HLA-G在无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者早孕绒毛滋养细胞的表达及意义

目的:研究无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者HLA-G在母胎界面的表达变化,及其对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力的影响。方法:采用SP法对正常早孕和无症状沙眼衣原体及解脲支原体感染患者早孕绒毛组织中HLA-G免疫组化染色并观察HLA-G的定位和分布;采用免疫印迹法检测正常与无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者早孕绒毛组织中HLA-G的表达情况;分离正常与无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者绒毛外滋养细胞并进行培养和鉴定,应用免疫细胞化学法检测HLA-G的表达。结果:免疫组化结果显示正常妊娠时HLA-G主要表达于绒毛滋养细胞;免疫印迹灰度分析显示,对比正常妊娠无症状沙眼衣原体和解脲支原体绒毛感染者的早孕绒毛中HLA-G蛋白表达减弱;培养的正常早孕绒毛外细胞滋养细胞中HLA-G呈强阳性表达,而无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染者其早孕绒毛外细胞滋养细胞中HLA-G表达减弱。结论:无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染能对早孕绒毛HLA-G表达产生影响,造成母胎界面局面免疫功能紊乱,滋养细胞容易受到母体的攻击,从而影响到滋养细胞的侵蚀能力。     

人先天性神经管畸形胎盘印迹基因甲基化状态的研究

目的:研究不同孕周神经管畸形(NTD)胎儿孕妇胎盘中印迹基因H19,PEG10和IGF2基因启动子区的甲基化状态,分析其与NTD的关系.方法:应用MethyLight方法实时定量检测不同孕周28例NTD患儿孕母胎盘和28例正常对照乳母胎盘中印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区的甲基化状态.结果:印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区在胎盘中普遍发生甲基化,而且在NTD患儿孕母胎盘中,H19,PEG10和IGF2中甲基化率略高于正常乳母胎盘组,但无统计学差异.将样品按照不同孕周分组后,IGF2基因启动子区甲基化水平在31～36周NTD胎儿乳母胎盘中显著高于正常胎儿乳母胎盘(P＜0.05).结论:印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区在所检测的NTD患儿孕妇的胎盘中总体甲基化水平与正常胎儿乳母胎盘无差异.但在妊娠31～ 36周时,NTD胎儿乳母胎盘中IGF2启动子甲基化水平显著高于正常胎儿乳母胎盘,提示印迹基因IGF2的甲基化状态可能与NTD的发生有关.     

p-ERK在早孕绒毛组织中的表达及意义

目的:研究人早孕绒毛组织中磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)的表达水平,探讨流产及其有关生殖过程发生的分子机制。方法:采用免疫组织化学、图像分析方法检测30例正常早孕绒毛组织(正常早孕组)和30例自然流产的早孕绒毛组织(自然流产组)中p-ERK的表达水平。结果:人早孕绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞均有p-ERK的表达,自然流产组中p-ERK蛋白表达面积及强度均明显低于正常早孕组,两者差异有显著性意义(P<0.05)。结论:ERK/MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)通路可能是人早孕绒毛滋养细胞增殖、分化及侵入过程中的主要信号转导途径之一。     

解聚素和金属蛋白酶19在人妊娠绒毛和胎盘组织中的表达

目的通过对解聚素和金属蛋白酶19（ADAM19）在人早孕绒毛和胎盘组织中表达的研究，探讨其在妊娠过程中的作用。方法应用免疫组织化学（免疫组化）链霉抗生物素-过氧化物酶法，对23例绒毛及41例胎盘组织中的ADAM19进行检测。结果ADAM19的表达主要集中在滋养细胞的细胞膜、细胞质中和细胞滋养层柱细胞中；早孕绒毛中，ADAM19表达主要集中于细胞滋养细胞膜，在晚孕期胎盘，ADAM19主要表达于合体滋养细胞膜。早孕期绒毛中AD—AM19表达量明显高于中孕期和晚孕期（P〈0．01），中孕期和晚孕期比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ADAM19可能与滋养细胞侵袭功能有关的重要的分子，可能对滋养细胞的浸润和妊娠的维持起重要作用。     

白血病抑制因子及其受体在早孕蜕膜和绒毛组织中表达的研究

目的探讨正常早孕蜕膜和绒毛组织白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)的表达. 方法采用原位杂交和免疫组织化学染色技术对18例正常早孕妇女蜕膜和绒毛组织LIF-mRNA 、LIF和LIFR蛋白的表达进行研究. 结果全部早孕蜕膜组织和绒毛滋养细胞中有LIF-mRNA、LIF和LIFR蛋白表达,同一组织和细胞LIF和LIFR基因表达强弱基本一致,LIFR在绒毛滋养细胞的表达强于蜕膜. 结论人类蜕膜和绒毛滋养细胞LIF和LIFR基因表达可能与胚泡着床、维持胎盘功能和促进胚胎发育有关.     

PPARγ和MMP-2在早孕滋养细胞浸润过程中的作用

目的 探讨PPARγ和MMP-2与早孕细胞滋养细胞浸润的关系.方法 将80例早孕绒毛组织按早期和晚期分为2组,各组40例,分别将其组织采用免疫组织化学技术检测PPARγ/和MMP-2蛋白的表达.结果 PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内,MMP-2阳性颗粒主要存在绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,且早孕早期绒毛PPARγ表达量高于早孕晚期(P＜0.01),而MMP-2表达量在早孕晚期高于早期(P＜0.05),与PPARy呈负相关(rs=-0.74,P＜0.01).结论 PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2的表达实现的.     

印迹基因H19对人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3侵袭能力的影响

目的探讨印迹基因H19对滋养细胞侵袭能力的影响,以期从分子遗传学角度来阐明滋养细胞侵袭行为的调控机制。方法含人全长H19 cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV经测序鉴定正确后,转染滋养细胞株JEG-3,观察其H19 mRNA表达和细胞侵袭力的变化。结果质粒转染JEG-3细胞的转染效率〉50%,转染目的基因H19后mRNA表达较对照组显著升高;转染目的基因后JEG-3细胞穿膜细胞数明显少于未转染组和空载体转染组。结论H19基因过表达可抑制JEG-3的侵袭能力,为H19调控滋养细胞侵袭行为提供了直接的实验证据。     

REDD1在胎盘组织中的表达及意义

目的探讨发育及DNA损伤反应调节基因1(regulated in development and DNA damage responses 1,REDD1)在人胎盘组织中的表达及其意义。方法选择早孕绒毛组织(6~10周)、中孕(24~28周)及足月晚孕(38~39周)胎盘组织各8例,采用免疫组织化学染色技术,Western blot杂交以及实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测REDD1 mRNA及蛋白在不同孕周胎盘组织中的表达。结果 REDD1蛋白表达于胎盘滋养细胞的细胞质中,随着孕周增加,REDD1在mRNA及蛋白在胎盘组织中的表达呈现下降趋势。结论 REDD1可能早期参与了滋养细胞侵袭的过程。     

STOX1在正常妊娠及重度子痫前期胎盘组织中的表达及意义

目的探讨STOX1在正常妊娠及重度子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法采用蛋白质印迹法(Western blotting)、逆转录PCR(RT-PCR)及免疫组织化学染色法测定晚期正常妊娠(42例)、重度子痫前期(30例)胎盘组织中STOX1基因的表达。结果 STOX1基因在正常晚期妊娠及重度子痫前期胎盘组织中均有提示;STOX1基因多见于绒毛的细胞滋养细胞与合体滋养细胞;与正常晚孕比较,重度子痫前期胎盘组织中STOX1 mRNA及蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论重度子痫前期存在STOX1基因及其表达增强,其异常表达可能参与重度子痫前期的发生发展。     

CD4、CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在 HIV-1感染者及正常人晚孕胎盘及早孕绒毛的表达

目的 明确CD4、CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在HIV-1不同感染状态晚孕胎盘和早孕绒毛的存在及表达情况,为探索HIV-1宫内传播的分子机制提供理论依据.方法 收集11例HIV-1感染孕妇胎盘、13例正常孕妇胎盘和10例早孕流产绒毛,免疫组化检测并比较3组孕妇胎盘或绒毛组织中HIV-1相关受体CD4、CCR5、CXCR4和DC -SIGN分子的存在情况及其表达强度.结果 CD4在早孕绒毛和晚孕胎盘中的表达存在个体差异,早孕组、对照组和病例组CD4阳性率分别为70.00％、61.54％、72.73％,3组阳性率差异无统计学意义(P=0.902).CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在胎盘均有表达,均定位于滋养细胞和绒毛间质细胞和/或Hofbauer细胞,且在早孕绒毛中的表达强度均低于晚孕胎盘组,差异均有统计学意义(t1=-4.09,P1＜0.001;t2=-4.80,P2＜0.001;t3=-4.57,P3=0.001).结论 胎盘组织中存在多种HIV-1受体相关分子,具备感染的分子基础.胎盘滋养细胞上是否存在CD4分子具有个体差异;CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在晚孕胎盘中的表达高于早孕的绒毛,可能是HIV-1感染宫内传播多发生于孕晚期的原因之一.     

Genomic imprinting in primate embryos and embryonic stem cells

Embryonic stem (ES) cells hold promise for cell and tissue replacement approaches to treating human diseases. However, long-term in vitro culture and manipulations of ES cells may adversely affect their epigenetic integrity including imprinting. Disruption or inappropriate expression of imprinted genes is associated with several clinically significant syndromes and tumorigenesis in humans. We demonstrated aberrant biallelic expression of IGF2 and H19 in several rhesus monkey ES cell lines while SNRPN and NDN were normally imprinted and expressed from the paternal allele. In contrast, expanded blastocyst-stage embryos, from which these ES cells were derived, exhibited normal paternal expression of IGF2 and maternal expression of H19. To test the possibility that aberrant methylation at an imprinting centre (IC) upstream of H19 accounts for the relaxed imprinting of IGF2 and H19, we performed comprehensive methylation analysis by investigating methylation profiles of CpG sites within the IGF2/H19 IC. Our results demonstrate abnormal hypermethylation within the IGF2/H19 IC in all analysed ES cell lines consistent with biallelic expression of these genes. Cellular overproliferation and tumour formation resulting from tissue or cell transplantation are potential problems that must be addressed before clinical trials of ES cell-based therapy are initiated.     

CXCL12/CXCR4在正常妊娠胎盘组织中的表达及意义

目的探讨CXCL12/CXCR4在正常妊娠不同孕期胎盘组织中的表达情况及其在滋养层细胞侵蚀及孕卵着床等正常妊娠过程中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测50例正常孕妇(早孕15例、中孕15例、晚孕20例)胎盘组织中CXCL12/CXCR4表达程度。结果CXCL12/CXCR4在早、中孕组滋养细胞、基质细胞、蜕膜组织中呈强阳性表达,晚孕组呈弱阳性或阴性表达,与早、中孕期组相比表达明显减弱,差异有极显著性(P<0.01)。结论CXCL12/CXCR4可能在胎盘形成、子宫-胎儿血管系统的建立等过程中发挥重要作用。     

正常妊娠不同孕期胎盘组织中基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1的表达

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (MMP) - 9及其组织蛋白酶抑制物 (TL MP) - 1在正常妊娠不同孕期胎盘组织中的表达情况及其在滋养层细胞侵蚀及孕卵着床等正常妊娠过程中的作用。方法 :采用免疫组织化学 SP法检测 4 5例正常孕妇 (早孕 10例、中孕 15例、晚孕 2 0例 )胎盘组织中 MMP- 9/ TIMP- 1表达程度。结果 :MMP- 9在早、中孕组的滋养细胞、基质细胞、蜕膜组织中呈强阳性表达 ,晚孕组呈阳性表达 ,与早、中孕期组相比表达明显减弱 ,有极显著性差异 (P<0 .0 1) ;TIMP- 1在早、中孕组呈阳性表达 ,晚孕组呈强阳性表达 ,与早、中孕组相比表达明显增强 ,有极显著性差异 (P<0 .0 1)。结论 :MMP-9/ TIMP- 1可能在胎盘的形成、子宫 -胎儿血管系统的建立等过程中发挥重要作用。     

惠州市同型β地中海贫血夫妇的胎儿产前地贫基因诊断分析

目的研究惠州市同型β地贫夫妇的胎儿地贫携带率、基因突变类型和分布特点。方法 116对夫妇均为轻型β-地中海贫血基因突变者,在孕早期取胎儿绒毛组织,孕中期取脐血或羊水,孕晚期取脐血;对羊水细胞和绒毛组织进行原位培养,脐血进行血液学和血红蛋白分析,分别采用培养前后的组织或脐血进行β地中海贫血基因检测。结果 116例胎儿中检出重型β-地中海贫血胎儿27例(23.28%);检出地贫携带者56例(48.28%)。共检出11种突变基因,21种基因型,居前4位的依次是:CD41-42(26.51%)(22/27+56)、IVS-Ⅱ-654(14.46%)(12/27+56)、CD-28(10.84%)(9/27+56),CD17(6.02%)(5/27+56);其中,单突变杂合子9种,56例(67.47%)(56/27+56),双突变杂合子10种,24例(28.92%)(24/27+56),突变纯合子2种,3例(3.61%)(3/27+56),另外,检出少见位点突变CD14-15和CD41-42/43各1例。结论本研究描述了惠州市同型β地贫夫妇的胎儿地贫的发生率和基因突变谱,为制订本地区地贫的防治工作提供科学依据。     

Survivin及p53与葡萄胎恶变的相关研究

目的:探讨Survivin及P53蛋白的表达在葡萄胎发生、发展及恶变中的作用。方法:采用免疫组织化学PV-6000法测定42例葡萄胎(其中12例恶变)和18例正常绒毛组织中p53和Survivin蛋白表达情况。结果:Survivin正常绒毛组和葡萄胎组的表达差异无统计学意义(P>0.05);p53在正常绒毛组和葡萄胎组表达差异具有统计学意义(P<0.05);Survivin及p53蛋白阳性表达率在葡萄胎恶变组中的表达均高于葡萄胎未恶变组(P<0.05)。结论:Survivin及p53可能与滋养细胞的侵袭过程及程度有关,检测葡萄胎组织中P53及Survivin的蛋白表达,可预测葡萄胎恶变,为临床预防性化疗提供一定的理论依据。     

MMP-7、MMP-26在妊娠滋养细胞疾病中的表达研究

目的：研究基质金属蛋白酶（ MMP）-7、MMP-26在滋养细胞疾病中的表达及与研究滋养细胞肿瘤相关因素之间的关系,为早期临床诊断滋养细胞疾病,判断其恶性程度提供有价值的线索。方法应用免疫组织化学S-ABC 法检测10例正常绒毛,15例完全性葡萄胎,5例部分性葡萄胎,14例侵蚀性葡萄胎,8例绒癌组织中MMP-7、MMP-26的表达,进行统计学分析。结果①MMP-7在正常绒毛组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组、绒癌组表达的阳性率分别为60．000％、45．000％、85．714％、100．000％,且有明显的统计学差异（χ2＝11．011,P＝0．012）,同时,MMP-7阳性率与胎盘绒毛滋养细胞非正常增生有显著相关性（r＝7．709, P＝0．005）,正常绒毛组、葡萄胎组分别和侵蚀性葡萄胎组、绒癌组之间阳性率比较具有明显的统计学差异（P＜0．05）;②MMP-26在正常绒毛组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组、绒癌组的表达阳性率分别为90．000％、45．000％、35．714％、25．000％,且有明显的差异（χ2＝9．680,P＝0．021）,同时,MMP-26阳性率与胎盘绒毛滋养细胞非正常增生有显著相关性（r＝7．519,P＝0．006）。正常绒毛组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组、绒癌组MMP-26阳性率两两之间比较均有明显差异（P＜0．05）。结论 MMP-7高表达MMP-26低表达可能提示妊娠滋养细胞侵袭性增强,对葡萄胎清宫组织检测MMP-7、MMP-26表达强度,有助于判断葡萄胎的侵袭性强弱。     

妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中HGF、MMP-9的表达及意义

目的:通过分析子痫前期患者胎盘与正常晚孕妇女胎盘组织中肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,探讨其在妊娠期高血压疾病(HDCP)发病中的作用。方法:选择晚孕期正常组孕妇35例、子痫前期组71例(包括轻度子痫前期组37例;重度子痫前期组34例)作为研究对象。两组均在临产前行剖宫产术,胎盘娩出后30 min内取胎盘母面中央绒毛组织块约1×1×1 cm,避开钙化区及坏死区,留取胎盘组织。生理盐水充分清洗,10%中性福尔马林溶液固定24 h以上,常规石蜡包埋4μm连续切片。免疫组织化学SP法检测胎盘组织中HGF、MMP-9的表达强度,根据细胞内染色强度和阳性细胞数分级。应用SPSS12.0统计软件进行数据处理。结果:①正常晚孕组胎盘组织中HGF、MMP-9表达均呈强阳性,阳性表达率分别为71.43%、80.00%;轻度子痫前期组胎盘组织中HGF、MMP-9表达均呈阳性,阳性表达率分别为64.86%、72.97%;重度子痫前期组胎盘组织中HGF、MMP-9阳性颗粒均明显减少,阳性表达率为35.29%、32.35%。②子痫前期组胎盘组织中HGF、MMP-9表达与正常晚孕组比较均有明显差异(P<0.05);重度子痫前期组胎盘组织HGF、MMP-9表达与对照组比较均有显著差异(P<0.01);轻度子痫前期组胎盘组织HGF、MMP-9表达与重度子痫前期组比较也有显著差异(P<0.05);轻度子痫前期组胎盘组织HGF、MMP-9表达与对照组比较无明显差异(P>0.05)。③重度子痫前期组HGF和MMP-9的表达水平存在正相关性(r=0.5663P<0.01)。结论:正常妊娠胎盘绒毛表达HGF及MMP-9子痫前期病情严重程度和此两种因子的表达密切相关,提示可能因HGF和(或)MMP-9表达减少、滋养细胞侵袭受限而引起胎盘生理性血管重铸障碍,导致胎盘缺血,引起一系列子痫前期临床症状发生。