干扰素α2a对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶表达和5′-脱氧氟尿苷抗癌活性的影响

目的 探讨干扰素-α2a(IFN-α2a)对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶(TP)mRNA表达水平以及5′-脱氧氟尿苷(5′-DFUR)和氟尿嘧啶(5-FU)抗癌效应的影响.方法 不同剂量IFN-α2a分别处理人结肠癌细胞LOVO和SW480,荧光定量PCR检测TP mRNA表达水平;MTT法检测联合应用IFN-α2a前后5-FU和5′-DFUR对LOVO和SW480抑制作用的半数有效浓度(IC50)变化情况.结果 与0 U/ml IFN-α2a浓度组相比,500 U/ml及5000 U/ml组可明显上调LOVO和SW480细胞TPmRNA表达(P＜0.01),而50 U/ml则对上述两种细胞TPmRNA表达水平无明显影响(P＞0.05).联合应用浓度为20 U/ml的IFN-α2a后,5-FU对LOVO和SW480细胞的IC50无明显改变(P＞0.05),但5′-DFUR的IC50则明显降低(P＜0.05).结论 IFN-α2a能上调结肠癌细胞TP mRNA的表达水平,并可使5′-DFUR对结肠癌细胞的IC50明显下降,而对5-FU则无明显影响.     

转染胸苷磷酸化酶基因对5’-脱氧氟尿苷抑制结肠癌细胞的影响

目的探讨转染胸苷磷酸化酶（TP）cDNA对5’-脱氧氟尿苷（5＇-DFUR）抑制人结肠癌细胞LOVO作用的影响。方法将TPcDNA序列克隆以慢病毒表达载体包装后转染人结肠癌细胞LOVO（LOVO．TP组）,另设空白对照组和LOVO．载体组。以流式细胞仪检测3组细胞转染效率,RT—PCR法检测3组细胞TPmRNA表达;Westernblot法检测转染前后TP蛋白水平;MTF法检测转染前后LOVO对5’-DFUR药物敏感性的变化;高效液相色谱法（HPLC）检测3组细胞转化不同浓度5’-DFUR生成5-FU量的情况。结果转染11P基因并传代5代后,LOVO细胞的转染效率在95％左右。转染TP基因后,LOVO．TP组的TPmRNA表达水平为空白对照组的（282．5＋86．8）倍（P〈O．01）,而LOVO．载体组与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）;Westernblot检测显示,LOVO．TP组的TP蛋白表达明显高于对照组和LOVO．载体组。5＇-DFUR对LOVO细胞半数有效剂量（IC50）对照组为（1607．3~56．8）~mol／L,明显高于LOVO．TP组的（1087．7~89．1）μmol／L（P〈0．01）;而LOVO-染载体组为（1699．5~38．7）μmol／L,与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）。培养基中分别加入0、500、1000和2000μmol／L的5＇-DFUR后,对照组培养基中分别检出0、2．10、3．13和7．19μmol／L的氟尿嘧啶（5．FU）;而在LOVO．TP组的细胞培养基中则分别检出0、22．16、30．94和40．02μmol／L的5．FU;而LOVO-载体组的培养基中则几乎无5．Fu检出。结论转染TPcDNA能够明显提高LOVO细胞的TPmRNA及TP蛋白表达水平。使细胞外5’-DFUR转化为5-Fu增多．明显提高5’-DFUR对LOVO的细胞毒性作用。     

转染胸苷磷酸化酶基因对5'-脱氧氟脲苷抗结肠癌细胞株活性的影响

目的 探讨人结肠癌细胞系SW480和LOVO细胞株转染胸苷磷酸化酶(TP)基因后转化5′-脱氧氟脲苷(5′-DFUR)为氟尿嘧啶(5-FU)能力的变化及5′-DFUR抗癌细胞株活性的变化.方法 构建包含TP cDNA的真核表达载体,用慢病毒包装后转染结肠癌细胞株SW480和LOVO.转染5代后以免疫荧光法和流式细胞技术检测转染效率;RT-PCR和Western blot法分别检测2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达.然后以高效液相色谱法(HPLC)检测2株细胞转染前后转化5′-DFUR为5-FU的量;MTT法检测5′-DFUR对2株细胞转染前后半数抑制浓度(IC50).结果 转染TP基因后SW480-TP与LOVO-TP 5代细胞转染效率稳定在95％左右.2株转染细胞的TP mRNA表达分别比野生型细胞增加(695±172)倍(t=-7.00,P=0.002)和(282±87)倍(t=-5.61,P=0.030),Western blot显示TP蛋白表达也明显增强.转染后的SW480-TP与LOVO-TP在培养基中分别使5′-DFUR转化为5-FU的量增加(t=19.406 ～66.921,P＜0.01).5′-DFUR对SW480的IC50由(1641±53) μmol/L降至(587±17) μmol/L(t=-32.59,P＜0.01);对LOVO的IC50由(1607±57) μmol/L降至(1088±89) μmol/L(t=-8.52,P＜0.01).结论 慢病毒载体能够高效地将TP cDNA转染至人结肠癌细胞SW480和LOVO并稳定传代,转染后2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达明显增高,使5′-DFUR转化为5-FU的量增加,对结肠癌细胞株SW480和LOVO的抑制作用增强.     

氟尿嘧啶对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响

目的观察氟尿嘧啶（5-FU）对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响。方法用不同药物浓度的5-FU处理SW480细胞,用CCK8法检测5-FU在SW480中的IC50,流式细胞仪检测SW480细胞ABCG2的阳性表达率．RT—PCR检测ABCG2的mRNA在SW480细胞中的表达差异。结果5-FU对SW480细胞的IC50随着药物浓度的增加而升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测发现,正常SW480细胞（A组）中ABCG2阳性表达率为（6．26±0．86）％;在药物处理48h后即刻检测时（B组）的阳性表达率下降至（3．43±1．18）％（P〈0．05）;在药物处理48h后的第2代细胞检测时（c组）则升高至（12．91±3．42）％（P〈0.05）。3组ABCG2mRNA表达趋势与流式细胞仪检测结果的趋势一致。结论不同浓度的5-FU可以影响人结肠癌SW480细胞ABCG2的表达。     

RNA干扰和洛拉曲克对结直肠癌LOVO细胞胸苷酸合成酶表达及细胞增殖的影响

目的探讨下调胸苷酸合成酶（Ts）基因以及化疗药洛拉曲克对人结直肠癌LOVO细胞胸苷酸合成酶表达水平以及对细胞生长、凋亡的影响。方法构建针对人Ts基因的小分子干扰RNA（siRNA）和阴性对照,转染至LOVO细胞,利用RT—PCR和Westernblot技术观察沉默TS基因后其基因和蛋白表达水平的变化,MTF法检测细胞增殖情况;另联合洛拉曲克作用于LOVO细胞,观察两者对LOVO细胞的TS蛋白表达和细胞生长的影响。结果转染TSsiRNA后,LOVO细胞TSmRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,细胞增殖速度亦低于对照组（均P〈0．05）。TSsiRNA联合洛拉曲克组细胞IC50值为（1．46±0．25）μm01／L,而阴性对照组和单用洛拉曲克组的IC50值分别为（6．81±0．31）μmol／L和（6．47±0．43）μmol／L。TSsiRNA联合洛拉曲克作用于细胞36h后。细胞凋亡指数为（62．12±0．89）％,高于单用TSsiRNA和洛拉曲克[（21．56±0．67）％和（40．51±0．83）％．均P〈0．05]。结论TSsiRNA可以下调人LOVO细胞中TS基因和蛋白的表达,使细胞生长速度减慢,凋亡增加,并可以增强洛拉曲克的药物敏感性。     

缺氧诱导对人结肠癌SW480细胞缺氧诱导因子-1α和Survivin基因表达的影响

目的 构建缺氧诱导模型和观察缺氧对人结肠癌SW480细胞系缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和Survivin基因表达的影响。方法 利用氯化钴（CoCl2）构建缺氧诱导模型；利用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）分别测定CoCl2缺氧诱导与SW480细胞HIF—1α和Survivin基因mRNA表达的时效关系（0、2、4、8、24h）和量效关系（0、50、100、150、200／μmol／L）。结果HIF-1α和Survivin基因mRNA表达与氯化钴浓度呈明显的剂量依赖关系；HIF-1α基因表达随诱导时间的延长而逐渐增强，4h亚组出现一个表达高峰，Survivin基因在缺氧诱导4h呈现表达最高峰；HIF-1α与survivin基因mRNA的表达在缺氧诱导量效关系（r=0．521，P＜0．05）和时效关系（r=0．693，P＜0．05）中均呈显著正相关。结论 缺氧可以诱导HIF—1α和Survivin基因的表达增加；HIF—1α与Survivin基因的表达均呈显著相关，提示Survivin基因可能与HIF—1α存在某种调控关系并在缺氧抗凋亡机制中发挥作用。     

干扰素-α诱导肾癌细胞胸苷磷酸化酶表达对5-FU化疗敏感性的影响

目的 探讨干扰素-α诱导肾癌细胞胸苷磷酸化酶（thymidine phosphorylase，TP）表达对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗敏感性的影响。方法采用不同浓度的干扰素-α2b处理肾癌细胞株786—0，应用RT—PCR和免疫印迹方法分别检测TP mRNA和TP蛋白水平变化。MTT法检测不同处理组786—0细胞中5-FU的半数抑制浓度（IC50）。建立肾透明细胞癌移植瘤动物模型，观察干扰素-α2b联合5-FU化疗对移植瘤生长的影响，免疫组化检测移植瘤中TP的表达，TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡。结果 干扰素-α2b3000和6000IU／ml处理组，TP mRNA表达量（灰度峰值）分别为0．5733±0．0231和0．8233±0．0404，TP蛋白表达量分别为0．6347±0．0719和0．8735±0．0640。干扰素-α对TP的表达有剂量依赖性增强作用（P〈0．01）。在干扰素-α2b作用下，5-FU对786—0半数抑制浓度由（13．9467±3．7140）μmol／L下降至（5．3200±0．1039）μmol／L，化疗敏感性增加（P〈0．01）。联合用药组移植瘤体积为（0．0940±0．0492）cm^3，小于单纯5-FU组的（0．5424±0．1591）cm^3（P〈0．05）。单纯5-FU组和联合用药组移植瘤中肿瘤细胞凋亡指数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 干扰素-α2b诱导的TP增强表达参与了干扰素-α联合5-FU化疗增效作用，TP是干扰素-α2b的靶基因之。     

紫草素下调CXCR4表达及抑制结肠癌细胞株SW480在CXCL12诱导下的定向迁移

目的探讨紫草素对结肠癌细胞增殖、CXCR4表达及对CXCL12诱导的定向迁移能力的影响。方法采用MTT法观察紫草素对SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测紫草素对SW480细胞表面CXCR4表达的影响．Transwell方法观察紫草素对SW480细胞定向迁移能力的影响。结果紫草素对SW480细胞生长有抑制作用．这种抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强。SW480细胞CXCR4阳性表达率为（99．1±0．7）％,用紫草素0.01、0．1及1．0μmol／L作用24h后,CXCR4阳性表达率分别降至（76．0±2．4）％、（59．1±2．5）％和（35．5±1．9）％（F=1098．041．P〈0．001）。上述不同浓度紫草素对CXCL12诱导的SW480迁移抑制率分别为25．2％、38．5％和55．7％（F=48．970,P〈0．001）。结论紫草素除了抑制结肠癌细胞增殖外,还可能通过下调CXCR4表达从而抑制肿瘤细胞在CXCL12诱导下的定向迁移。     

热打击联合脂多糖刺激对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响

目的：观察脂多糖（LPS）与热打击分别单独作用与联合作用对人肠上皮细胞SW480释放细胞因子的影响。方法：于37℃、5％CO2标准培养箱中培养人肠上皮细胞株SW480。实验分4组：空白对照组直接收集细胞上清;LPS单独刺激组（LPS组）分别使用0、0．01、0．1、1和10μg／ml的LPS刺激SW480细胞,24h后收集细胞上清;热打击组将SW480细胞进行热打击（42℃,1h）后在标准孵箱分别培养1h和24h后收集细胞上清;LPS＋热打击组将SW480细胞42℃热打击1h后给予上述浓度的LPS刺激,再重新置于标准孵箱中培养,24h后收集细胞上清。各组细胞上清用LiquiChip液相蛋白芯片系统分别检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）、7干扰素（IFN-7）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等10种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平。结果：单独LPS刺激时呈剂量依赖性诱导SW480表达分泌IL-8,对其余9种细胞因子／趋化因子的表达分泌水平影响不明显。单纯热打击仅诱导SW480细胞表达分泌IL-8的水平升高,且与空白对照组比较,仅热打击24h后IL-8的水平显著增加（P〈0．01）。热打击联合不同浓度的LPS刺激SW480细胞,LPS浓度低时并不影响SW480表达分泌IL-8的水平（P〉O．05）,而高浓度LPS可以显著减少其表达分泌水平（P〈0．05）。结论：人肠上皮细胞SW480作为脏器实质细胞,对炎性刺激仅能产生单一种类的细胞因子,其中LPS单独刺激和一定强度的热打击均可上调SW480分泌IL-8;但高浓度LPS在热环境下可抑制SW480细胞的IL-8表达分泌水平。     

牛蒡子苷元对结肠癌细胞SW480凋亡的影响及其机制

目的探讨牛蒡子苷元对结肠癌细胞系SW480凋亡的影响及相关机制。方法①以结肠癌细胞系SW480为研究对象,通过琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术观察牛蒡子苷元对SW480细胞细胞凋亡的影响。②应用RT-PCR技术探讨牛蒡子苷元对SW480细胞增殖和凋亡影响的相关机制。结果①与SW480亲本细胞相比,20mg/L牛蒡子苷元处理的SW480细胞出现明显的DNA"梯子"样断裂变化。②与SW480亲本细胞相比,20mg/L牛蒡子苷元处理的SW480细胞凋亡明显增加(P<0.01)。③与SW480亲本细胞相比,20mg/L牛蒡子苷元处理的SW480细胞中,抗凋亡基因bcl-2和IAP-1表达下调,而bcl-XL表达没有明显变化;促凋亡基因bax和Smac表达上调。结论①牛蒡子苷元可诱导SW480细胞凋亡。②牛蒡子苷元诱导SW480细胞凋亡可能与抗凋亡基因bcl-2和IAP-1表达下调,促凋亡基因Smac和bax表达上调有关。     

单核细胞增强5′-脱氧氟尿苷抗结直肠癌细胞活性

目的 探讨巨噬细胞在结直肠癌化疗中的调控作用。方法 应用ELISA法分别检测结直肠癌细胞系LS174T、Clone A、Colo320、MIP101的胸苷磷酸化酶(dThdPase)蛋白含量。采用MTT分析,分别测定出氟尿嘧啶(5-FU)和5’-脱氧氟尿苷(5’-DFUR)对上述4种癌细胞的半数有效浓度(IC50)。然后把5’-DFUR加入培养基中同人血单核细胞一起培养24 h,其培养上清液2倍稀释后加入结直肠癌细胞中行MTT分析测定其IC50有无改变。同时测定单核细胞在不同浓度5’-DFUR中的存活率。结果 4种结直肠癌细胞仅LS174T检出0.5 U/mg的dThdPase蛋白,其它3种未检出。4种癌细胞对5-DFUR的IC50均明显高于5-FU(P<0.01)。同人血单核细胞一起培养后,5’-DFUR对4种癌细胞的IC50明显下降,仅相当于处理前的11.6％～34.3％(P<0.05),同时发现5’-DFUR对人血单核细胞无明显生长抑制作用。结论 被检结直肠癌细胞因缺乏dThdPase活性,不能在细胞内转化抗癌药物5’-DFUR为5-FU发挥细胞毒作用;同人血单核细胞一起培养后,5’-DFUR在单核细胞内dThdPase的催化下,可转化成5-FU并释放到培养基中发挥抗癌作用。     

BH3-only在奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的研究BH3-only基因表达在奥沙利铂诱导人结肠癌细胞株凋亡中的作用及其机制。方法采用不同浓度（0．3、0．6、1．25、2,5、5、10和20mg／L）奥沙利铂处理人结肠癌细胞株SW480及HT29,应用MTT检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测凋亡情况;荧光定量PCR检测BH3-only基Bim和PUMA表达。结果不同浓度奥沙利铂分别作用于结肠癌细胞SW480后,出现不同程度的细胞生长抑制作用,呈剂量依赖性。5mg／L和10mg／L浓度的奥沙利铂作用于SW480细胞24h后,细胞凋亡率分别为（4．87±0．55）％和（12．10±1．04）％,作用48h后分别为（11．47±0．85）％和（30．07±2．01）％,作用72h后分别为（28．99±2．12）％和（38．32±3．15）％,均显著高于相应时间点对照组细胞的凋亡率[（0．30±0．10）％、（0．40±0．10）％和（0．50±0．20）％,均P〈0．01]。同时Bim和PUMAmRNA表达水平也显著高于对照组（P〈0．05）。而同样处理的HT29细胞其生长抑制率、细胞凋亡率及Bim和PUMAmRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论奥沙利铂具有抑制结肠癌细胞株SW480生长并诱导其凋亡的作用,其机制可能与促凋亡相关基因BH3-only（Bim和PUMA）表达增强有关。     

Stat3与过氧化物酶体增殖因子激活受体δ信号转导通路间交互作用对结肠癌细胞增殖的调控影响

目的观察选择性环氧合酶（COX）-2抑制剂NS-398对结肠癌细胞系SW480中Star3与过氧化物酶体增殖因子激活受体（PPAR）δ信号转导通路的影响，探讨不同信号转导通路间交互作用调控结肠癌细胞增殖的分子机制。方法应用逆转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测结肠癌细胞系SW480中COX-2 mRNA表达水平，用选择性COX-2抑制剂NS-398处理结肠癌细胞系SW480，Western blot检测Star3与PPARδ信号转导通路成员表达，噻唑蓝（MTT）比色试验检测细胞增殖状态，流式细胞技术检测细胞周期与凋亡。结果结肠癌细胞系SW480中未检测到COX-2 mRNA表达，NS-398（75μmol／L）作用于SW480细胞72h后，G1期细胞比率由37．9％上升至48．6％，S期细胞比率分别由58，1％，下降至44．9％，细胞增殖受抑制。Stat3、PPARδ、Cyclin D1与bcl-x L表达水平随NS-398作用时间延长而下降。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过非COX-2依赖途径影响结肠癌细胞的增殖。     

RNA干扰靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶P85α蛋白表达对结直肠癌细胞周期和细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）P85α蛋白表达对结直肠癌细胞周期与细胞凋亡的影响。方法设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体．分别稳定转染结直肠癌SW480细胞。采用Western blot筛选出对P13K P85α蛋白抑制效率最高的shRNA干扰片段．然后通过PI标记法和Annexin V—FITC标记法分别检测干扰后SW480细胞周期和细胞凋亡情况。结果转染shRNA／324后．SW480细胞P13K P85α蛋白降低最为显著．抑制率为90％。选择该干扰片段进行后续实验。干扰组与对照组SW480细胞的G1期细胞数量分别占（62．4±2．7）％和（51．2±3．5）％;S期细胞数量占（23．9±1．7）％和（34．1±3．4）％;氟尿嘧啶所诱导的细胞凋亡率为（11．1±3．7）％和（1．4±0．6）％;上述差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论P13K P85α蛋白表达下降可引起结直肠癌SW480细胞周期阻滞,细胞凋亡增加：PI3K P85α可能成为结直肠癌基因治疗的新靶点。     

干扰素γ诱导人肝癌细胞表达HLA—E逃避NK细胞杀伤

目的探讨干扰素γ（IFN-γ）诱导人肝癌细胞表达非经典人类白细胞抗原HLA-E,及对NK细胞肿瘤杀伤的影响。方法用不同终浓度的IFN-γ分别体外持续诱导人肝癌细胞系（BEL-7402）72h。用细胞免疫组织化学、Western-blot、逆转录PCR和流式细胞技术,检测各组细胞HLA-E基因产物的表达及各组的NK细胞杀伤率。结果与空白对照相比,IFN-γ浓度100～1000U／ml）诱导BEL-7402细胞表达HLA-E基因产物（抗原、mRNA和蛋白）明显增多（P〈0．01）,细胞表面HLA-E抗原相应增多（P〈0．01）。细胞表达HLA-E基因的强弱与IFN-γ诱导浓度有关。高浓度IFN—γ（500-1000U／ml）诱导细胞HLA-E阳性率、表达强度高于低浓度诱导（100-400U／ml）。最适宜的IFN-γ浓度为500U／ml,高浓度组的NK细胞杀伤率更低（P〈0．01）。结论高浓度IFN-γ（500～1000U／ml）诱导人肝癌细胞HLA-E基因高表达,通过非经典HLA-Ⅰ（HLA-E）途径逃避NK细胞免疫监视。     

人结直肠癌耐药细胞株体外药物敏感性实验

目的 观察人结直肠癌细胞被抗肿瘤药物作用后对不同药物的耐受情况。方法 人结直肠癌LOVO细胞系分别在体外与氟尿嘧啶（5－FU）和阿霉素（ADM）作用,成功诱导LOVO／5－FU和LOVO／ADM两个耐药细胞株,体外细胞毒性实验观察它们对5－FU、丝裂霉素（MMC）、ADM、顺铂（DDP）、氨甲喋呤（MTX）、阿糖胞苷（Arac)等6种药物敏感性。结果 两株细胞对5－FU和ADM均有耐药,耐药指数分别为16．48、23．17,LOVO／5－FU对MMC、ADM及DDP为3．37、2．22、2．70倍耐药,LOVO／ADM对MMC、5－FU及DDP为4．96、11．66、3．70倍的耐药。结论 两株耐药细胞均产生了多药耐药（multidrug resistance,MDR),药物引起的耐药一般是交叉耐药。     

藤黄酸逆转人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

目的探讨藤黄酸对多药耐药人结肠癌细胞株SW480/L—OHP的耐药逆转及其对多药耐药基因（MDR1）和P-糖蛋白（P—gP）表达的影响。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株SW480/L—OHP。噻唑蓝（MTT）法测定SW480/L-OHP细胞株的耐药指数和藤黄酸在无细胞毒浓度下对结肠癌细胞耐受奥沙利铂的逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,RT—PCR检测各组细胞MDRlmRNA表达水平,Westernblot检测各组细胞P—gP蛋白的表达水平。结果藤黄酸对结肠癌SW480及SW480/LOHP细胞增殖均具有抑制作用,且呈量效关系。奥沙利铂与低毒剂量藤黄酸共同作用SW480/L-OHP细胞,其Ic50显著降低（P〈0．05）,耐药逆转倍数为3．72。与奥沙利铂单药组相比,加入低毒剂量藤黄酸后,细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。藤黄酸作用后MDRlmRNA转录水平降低,同时下调了P—gp蛋白表达。结论藤黄酸部分逆转SW480/L—OHP细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制与增加细胞内奥沙利铂的蓄积,抑制MDRl基因的表达及降低P—gp的表达有关。     

整合素αvβ6调控结肠癌细胞转录因子Ets-1表达的分子机制研究

目的:探讨整合素αvβ6对核转录因子Ets-1表达的影响,明确αvβ6-ERK2直接连接在该过程中发挥的作用。方法:流式细胞仪检测各结肠癌SW480细胞表面αvβ6的表达;采用Westernblotting法分别检测ERK表达、活化水平和Ets-1的表达水平。结果:SW480β6和SW480β6Del.mutant细胞均表达αvβ6;SW480β6细胞Ets-1的表达量较SW480细胞明显增多(P<0.05),同时ERK的磷酸化水平(p-ERK)也明显升高,而总ERK(t-ERK)表达水平二者无明显差异;SW480β6Del.mutant细胞ERK2的磷酸化水平较SW480β6细胞明显降低;SW480β6Del.mutant细胞和PD98059处理的SW480β6细胞Ets-1的表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:整合素αvβ6通过αvβ6-ERK2直接连接提高ERK2的磷酸化水平,从而促进结肠癌SW480细胞核转录因子Ets-1表达。     

树突状细胞融合瘤诱导抗结肠转移癌免疫应答

目的 检测结肠转移癌细胞SW620和树突状细胞（DC）融合构建的肿瘤疫苗对结肠转移癌细胞SW620及其同源结肠癌细胞SW480的杀伤作用。方法 应用促融合剂50％聚乙二醇（PEG）对SW620细胞和从外周血单个核细胞（PBMC）诱生的DC进行融合,用流式细胞仪（FCM）分析其表型并检测融合效率,电镜及免疫细胞化学观察DC、SW620和融合细胞（DC／SW620）形态;^51Cr释放法检测DC／SW620致敏CTL对SW620及SW480细胞的杀伤作用。结果 从PBMC成功诱生出高表达HLA-ABC、HLA-DR、CD80、CD86、CD83的成熟DC,DC／SW620的融合效率达到27．12％。融合细胞兼具DC与肿瘤细胞的结构特点及免疫表型。^51Cr释放法检测DC／SW620激活的CTL对SW620及SW480的杀伤作用强于各对照组（P〈0．01）。结论 DC与SW620细胞融合体外致敏自体T淋巴细胞能生成抗原特异CTL,对结肠转移癌细胞SW620及同源结肠癌细胞SW480有一定的杀伤作用。     

microRNA-34a增加奥沙利铂对结肠癌细胞敏感性的实验研究

目的:构建奥沙利铂耐药结肠癌细胞株(SW480/ADR),观察miRNA-34a对SW480/ADR细胞奥沙利铂敏感性的影响。方法:使用浓度梯度法构建奥沙利铂耐药细胞株(SW480/ADR)。miR-34a慢病毒转染SW480/ADR细胞,MTT法检测细胞增殖,Real-time PCR定量检测miR-34a表达,Western blot检测蛋白表达。结果:SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞miR-34a的2-△△Ct值为0.15±0.03、0.12±0.02和0.74±0.13,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。奥沙利铂对SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞的IC50值分别为8.64±1.54、24.16±3.72和11.52±1.22μmol/L,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞OCT-4蛋白的相对灰度值为0.096±0.014、0.352±0.053和0.136±0.017,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-34a可以显著降低结肠癌奥沙利铂耐药细胞OCT-4蛋白表达,逆转结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药。