Resovist标记神经干细胞向大鼠局灶性脑缺血区域的迁移：MRI体内追踪

摘要 背景：Resovist是一种超顺磁性氧化铁,能够标记神经干细胞。本实验成功制备Resovist标记的神经干细胞（磁标记神经干细胞）,并利用MRI技术活体内追踪磁标记神经干细胞向大鼠脑部缺血区的迁移。 目的：利用核磁共振技术（MRI）活体追踪Resovist标记的神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血。 设计,时间,地点：体外进行细胞学研究及大鼠脑内活体追踪试验。实验从2006年12月到2009年2月在哈尔滨医科大学基础实验室及哈尔滨医科大学附属第二医院神经科和MRI室完成。 材料：哈尔滨医科大学动物中心提供的新生清洁级SD大鼠 方法：神经干细胞培养、传代;制备Resovist标记的神经干细胞;利用免疫细胞化学、透射电镜和Prussian blue 染色等方法对Resovist标记神经干细胞的生长曲线进行研究。核磁共振追踪活体磁标记神经干细胞。 主要观察指标：免疫细胞化学、透射电镜、普鲁士蓝染色和MRI等方法 结果：在原代及传代细胞中有Nestin阳性细胞即神经干细胞。Resovist与神经干细胞共同孵育后,透射电镜及Prussian blue 染色显示胞浆中含有铁颗粒,铁颗粒也可以随细胞的分裂增殖而传到子代细胞中。随Resovist浓度的增高(2.8－11.2μg/ml), Resovist对神经干细胞存活无显著性影响。当Resovist的浓度大于22.4μg/ml时,影响其存活。活体状态下,MRI成功追踪到Resovist标记神经干细胞(Resovist浓度为 11.2μg/ml)呈低信号,并随时间推移,细胞向缺血灶迁移。 结论：本实验利用Resovist作为磁标记探针,成功制备磁标记神经干细胞。利用核磁共振（MRI）技术对磁标记神经干细胞进行活体追踪,观察细胞移植后的存活、迁移状况。     

纳米磁化标记神经干细胞的MRI大鼠活体示踪实验研究

目的:探讨用MRI活体示踪移植磁化标记神经干细胞在创伤性脑损伤模型大鼠脑内迁移和分布的可行性。方法:建立大鼠脑部左侧半球脑损伤模型。2周后将磁化标记胚胎神经干细胞立体定向移植入大鼠脑部右侧半球。在移植后1、3d及1、2周分别行大鼠头部MRI。结果:移植后行头颅MRI可见移植部位FSET2 WI和GRET2 序列呈环形低信号。实验组大鼠头颅MRI脑内有一低信号线,指向对侧脑挫伤部位。结论:用MRI活体示踪移植磁化标记神经干细胞在TBI模型大鼠脑内迁移和分布是可行的。     

MRI活体示踪大鼠脑内超顺磁性氧化铁标记成人神经干细胞

背景：目前判断神经干细胞移植后向脑损伤部位的迁移需要处死受体动物行脑切片检查,且不能进行多点、动态的观察。 目的：探讨用MRI活体示踪移植磁化标记成人神经干细胞在创伤性脑损伤模型大鼠脑内迁移和分布的可行性。 方法：建立大鼠脑部左侧半球创伤性脑损伤模型,超顺磁性氧化铁体外标记成人神经干细胞。模型建立后2周将标记成人神经干细胞立体定向移植入大鼠脑部右侧半球。在移植后1 d、3 d、1周和2周分别行大鼠头部MRI。2周后处死大鼠取脑,用普鲁士蓝染色法进行染色,观察标记神经干细胞的迁移。 结果与结论：超顺磁性氧化铁体外标记成人神经干细胞的成功率约为85%。移植后行头颅MRI可见位于右侧半球的移植部位FSE T2WI和GRE T2序列呈环形低信号。随时间推移,创伤性脑损伤后移植标记干细胞组大鼠头颅MRI可见脑内有一低信号线,指向对侧脑挫伤部位,而创伤性脑损伤后移植未标记干细胞组,正常大鼠移植标记干细胞组无信号线。MRI显像结果与脑切片普鲁士蓝染色观察到的结果是相符合的。 结果提示用MRI活体示踪移植磁化标记成人神经干细胞在创伤性脑损伤模型大鼠脑内迁移和分布可行、有效。     

菲立磁标记兔骨髓基质源神经干细胞自体移植入纹状体后的形态学观察

目的将体外标记的骨髓基质源神经干细胞经单细胞悬液微移植后观察其在兔纹状体的存活、迁移、分化和整合情况，为细胞移植治疗疾病奠定基础。方法分离兔骨髓基质细胞，利用神经干细胞培养基、白血病抑止因子和碱性成纤维母细胞生长因子进行细胞扩增并诱导成骨髓基质源神经干细胞，再经菲立磁和活细胞荧光染料PKH67标记后．采用微移植的方法，通过脑立体定位仪，用微玻璃针将干细胞分别植入兔脑纹状体内。存活1、4、8周后处死动物，组织切片，利用光镜和电镜观察标记细胞在脑内的形态学情况。结果菲立磁标记的兔骨髓基质源神经干细胞经微移植后可在兔脑内纹状体区域存活，移植的干细胞可向周围的脑实质内迁移和整合，迁移细胞沿特定的纹状体结构分布。少量菲立磁标记的干细胞可以分化成神经元。结论骨髓基质源神经干细胞移植后．可在脑实质内存活、迁移、分化和整合，这种细胞可能成为中枢神经系统自体移植的细胞来源。     

USPIO标记大鼠骨髓源性神经干细胞移植脑皮层影像及形态学初步研究

目的将超小超顺磁性氧化铁（USPIO）Sinerem标记的大鼠骨髓源性神经干细胞移植鼠脑后，初步观察其在大脑中的活性、迁移和整合情况，确定MRI成像示踪Sinerem标记神经干细胞的可行性。方法分离SD大鼠骨髓基质细胞，体外培养诱导成骨髓源性神经干细胞。将Sinerem氧化铁和神经干细胞共孵育培养过夜。采用普鲁士蓝染色和透射电镜确定细胞内铁的摄取、定位情况。将标记细胞立体定向移植微注射到大鼠脑皮层。在不同时间点以SE序列T2WI行4．7T磁共振干细胞成像示踪，然后用组织学方法观察标记细胞在脑内的转归情况。结果Sinerem标记神经干细胞效率为98％～100％，普鲁士蓝染色显示铁颗粒存在胞质中，电镜显示铁颗粒集中于内涵体／溶酶体中；移植细胞体内的T2WI信号强度明显降低．可在4周时检测到细胞沿胼胝体迁移；组织学检测结果表明标记后的细胞可在脑内存活，并能沿神经纤维迁移。结论USPIO能有效地标记骨髓源性神经干细胞，利用磁共振成像可进行大脑中活体示踪监测。     

活体磁共振示踪磁标记大鼠神经干细胞**☆

背景：要将神经干细胞替代治疗神经系统疾病应用于临床,必须解决一个重要问题,就是植入人脑内神经干细胞的存活、迁移、识别和动态监测。 目的：拟建立菲立磁体外标记胎鼠神经干细胞的方法及检测手段,观察标记细胞移植后在活体上磁共振信号的改变。 设计、时间及地点：MRI动态评估,体内实验,于2005-01/08在武警医学院附属医院完成。 材料：孕13~18 d SD胚胎大鼠10只用于分离、培养大鼠胚胎源性神经干细胞,健康成年清洁级SD大鼠32只,用于制作局灶性脑缺血再灌注模型。 方法：分离培养大鼠胚胎源性神经干细胞,使用菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记神经干细胞。制作局灶性脑缺血再灌注模型,将菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记的神经干细胞分别移植入模型大鼠左侧脑内,右侧移植未标记的神经干细胞。 主要观察指标：对标记细胞进行普鲁士蓝染色、电镜观察。细胞活体移植后1,5,14 d体内磁共振示踪。 结果：菲立磁可以高效率地标记神经干细胞,普鲁士蓝染色显示菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记神经干细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒,电镜结果显示菲立磁-多聚赖氨酸复合物标记的神经干细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡。磁共振成像检查发现脑内移植的标记细胞在磁共振上呈明显的低信号改变,移植第5天低信号物质沿胼胝体腹侧迁移。在移植第14天,对称平行的两个针道已经基本看不见,病灶侧侧脑室部位低信号物质向对侧迁移,左侧侧脑室部位低信号物质基本看不见。 结论：菲立磁经多聚左旋赖氨酸转染后可体外标记神经干细胞,标记后体内移植的神经干细胞可以在磁共振上产生明显的低信号改变。     

早期分化的神经干细胞移植治疗大鼠脑梗死的实验研究

目的研究早期分化的神经干细胞移植治疗脑梗死的可能性。方法从Wistar新生大鼠的大脑分离培养神经干细胞,取传代的神经干细胞诱导分化并经BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶)标记后移植到脑梗死对侧的侧脑室,移植后对大鼠的功能恢复进行评价,用免疫组织化学方法鉴定移植的细胞在脑内的迁移和分化情况。结果将早期分化的神经干细胞移植到鼠脑后2周在梗死灶对侧可发现移植的细胞,4周时移植的细胞在梗死灶内分化为神经细胞,大鼠的学习功能和神经功能恢复较对照组均有明显改善。结论早期分化的神经干细胞移植到大鼠脑内仍能存活,并能有效穿过脑脊液———脑屏障迁移到脑梗死的部位;且分化为神经细胞。     

脑出血大鼠脑内神经干细胞移植的研究

目的分离并克隆新生大鼠神经干细胞,研究其移植入脑出血大鼠脑内的生物学特征,了解神经干细胞移植治疗脑出血的可行性.方法用尾状核注射Ⅶ型胶原酶制作脑出血模型,从Wistar新生大鼠脑室下区分离并克隆神经干细胞,经Brdu(5-溴脱氧尿嘧啶)掺入标记后移植入脑出血同侧的侧脑室或脑出血对侧的尾状核中.经免疫组织化学鉴定了解移植细胞在大鼠脑内的生存、迁移及分化情况.结果将稳定培养的神经干细胞移植入脑出血大鼠脑内,发现移植后4 d移植细胞仍存在.侧脑室移植组中移植细胞多在侧脑室周边区存在,尾状核移植组可见移植细胞开始向对侧迁移.免疫荧光双标证实细胞大多分化成神经元,少部分分化成胶质细胞.结论神经干细胞移植入脑出血大鼠脑内后能够存活,并能有效地穿过室管膜和向脑出血部位迁移.移植细胞在脑内大部分分化成神经元,少部分分化成胶质细胞.     

菲立磁标记骨髓基质干细胞移植修复兔坐骨神经缺损

【背景】既往为明确细胞移植后对组织修复情况,多采用标本处死或取材等侵袭性方法,但此类方法创伤大且不适于人体研究。通过应用示踪剂标记移植细胞,采用无创伤性影像学技术活体识别、追踪移植细胞的存活及分化状态,观察组织再生修复情况,无疑对于提高细胞移植治疗有重要意义。 【目的】应用MRI影像学技术,体外追踪活体内菲立磁-多聚赖氨酸复合标记的骨髓基质干细胞移植后的存活、迁移变化及与宿主的整合情况。 【设计、时间及地点】细胞学体外观察,于2008年3月至12月在珠江医院神经外科实验室完成。 【材料】健康新西兰兔10只,由南方医科大学实验动物中心提供。菲立磁为Advanced Magnetic公司产品,多聚赖氨酸为Sigma公司产品。 【方法】无菌条件下抽取新西兰兔股骨骨髓,密度梯度离心法获取骨髓基质干细胞,收集细胞加入含白血病抑制因子、碱性成纤维细胞生长因子及胎牛血清的神经干细胞培养基诱导5天。将50mg/L菲立磁和1.5mg/L多聚赖氨酸混合震荡30分钟后加入到神经培养基中进行标记,细胞孵育24小时后移植至坐骨神经缺损处。分别在细胞移植后1周、2周、4周、8周和16周行移植处MRI扫描及组织学观察。 【主要观察指标】骨髓基质干细胞经诱导后向神经干细胞分化情况,细胞内铁的鉴定,菲立磁－多聚赖氨酸复合物对细胞增殖或分化的影响,利用MRI对标记后移植细胞观察的有效性。 【结果】1.骨髓基质干细胞体外培养能成功扩增、繁殖,经诱导分化成具有细长突起的神经干细胞。2.菲立磁-多聚赖氨酸复合物能在体外标记骨髓基质干细胞,标记效率达到98％且无明显渗漏。3.1周后MRI扫描可见坐骨神经细胞移植处局限性低信号改变,4和8周后信号区域改变增大,16周未见明显信号改变。HE染色发现细胞移植组神经纤维再生良好,体外菲立磁标记骨髓基质细胞移植后可在坐骨神经内存活并向神经两断端迁移。组织学改变基本上与核磁共振影像相对应。 【结论】1.骨髓基质干细胞经体外诱导能分化为神经干细胞并保持其增殖活性。2.菲立磁-多聚赖氨酸复合物可在体外高效标记骨髓基质细胞,且不影响标记后细胞的活性、增殖和分化能力。3.菲立磁标记的兔骨髓基质细胞源神经干细胞移植后,可在宿主坐骨神经内存活、迁移,T2WI序列成像可清晰显示Feridex标记的BMSCs所致的低密度影像改变。利用MRI可以对移植后的标记细胞进行活体追踪。     

超顺磁氧化铁标记骨髓基质干细胞移植治疗帕金森病鼠的实验研究

目的:研究应用超顺磁氧化铁(SPIO)标记骨髓基质干细胞(MSCs)移植治疗帕金森病(PD)大鼠后的在体MRI观察。方法:分离、获取大鼠骨髓基质细胞,脂质体转染法将SPIO标记MSCs;制作PD模型,SPIO标记的MSCs移植到PD大鼠右侧纹状体区,应用MRI在体观察脑内移植的骨髓基质细胞的存活和迁徙情况。结果:体外SPIO标记的骨髓基质细胞普鲁蓝染色阳性;脑内移植SPIO标记MSCs的PD大鼠磁共振T2和T2GRE扫描检查显示在移植区呈低信号改变。随时间的延长,移植区信号向周围扩大。脑纹状体区的铁染色也可见SPIO标记MSCs从移植部位向四周迁移。结论:SPIO可用于体外标记MSCs,通过MRI技术可以对标记细胞脑内移植后进行初步的活体示踪,有利于MSCs移植治疗PD后的疗效观察。     

超顺磁性氧化铁标记神经干细胞移植入局灶性脑缺血大鼠纹状体的MRI示踪及其对学习记忆的影响

目的 探讨以超顺磁性氧化铁（SPIO）标记的胎鼠神经干细胞（NSCs）移植入局灶性脑缺血大鼠纹状体的MRI示踪及其对学习与记忆的影响。方法 体外培养的胎鼠NSCs用Fe2O3-多聚左旋赖氨酸（Fe2O3-PLL）标记，普鲁士蓝和台盼蓝染色分别检测标记率和细胞活力。将大鼠随机分为A组（正常对照组）、B组（正常标记NSCs移植组）、C组（脑缺血组）、D组（标记NSCs移植组）、E组（未标记NSCs移植组）及F组（灭活标记NSCs移植组）。取C组、D组、E组和F组大鼠制备局灶性脑缺血模型；将标记及未标记的NSCs悬液及灭活的标记NSCs悬液分别定向注射于B组、D组、E组和F组大鼠左侧纹状体内；移植后3d、7d、2周、3周、4周，对A组、C组、D组和E组分别进行Y型电迷宫检测；对B组、D组和F组进行活体MRI示踪扫描；MRI扫描后的大鼠行脑组织切片普鲁士蓝染色，观察移植的NSCs分布。结果NSCs的FeO3-PLL标记率近100％，标记的NSCs细胞活力为95％。与C组比较，D组和E组移植后各时间点大鼠的学习与记忆能力明显改善（均P〈0.05）；MRI显示移植4周后D组移植区低信号影范围较大；脑组织切片可见移植的NSCs沿胼胝体向对侧迁移。结论 Fe2O3-PLL标记不影响NSCs活力；移植NSCs能改善脑缺血大鼠的学习与记忆功能；移植的NSCs可向病灶区迁移。     

移植神经干细胞的存活与迁移：电刺激小脑顶核可提高移植效率吗？**

背景：缺血早期半暗带中神经元和内皮细胞的坏死和凋亡无法得到缓解,加之移植后的存活率低,向功能细胞的分化率低,是单纯神经干细胞移植的缺陷。课题组提出整体干预理念,期望给移植细胞提供优化的整体环境。 目的：观察神经干细胞移植与电刺激小脑顶核相结合整体干预对移植神经干细胞存活与迁移的影响。 方法：体外分离、培养新生Wistar大鼠海马表皮生长因子反应性神经干细胞,Brdu标记,并用胎牛血清诱导,观察其多向分化潜能;80只Wistar大鼠分为4组：顶核刺激+神经干细胞移植组(n=32)：左侧小脑顶核刺激24 h后行右侧大脑中动脉梗死,再24 h后将神经干细胞立体定向注入右侧侧脑室内;顶核刺激组(n=8)：PBS代替神经干细胞,其余同顶核刺激+神经干细胞移植组;单纯神经干细胞移植组(n=32)：同心圆电极插入小脑顶核,不通电其余同顶核刺激+神经干细胞移植组;对照组(n=8)：同心圆电极插入小脑顶核后不通电,其余同顶核刺激组。记录梗死后6,24 h,3,7,14,28 d大鼠的神经功能;分别在移植后3,7,14,28 d处死大鼠,以梗死灶为中心切片,Brdu免疫组织化学染色,观察移植神经干细胞的存活与迁移。 结果与结论：分离培养的表皮生长因子反应性细胞表达nestin抗原,并有自我更新及多向分化潜能,在胎牛血清诱导下可分化为神经胶质细胞和神经元。经Brdu标记后,85%以上神经干细胞表达Brdu抗原。移植28 d内顶核刺激+神经干细胞移植组功能评分明显优于与其他3组(P < 0.05~0.01)。顶核刺激+神经干细胞移植组在移植14,28 d存活细胞数明显多于单纯神经干细胞移植组;提示电刺激小脑顶核可显著提高移植神经干细胞的存活率及大脑中动脉梗死大鼠的神经功能评分;优化的整体环境可提高移植神经干细胞对局灶性脑缺血损伤细胞的替代作用。     

SPIO标记神经干细胞治疗小脑萎缩大鼠的实验研究

目的探讨超顺磁性氧化铁（SPIO）标记胎鼠神经干细胞（NSC）的脑内MRI示踪效果及NSC对小脑萎缩大鼠共济运动的影响。方法将24只小脑萎缩大鼠模型随机等分为对照组、标记组、未标记组及灭活标记组,每组6只,用生理盐水、SPIO标记NSC、未标记NSC及灭活的NSC悬液分别注射于各组大鼠的小脑齿状核;进行步距行为学检测、活体MRI示踪扫描、脑组织切片普鲁士蓝染色,观察移植NSC的分布。结果与对照组、灭活标记组比较,标记组、未标记组大鼠移植后步距行为学明显改善（P〈0.05）;与灭活标记组比较,标记组MRI显示移植4周后移植区低信号影响范围较广,普鲁士蓝染色阳性细胞向周围迁移距离较远。结论MRI可显示SPIO标记的NSC在移植大鼠脑内的分布和存活情况;移植NSC能改善小脑萎缩大鼠的共济运动功能。     

The role of hypoxia in stem cell regulation of the central nervous system: From embryonic development to adult proliferation

Hypoxia is involved in the regulation of various cell functions in the body, including the regulation of stem cells. The hypoxic microenvironment is indispensable from embryonic development to the regeneration and repair of adult cells. In addition to embryonic stem cells, which need to maintain their self-renewal properties and pluripotency in a hypoxic environment, adult stem cells, including neural stem cells (NSCs), also exist in a hypoxic microenvironment. The subventricular zone (SVZ) and hippocampal dentate gyrus (DG) are the main sites of adult neurogenesis in the brain. Hypoxia can promote the proliferation, migration, and maturation of NSCs in these regions. Also, because most neurons in the brain are non-regenerative, stem cell transplantation is considered as a promising strategy for treating central nervous system (CNS) diseases. Hypoxic treatment also increases the effectiveness of stem cell therapy. In this review, we firstly describe the role of hypoxia in different stem cells, such as embryonic stem cells, NSCs, and induced pluripotent stem cells, and discuss the role of hypoxia-treated stem cells in CNS diseases treatment. Furthermore, we highlight the role and mechanisms of hypoxia in regulating adult neurogenesis in the SVZ and DG and adult proliferation of other cells in the CNS.     

Spatio-temporal dynamics, differentiation and viability of human neural stem cells after implantation into neonatal rat brain

Neural stem cells (NSCs) have attracted major research interest due to their potential use in cell replacement therapy. In patients, human cells are the preferred choice, one source of human NSCs being the brain of fetuses. The aims of the present study were to explore the long‐term differentiation, mobility and viability of NSCs derived from the human fetal striatum in response to intracerebral implantation. To investigate long‐term spatio‐temporal and functional dynamics of grafts in vivo by magnetic resonance imaging, these cells were labeled with superparamagnetic iron oxide (SPIO) nanoparticles prior to implantation. SPIO‐labeling of human NSCs left the quantitative profile of the proliferation, cell composition and differentiation capacity of the cells in vitro unaltered. Also after transplantation, the phenotypes after long‐term cell differentiation were not significantly different from naïve cells. Upon transplantation, we detected a hypointensity corresponding to the striatal graft location in all animals and persisting for at least 4 months. The hypointense signal appeared visually similar both in location and in volume over time. However, quantitative volumetric analysis showed that the detectable, apparent graft volume decreased significantly from 3 to 16 weeks. Finally, the human NSCs were not proliferating after implantation, indicating lack of tumor formation. These cells are thus a promising candidate for translationally relevant investigations for stem cell‐based regenerative therapies.     

胎鼠神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响

目的研究胎鼠神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡及凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组(Normal组),脊髓损伤组(SCI组),神经干细胞组(NSC组),神经干细胞标记组(BrdU+NSCs组)。采用电控脊髓损伤打击装置制作模型,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Br-dU)法标记处于对数生长期的NSCs,SCI后即刻进行NSCs移植。免疫组化法观察BrdU标记NSCs的存活、迁移及凋亡抑制基因Bcl-2的表达,TUNEL法标记凋亡细胞(免疫组化及免疫荧光显色),改良Rivlin法观察大鼠后肢运动功能的恢复情况。结果 BrdU+NSCs组在损伤脊髓区域可检测到BrdU标记的阳性NSCs。BrdU+NSC组与NSC组各时间点凋亡阳性细胞数均比SCI组减少(P<0.01),Bcl-2免疫阳性细胞光密度值比SCI组明显增加(P<0.01),且Bcl-2表达高峰延长至伤后7d;移植后7d、14d、28d后肢运动功能评分较SCI组明显升高(P<0.01)。Br-dU+NSC组与NSC组之间比较无明显差异(P>0.05)。结论体外培养的胚胎大鼠NSCs可在脊髓损伤区域存活、迁移,并能通过上调Bcl-2的表达来抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞的凋亡,从而促进大鼠瘫痪肢体功能的恢复。     

Human neural stem cells improve sensorimotor deficits in the adult rat brain with experimental focal ischemia

Ischemic stroke is caused by the interruption of cerebral blood flow that leads to brain damage with long-term sensorimotor deficits. Stem cell transplantation may recover functional deficit by replacing damaged brain. In this study, we attempted to test whether the human neural stem cells (NSCs) can improve the outcome in the rat brain with intravenous injection and also determine the migration, differentiation and the long-term viabilities of human NSCs in the rat brain. Focal cerebral ischemia was induced by intraluminal thread occlusion of middle cerebral artery (MCA). One day after surgery, the rats were randomly divided into two groups: NSCs-ischemia vs. Ischemia-only. Human NSCs infected with retroviral vector encoding beta galactosidase were intravenously injected in NSCs-ischemia group (5 x 10(6) cells) and the same amount of saline was injected in Ischemia-only group for control. The animals were evaluated for 4 weeks using turning in an alley (TIA) test, modified limb placing test (MLPT) and rotarod test. Transplanted cells were detected by X gal cytohistochemistry or beta gal immunohistochemistry with double labeling of other cell markers. The NSCs-ischemia group showed better performance on TIA test at 2 weeks, and MLPT and rotarod test from 3 weeks after ischemia compared with the Ischemia-only group. Human NSCs were detected in the lesion side and labeled with marker for neurons or astrocytes. Postischemic hemispheric atrophy was noted but reduced in NSCs-ischemia group. X gal+ cells were detected in the rat brain as long as 540 days after transplantation. Our data suggest intravenously transplanted human NSCs can migrate and differentiate in the rat brain with focal ischemia and improve functional recovery.