全反式维甲酸诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的探讨全反式维甲酸（ATRA）诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡的可能性，并进一步研究其作用机制。方法体外培养人膀胱癌脚细胞，以不同浓度ATRA处理后，用MTT法测定细胞生长抑制情况；流式细胞术检测细胞凋亡率；分光光度法检测caspase-3活性；逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法检测bcl-2 mRNA表达。结果ATRA能显著抑制EJ细胞的生长，并在一定浓度和时间范围内呈现出时间、剂量依赖关系；细胞的凋亡率随着ATRA浓度的增大而增高；ATRA作用后bcl-2 mRNA表达随着ATRA浓度的增大而降低；caspase-3基因的活性随着ATRA浓度的增大而升高。结论ATRA对人膀胱癌EJ细胞生长的抑制在一定浓度范围内呈时间和剂量依赖性。ATRA通过抑制bcl—2 mRNA表达，激活caspase-3基因而诱导凋亡，这为其诱导凋亡的作用机制之一。     

SeO2逆转人卵巢癌耐药细胞株耐药性的研究

[目的]探讨SeO2对体外培养的人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP细胞耐药性的影响及其可能的作用机制.[方法]用MTT法、流式细胞术、电镜检测体外培养的COC1/DDP细胞在单独SeO2及与DDP联合作用下的增殖抑制及凋亡程度,用间接免疫荧光标记法在流武细胞仪上检测Survivin蛋白的表达水平.[结果]SeO2对COC1/DDP细胞的增殖抑制作用随SeO2浓度升高而明显增强,其最适浓度约10μmol/L,SeO2与DDP同时作用时增殖抑制作用明显增高;应用流武细胞术,10μmoL/L的SeO2与DDP同时作用于COC1/DDP细胞72 h,凋亡率达(30.66±2.34)%,电镜术也可检测到凋亡细胞存在;应用间接免疫荧光标记法在流式细胞仪上检测,SeO2与DDP同时作用72 h COC1/DDP细胞的Survivin蛋白表达水平明显降低.[结论]在体外,SeO2可增强COC1/DDP细胞对DDP的敏感性,诱导其凋亡.其诱导凋亡机制可能与下调Survivin蛋白的表达水平有关.     

全反式维甲酸诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡的可能性,并进一步研究其作用机制.方法 体外培养人膀胱癌EJ细胞,以不同浓度ATRA处理后,用MTT法测定细胞生长抑制情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;分光光度法检测caspase-3活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2 mRNA表达.结果 ATRA能显著抑制EJ细胞的生长,并在一定浓度和时间范围内呈现出时间、剂量依赖关系;细胞的凋亡率随着ATRA浓度的增大而增高;ATRA作用后bcl-2 mRNA表达随着ATRA浓度的增大而降低;caspase-3基因的活性随着ATRA浓度的增大而升高.结论 ATRA对人膀胱癌EJ细胞生长的抑制在一定浓度范围内呈时间和剂量依赖性.ATRA通过抑制bcl-2 mRNA表达,激活caspase-3基因而诱导凋亡,这为其诱导凋亡的作用机制之一.     

黄连素对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄连素对人卵巢癌细胞株OVCAR3增殖和凋亡的影响,为卵巢瘤的治疗提供实验依据。方法采用不同浓度的黄连素处理人卵巢癌细胞株OVCAR3,等体积培养基培养正常对照组细胞。CCK-8法观察黄连素对卵巢癌细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测黄连素处理后细胞凋亡情况;RT-PCR、Western Blot分别检测卵巢癌细胞中Caspase-3、Caspase-8mRNA及蛋白表达情况。结果黄连素抑制人卵巢癌细胞株OVCAR3的增殖且呈时间剂量依赖性,并促进细胞凋亡。RT-PCR、Western Blot结果显示:黄连素作用于OVCAR3细胞株后,细胞Caspase-3、Caspase-8 mRNA及蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论黄连素能够通过抑制人卵巢癌细胞株OVCAR3增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用,可为临床卵巢癌治疗策略提供新的思路。     

米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡的影响

目的:探讨米非司酮合用顺铂对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增殖及凋亡率的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株增殖活力的影响,采用流式细胞术观察不同浓度的米非司酮合用顺铂对COC1/DDP细胞株凋亡率的影响。结果:对照组和顺铂组比较,米非司酮加顺铂组细胞增殖活力OD值明显下降,细胞凋亡率明显升高,且随着米非司酮浓度的升高变化愈加显著(P<0.05和P<0.01)。结论:米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞增殖活力均具有显著抑制作用,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,其增敏作用与促进细胞凋亡有关,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系。     

人卵巢癌COCl／5-Fu耐药细胞株多药耐药与凋亡关系的研究

目的探讨耐药株人卵巢癌细胞COC1／5-Fu的耐药机制及耐药与细胞凋亡的关系。方法检测COC1／5-Fu细胞株对不同抗肿瘤药物的敏感性,流式细胞仪分析COC1／5-Fu细胞在5-Fu作用的凋亡情况以及对5-Fu的耐受分析,RT—PCR分析COC1／5-Fu细胞株中凋亡相关基因p53、bcl-2、bcl—xl、bax等基因的表达情况。结果COC1／5-Fu细胞与COCl细胞相比除对5-Fu耐药外,对其它几种常用化疗药均有不同程度的耐药性;COCl细胞未经5-Fu处理的对照组、30ixmol／L5-Fu组及150umol／L5-Fu组的凋亡指数与对照组相比,凋亡分别增加了1．2倍和2。1倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,而经同样浓度5-Fu处理的COC1／5-Fu细胞与其对照组相比,细胞凋亡变化不明显（P〉0．05）;经30umol／L和150umol／L5-Fu处理后,COC1细胞与其对照组相比,呈现明显的GO／G1期增加,S期、G2／M减少,而COC1／5-Fu细胞与其对照组相比细胞周期未见改变;PCR分析发现与COC1细胞相比,COC1／5．Fu细胞耐药株bcl-xl、bcl-xs和bax的表达增高,而p53和cpp32的表达减少,特别是p53基因表达明显减少（P〈0．05）。结论wtp53基因的突变与卵巢癌细胞的细胞周期的改变、耐药性的产生相关,是卵巢癌细胞COC1／5-Fu产生多药耐药性的机制之-。     

As2O3对NB4细胞增殖及凋亡的影响

目的研究不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对急性粒细胞白血病细胞株NB4（APLM3）凋亡及细胞周期的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测As2O3对NB4的细胞毒活性，流式细胞仪AnnexinVFITC-PI检测细胞凋亡率，溴化丙碇（PI）染色法检测细胞周期。结果1～8μmol／LAs2O3能显著抑制NB4细胞增殖，且这些变化呈明显的时间和浓度依赖关系（时间一剂量效应）。2～8μmol／LAs2O3能显著诱导NIM细胞凋亡，处理时间为12h，其早期凋亡率和总凋亡率均与剂量呈线性正相关；处理时间为24h，其早期凋亡率、中晚期凋亡率和总凋亡率与剂量呈线性正相关；As2O3处理时间为36h和48hNB4细胞以中晚期调亡为主。流式细胞检测表明，不同浓度的As2O3均使NB4细胞周期阻滞在G2／M期。结论As2O3能抑制人白血病NB4细胞增殖，其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖使细胞受阻于G2／M期。其诱导凋亡作用具有时间和浓度依赖关系。     

蜈蚣提取液体外抗肝癌Bel-7404细胞作用机制的研究

目的研究蜈蚣提取液（ECP）对肝癌Bel-7404细胞株的作用机制。方法采用不同浓度ECP作用于体外培养的肝癌细胞Bel-7404，流式细胞仪检测治疗组与对照组的细胞周期及其凋亡率；免疫组化法检测两组细胞内凋亡相关基因X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）及Bax的表达情况。结果ECP在不同浓度下，Bel-7404细胞内G0／G1期所占的比例、细胞增殖指数（PI）和细胞凋亡率是不同的，且差异有统计学意义（P〈0．05）。在相同浓度组下，24h的细胞凋亡率明显低于48h的，差异有统计学意义（P〈0．01）；随ECP浓度加大，XIAP在Bel-7404细胞中表达逐步减少，Bax表达逐步增多。结论ECP作用Bel-7404细胞的G1／G0期，抑制其增殖。通过上调Bax和抑制XIAP的表达，诱导并促进肝癌细胞凋亡，其作用呈剂量和时间依赖效应。     

洛铂对卵巢癌细胞SKOV3增值抑制及对bax、bcl-2凋亡基因表达的影响

目的:研究洛泊作用于浆液性卵巢癌细胞SKOV3后其对凋亡基因bcl-2和bax表达的影响。方法:体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用,流式细胞仪检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2的表达。结果:体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡,同时随着洛铂浓度的增加,bax基因的表达增加,而bcl-2表达减少。结论:卵巢癌SKOV3细胞对洛泊具有药物敏感性,洛泊可诱导卵巢癌细胞的凋亡,bax蛋白的表达增加和bcl-2蛋白表达的减少可能是洛泊诱导卵巢癌细胞的凋亡机制之一。     

1,25-(OH)2D3抑制人肝癌细胞增殖的研究

目的：探讨1，25－（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖的机制。方法：体外培养肝癌细胞株SMMC－7721，培养基因10、50及100（nmol/L)1，25－（OH）2D3作用2d,4d,6d后，用四唑盐比色试验（MTT）和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长；台盼蓝拒染法绘制生长曲线；DNA凝胶电泳检测肝癌细胞凋亡。结果：MTT和平板克隆形成实验检测结果显示10－100nmol/L的1，25－（OH）2D3均对SMMC－7721细胞株有显的抑制作用，且呈剂量－效应关系。DNA凝胶电泳结果显示，1，25－（OH）2D3能够诱导SMMC－7721细胞凋亡。结论：1，25－（OH）2D3对于人肝癌细胞株SMMC－7721的增殖有显的抑制，其机理可能是通过干扰肝癌细胞的DNA代谢和诱导肝癌细胞凋亡。     

γ-分泌酶抑制剂对人脐静脉内皮细胞系增殖凋亡的影响

目的探讨Notch信号特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对正常人脐静脉内皮细胞系增殖凋亡的影响。方法分别用不同浓度DAPT（15、30、45、60μM/L）处理体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）12h、24h和48h,MTT法测定内皮细胞活力;粘附实验测定处理24h后细胞粘附率;TUNEL法检测处理24h后细胞凋亡率;Western法检测Notch信号通路受体Notch1的表达。结果 MTT检测显示DAPT显著抑制HUVECs存活（P〈0.01）,并呈浓度时间依赖性;粘附实验结果显示DAPT（24h）可以显著减弱HUVECs粘附能力（P〈0.01）;TUNEL检测显示DAPT（24h）可以显著增加HUVECs凋亡率（P〈0.01）;Westernblot结果显示DAPT使HUVECs中Notch1表达显著下降（P〈0.01）。结论 DAPT可阻断Notch信号通路,抑制正常人脐静脉内皮细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

罗格列酮对胃癌AGS细胞株生长的影响

目的探讨PPARγ配体罗格列酮对胃癌AGS细胞株增殖、凋亡的作用及其分子机制。方法采用MTS法测定罗格列酮对胃癌AGS细胞株存活率的影响,流式细胞术检测罗格列酮对AGS细胞凋亡的影响,荧光定量PCR及Western blot法检测罗格列酮对PPARγ、HCaRG及DLK1 mRNA及蛋白的表达。结果不同浓度罗格列酮（1—100μM）处理AGS细胞株24h及48h,细胞的存活率明显降低,其作用呈浓度及时间依赖性,预先加入PPARγ拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮的作用;不同浓度罗格列酮处理AGS细胞株48h,细胞凋亡百分率明显高于对照组（t≥2．97,P〈0．05）,GW9662不能逆转罗格列酮的作用;罗格列酮诱导AGS细胞株PPARγ、HCaRG及DLK1的表达,并呈剂量依赖,GW9662能阻断罗格列酮诱导DLK1表达的作用,而不能阻断其诱导HCaRG表达的作用。结论罗格列酮通过PPARγ依赖及非依赖两种途径抑制胃癌AGS细胞株生长,诱导DLK1及HCaRG表达可能是罗格列酮抗胃癌作用机制之一。     

塞来昔布对急性白血病原代细胞凋亡的影响

目的：探讨塞来昔布对急性白血病原代细胞的增殖抑制与诱导凋亡的作用。方法：采用MTT法检测塞来昔布对急眭白血病原代细胞的增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：塞来昔布能显著抑制急性白血病原代细胞的增殖,且呈时间和剂量具有依赖性（P〈0．05）;流式细胞仪结果分析发现,实验组与对照组的凋亡率有显著差异,且实验组的凋亡率明显升高,呈剂量依赖性（P〈0．01）。结论：塞来昔布能有效抑制急性白血病原代细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制有待进一步研究。     

全反式维甲酸与PD98059联合应用抑制结肠癌细胞的增殖

目的本实验拟通过阐明全反式维甲酸（ATRA）与MEK1／2的特异性抑制剂PD98059联合作用对结肠癌细胞增殖的影响。方法实验分组：未加药对照组,ATRA加药组,ATRA与PD98058联合加药组。MTT法检测PD98059联合ATRA对结肠癌细胞株LS174T的增殖抑制作用。流式细胞仪检测结肠癌细胞凋亡情况。结果MTT法显示PD98059联合ATRA应用引起细胞抑制效果明显优于单个药物作用的效果。流式细胞仪检测也表明两种药物联合应用引起结肠癌细胞凋亡效果明显优于任一单个药物。结论AT1KA与PD98059联合应用可通过引起结肠癌细胞凋亡．从而抑制癌细胞增殖。     

姜黄素通过Notch途径抑制人宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖

目的:探讨姜黄素对人宫颈癌细胞株HeLa细胞体外增殖抑制及凋亡诱导作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度姜黄素对HeLa细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测HeLa细胞Notch1、Notch2、Jagged1、Bcl-2、Bax基因表达情况。结果:姜黄素对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。随着姜黄素剂量的增加,Notch1、Notch2、Bcl-2mRNA的表达逐渐下降,Bax mRNA的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax亦逐渐减小,Jagged1mRNA无明显变化。结论:姜黄素可能通过Notch信号途径改变凋亡蛋白的表达,抑制HeLa细胞增殖。     

塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响

目的探讨塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度(0、0. 625、12. 5、25、50及100μmol/L)塞来昔布对COC1/DDP细胞生长的影响,计算出24、48及72h的IC50。将对数生长期的COC1/DDP细胞随机分为对照组(未做处理)、顺铂组(给予2μg/ml顺铂)、塞来昔布组(给予25μg/ml塞来昔布)及联合组(给予25μg/ml塞来昔布+2μg/ml顺铂)。MTT法检测各组细胞的生长情况,FCM检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测各组细胞中增殖细胞核抗原(Ki67)、细胞周期素D1 (Cyclin D1)、生存素(Survivin)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达。结果塞来昔布能够呈时间-浓度依赖性抑制COC1/DDP细胞生长,其在24、48和72 h的IC50分别为47. 05、25. 86和16. 11μmol/L。与对照组相比,顺铂组、塞来昔布组和联合组中COC1/DDP细胞的OD值以及Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低,凋亡率均显著升高;但顺铂对COC1/DDP细胞的作用较弱,塞来昔布对COC1/DDP细胞的作用较强,联合用药能够增强两者对COC1/DDP细胞的作用且高于两者之和。结论塞来昔布联合顺铂能够协调抑制COC1/DDP细胞生长并诱导细胞凋亡,降低COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性,其分子机制可能与下调Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白表达有关。     

去甲斑蝥素联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）联合ABT-737对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测NCTD单药或联合ABT-737对宫颈癌细胞株HeLa、SiHa增殖的影响;采用流式细胞术分析NCTD联合ABT-737对宫颈癌细胞凋亡的影响。结果：NCTD单药能够显著抑制宫颈癌细胞株HeLa、SiHa的增殖,抑制作用呈剂量依赖性。NCTD与ABT-737联用后抑制作用明显增强。1 μmol/L ABT、60 μmol/L NCTD及两药联用诱导HeLa细胞的凋亡率分别为（31.65±7.75）%、（40.34±14.52）%和（63.03±10.90）%,诱导SiHa细胞的凋亡率分别为（9.76±0.04）%、（22.04±3.03）%和（58.36±2.31）%。NCTD、ABT两药联合的促凋亡作用比单药显著增强（P＜0.05）。结论：NCTD单药在体外能够明显抑制宫颈癌细胞HeLa、SiHa的增殖,与ABT-737联用后抑制增殖和促凋亡作用更加显著。     

羟苯维胺脂对卵巢癌细胞SKOV3的体外影响

目的探讨羟苯维胺脂(4-HPR)对卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响.方法通过细胞生长曲线和MTT法观察4-HPR对卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制作用,通过流式细胞观察4-HPR对细胞周期的影响和诱导凋亡作用.结果5和10 μmol/L的4-HPR可显著抑制卵巢癌细胞株SKOV3的生长和增殖,MTT显示IC50为3.2μmol/L.流式细胞检测显示4-HPR可使S期和G2期的比例增加,可诱发卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡,其诱导凋亡的作用呈时间和剂量依赖性.结论4-HPR可抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞的凋亡,在卵巢癌的治疗上有临床应用前景.     

急性三氯异氰尿酸中毒1例报告

目的探讨工业有机溶剂三氯乙烯（trichloroethylene,TCE）对体外培养人皮肤角质形成细胞（keratinocyte,KC）的凋亡诱导作用及抗氧化物质维生素E（vitamine E,Vit E）对其保护作用。方法TCE组以不同浓度TCE（0．125、0．50、2．0mmol／L）作用于体外培养的人KC;Vit E保护组分别采用不同浓度TCE和150μmoL／L Vit E共同作用于KC。利用透射电子显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡水平,并测定细胞DNA含量,计算凋亡发生率及增殖指数（PI）。结果透射电子显微镜观察可见TCE组KC出现凋亡改变,而Vit E保护组细胞凋亡改变不明显;流式细胞仪定量检测可见TCE组细胞凋亡率较对照组高,而增殖指数降低;VitE保护组细胞凋亡率比TCE作用组低,而增殖指数升高,且有统计学意义。结论TCE对体外培养人KC具有凋亡诱导作用,VitE对其具有保护作用。     

Nimesulide诱导胰腺癌细胞凋亡机制的研究

目的：探讨选择性COX-2抑制剂Nimesulide对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能分子机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察不同浓度Nimesulide对PANC-1细胞增殖的影响;流式细胞术（FACS）及DNA梯状电泳（DNA ladder）检测PANC-1细胞凋亡的改变;Western blotting法检测Nimesulide不同浓度作用下PANC-1细胞COX-2蛋白水平的改变,RT-PCR法检测COX-2 mRNA水平的变化。结果：MTT、流式细胞术及DNA ladder显示Nimesulide呈剂量依赖性地抑制PANC-1细胞的增殖,并诱导其凋亡;Western blotting和RT-PCR法显示随着药物浓度的增加,COX-2蛋白及mRNA表达降低。结论：Nimesulide可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡,从而抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长。