吗啡依赖对小鼠海马神经元核酸代谢的影响

目的：探讨吗啡依赖对小鼠海马神经元结构和功能损害的分子机制。方法：以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型,采用吖啶橙荧光探讨技术,显示吗啡领带组、纳洛酮催促戒断组和正常对照组小鼠海马神经元DNA和RNA的变化。结果：与对照组相比,吗啡依赖组和纳洛酮催促戒断组海马神经元DNA和RNA荧光反应强度均明显减弱,纳洛酮催促戒断组荧光反应强度更弱。结论：吗啡依赖和纳洛酮催促戒断损伤海马神经元核代谢,后者的损伤程度更为严重,这些变化可能是吗啡依赖造成脑功能损坏尤其是学习记忆功能下降的原因之一。     

吗啡依赖对小鼠肺表面活性物质分泌的影响

目的探讨吗啡依赖对小鼠肺表面活性物质分泌的影响.方法以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型,纳洛酮诱发戒断症状.根据小鼠戒断反应中出现的跳跃次数、体重下降等指标评定戒断反应强度.采用毛细管上升现象测定吗啡依赖和戒断小鼠离体肺灌洗液表面张力的变化.结果吗啡依赖组和纳洛酮催促戒断组离体肺灌洗液表面相对张力和表面张力均明显大于对照组(P<0.01),而且吗啡戒断组离体肺灌洗液表面相对张力和表面张力又明显大于吗啡依赖组(P<0.01).结论吗啡依赖和纳洛酮催促戒断小鼠肺表面活性物质含量下降,尤其是戒断期.这些变化可能是吗啡依赖造成肺功能损害的原因之一.     

吗啡依赖对小鼠肺表面活性物质分泌的影响

目的：探讨吗啡依赖对小鼠肺表面活性物质分泌的影响。方法：以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型，纳洛酮诱发戒断症状。根据小鼠戒断反应中出现的跳跃次数、体重下降等指标评定戒断反应强度。采用毛细管上升现象测定吗啡依赖和戒断小鼠离体肺灌洗液表面张力的变化。结果：吗啡依赖组和纳洛酮催促戒断组离体肺灌洗液表面相对张力和表面张力均明显大于对照组（P＜0．01），而且吗啡戒断组离体肺灌洗液表面相对张力和表面张力又明显大于吗啡依赖组（P＜0．01）。结论：吗啡依赖和纳洛酮催促戒断小鼠肺表面活性物质含量下降，尤其是戒断期。这些变化可能是吗啡依赖造成肺功能损害的原因之一。     

PI-3K信号通路在吗啡依赖纳洛酮激发戒断反应中的作用

目的：研究PI-3K信号通路在吗啡依赖纳洛酮激发戒断反应中的作用。方法：在小鼠急性和慢性吗啡依赖和戒断模型上,采用鞘内和脑室内注射PI-3K抑制剂对吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断反应的影响,探讨神经元PI-3K信号通路吗啡依赖和戒断过程中的作用。结果：鞘内预先注射PI-3K信号通路抑制剂LY294002及Wortmanin能明显加重急性和慢性吗啡依赖小鼠纳洛酮激发戒断反应。脑窜内预先注射PI-3K信号通路抑制剂LY294002及Wortmanin也明显加重急性和慢性吗啡依赖小鼠纳洛酮激发戒断反应。结论：脊髓和脊髓上中枢神经元PI-3K信号通路均参与吗啡依赖的形成及戒断反应的表达。     

吗啡依赖和戒断小鼠海马MT1、MT2基因表达的变化

【目的】探讨吗啡依赖和戒断小鼠海马金属硫蛋白（metallothionein，MT）MT1、MT2 mRNA表达的变化。【方法】剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型，腹腔注射盐酸纳络酮诱发戒断症状。根据小鼠戒断反应中出现的跳跃次数、体重下降等指标评定戒断反应的强度。采用半定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法，观察实验小鼠海马MT1、MT2 mRNA的变化情况。【结果】吗啡依赖组MT1、MT2 mRNA表达水平高于对照组和吗啡戒断组（P〈0．05），吗啡戒断组MT1、MT2 mRNA表达水平高于对照组（P〈0．05）。【结论】吗啡依赖小鼠海马MT1、MT2 mRNA表达增加，纳络酮戒断能够抑制吗啡依赖引起的MT1、MT2表达增加，表明海马MT的表达变化参与了吗啡依赖和戒断过程。     

三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马磷酸化CREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响

目的:研究三七总皂甙(PNS)对吗啡依赖及纳络酮催促戒断大鼠海马组织CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制. 方法:应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡躯体依赖模型,采用腹腔注射纳络酮建立催促戒断模型,大鼠在给予吗啡的同时,采用4种不同剂量PNS进行灌胃. 采用Western blot和电泳迁移率改变分析法(EMSA)分别观察PNS对吗啡依赖及戒断大鼠海马组织总CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响. 结果:①不同剂量PNS组、吗啡成瘾(MOR)组及纳络酮催促戒断(NAL)组大鼠海马组织总CREB蛋白表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05);②MOR组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值略高于对照组(P>0.05),NAL组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值明显高于对照组和MOR组(P<0.01);③PNS可以剂量依赖性的抑制纳络酮催促戒断所引起的pCREB蛋白表达增高和CREB/DNA结合活性的增强. 结论:PNS可以剂量依赖的抑制吗啡成瘾及纳络酮催促戒断诱导的大鼠海马组织CREB磷酸化和CREB/DNA结合活性的增强.     

鞘内注射NOS抑制剂对吗啡戒断大鼠脊髓神经元磷酸化CREB表达的影响

目的研究鞘内注射NOS抑制剂对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断反应、脊髓p-CREB表达的影响。方法建立大鼠吗啡依赖和戒断模型,SD大鼠72只,分为正常对照组、吗啡依赖组、吗啡戒断组、L-NAME组,每组18只大鼠。采用行为学(n=8)、免疫组织化学(n=6)和Western blot(n=4)方法观察鞘内注射L-NAME对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断反应、脊髓p-CREB表达的影响。结果 (1)鞘内注射L-NAME、可明显减轻吗啡依赖大鼠戒断症状,戒断组戒断症状评分为28.60±4.89,L-NAME组22.10±4.52(P<0.05);戒断组TEA评分为13.50±2.55,L-NAME组9.80±3.11(P<0.05)。(2)鞘内注射L-NAME可明显减少戒断大鼠脊髓背角p-CREB阳性神经元的数目(380±71),L-NAME组(283±47)低于戒断组(P<0.05)。(3)Western blot结果显示:鞘内注射L-NAME明显抑制吗啡戒断期间脊髓p-CREB表达的增加。结论鞘内注射NOS抑制剂能明显抑制吗啡戒断大鼠脊髓神经元p-CREB的表达。     

小鼠吗啡依赖纳洛酮催促戒断跳跃反应模型的建立

目的建立稳定的小鼠吗啡依赖纳洛酮催促戒断跳跃反应模型。方法小鼠连续皮下注射吗啡,以纳洛酮催促戒断跳跃反应为指标,调整吗啡给予天数(5,6,7,10d)、吗啡累积剂量(360,560,640,945,1100,1105,1200mg/kg)、每日给予吗啡的频数[一天二次(bid),一天三次(tid)]、纳洛酮催促紧前给予吗啡与否、以及纳洛酮剂量(10,20mg/kg),建立四个造模方案包括八个子方案。结果方案A、B2、C2吗啡组小鼠跳跃反应率未达100%;方案B1、C1、D2、D3、D4吗啡组小鼠跳跃次数变异系数较大。方案D1采用小鼠连续皮下注射倍增剂量的吗啡,tid×6d,每日每次剂量分别为5,10,20,40,80,160mg/kg;第7天皮下注射吗啡160mg/kg,3h后腹腔注射纳洛酮10mg/kg,吗啡组小鼠可产生显著的跳跃反应,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),且变异系数小(CV为0.22),该方案吗啡依赖小鼠跳跃反应次数适度,离散度小。结论选用方案D1可建立稳定的小鼠戒断跳跃反应模型。     

吗啡依赖大鼠模型的戒断行为学比较

目的　研究吗啡依赖大鼠模型建立方式和催促戒断给药剂量对戒断强度的影响及其相互关系。方法　对两种常用吗啡依赖大鼠模型在不同剂量纳洛酮催促戒断后,观察戒断体征及体重减轻来评估戒断强度。结果　两组方法均成功建立了大鼠吗啡依赖。5日法（吗啡总剂量380mg.kg－1）模型大鼠在2mg.kg－1和4mg.kg－1纳洛酮催促剂量下戒断强度无显著性差异（P＞0.05）。12日法模型（吗啡总剂量1365mg.kg－1）戒断强度随纳洛酮剂量增加显著上升（P＜0.01）,但仅在4mg.kg－1纳洛酮催促剂量时显著高于5日法模型。结论　应根据不同的实验要求,选择适当的吗啡依赖模型的建立方法,并结合实验条件判定结果。     

吗啡依赖大鼠模型的戒断行为学比较

目的　研究吗啡依赖大鼠模型建立方式和催促戒断给药剂量对戒断强度的影响及其相互关系。方法　对两种常用吗啡依赖大鼠模型在不同剂量纳洛酮催促戒断后，观察戒断体征及体重减轻来评估戒断强度。结果　两组方法均成功建立了大鼠吗啡依赖。5日法（吗啡总剂量380mg     

氯胺酮对小鼠吗啡戒断症状和脊髓星形胶质细胞活性的影响

目的 研究氯胺酮对小鼠吗啡戒断症状和脊髓星形胶质细胞活性的影响。方法 昆明种小鼠30只,随机分为5组(n=6),A组:皮下剂量递增法给药建立吗啡依赖模型;B组:对照组,给予等容积的生理盐水;C、D、E3组:吗啡用药均同A组,最后一次吗啡注射30 min后分别腹腔注射0、8、16 mg/kg氯胺酮。观察纳络酮催瘾后戒断症状的改变;用免疫组化方法测定各组脊髓星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物的变化。结果 与C组相比,D组可缓解吗啡戒断症状(P<0.05),而E组则明显缓解(P<0.01);D组和E组吗啡戒断所致的体重下降显著减轻(P<0.01)。脊髓GFAP免疫反应阳性产物表达相对面积,A组与B组比较,D、E组与C组比较差异均无显著性意义(均为P>0.05)。结论 氯胺酮可缓解小鼠吗啡戒断症状,脊髓星形胶质细胞GFAP活性可能未参与介导吗啡依赖和戒断反应。     

Coadministration of glycogen-synthase kinase 3 inhibitor with morphine attenuates chronic morphine-induced analgesic tolerance and withdrawal syndrome

BackgroundGlycogen-synthase kinase 3 (GSK3) is involved in many signaling pathways and is associated with a host of high-profile pathophysiological states. However, its role in morphine tolerance, especially naloxone-precipitated withdrawal syndrome, has not been well investigated. The present study was undertaken to study the role of GSK3 in chronic morphine exposure.MethodsAdult male Sprague–Dawley rats were subjected to intraperitoneal (i.p.) injections of morphine (10 mg/kg) twice daily for 6 consecutive days, and tail-flick tests were conducted to evaluate changes of morphine-induced antinociception. GSK3 inhibitor, SB216763 or SB415286, was i.p. injected prior to morphine to investigate the influences on morphine tolerance. There were four groups receiving morphine plus vehicle (2% dimethyl sulfoxide), morphine plus SB216763 (0.6 mg/kg) or SB415286 (1.0 mg/kg), GSK3 inhibitor alone, or dimethyl sulfoxide: as the control group. On Day 7, naloxone (i.p., 1 mg/kg) was administered and naloxone-precipitated withdrawal behaviors were individually compared between groups.ResultsRepeated morphine exposure in this study led to progressive shortening of tail-flick latencies and produced six of nine observed naloxone-precipitated withdrawal behaviors. Coadministration with SB216763 or SB415286 significantly prevented antinociceptive tolerance and alleviated parts of withdrawal syndrome. Both inhibitors could similarly reverse withdrawal behaviors including grooming, chewing, and ptosis, but did not affect withdrawal behaviors of penis licking and defecation.ConclusionThe results demonstrate the importance of GSK3 in reducing chronic morphine-induced tolerance and withdrawal syndrome. Although GSK3 is involved in diverse physiological functions, aiming at GSK3-related pathway could still be a potential tool to improve therapeutic quality in clinical morphine treatment.     

脑电图在伽玛刀治疗猴吗啡依赖疗效评价中应用的初步研究

目的研究恒河猴吗啡依赖形成过程中、自然戒断后及伽玛刀治疗后的脑电图变化,结合戒断症状评分,判断伽玛刀治疗猴吗啡依赖的疗效．方法以健康成年恒河猴3只,随机分成2组,建立吗啡依赖动物模型．对照组（n=1）,吗啡依赖后自然戒断;治疗组（n=2）,吗啡依赖后以双侧伏膈核为靶点行伽玛刀治疗．动态监测用吗啡期间、伽玛刀治疗后（对照组自然戒断后）的脑电图变化．结果吗啡依赖后,猴脑电图α频带功率值下降,θ频带、δ频带功率值增加,β频带功率值在前额区呈先减少后增加的变化趋势．伽玛刀治疗后,与同期对照组相比,脑电图的异常改变明显恢复．结论脑电图监测能够从神经电生理变化方面对伽玛刀治疗猴吗啡依赖的疗效作出客观评价．     

褪黑素对吗啡戒断小鼠学习记忆及海马CA1区细胞数的影响

目的　观察褪黑素 (melatonin ,MT)对吗啡戒断小鼠学习记忆能力及海马CA1区细胞数的影响并探讨其机制。方法　建立小鼠吗啡依赖模型 ,皮下注射定量吗啡 ,在注射吗啡的同时每天 2次 (早晚 8:0 0 )用不同剂量的MT(2 .5、5、10mg·kg 1)给小鼠灌胃 ,腹腔注射纳络酮 (5mg·kg-1)催瘾 ,观察其戒断症状 ,电迷宫法检测小鼠学习记忆情况 ;行为学检测结束后 ,处死动物 ,取出全脑 ,固定切片 ,进行形态学观察。结果　褪黑素低、中、高剂量组学习记忆能力与吗啡戒断组比有显著差异 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 0 1) ,在该实验剂量范围内有较好的量效关系 ;3组海马CA1区的细胞数与吗啡戒断组比有显著差异 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 0 1)。结论　MT对吗啡戒断致小鼠学习记忆障碍有改善作用 ,这种作用可能与褪黑素保护海马CA1区神经细胞有关。     

三七总皂甙对吗啡戒断大鼠皮质、纹状体神经细胞内游离钙的影响

[目的]研究三七总皂甙（PNS）对吗啡戒断大鼠皮质、纹状体神经细胞内[Ca^2＋]的影响,深入探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制。[方法]应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡躯体依赖模型,采用腹腔注射纳洛酮建立催促戒断模型,大鼠在给予吗啡的同时用3种不同剂量PNS进行灌胃,记数大鼠的体重变化和跳跃次数,采用流式细胞术测定PNS对吗啡戒断大鼠皮质、纹状体1神经细胞内[Ca^2＋]的影响。[结果]（1）PNS呈剂量依赖性地抑制戒断大鼠体重减轻和跳跃的发生。（2）慢性吗啡作用可以使皮质、纹状体神经细胞内[Ca^2＋]升高;纳洛酮催促戒断可迅速逆转皮质、纹状体神经细胞[Ca^2＋]异常增高;3种不同剂量PNS可以使戒断大鼠脑内[Ca^2＋]缓慢升高,且呈剂量依赖性。[结论]PNS对吗啡依赖大鼠催促戒断症状的抑制作用可能与其对中枢[Ca^2＋]的调节有关。     

不同时程吗啡依赖戒断大鼠海马CA1区BDNF 及PSD-95的表达

目的观察不同时程吗啡依赖大鼠戒断1周后海马CA1区脑源性神经生长因子(BDNF)及突触后致密质95(PSD-95)的表达变化,探讨吗啡依赖戒断对海马CA1区的影响。方法建立不同时程(1周、2周、4周)吗啡依赖大鼠模型并自然戒断1周后,应用RT-PCR方法观察海马CA1区BDNF及PSD-95的表达情况。结果吗啡依赖1周戒断组大鼠海马CA1区的BDNF及PSD-95表达较生理盐水对照组下降(P<0.01),吗啡依赖2周戒断组大鼠海马CA1区的BDNF及PSD-95表达较吗啡依赖1周戒断组大鼠有所上升(P<0.05),但仍低于生理盐水对照组(P<0.01),吗啡依赖4周戒断组大鼠海马CA1区的BDNF及PSD-95表达较吗啡依赖1周戒断组大鼠、吗啡依赖2周戒断组大鼠均下降(P<0.01)。结论BDNF及PSD-95在吗啡依赖大鼠自然戒断1周后的海马CA1区的表达降低,吗啡依赖戒断对海马CA1区损伤明显。     

部分毁损内嗅区皮质区对吗啡戒断大鼠行为学和海马结构CREB表达的影响

目的本探究使用兴奋型神经毒海人藻酸(kainate,KA)部分毁损海马结构信息的主要传入通路内嗅区皮质后,观察吗啡成瘾大鼠戒断时海马结构中CREB蛋白的表达变化及吗啡戒断鼠的行为学的变化。方法实验使用Wistar大鼠,随机均分为4组:①对照组:背部肩胛间皮下注射与实验组等体积的生理盐水;②戒断组:背部肩胛间皮下注射盐酸吗啡;③戒断注生理盐水组:在背部肩胛间皮下注射吗啡,再在内嗅区皮质注射生理盐水;④戒断注KA组:在背部肩胛间皮下注射吗啡,再在内嗅区皮质注射KA。对照组、戒断注生理盐水组和戒断注KA组连续注射6天吗啡,每天按体重增加吗啡量,使之快速成瘾;注射吗啡6天后,不再注射,开始观察戒断症状并在内嗅区皮质注射KA;戒断52h后,处死全部大鼠,用免疫组化染色方法观察各组大鼠海马结构内CREB蛋白的表达。结果①在戒断症状出现的高峰期,单纯戒断组与对照组相比大部分戒断症状的行为学指标都具有阳性意义;戒断注KA组与单纯戒断组或者戒断注射生理盐水组相比较大部分戒断症状的行为学指标下降较明显;戒断注KA组与对照组相比较大部分戒断症状的行为学指标差异不明显;②CREB在对照组、戒断组、戒断注生理盐水组以及戒断注射KA组的表达不同,其中在戒断注射生理盐水组的表达最高,其次为戒断组,在戒断注射KA组表达较低,而在对照组表达最低。结论毁损内嗅区皮质后吗啡成瘾大鼠的戒断症状明显减少,同时海马结构中的CREB表达减少,海马结构可能在大鼠CREB介导的成瘾记忆中有重要作用。     

药物洗脱法模拟阿片类药物戒断细胞模型的建立

目的 应用药物急性洗脱法建立阿片类药物非纳洛酮催促戒断细胞模型.方法 以稳定表达μ阿片受体(Mu opioid receptor,MOR)的CHO细胞CHO-MOR为研究对象,阿片类药物(D-Ala2,N-甲基-Phe,Gly-ol)脑啡肽(DAMGO)及吗啡预处理细胞不同时间,然后采用药物洗脱法将药物去除,运用cAM...