κ阿片受体激动对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的抑制作用

目的 通过观察κ阿片受体激动对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的作用,研究κ阿片受体激动剂对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的抑制作用.方法 以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用血管紧张素Ⅱ1 μM诱导心肌肥大,观察U50488H1 μM对它的作用,并和洛沙坦(los)1 μM组做对比观察κ阿片受体的激活对心肌肥大的作用.用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;用[3H]-leueine掺入法测定心肌细胞蛋白的合成.结果 AngⅡ1 μM使心肌细胞总蛋白含量,蛋白表迭及细胞体积明显增加;U50488H1 μM能够降低由AngⅡ引起的心肌细胞蛋白含量,蛋白表达,以及体积的增加,从而抑制心肌肥大,并且抑制程度与los1 μM相似.结论 κ阿片受体激动剂U50488H能够抑制由AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.     

辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制研究

目的 探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的保护作用及机制.方法 采用原代培养新生SD大鼠心肌细胞,以AngⅡ诱导心肌细胞肥大,观察Sim和环孢素A(cyclosporine A,CSA)对心肌肥厚的影响.应用计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;考马斯亮蓝法测心肌细胞总蛋白;Till阳离子测定系统(德国)采用DM3000软件测定胞内[Ca2+]i瞬间变化;Western blotting法检测心肌细胞中钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)蛋白的含量.结果 与AngⅡ组相比,Sim可以抑制AngⅡ诱导的细胞体积和总蛋白的增加(P＜0.05),抑制心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)瞬间变化幅度(P＜0.05),抑制CaN蛋白表达;Sim组与CsA(CaN抑制剂)组相比差异均无统计学意义.结论 Sim抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚可能通过调节Ca2+/CaN通路发挥作用.     

人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的探讨传统中药人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）所诱发心肌肥大的影响。方法采用酶消化法分离新生大鼠心室肌细胞,培养心肌细胞随机分为3组：正常对照组、Ang Ⅱ组、AngⅡ＋Rg1组。在接受药物处理24h后,检测心肌细胞总蛋白含量,β-MHC、TNF-α和IL-1β的mRNA表达量。结果 Ang Ⅱ处理导致培养心肌细胞的总蛋白含量以及β-MHC mRNA表达量显著增加,提示心肌肥大的发生;人参皂苷Rg1显著抑制了Ang Ⅱ的促心肌细胞肥大作用。同时,AngⅡ增加心肌细胞对TNF-α和IL -1βmRNA表达的效应也被人参皂苷Rg1所抑制。结论人参皂苷Rg1抑制了 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大以及心肌细胞对炎性介质TNF-α、IL-1β的释放,这可能是人参皂苷Rg1对心脏疾病具有保护作用的细胞学基础。     

多胺在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用

目的探讨多胺在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大中的作用。方法乳鼠心肌细胞原代培养,AngⅡ诱导心肌细胞肥大复制心肌肥大细胞模型。检测心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量,RT-PCR检测ANP mRNA水平作为心肌肥大评价指标;高效液相色谱测定心肌细胞多胺含量。结果AngⅡ100nmol/L作用48h,显著增加心肌细胞表面积,细胞蛋白含量和ANP mRNA表达增加,同时,AngⅡ诱导细胞内腐胺含量明显增加。DFMO干预后,减少细胞内腐胺和总多胺水平,下调AngⅡ诱导的心肌细胞表面积、心肌细胞蛋白含量,ANP mRNA水平的增加。结论DFMO预处理耗竭细胞内腐胺,减少多胺含量可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大与凋亡干预的研究

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察丹参酮ⅡA（TSN）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响。方法应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞，采用相差显微镜测量细胞大小，测定心肌细胞^3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标；用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率，用Westamblot法检测心肌细胞凋亡蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达。结果TSN能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞增大、心肌细胞^3H-亮氨酸掺入率的显著增加（P〈0.01）、心肌细胞凋亡率的增加（P〈0．05）、心肌细胞促凋亡蛋白P53和Bax表达的明显增高（P〈0.01），其效果与AngⅡ受体阻滞剂缬沙坦（Valsartan）相似。结论TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，这可能与其同时抑制了心肌细胞的凋亡有关。     

银杏叶提取物对心肌细胞肥大的防治作用及其量效关系的研究

目的：在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba．EGb)及其单体槲皮素(quercetin，Que)对血管紧张素11(AngiotensinⅡ，AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的防治作用。方法：采用改良Lowry法测定心肌细胞总蛋白含量，相差显微镜测量细胞大小作为心肌细胞肥大的指标。结果：EGb和Que能抑制AngⅡ引起的心肌细胞总蛋白含量及直径的增加，其效果与血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)卡托普利(captopril，Cap)相似。结论：EGb和Que能有效地防治心肌细胞肥大的发生和发展。     

肿瘤抑制因子PTEN与心肌肥大关系的研究

[摘要]目的：观察肿瘤抑制因子PTEN在心肌肥厚大鼠心肌组织以及在血管紧张素诱导的肥大心肌细胞中的表达，探讨PTEN在心肌肥大发生发展中的作用以及相关机制。方法：采用腹主动脉狭窄术制备压力超负荷心肌肥厚动物模型，及血管紧张素诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型，应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）方法、Westernblot及免疫组化等方法，分别检测各组PTEN mRNA和蛋白表达的变化，     

转化生长因子β1与大鼠心肌细胞肥大关系的实验研究

目的 探讨转化生长因子β1(TGF—β1)与大鼠心肌细胞肥大的关系。方法 培养新生大鼠心肌细胞，检测[^3H]—亮氨酸掺入量和心房利钠因子(ANF)的表达判断心肌细胞肥大，同时检测肥大心肌细胞TGF—β1表达。结果 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和TGF—β1均能增加心肌细胞[^3H]—亮氨酸掺入和ANF表达，两者合用效果更显著；AngⅡ还促进心肌细胞自分泌TGF—β1。结论 AngⅡ诱导心肌细胞分泌TGF—β1，AngⅡ和TGF—β1在诱导心肌细胞肥大中有协同作用。     

乌苏里藜芦生物碱对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响

[目的]在原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞上,观察乌苏里藜芦生物碱(Veratrum nigrum L.Var.ussurience Na-kai alkaloids,VnA)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠乳鼠的心肌细胞肥大的影响。[方法]通过BCA法测定心肌细胞蛋白含量和显微测微器测定心肌细胞直径,免疫荧光法分析心肌细胞内钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的表达变化。[结果]在一定剂量范围内VnA能抑制心肌细胞蛋白含量的增加(P<0.01)和细胞体积的增加(P<0.01),细胞内CaN的表达减少。[结论]VnA抑制AngⅡ诱导的乳鼠心肌细胞肥大可能与其抑制细胞内CaN表达有关。     

柚皮素减轻AngⅡ诱导的原代大鼠心肌细胞肥大作用

目的:探讨柚皮素(Naringenin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的原代大鼠心肌细胞(NRVMs)肥大作用及其作用机制。方法:AngⅡ刺激NRVMs构建体外心肌肥大模型,分为Vehicle组、Naringenin组、AngⅡ组和AngⅡ+Naringenin组。CCK8检测心肌细胞活性,α-actinin免疫荧光染色检测心肌细胞横截面积,RT-PCR检测ANP、BNP mRNA表达水平,Western Blot检测JNK、ERK及P38蛋白磷酸化水平,Hoechst染色检测心肌细胞凋亡。结果:与对照组相比,AngⅡ组心肌细胞横截面积明显增大,ANP、BNP mRNA表达水平明显增加,给予柚皮素干预后心肌细胞面积减小,ANP、BNP mRNA表达水平降低;此外,柚皮素能够减轻AngⅡ诱导的ERK和P38蛋白磷酸化水平上调及心肌细胞凋亡。结论:柚皮素可以减轻AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制MAPK信号通路以及减轻心肌细胞凋亡有关。     

自噬在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用

【目的】探讨自噬在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用.【方法】原代培养的乳鼠心肌细胞,采用Ang Ⅱ干预建立心肌肥大的模型;在光学显微镜下观察心肌细胞的形态,采用Real time PCR技术检测心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽(ANP)的表达,Western blot法检测LC3蛋白的表达.【结果】 Ang Ⅱ可抑制自噬相关基因LC3蛋白的表达,自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3MA)会促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.【结论】AngⅡ可能通过抑制自噬来诱导心肌细胞肥大.     

辛伐他汀防治心肌细胞肥大效应及其与钙通道关系的研究

目的：探讨辛伐他汀对心肌细胞肥大的防治作用及其与钙通道活动的关系。方法：采用血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型。应用改良Lowry法测定心肌细胞总蛋白含量。相差显微镜测定心肌细胞表面积。CCK-8法检测心肌细胞活力变化。westernblot方法检测心肌细胞L-型钙通道亚单位Cav1.2（α1C）、T-型钙通道亚单位Cav3.1（α1G）、Cav3.2（α1H）蛋白表达的变化。应用激光共聚焦显微镜技术检测[Ca^2＋]i的变化。结果：（1）辛伐他汀能明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量及细胞表面积的增加,同时提高心肌细胞活力;（2）辛伐他汀能明显降低心肌细胞T-型钙通道α1G、α1H蛋白表达,但对L-型钙通道α1C蛋白表达无明显影响;（3）辛伐他汀可呈剂量依赖性抑制心肌细胞肥大所致的钙离子超载。结论：辛伐他汀对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大具有明显的防治作用,其作用机制可能与辛伐他汀抑制T-型钙通道α1G、α1H蛋白的重新再表达有关,并与其抑制细胞内钙超载密切相关。     

人参皂苷Rb1抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大

目的观察人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,Rb1)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)所致心肌细胞肥大的影响。方法利用培养的新生大鼠心肌细胞,以细胞直径、蛋白含量为心肌肥大标志,观察药物的抗心肌肥大效应。ANFmRNA的表达用Real-timePCR检测;用Fura-2/AM负载的培养心肌细胞检测细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)以探讨Rb1可能的作用机制。结果AngⅡ1×10-7mol.L-1使心肌细胞细胞直径明显增大,蛋白含量明显增加,心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)mRNA表达明显上调,并使细胞[Ca2+]i明显升高。Rb150、100和200μg/ml使经AngⅡ处理的心肌细胞直径分别缩短18.4%,32.7%和43.8%;心肌细胞蛋白含量分别减少8.4%、13.6%和17.2%;降低ANFmRNA的表达;Rb150、100和200μg/ml呈剂量依赖地抑制AngⅡ所致的[Ca2+]i升高,NO前体L-精氨酸L-arg10-3molμL-1具有相似的作用,NO合酶抑制剂L-NAME对Rb1的效应无明显影响。结论Rb1可抑制Ang...     

非诺贝特对新生大鼠体外肥大心肌细胞的影响

目的：研究过氧化物酶体增殖物活化型受体α（PPARα）激活物非诺贝特对大鼠体外心肌细胞病理肥大的影响。方法：新生大鼠原代心肌细胞培养后，用不同时间、不同浓度的PPARα配体非诺贝特预处理细胞，然后以血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导其肥大。采用软件分析细胞面积，以RT-PCR法检测肥大心肌细胞α、一肌球蛋白重链（α-MHC、β-MHC）及PPARαmRNA表达的影响，单四唑（MTT）比色法测定非诺贝特对AngⅡ处理细胞活力的干预作用。结果：非诺贝特预处理24h可逆转AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，α/β-MHC mRNA表达比值降低及细胞活力的改变。同时增加PPARα mRNA的表达，并呈一定剂量依赖性；而非诺贝特和AngⅡ几乎同时处理细胞时，则无明显效应。结论：PPARα参与心肌细胞肥大过程，长期慢性非诺贝特预处理可能对心肌有保护效应。     

间质细胞在牵张刺激心肌细胞肥大中的作用

大量研究表明心脏是一个重要的内分泌器官。心肌间质细胞(主要是成纤维细胞、微血管内皮细胞)约占心肌组织细胞总数的40%，但是，单独针对心肌组织中各种间质细胞功能的离体研究较少。尤其是对于成纤维细胞、微血管内皮细胞在受到超负荷力学机械刺激后的内分泌功能有何变化及其在超负荷心肌肥大机制中的作用均不清楚。 　　我们应用体外细胞牵张刺激模型，采用条件培养基刺激法观察成纤维细胞、微血管内皮细胞在受到牵张刺激后的内分泌活化情况及在心肌细胞肥大中的作用。结果发现，对培养在硅酮膜上的成纤维细胞和微血管内皮细胞进行20%牵张刺激，24h即可见到两种细胞培养上清中血管紧张素Ⅱ和内皮素含量显著升高，牵张时间延长，二者的浓度进一步显著增加。因此，上述结果不仅说明牵张刺激可诱导成纤维细胞、微血管内皮细胞的内分泌活化，还提示牵张刺激对内分泌的活化作用具有时间依赖性。另外，我们发现牵张刺激成纤维细胞、微血管内皮细胞的条件培养基均可显著刺激心肌细胞3H-Leu掺入、c-fos蛋白及β-MHC mRNA的表达，提示牵张刺激可通过诱导心肌间质细胞内分泌活化启动心肌细胞肥大反应。血管紧张素Ⅱ、内皮素受体拮抗剂可明显抑制心肌细胞3H-Leu掺入率、c-fos蛋白及β-MHC mRNA的表达。但是，当联合应用上述两种受体拮抗剂时，3H-Leu掺入率、c-fos蛋白及β-MHC mRNA表达的抑制率可达80%以上，但并不能完全抑制，说明牵张刺激可诱导成纤维细胞和内皮细胞分泌包括血管紧张素Ⅱ和内皮素等在内的多种细胞因子、生长因子参与刺激心肌肥大反应，如成纤维细胞生长因子、转化生长因子等。因此，研究表明预防或逆转超负荷心肌肥大的最佳措施可能仍然是减轻心肌组织受到的过度应力刺激。     

丹参素对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大的影响

利用体外细胞培养技术 ,观察了丹参素对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )致心肌肥大的影响。结果表明 :丹参素抑制AngⅡ引起的培养心肌细胞总蛋白含量及直径的增加 ,对AngⅡ引起的心脏成纤维细胞的增殖也有抑制作用 ,其效果与AngⅡ受体 1阻滞剂Losartan相似 ,说明丹参素具有抑制心肌肥厚的作用     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

[目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化

 [目的]研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。[方法]分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大,72h后用RT-PCR和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及Cx43表达量的关系。[结果]血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低,Cx43蛋白表达低于对照组,Cx43mRNA表达水平也较对照组明显下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。[结论]血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因表达明显下调,导致Cx43蛋白表达亦出现下调,这一改变可能与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

AngⅡ对心肌细胞Kv4．2钾通道蛋白表达的影响及机制

【目的】体外培养新生大鼠心肌细胞,观察AngⅡ在诱导细胞肥厚过程中对Kv4．2蛋白表达的影响,及钙离子在其细胞内信号传导通路中的作用。【方法】AngⅡ心肌细胞肥大模型,用激光共聚焦显微镜检测AngⅡ对心肌细胞胞浆钙离子浓度的影响,用流式细胞仪检测AngⅡ诱导心肌细胞肥厚过程中细胞Kv4．2表达的变化。【结果】AngⅡ明显增加细胞的蛋白总量,诱导心肌细胞肥大,AngⅡ能增加心肌细胞胞浆钙离字浓度,下调Kv4.2编码的通道蛋白的表达含量。【结论】AngⅡ在诱导心肌细胞肥大过程中,可能通过细胞内钙离子以外的信号通路下调Ito通道蛋白Kv4．2。     

血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用

【目的】本研究主要是从丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)激活及失活角度研究该信号途径在血管紧张素Ⅱ (an giotensinⅡ ,AngⅡ )介导的心肌细胞肥大反应中作用。【方法】实验分别以 :①心肌细胞蛋白合成速率作为心肌肥大反应指标 ;②磷酸化MAPK蛋白 (p44MAPK、p42MAPK)表达反映MAPK活性状态。【结果】①AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 48h ,可使3H 亮氨酸掺入明显增加 ,该作用可被CV11974明显抑制 (抑制 85 % ) ,而PD0 980 5 9可部分抑制该反应 (抑制 32 5 % ) ;②AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 5min ,磷酸化MAPK蛋白表达即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h基本恢复正常 ,血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体 (AT1)拮抗剂CV11974(0 .1mmol/L)或MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5 0 μmol/L)可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达 (30min时分别下降 89%及 81% )。【结论】AngⅡ主要通过AT1受体激活MAPK及介导心肌肥大反应 ,抑制MAPK的激活可减轻AngⅡ介导的心肌肥大反应。MAPK通路激活是AngⅡ介导的心肌肥大反应重要机制。