抗Fas的抗体在实验性病毒性心肌炎中作用机制的研究

目的探讨中和型抗Fas的抗体对小鼠柯萨奇病毒性心肌炎的治疗作用及作用机制。方法60只BAIB/c小鼠随机分为4组：1组空白对照组，2组病毒对照组、3组IgG对照组、4组抗Fas抗体治疗组。于接种后第10天每组随机处死小鼠8只，心肌组织切片HE染色了解心肌损伤情况，电镜技术及原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡情况，免疫组化方法检测casimse-3的表达，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌组织中easpase-3的mRNA表达。实时定量PCR（RQ-PCR）定量心肌柯萨奇病毒B3（CVB3）mRNA拷贝数。结果（1）病毒对照组可见caspase-3表达和心肌细胞凋亡，且均与心肌病变积分成正相关（r=0．81，P〈0．01；r=0．73，P〈0．05）。（2）抗Fas抗体治疗组小鼠心肌组织病变积分、心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达及心肌内CVB3 mRNA拷贝数均明显低于病毒对照组（P〈0．05）和IgG对照组（P〈0．05）。结论Fas/FasL途径介导的心肌细胞凋亡参与了病毒性心肌炎的发病过程，凋亡是导致病毒性心肌炎心肌损伤的重要机制之一，抗Fas抗体可降低caspase-3活化和mRNA表达，减少心肌细胞凋亡，降低心肌细胞内病毒复制，使心肌损伤明显减轻。     

汉黄芩苷对柯萨奇B3病毒诱导的病毒性心肌炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨汉黄芩苷对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠炎症反应的影响及其可能的调控机制。方法:用CVB3感染BALB/c小鼠构建病毒性心肌炎动物模型。取40只BALB/c小鼠将其随机分为4组:正常对照组、CVB3感染的病毒性心肌炎组、CVB3感染后给予汉黄芩苷处理的治疗组以及CVB3感染后同时给予汉黄芩苷和AKT激动剂处理的激动剂组,每组10只。于药物治疗7 d后处死各组小鼠。用HE染色检测前3组小鼠心肌组织内炎症细胞浸润情况。用ELISA检测前3组小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6含量。用Western blot实验检测前3组小鼠心脏组织中炎症因子蛋白表达水平以及AKT/NF-κB通路的活化情况。最后,通过Western blot实验检测全部4组小鼠心肺组织中AKT/NF-κB通路的活化情况。结果:与正常组相比,病毒性心肌炎小鼠心脏组织内存在大量炎症细胞浸润,而汉黄芩苷治疗显著降低CVB3病毒诱导的心脏组织炎症细胞浸润(P<0.05)。CVB3病毒感染后小鼠血清中IL-1β和IL-6含量较正常组显著升高(P<0.05),而给予汉黄芩苷治疗后小鼠血清中IL-1β和IL-6含量较病毒性心肌炎组显著降低(P<0.05)。Western blot检测结果表明,与病毒性心肌炎组相比,汉黄芩苷治疗显著降低心肌组织内炎症因子(IL-1β和IL-6)蛋白表达水平以及AKT和NF-κB蛋白的磷酸化水平(P<0.05);而给予AKT激动剂处理后,汉黄芩苷对NF-κB蛋白磷酸化水平的抑制作用显著减弱(P<0.05),且汉黄芩苷对炎症因子的下调作用也显著受到抑制(P<0.05)。结论:汉黄芩苷可通过调控AKT/NF-κB通路减轻病毒性心肌炎小鼠的炎症反应。     

小鼠急性病毒性心肌炎心肌HO-1mRNA及其蛋白表达

目的：探讨小鼠急性病毒性心肌炎（viral myocarditis,VMC）心肌细胞血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1, HO-1）基因及其蛋白表达的动态变化。方法:72只清洁级近交系4-6周龄雄性BALB/c小鼠随机分为2组：心肌炎组（V组）40只（腹腔注射 CVB3病毒），实验对照组（C组）32只。于病毒接种后第4 d、8 d、15 d、21 d分别采血后处死小鼠并留取心脏标本。采用免疫组化法和原位杂交法检测心肌HO-1蛋白及mRNA表达，分光光度计法分间接测定COHb含量，光镜及透射电镜观察心肌组织病理及细胞超微结构改变。结果: （1）心肌炎组可见炎症细胞浸润，心肌细胞可见大面积坏死，晚期可见钙化灶形成；电镜下可见肌原纤维溶解断裂，线粒体膜消失，含溶酶体丰富的单核巨噬细胞浸润，对照组小鼠心肌未见上述变化。（2）血COHb含量变化：心肌炎组小鼠血COHb含量在第8 d和第15 d均较对照组明显增高，2组差异显著（0.047±0.005和0.031±0.004；0.076±0.006和0.030±0.005，P<0.01）。（3）血清cTnI含量变化：V组小鼠血清cTnI含量与C组比较除第21d无明显差别外，其余各时点均高于C组，差异有统计学意义，P<0.01。（4）HO-1免疫组化结果：心肌炎组HO-1蛋白均成阳性表达，各时点心肌HO-1平均吸光度值均高于对照组（P<0.01）。 （5）HO-1mRNA原位杂交结果：心肌炎组HO-1mRNA原位杂交染色各时点均呈阳性表达，各时点吸光度值均高于对照组（P<0.01）。结论:病毒性心肌炎可诱导心肌组织HO-1mRNA及其蛋白的表达，可能是受损心肌发挥自我保护作用机制之一。     

黄芪甲甙改善扩张型心肌病小鼠左室重构与磷酸化p-38MAPK相关性的实验研究

目的：探讨黄芪甲甙对柯萨奇病毒B3（CVB3）扩张型心肌病(DCM)小鼠左室重构的影响及其可能的作用机制。方法:BALB/c小鼠腹腔无菌重复增量接种CVB3建立扩张型心肌病动物模型（n＝30）；感染CVB3 的小鼠以黄芪甲甙（0.6 mg·kg-1·d-1）灌胃作为扩张型心肌病＋黄芪甲甙治疗组（n＝20）；同期腹腔无菌注射等容积不含病毒的EMEM液作为正常对照组（n＝10）。用高频超声心动图测量左室大小及心功能指数，用ELISA技术检测血清I、III型前胶原端肽（PINP、PICP及PIIINP）浓度并计算PICP/PICN比值，苦味酸天狼猩红胶原特异染色和偏光显微镜显像，并辅以图像分析软件计算心肌胶原容积积分（CVF）和I型胶原的含量，分别应用RT-PCR和Western blotting技术检测心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原变化和磷酸化p38MAPK的表达。结果:黄芪甲甙显著提高DCM小鼠的生存率、有效地降低扩大的左室内径及增加心脏功能；组织学和血清学显示DCM小鼠心肌组织胶原沉积明显多于正常对照组，而这种增多的趋势可被黄芪甲甙明显抑制 (P<0.01)；DCM小鼠心肌磷酸化p38MAPK表达高于正常对照组，黄芪甲甙治疗后p38MAPK活性明显低于正常对照组（分别为P<0.01和P<0.05）。结论:黄芪甲甙改善CVB3感染后导致的扩张型心肌病左室重构可能与降低磷酸化p38MAPK活动密切相关。     

RIP3/CaMKⅡ信号通路对重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响

目的:观察RIP3/CaMKⅡ信号通路对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的重症病毒性心肌炎小鼠心脏功能及生存曲线的影响,并探讨CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93对心肌损伤的作用。方法:将60只雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、CVB3组、CVB3+KN-93组和CVB3+KN-93+Ti(活性氧簇特异性抑制剂)组,以上小鼠腹腔及尾静脉注射药物连续7 d。采用双抗体夹心免疫法检测小鼠心肌细胞坏死标志物,心脏超声技术检测小鼠心脏结构和功能,绘制Kaplan-Meier生存曲线,观察KN-93对小鼠心肌的保护作用。结果:CVB3+KN-93组小鼠心肌细胞坏死较CVB3组显著减轻,心脏功能和生存曲线改善(P<0.01);CVB3+KN-93组小鼠心肌组织H2O2含量较CVB3组显著下降(P<0.01);加入Ti后,CVB3+KN-93+Ti组H2O2含量较CVB3+KN-93组轻度下降(P<0.05),但无论是心脏功能还是生存曲线均无显著差异。结论:RIP3/CaMKⅡ信号通路在CVB3诱导的急性重症病毒性心肌炎小鼠心肌细胞损伤中起到主导作用;KN-93能阻断这种作用并可能产生新的治疗方式,其效果可能是通过对CaMKⅡ的直接抑制和对活性氧簇的间接抑制而实现的。     

病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB的表达

目的:初步探讨基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65在柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎心肌中的表达。方法:6周龄近交系雄性BALB/c小鼠随机分为对照组和病毒性心肌炎组,分别给予0.1 m L PBS和10-5.69TCID50/m L CVB3注射,第4天和第10天各随机取8只小鼠处死并取血和心脏标本。Reed-Muench法测定接种病毒滴度;苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色后光镜观察心肌组织病理学改变;应用免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测MMP-2和NF-κB p65在心肌组织表达的分布和含量;用Western blot法检测MMP-2、NF-κB p65和IκBα在心肌组织的表达,用ELISA检测血清TNF-α含量的变化。结果:与对照组相比,免疫组化和Western blot实验结果提示病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB p65的表达显著升高(P0.05);感染组IκBα的表达呈下降趋势(P0.05);ELISA结果提示血清TNF-α含量在感染组显著升高,差异有统计学显著性(P0.05)。结论:病毒性心肌炎小鼠心肌组织中TNF-α、NF-κB p65和MMP-2表达显著上调,可能通过相关机制参与疾病的发生。     

硫化氢对柯萨奇病毒感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用

目的研究硫化氢对柯萨奇病毒B3（Coxsachievirus B3, CVB3）感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用以及胱硫醚γ-裂解酶（ CSE）/硫化氢（ H2 S）通路在其体内的表达情况。方法将110只5周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为4组：正常对照组、病毒性心肌炎组、硫氢化钠（外源性H2 S供体）组和DL-炔丙基甘氨酸（ PAG,CSE不可逆抑制剂）组。以腹腔注射CVB3建立急性病毒性心肌炎模型,接种当天记为第0天,24 h后每组每日经腹腔分别注射相应干预药物。分别于接种后第4天和第10天从各组随机抽取10只处死,留取血清和心肌标本。观察心肌炎症病理改变,酶联免疫吸附法检测H2 S及IL-6、TNF-α等炎症因子含量,逆转录-聚合酶链反应法检测心肌组织CVB3、CSE的mRNA表达水平,免疫组化及蛋白质印迹法定性、定量检测CSE蛋白水平表达。结果与正常对照组比较,病毒性心肌炎组血清和组织H2 S浓度、CSE mRNA、CSE蛋白水平表达均明显下调,给予NaHS干预可明显上调H2 S水平,减轻心肌损伤、减轻炎症细胞浸润以及间质水肿,对病毒CVB3 mRNA的表达有抑制作用,而给予PAG干预,可明显抑制H2 S和CSE表达,加重心肌损伤、炎症细胞浸润及间质水肿,促进CVB3 mRNA的复制。结论在病毒性心肌炎中,CSE/H2 S通路表达明显受到抑制,给予PAG干预可明显抑制该通路的表达,加重心肌损伤,促进病毒复制,外源性供给硫化氢可对感染心肌起到保护作用,且可抑制病毒复制。     

椒蒿提取物对病毒性心肌炎心肌保护作用的研究

椒蒿为菊科植物 ,民间常作为野菜采食 ,中药认为有抗风寒作用。本文所用的椒蒿提取物含茴香脑 5 6 %。用提取物对病毒性心肌炎的动物模型进行了研究 ,旨在探讨其心肌保护作用。柯萨奇B3 病毒 (CVB3 )Nancy株 ,在Vero细胞上增殖后 ,TCID50 为 10 9;BALB/c雄性小鼠 4～ 6周龄 ,体重 12± 2g,16 0只。分为 6组 ,A组 :为正常对照组 ,取10只小鼠 ,腹腔注射 0 1ml不含病毒的Eagle′sMEM液。其余 15 0只小鼠随机等分为 5组 ,每组 30只 ,分别腹腔接种0 .1ml病毒液 ,建立病毒性心肌炎 (VMC)模型。B组 :病毒模型对照组 ;C组 :黄芪治疗组 ;…     

芪芍五味子复方制剂对病毒性心肌炎小鼠免疫调节机制的研究

目的研究黄芪、赤芍、五味子组成的芪芍五味子复方制剂调节病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子表达的机制。方法 Balb/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组、中药高、中、低剂量组及VitC和病毒唑联用组。小鼠接种柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC模型,流式细胞仪检测外周血CD4(+Th)和CD8(+Ts)淋巴细胞亚群数目及比值,ELISA检测IFN-γ、IL-4水平,心肌作组织病理学检查。结果与正常小鼠比较,病毒对照组小鼠外周血CD4+和CD8+淋巴细胞亚群数目下降,CD4+/CD8+下降,血清IFN-γ水平升高,IL-4水平降低(P0.05),中药治疗组小鼠淋巴细胞亚群数目及CD4+/CD8+均高于病毒对照组(P0.05),IFN-γ水平高于病毒对照组及VitC和病毒唑联用组(P0.05),同时小鼠心肌炎症性病理变化明显减轻。结论芪芍五味子复方制剂能调节外周血T淋巴细胞数目及比值,诱生Th1型细胞因子IFN-γ减轻CVB3感染小鼠心肌损伤,起到保护作用。     

槲皮素对CVB3诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎性反应的调节

目的：心肌炎是由多种不同的感染因子引起的心脏炎症性病变,会造成致命性伤害,尤其是对年轻人。本文旨在探索槲皮素对柯萨奇B3m病毒(CVB3)诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎性反应的影响。方法：CVB3感染建立急性病毒性心肌炎模型。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)水平通过商业化试剂盒进行检测。ELISA检测IL-1β、IL-6和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。蛋白印迹分析TGF-β1、p-NF-κB-P65和TNF-α表达。结果：与正常组相比,CVB3组乳鼠存活率明显降低,心脏重量/体重(HW/BW)比值和血糖浓度明显升高(P<0.05)。槲皮素可抑制CVB3诱导的存活率下降,HW/BW比值和血糖浓度的上升(P<0.05)。与正常组相比,CVB3组SOD水平下降,MDA和LDH水平上升(P<0.05)。槲皮素可减弱CVB3诱导的SOD水平的降低,MDA和LDH水平的升高(P<0.05)。而且,CVB3组乳鼠IL-1β、IL-6和iNOS水平高于正常组(P<0.05)。槲皮素组乳鼠IL-1β、IL-6和iNOS水平低于CVB3组(P<0.05)。与正常组相比,CVB3组TGF-β1、p-NF-κB P65和TNF-α的表达增强(P<0.05)。槲皮素可抑制CVB3诱导的TGF-β1、p-NF-κB P65和TNF-α表达水平的升高(P<0.05)。结论：槲皮素可减轻CVB3诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎症反应。     

14-3-3蛋白的研究进展

14-3-3是一个在真核生物中广泛表达的酸性蛋白家族,主要以同源/异源二聚体形式存在,通过磷酸化丝/苏氨酸作用与靶蛋白或靶蛋白的2个结构域结合。7种不同亚型的高度保守的14-3-3蛋白与人类细胞中多种不同的信号通路有密切的关系。14-3-3通过调节靶蛋白间的相互作用在信号转导途径中发挥调控作用。     

3-Hydroxy-3-Methylglutaric Aciduria

3-Hydroxy-3-methylglutaric aciduria was found in a newborn infant whose parents are first cousins. The patient presented at 5 days of life with hyperammonemia, hypoglecemia, and metabolic acidosis. There was no ketonuria. Diagnosis was made by analysis of the pattern of organic acids excreted in the urine. A profound deficiency in activity of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A lyase was found in cultured skin fibroblasts. The parents had intermediate levels of enzyme activity.     

Electrochemical copolymerization of 3-dodecylthiophene and 3-methylthiophene

3-Dodecylthiophene ( 1a ) and 3-methylthiophene ( 1b ) were copolymerized electrochemically. The visible and IR spectra of the neutral copolymers prove the copolymers to be of random structure, which can be denoted as that of poly(3-alkyl-2,5-thienylene)s. 1b polymerizes with preference over 1a . With increasing fraction of monomeric units of 1b in the copolymers, the conductivity increases and the solubility of the neutral copolymers decreases. The copolymer containing 58 mol-% monomeric units of 1b has a high conductivity of 220 S/cm and a good solubility of 75 wt.-% in chloroform. ¹H NMR spectra of poly(3-dodecylthienylene) and copolymers show two chemical shifts for the α(1)-methylene protons of the monomeric units of 1a as well as of the methyl protons of the monomeric units of 1b . This fact may be explained by the presence of head-to-head and other constitutions.     

3-Hydroxy-3-methylglutaric aciduria

3-Hydroxy-3-methylglutaric aciduria was found in a newborn infant whose parents are first cousins. The patient presented at 5 days of life with hyperammonemia, hypoglycemia, and metabolic acidosis. There was no ketonuria. Diagnosis was made by analysis of the pattern of organic acids excreted in the urine. A profound deficiency in activity of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A lyase was found in cultured skin fibroblasts. The parents had intermediate levels of enzyme activity.     

14－3－3蛋白的新认识

14-3-3蛋白是一个在真核生物中广泛表达的高度保守的酸性蛋白家族,主要以同源/异源二聚体形式存在,在哺乳动物中由7种亚型组成。7种不同亚型的14-3-3蛋白在人类细胞中发挥着重要作用。本文就14-3-3蛋白的序列保守性和独特性、结构特征、结合靶点、调控机制以及作为潜在药物治疗靶点的相关研究进展做一综述。     

Regulation of Abortion by γλ T Cells

PROBLEM: T cells are present at the feto-maternal interface, but their function during pregnancy has not been fully elucidated. T cells bearing γλ T-cell receptor (TCR) may be particularly important, as some subsets can react to trophoblast cells by producing cytokines, such as interleukin-2 (IL-2). METHOD: We depleted T cells bearing the γλ receptor by injecting monoclonal antibodies (mAB) into females of the abortion-prone animal model CBA x DBA/2. We investigated the percentage and number of γλ T-cell receptor positive (TCR)⁺ cells in decidua and spleen during pregnancy in control and γλ-depleted female mice. Pregnant females were also exposed to ultrasonic sound stress to boost the abortion rate. RESULTS: Stress failed to increase the abortion rate in the γλ TCR-depleted mice. FACScan analysis show that the ratio of cells bearing the γλ TCR dramatically decreased after injection of mAB to the γλ TCR in spleen and decidua, these cells recovered six days after depletion, showing a change in cytokine pattern. Levels of TNF-α in decidual γλ T cells decreased; similar effects of decreasing Th₁ cytokines could be observed in splenic γλ T cells. We further identified increased levels of intracellular TNF-α in the Vλ4 subset in the decidua, compared to spleen. CONCLUSIONS: Trophoblast recognition by the Vλ4 T-cell subset in the decidua may cause the release of abortogenic cytokines such as TNF-α. Depletion of such γλ TCR T cells during early pregnancy may promote successful pregnancy outcome in normal pregnancy and prevent stress-induced abortions.