虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响☆

背景:虎杖多年来一直是烧伤、创伤创面愈合治疗方剂中的一味主药,因成分复杂,具体药理作用难以进一步研究,对于虎杖苷促愈合作用目前未见文献报道. 目的:分析不同浓度虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响. 方法:取烧伤后行瘢痕切除植皮4例患者剩余小中厚皮片,原代培养人成纤维细胞.用含有10-6,10-5,10-4,10-3,10-2 mol/L不同浓度虎杖苷培养液作用第2代人成纤维细胞,未加虎杖苷的培养液作为对照.MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;ELISA法检测上清中纤维结合蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达情况. 结果与结论:10-5、10-4 mol/L组促进成纤维细胞增殖最明显,10-2 mol/L组吸光度值显著下降,细胞生长受抑制.10-3 mol/L组G1期细胞大幅度下降,细胞有S期阻滞现象.10-2 mol/L组有明确的促凋亡作用.10-2 mol/L组上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较其他各组显著增高(P <0.05);纤维结合蛋白较对照组显著增高(P <0.05),较其他各组有所下降(P <0.05).说明低浓度虎杖苷有促进成纤维细胞增殖、保护细胞免于凋亡及促进纤维结合蛋白的表达与合成分泌的作用,促进成纤维细胞增殖的最适浓度应为10-5~10-4 mol/L.     

miR-181a-5p介导虎杖苷体外诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制研究

【目的】探讨虎杖苷体外干预对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响。【方法】以不同浓度(0、2、4、6、8、16μmol/L)的虎杖苷处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT方法检测细胞增殖变化。乳腺癌MDA-MB-231细胞分成对照组(常规培养)、虎杖苷组(6μmol/L虎杖苷处理)、虎杖苷+Anti-NC组(转染inhibitor control,6μmol/L虎杖苷处理)、虎杖苷+Anti-miR-181a-5组(转染miR-181a-5 inhibitor,6μmol/L虎杖苷处理)。流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡情况,Western blot检测MDA-MB-231细胞Bax和c-caspase-3、caspase-3蛋白表达水平,Realtime PCR方法测定MDA-MB-231细胞miR-181a-5p表达水平。【结果】与对照组比较,2、4、6、8、16μmol/L的虎杖苷处理后的细胞吸光值显著降低(均P<0.05)。与虎杖苷+Anti-NC组比较,虎杖苷+Anti-miR-181a-5组乳腺癌细胞中miR-181a-5p水平降低,吸光值升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax、c-caspase-3、caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与对照组比较,虎杖苷组乳腺癌细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Bax、c-caspase-3、caspase-3水平升高,miR-181a-5p表达水平升高(P<0.05)。【结论】虎杖苷通过上调miR-181a-5p抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化及黄芪甲苷的协同作用（英文）

背景：大多学者使用5-氮胞苷作为诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞定向分化。目的：观察联合应用黄芪甲苷及5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞定向分化中心肌细胞相关受体的表达。方法：选用生长良好的第3代骨髓间充质干细胞,分为4组。Ⅰ组：仅更换L-DMEM培养液;Ⅱ组：100mg/L黄芪甲苷＋5μmol/L5-氮胞苷诱导24h后,更换L-DMEM培养液。Ⅲ组：10μmol/L5-氮胞苷孵育24h后,更换L-DMEM培养液;Ⅳ组：5μmol/L5-氮胞苷孵育24h后,更换L-DMEM培养液。各组均每3d换液1次,诱导30d后对分化细胞进行鉴定。结果与结论：①Ⅲ组、Ⅳ组及Ⅱ组诱导后细胞心肌细胞特异性蛋白Nkx2.5、cTnT及Desmin的表达均为阳性,与Ⅰ组比较,差异有非常显著性意义（P〈0.01）。Ⅱ组及Ⅲ组诱导后2周,镜下见cTnT、Desmin表达数量高于Ⅳ组（P〈0.01）。Nkx2.5在两组表达亦高于Ⅳ组,其中Ⅱ组与Ⅳ组比较,差异有极显著性意义（P〈0.01）,Ⅲ组与Ⅳ组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。Ⅰ组无上述蛋白的阳性表达。②诱导后2周,镜下可见Ⅱ组、Ⅲ组细胞出现心肌细胞样的节律性跳动,证明部分细胞在诱导因素的作用下,已向心肌细胞分化。结果表明用100mg/L黄芪甲苷＋5μmol/L5-氮胞苷联合诱导可产生与10μmol/L5-氮胞苷相似的诱导效果,这可能与黄芪甲苷对细胞具有保护作用,促血管内皮细胞增殖作用,增强细胞对5-氮胞苷细胞毒性的耐受,上调心肌特异性蛋白的表达有关。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型的改变

背景:近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用,但对于引起血管外膜成纤维细胞表型转化的机制尚不十分清楚.目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变,同时检测对Ⅰ胶原蛋白表达的作用.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-07/2008-10在上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室完成.材料;鼠龄2个月的健康雄性SD大鼠,体质量约120 g,用于体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;转化生长因子β1由美国GenWay Biotech公司提供;罗格列酮粉剂为北京高盟化工有限公司产品.方法:实验分为3组:转化生长因子β1诱导组:以不同质量浓度的转化生长因子β1(3,5,10,15 μg/L)诱导成纤维细胞48 h;罗格列酮干预组:用不同浓度的PPAR-γ激动剂罗格列酮(5,10,30,50 μmol/L)干预成纤维细胞45 min后,加入转化生长因子β1 10 μg/L共同培养48 h:对照组:不添加任何干预措施.主要观察指标:①免疫组织化学α-平滑肌肌动蛋白检测不同浓度转化生长因子β1、罗格列酮干预后成纤维细胞的表型改变.②蛋白免疫印迹检测成纤维细胞中平滑肌α2肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:不同质量浓度转化生长因子β1诱导成纤维细胞48 h后,与对照组相比,5μg/L转化生长因子β1可明显刺激成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达,10μg/L转化生长因子β1刺激细胞表型改变及平滑肌α 2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达最明显(P<0.05),随后转化生长因子β1再增加至15μg/L,与10μg/L转化生长因子β1浓度组相比,其刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达不再增加(P>0.05).不同浓度罗格列酮干预10 μg/L转化生长因子β1诱导的成纤维细胞48 h后,与对照组相比,30 μmol/L可明显抑制成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达(P<0.05).结论:PPAR-γ激动剂罗格列酮能抑制转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达.     

应用MTT法观察TGF-β1与阿托伐他汀对人心肌成纤维细胞增殖影响

将培养的细胞按实验方法不同分为对照组、实验组,采用MTT法观察阿托伐他汀、转化生长因子-β1对人心肌成纤维细胞生长影响。结果 MTT法观察示:阿托伐他汀抑制人心肌成纤维细胞生长,最大抑制浓度是10μmol/L;转化生长因子-β1促进人心肌成纤维细胞增殖,最大增殖浓度是10ng/ml。转化生长因子-β1促进人心肌成纤维细胞增殖,而阿托伐他汀抑制人心肌成纤维细胞增殖,并可拮抗转化生长因子-β1对人成纤维细胞的增殖。     

血管紧张素Ⅱ对人α1(Ⅰ)胶原基因启动子与活性的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人皮肤成纤维细胞增殖活性及人α1(Ⅰ)原胶原基因启动调控序列的作用。方法用组织块法原代培养人皮肤成纤维细胞并进行传代培养作为本研究的模型细胞。①采用四甲基偶氮唑盐(MTT)掺入法测定经不同浓度血管紧张素Ⅱ处理24 h后成纤维细胞的增殖情况。②构建含长短不一的人α1(Ⅰ)原胶原基因5'侧翼区序列与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体pCOLH11.5、pCOLH12.5,用FUGENE 6将重组体转染至人皮肤成纤维细胞,ELISA法测定不同浓度血管紧张素Ⅱ作用24 h后,转染有重组体的成纤维细胞的CAT表达量。结果①在1×10-9~1×10-5mol/L血管紧张素Ⅱ处理24 h后,各浓度组成纤维细胞增殖值与对照组之间不存在剂量依赖关系(P>0.05)。②2种重组体转染成纤维细胞,并经血管紧张素Ⅱ处理24 h后,转染细胞的CAT相对表达量测定:pCOLH12.5组与对照组之间,较高浓度组(1×10-5mol/L)与较低浓度组(10×10-6mol/L)之间存在显著差异(P<0.05),且存在剂量依赖关系,pCOLH11.5组与对照组之间不存在明显差异(P>0.05)。结论血管紧张素Ⅱ在1×10-9~1×10-5mol/L浓度范围内,对所研究的模型细胞———人皮肤成纤维细胞增殖不存在剂量依赖关系。血管紧张素Ⅱ对胶原基因启动序列pCOLH12.5具有正性调控作用,并存在剂量依赖关系。     

转化生长因子β1对肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质成分的调节与阿魏酸钠的干预效果

背景：细胞外基质在肾间质的积聚是肾小管间质纤维化的主要特征。肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化在肾间质纤维化发病机制中起了重要作用。目的：从细胞水平观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及细胞外基质主要成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的影响。设计：以细胞为观察对象，随机对照实验：单位：四川大学华西医院肾脏科、材料：大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E来源于American Type Culture Collection（ATCC），由澳大利亚Monash医学中心肾内科实验室提供，本实验所用细胞株为第36代。阿魏酸钠为白色晶体，可溶于水，纯度〉98．0％，由成都亨达药业有限公司提供，实验时终浓度分别125，250，500μmol／L。兔抗大鼠α平滑肌肌动蛋白多克隆抗体为武汉博士德产品；ELISA试剂盒为上海森雄公司产品；人重组转化生长因子β1为R＆D公司产品：DNA Engine Opdcon^TM实时荧光定量聚合酶链反应仪为MJ Research产品。方法：将体外培养的细胞株NRK52E分为5组；空白对照组：仅加入含血清的DMEM培养基；转化生长因子β1刺激组；培养液中加入终质量浓度为5ng/L的转化生长因子β1；阿魏酸钠低、中、高浓度组：培养液中加入终质量浓度为5ng／L转化生长因子β1和125，250，500μmol／L的阿魏酸钠。主要观察指标：应用相差显微镜、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附法观察阿魏酸钠对转化生长因子β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对细胞外基质主要成分胶原Ⅰ胶原Ⅲ和纤维粘连蛋白的影响。结果：①NRK52E细胞形态：与空白对照组相比，转化生长因子β1刺激组细胞在培养3d后，细胞株NRK52E从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞的形态。阿魏酸钠3个浓度组细胞受转化生长因子β1的刺激而出现的形态学改变得到不同程度的改善，并呈剂量依赖性。②α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达：转化生长因子β1 5ng／L诱导6h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA较空白对照组上升，在72h达高峰；经过不同剂量阿魏酸钠干预72h后α-平滑肌肌动蛋白mRNA显著下调并呈剂量依赖性（P〈0．05）。③细胞外基质变化；经转化生长因子β1 5ng／L诱导72h后，细胞培养上清中Ⅰ型胶原，Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白含量明显增加（P〈0．05）。经过不同剂量的阿魏酸钠干预后，不同程度地抑制了转化生长因子β1促Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白增多的作用，并呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论：转化生长因β1可以诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化，刺激细胞外基质成分Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维粘连蛋白的升高。阿魏酸钠可剂量依赖性地抑制转化生长因子β1所导致的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化作用。     

异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用,为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法:实验皮肤标本来源于2002-07/2003-07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者,取冗余全层皮肤组织,患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞,实验分为异搏定组:包括1×10-3,1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7,1×10-8,1×10-9,1×10-10mol/L组,分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液;氢化可的松组:在细胞培养孔中加入2mL浓度为1×10-7mol/L氢化可的松的培养液;对照组:在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0.005的新生牛血清的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色;细胞增殖状况测定应用3氚标记的胸腺嘧啶掺入法;观察细胞增殖抑制率[抑制率(I%)=(阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值)/阴性对照每分钟脉冲数值],取各例样本的平均值。结果:①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果:对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖,24h达到高峰,48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应:各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用,其中1×10-6mol/L异搏定与1×10-7mol/L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异(t=0.135,P=0.896>0.05)。③浓度为1×10-6mol/L异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应:氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(60.67±18.94)%比(-19.69±21.26)%,(10.89±11.61)%,(37.03±12.17)%,q=10.867,6.732,3.197;P<0.05];异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(51.42±15.30)%比(-16.83±16.90)%,(1.09±11.62)%,(17.41±13.41)%,q=10.566,7.791,5.265;P<0.05];在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松(t=2.423,P=0.042<0.05)。结论:不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用,异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

PKCα对AngⅡ作用的心肌成纤维细胞增殖活性和NO分泌的影响

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用后的心肌成纤维细胞增殖活性和一氧化氮(NO)分泌的影响。方法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞,分为对照组(正常培养)、AngⅡ组(AngⅡ处理)、实验组(PKCα抑制剂D4681和AngⅡ处理)。实时定量PCR和Western blot法测定细胞中的PKCαmRNA和蛋白水平。用PKCα抑制剂和AngⅡ共同处理心肌成纤维细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖活性,硝酸还原法测定细胞分泌的NO水平,酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养液中的诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)含量,羟脯氨酸法测定细胞合成胶原蛋白水平,Western blot法测定各组细胞表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Ⅰ型胶原(COLLⅠ)、Ⅱ型胶原(COLLⅡ)水平。结果 AngⅡ组心肌成纤维细胞中的PKCαmRNA和蛋白水平均明显高于对照组(P0.05)。AngⅡ组心肌成纤维细胞增殖活性升高,细胞分泌的NO含量和i NOS活性均下降,细胞合成胶原蛋白水平升高,细胞中的MMP-1、MMP-2蛋白水平下降,COLLⅠ、COLLⅡ蛋白水平升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。实验组心肌成纤维细胞增殖活性降低,细胞分泌的NO含量和i NOS活性升高,胶原蛋白合成减少,细胞中MMP-1、MMP-2蛋白表达增多,COLLⅠ、COLLⅡ蛋白表达减少,与AngⅡ组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论 PKCα在AngⅡ作用后的心肌成纤维细胞中表达升高,抑制PKCα可以减弱AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖作用,促进细胞分泌NO。     

不同浓度5-氮胞苷体外诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景：在体外将人脐带间充质干细胞诱导为心肌样细胞的5-氮胞苷合适浓度的研究较少,且无明确结论。目的：对比不同浓度5-氮胞苷诱导人脐带间充质干细胞转化为心肌细胞的效果,以确定一种合适的诱导浓度。方法：第2代人脐带间充质干细胞中分别加入浓度为2.5,5,10,20,40,80μmol/L的5-氮胞苷,作用24h后除去,继续培养4周。于诱导后第2周行免疫组化染色检测肌钙蛋白Ⅰ阳性细胞率。结果与结论：5-氮胞苷诱导后7d,细胞形态发生变化,细胞多紧密平行排列生长,细胞体积变大,梭形细胞比例下降,40,80μmol/L组细胞形态变化明显。4周时,40,80μmol/L组细胞的折光性减低,细胞活性减弱,继续出现死亡的细胞。诱导后2周,2.5μmol/L组肌钙蛋白Ⅰ染色为阴性,10,20,40,80μmol/L组细胞肌钙蛋白Ⅰ阳性率均明显高于5μmol/L组（P〈0.05）。提示5-氮胞苷可诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞转化,10μmol/L是较佳的诱导浓度。     

钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响

目的：钙通道阻滞剂可抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的分泌，减少瘢痕的增生。实验拟进一步观察钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响。 方法：实验于2006—03／06在吉林大学中日联谊医院中心实验室完成。①实验材料：Wistar大鼠10只；盐酸维拉帕米注射液为上海禾丰制药有限公司产品。②实验过程及分组：制作大鼠双侧坐骨神经损伤模型，术后2周取损伤处神经瘢痕，按组织块法培养神经瘢痕成纤维细胞，实验所用细胞为4～8代，分4组，其中3组培养基中维拉帕米药物浓度分别为10，50及100umol／L，l组为空白对照组。③实验评估：分别用四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖能力、羟脯氨酸比色法测定细胞上清液中的胶原含量和胞浆中的胶原含量。 结果：①四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖结果：钙通道阻滞剂对神经瘢痕成纤维细胞的生长增殖具有明显抑制作用，且呈现剂量依赖性（P〈0．05）。②羟脯氨酸比色法测定胶原含量：钙通道阻滞剂可使分泌到细胞培养上清中的胶原含量明显减少，以100μmol／L浓度组作用最为显著（P〈0．05）；胞浆中的胶原含量增加，具有明显剂量依赖性，以100μmol／L浓度组作用最为显著（P〈0．05）。 结论：钙通道阻滞剂可以抑制神经瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原分泌。     

双醋瑞因对白细胞介素1β诱导软骨细胞凋亡的影响

背景：双醋瑞因是一种新型的白细胞介素1阻滞剂,其是否对软骨细胞的凋亡有抑制作用以及是否通过细胞信号转导通路发挥作用的基础应用研究较少。目的：观察双醋瑞因对体外白细胞介素1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响。方法：体外培养SD大鼠关节软骨细胞,苏木精-伊红染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞,用白细胞介素1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡模型,再用10-4,10-5,10-6mol/L双醋瑞因干预培养。结果与结论：10-4mol/L和10-5mol/L的双醋瑞因可降低白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡率（P〈0.01和P〈0.05）。10-5mol/L双醋瑞因能够显著抑制白细胞介素1β诱导p38磷酸化（P〈0.01）。双醋瑞因干预的软骨细胞中p38mRNA的表达量较模型组下降0.38倍（P〈0.01）。结果证实,双醋瑞因能够抑制软骨细胞中p38蛋白和基因的表达,从而抑制白细胞介素1β诱导关节软骨细胞凋亡。     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的影响——附18例报告

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）滑膜细胞凋亡的影响。方法：对18份RA滑膜组织进行原代培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测加入0μmoL／L、0．10μmol／L、0．40μmoL／L、0．80μmol／LAs2O3对RA滑膜细胞活力影响,用流式细胞仪分析加入不同浓度As2O3后早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、活细胞、坏死细胞所占的比例,观察加入不同浓度As2O3后RA滑膜细胞的半胱氨酸蛋白酶-3的活性变化。结果：与同一时段无加入As2O3的RA滑膜细胞比较,加入0．10μmol／L、0．40μmol／L、0．80μmol／L As2O3的RA滑膜细胞活力明显下降（均为P〈0．05）。RA滑膜细胞中的早期凋亡细胞及坏死细胞所占比例随As2O3浓度升高而增高,活细胞所占比例随As2O3浓度升高而降低（均为P〈0．05）,其中,As2O3浓度为0．80la,mol／L组的早期凋亡细胞及坏死细胞所占比例最高、活细胞所占比例最低（均为P〈0．01）。半胱氨酸蛋白酶-3活性随As：O,浓度增加而增加（均为P〈0．05）。结论：As：O,可抑制RA滑膜细胞的活力,在达到一定的药物浓度后可对滑膜细胞产生致死效应。As：O,所诱导滑膜细胞凋亡可能与半胱氨酸蛋白酶一3的活性增高有关。     

地塞米松对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究发现地塞米松能有选择性地促进骨髓间充质干细胞凋亡。目的：了解地塞米松对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制。方法：体外培养 SD 大鼠骨髓间充质干细胞,传至第 2 代后分两组培养,对照组不加地塞米松,实验组分别加入 10-9,10-8,10-7 mol/L 地塞米松,作用 3,6,12,24 h 后通过流式细胞仪检测凋亡率。MTT 法检测地塞米松对骨髓间充质干细胞增殖率的影响。取 10-7 mol/L 地塞米松作用骨髓间充质干细胞 24 h,反转录后检测 Caspase-3 和 bcl-2 的表达。结果与结论：与对照组比较,10-8,10-7 mol/L 地塞米松作用 12~24 h 对骨髓间充质干细胞的凋亡有明显促进作用,且与作用浓度和时间存在相关性,随着作用浓度的增大和时间的延长骨髓间充质干细胞的凋亡率有增高的趋势。MTT 结果表明10-8,10-7 mol/L 地塞米松作用 24 h 对骨髓间充质干细胞增殖率影响显著,这与上述流式细胞仪的检测结果相符。RT-PCR提示地塞米松作用组 Caspase-3 显著增高,bcl-2 降低。结果证实地塞米松可能是通过细胞外通路和（或）线粒体通路促进骨髓间充质干细胞凋亡。     

低能体外冲击波和低剂量间歇甲状旁腺素干预成骨细胞的增殖和分化

背景：体外冲击波等应力刺激可促进成骨,甲状旁腺激素激素也参与调控骨代谢。目的：实验探讨低剂量间歇人重组甲状旁腺素1-34和低能体外冲击波对体外培养大鼠成骨细胞增殖及成骨分化的作用。方法：采用改良胶原酶消化法培养大鼠乳鼠颅骨来源成骨细胞备用。分别用60-150次0.18 mJ/mm2低能体外冲击波刺激体外培养大鼠成骨细胞,不同浓度（10-12 mol/L-10-10 mol/L）及作用方式的人重组甲状旁腺素1-34刺激,以及低能体外冲击波和间歇低剂量（10-11 mol/L）间歇人重组甲状旁腺素1-34刺激共同作用后,用锥虫蓝法进行细胞计数、MTT和流式细胞术分析检测大鼠成骨细胞的增殖情况;用酶标仪检测碱性磷酸酶活性,用免疫组化检测Ⅰ型胶原表达来观察大鼠成骨细胞的成骨分化。结果与结论：60-150次0.18 mJ/mm 2低能体外冲击波刺激、间歇人重组甲状旁腺素1-34（10-11和10-10 mol/L）刺激以及低能体外冲击波＋间歇人重组甲状旁腺素1-34（10-11 mol/L）刺激均可显著促进体外培养大鼠成骨细胞增殖和成骨分化（P＜0.05）,其中60-150次低能体外冲击波刺激＋间歇人重组甲状旁腺素1-34刺激各组作用最强（P＜0.05）。结果证实,适当的低能体外冲击波应力刺激和低剂量间歇人重组甲状旁腺素1-34刺激联合应用可显著促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖和成骨分化。     

地塞米松干预大鼠星形胶质细胞周期素的表达及细胞周期进程

背景：有研究表明地塞米松可引起星形胶质细胞凋亡,但其机制不清,有关地塞米松干扰星形胶质细胞的周期素表达的作用未见报道。目的：观察地塞米松引起大鼠星形胶质细胞凋亡与周期素表达的关系。方法：将不同浓度的地塞米松（0,10-5,10-4,10-3mol/L）与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24h后,经流式细胞仪检测细胞周期,并用免疫细胞化学方法检测周期素A和E在星形胶质细胞内的表达。结果与结论：地塞米松10-5,10-4mol/L浓度组G1期细胞指数较对照组增加（P〈0.05,P〈0.01）,10-3mol/L组的S期细胞指数较对照组明显升高（P〈0.01）;周期素A的表达随着地塞米松浓度的升高而减弱（P〈0.05）。周期素E的表达在地塞米松0,10-5,10-4mol/L组随着地塞米松浓度的升高而减弱（P〈0.05）,但在10-3mol/L浓度组反而表达增强（P〈0.01）。说明地塞米松10-5,10-4mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于G1期且与周期素A和E表达降低有关,地塞米松10-3mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于S期主要与周期素A表达降低有关。     

YC-1对Aβ寡聚体毒性的保护作用及其相关机制

目的:探讨YC-1针对Aβ寡聚体(ADDLs)毒性的保护作用及其相关机制。方法:原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系,应用不同浓度ADDLs(500 nmol/L、1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)干预以模拟体外AD模型,应用YC-1对此模型进行干预,以CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测NICD及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平,采用real-time PCR检测Caspase-3 mRNA水平。结果:浓度≥2μmol/L的ADDLs干预明显降低混合培养体系细胞活力水平,并呈现浓度依赖性(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h显著降低细胞活力(P<0.01),YC-1可明显拮抗这种毒性作用(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h明显上调NICD及HIF-1α水平(P<0.01),YC-1可拮抗这种提高(P<0.05或0.01)。10μmol/L ADDLs干预4 h显著提高Caspase-3的mRNA水平(P<0.01),YC-1可显著抑制这种上调(P<0.05)。结论:ADDLs表现出对原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系的毒性作用,YC-1可发挥保护作用。     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡。目的：观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法：将0.001,0.01,0.1,1.0μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。结果与结论：与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高（P〈0.01）,其中辛伐他汀浓度在0.1μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著（P〈0.01）;同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组细胞凋亡率下降（P〈0.01）,其中0.1μmol/L组凋亡率下降最显著（P〈0.01）。0.1μmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断。说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。     

胰蛋白酶与糖皮质激素影响肺成纤维细胞增殖与骨架蛋白的表达

背景：肺成纤维细胞不但是肺组织的结构支持细胞,还能够通过增殖、收缩、趋化及分泌细胞外基质等多种功能在肺组织的炎症损伤-修复过程中发挥关键作用。目的：观察原代培养的人肺成纤维细胞在胰蛋白酶或糖皮质激素作用下增殖特性与骨架蛋白表达的变化。方法：采用人肺成纤维细胞体外培养,胰酶处理24h,终浓度分别为0,0．5,1．0,5,10mg／L胰酶;地塞米松处理72h,在有血清培养条件下进行,浓度范围10^-9-10^-8 mol／L。MTT法测定成纤维细胞增殖情况;免疫印迹方法测定细胞波形蛋白和肌动蛋白的表达。结果与结论：胰蛋白酶在低浓度（0．1-0．5mg／L）时刺激肺成纤维细胞增殖;而较高浓度（1-10mg／L）明显抑制细胞生长。地塞米松对肺成纤维细胞增殖作用的影响不明显。胰蛋白酶显著上调肺成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白的表达,但对波形蛋白的表达无明显影响;地塞米松（10^-9-10^-6mol／L）显著抑制波形蛋白的表达。结果表明在慢性阻塞性肺病等支气管肺慢炎症性疾病的发病过程中,胰蛋白酶和糖皮质激素可以通过参与成纤维细胞增殖和骨架蛋白的表达发挥作用。     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子α刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1000mg/L;PDTC组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,再加入终浓度18μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1000mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多（P〈0.01或P〈0.05）,200,400,600mg/L的川芎嗪及18μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达（P〈0.01）,且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关（r=0.980,P〈0.01）。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。