭ总ＰＫＣ活性、南和胸膜ＰＫＣ活性均明显高于健康者（Ｐ〈０．０１和Ｐ〈０．０５）,ＡＭ的总ＰＫＣ活性与ＢＡＬＦ中细胞总数呈正相关（ｒ＝０．５９１７,Ｐ〈０．０５）。结论 ＰＫＣ     

汉防己甲素对慢性缺氧大鼠肺胶原的影响

目的 探讨汉防己甲素（Ｔｅｔ）对慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织胶原含量的影响。方法 雄性大鼠３０只，随机分为：（１）对照组１０只，不缺氧处理；（２）单纯缺氧组１０只，每只于低氧前后腹腔注射生理盐水１ｍｌ，共２１天，每天缺氧８小时；（３）汉防己甲素处理组１０只，于每天缺氧前后按７．５ｍｇ·ｋｇ＾－１腹腔注射汉防己甲素，共２１天。应用氯胺Ｔ氧化比色法测定肺组织和肺外肺动脉的羟脯氨酸（Ｈｙｐ）含量和马三     

Inhibition of protein kinase C in multidrug-resistant cells by modulators of multidrug resistance

We have evaluated the protein kinase C (PKC) activity in two series of cultured cell lines presenting the multidrug-resistance (MDR) phenotype and in the corresponding wild-type cells: the human KB 3.1, KB A1 and KB 8.5 cell lines, and the rat C6, C6 0.5 and C6 1V cell lines. We have observed an increase in PKC activity in the MDR cell lines of the KB cell lineage, proportional to their degree of resistance to doxorubicin. In contrast, the MDR cell lines of the C6 cell lineage presented no change (C6 0.5) or even decrease (C6 1V) in PKC activity; the basal level of PKC activity in C6 cells was, however, 50-fold higher than in KB 3.1 cells. We have tested, in these lines, the effect of four modulators of MDR: verapamil, cyclosporin A, quinine and S-9788, on doxorubicin acytotoxicity and on PKC activity. We observed that cyclosporin A and S-9788, which were the most active on MDR reversal, were able to inhibit PKC activity in the KB resistant lines as well as in all C6 lines, whereas verapamil and quinine had only marginal effects on PKC activity. The distribution of PKC isoenzymes was studied by Western blots. The PKC , and isoforms were increased in the KB resistant lines as compared to wild-type cells, which could account for the increase PKC activity we observed. In contrast, PKC and were decreased in C6 1V cells, as expected from the results obtained for total PKC activity, but we also noticed an important decrease in PKC in the C6 0.5 line. Our results suggest that an increase in PKC activity is not an absolute requirement for expression of MDR, provided that the basal level be high enough; and that some modulators may act on MDR, not only through direct P-glycoprotein interaction, but also through P-glycoprotein phosphorylation or expression. The distribution of PKC isoenzymes revealed that the modifications encountered between sensitive and resistant cells mainly concerned , and isoenzymes of PKC.Abbreviations PKC protein kinase C - MDR multidrug resistance