通过核转录因子-κB诱导基质金属蛋白酶的表皮生长因子对胆管癌细胞侵袭的影响

目的 探讨表皮生长因子通过核转录因子（NF）-κB诱导基质金属蛋白酶促进胆管癌细胞侵袭的机制。方法 检测胆管癌细胞株HuCCT1在表皮生长因子（EGF）同浓度下的细胞侵袭力及细胞增殖情况；采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot分析方法，检测基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9在不同EGF浓度下的基因和蛋白表达；采用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）检测NF-κB在不同EGF浓度下的活性。结果 随着EGF浓度的增加，胆管癌细胞株HuCCT1侵袭细胞数也随之增加，具有明显的浓度依赖性。而EGF浓度的变化对HuCCT1细胞的增殖无明显影响。EGF明显上调HuCCT1细胞中MMP-9的mRNA和蛋白表达水平，MMP-2不受影响。EGF增强NF-κB的活性；PDTC和布洛芬明显抑制EGF诱导的HuCCT1细胞侵袭力。结论 EGF能够增强胆管癌细胞的侵袭力，其增强的侵袭力可能是通过NF-κB信号传导路径，激活MMP-9而实现的。     

核转录因子κB抑制剂抑制表皮生长因子诱导胰腺癌细胞侵袭研究

表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）在胰腺癌组织中表达明显增高，核转录因子KB（nuclear factor kappaB，NF-κB）是参与调控肿瘤侵袭和转移的相关基因，二者均与肿瘤的侵袭和转移密切相关。本实验通过研究NF-κB抑制剂对EGF诱导胰腺癌细胞侵袭能力的影响，探讨抑制NF-κB信号转导通路在胰腺癌治疗中的作用。[第一段]     

通过核转录因子-кB诱导基质金属蛋白酶的表皮生长因子对胆管癌细胞侵袭的影响

目的探讨表皮生长因子通过核转录因子(NF)-кB诱导基质金属蛋白酶促进胆管癌细胞侵袭的机制。方法检测胆管癌细胞株HuCCT1在表皮生长因子(EGF)同浓度下的细胞侵袭力及细胞增殖情况；采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析方法,检测基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9在不同EGF浓度下的基因和蛋白表达；采用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)检测NF-кB在不同EGF浓度下的活性。结果随着EGF浓度的增加,胆管癌细胞株HuCCT1侵袭细胞数也随之增加,具有明显的浓度依赖性。而EGF浓度的变化对HuCCT1细胞的增殖无明显影响。EGF明显上调HuCCT1细胞中MMP-9的mRNA和蛋白表达水平,MMP-2不受影响。EGF增强NF-кB的活性；PDTC和布洛芬明显抑制EGF诱导的HuCCT1细胞侵袭力。结论EGF能够增强胆管癌细胞的侵袭力,其增强的侵袭力可能是通过NF-кB信号传导路径,激活MMP-9而实现的。     

IκB-α基因转染HCC9204细胞对NF-κB和MMP-9表达的影响

目的观察高转移性人肝癌细胞系HCC9204转染抑制性κB基因(IκB-α)后核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞,应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达;通过基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移能力。结果HCC9204细胞转染pcDNA3-IκB-α后,细胞内NF-κB蛋白表达下降,同时伴随MMP-9mRNA表达水平和细胞侵袭、转移能力的明显下降。结论NF-κB活性被抑制后引起细胞侵袭、转移能力的下降可能是由于MMP-9表达下降所致。     

NF-κB、MMP-9与肝细胞肝癌浸润转移的实验研究

目的观察高转移性肝癌细胞系HCC9204细胞转染抑制性κB基因（IκB-α）后核因子κB（NF-κB）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的改变以及细胞浸润转移能力的改变。方法采用脂质体法将IκB-α基因转染HCC9204细胞，应用Western-blot及RT-PCR法检测MMP-9和NF-κB的表达；电泳迁移率分析（EMSA）测定NF-κB活性；免疫组化法检NF-κBp65、MMP-9的表达；激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察MMP-9细胞定位以及细胞形态；基底膜侵袭实验检测肿瘤细胞的浸润和转移。结果HCC9204细胞转染PCDNA3-IκB-α后，细胞内NF-κB和MMP-9 mRNA表达以及NF-κB活性下降；NF-κB、MMP-9表达具有明显的正相关；MMP-9蛋白表达位置和细胞形态改变；细胞侵袭转移能力明显下降。结论NF-κB表达水平与HCC9204的浸润转移能力有关；NF-κB活性抑制后细胞浸润转移能力下降，MMP-9表达下降可能起主要作用。     

表皮生长因子促进胰腺癌细胞侵袭和转移的实验研究

目的 探讨表皮生长因子（epidermal growthfactor，EGF）促进胰腺癌细胞侵袭和转移的分子机理。方法 EGF对胰腺癌细胞系NOR—P1的增殖、黏附及侵袭能力的影响分别用WST-1细胞增殖实验、细胞黏附实验和Transwell体外侵袭实验检测；MMP-9和MMP-2的活性及表达分别用明胶酶谱分析和Western印迹、RT—PCR检测；NF-κB活性用凝胶电泳迁移实验检测。结果 EGF能够明显促进胰腺癌细胞的侵袭能力，但对胰腺癌细胞的黏附力及增殖并无明显影响；EGF明显上调胰腺癌细胞的NF-κB和MMP-9的活性及表达，但对MMP-2活性及表达无影响；NF-κB抑制物四氢化吡咯二硫代氨基甲酸盐（PDTC）能够明显抑制EGF所诱导的NF-κB活性，同时也抑制EGF所诱导的MMP-9表达及胰腺癌细胞的侵袭力。结论 EGF通过活化NF-κB促进胰腺癌细胞的MMP-9的表达和侵袭力，采用NF-κB抑制剂PDTC阻断NF-κB通路能够降低胰腺癌细胞的侵袭力。     

穿心莲内酯对肺癌细胞NF-κB的活性以及MMP-9表达的影响

目的:观察穿心莲内酯(Andrographolide,AD)对肺癌H3255细胞的生长抑制作用以及对基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein,MMP)-9表达与活性的影响,并研究其可能的分子机制。方法:体外培养H3255细胞,MTT法检测细胞的增殖情况;RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达,明胶酶谱实验检测其酶活性;Western blot检测NF-κB p65亚基的核转位以及IκB磷酸化情况。结果:AD能以剂量和时间依赖性方式抑制H3255细胞增殖;不同浓度的AD能降低MMP-9的mRNA表达水平和酶活性。结论:AD对肺癌细胞增殖具有抑制作用,其机制可能与抑制I-κBα磷酸化而抑制NF-κB激活,最终抑制MMP-9的活性有关。     

IKK/NF-κB信号转导通路与危重病

NF κB可调节众多的基因转录 ,尤其是涉及炎症和急性应激反应的基因转录 ,从而启动一系列的细胞级联和全身性反应 ,并最终导致器官功能不全 ,提示IKK NF κB信号转导通路在危重病中有重要的作用。     

靶向MMP-2的RNAi抑制胰腺癌PANC-1细胞侵袭性的研究

目的 观察RNAi体外沉默胰腺癌PANC-1细胞MMP-2基因对胰腺癌细胞MMP-2表达及细胞侵袭能力的抑制作用.方法 设计靶向MMP-2的siRNA并构建到pGCsi-U6质粒,重组质粒通过脂质体Lipofectamine 2000转染PANC-1细胞,流式细胞仪检测质粒的转染率,RQ-PCR检测细胞MMP-2的mRNA表达水平;ELISA检测细胞MMP-2蛋白的分泌量;Transwell小室侵袭观察各组细胞侵袭能力;MTT比色法检测各组细胞增殖活性.结果 测序鉴定证实,干扰质粒构建成功,重组质粒转染率最高达82.1%.转染干扰质粒PANC-1细胞的MMP-2基因mRNA表达抑制了71.74%(P＜0.05);MMP-2蛋白分泌下降了49.82%(P＜0.05);细胞侵袭能力抑制率达33.0%(P＜0.05);细胞的增殖活性无明显变化(P＞0.05).结论 靶向MMP-2的RNAi能抑制胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭能力,提示MMP-2可以作为胰腺癌基因治疗的靶点,亟待RNAi能为肿瘤治疗开创崭新局面.     

核因子κB、表皮生长因子受体及黏蛋白1在肝内胆管结石合并肝内胆管癌组织的表达及其意义

目的 探讨肝内胆管结石合并肝内胆管癌组织核因子κB(NF-κB)、表皮生长因子受体(EGFR)和黏蛋白1(MUCl)的表达及其临床意义。方法取中山大学附属第二医院1989年8月至2009年6月间肝切除组织石蜡标本90例,其中肝内胆管结石合并肝内胆管癌33例为实验组,肝内胆管结石32例为对照组,肝良性肿瘤旁1～2 cm正常肝内胆管组织25例为空白组。组织切片分别进行NF-κB、EGFR及MUC1免疫组化染色,分析其表达差异的意义。结果 3组NF-κB的表达阳性率分别为51.5％(17/33)、25％ (8/32)和4％(1/25),P＜0.01;3组EGFR的表达阳性率分别为57.6％(19/33)、31.3％ (10/32)和0(o/25),P＜0.01; MUC1表达阳性率分别为54.5％ (18/33)、28.1％(9/32)和0(0/25),P＜0.01。EGFR、MUC1在病理组织学分级、肿瘤局部浸润及淋巴结转移的表达差异有统计学意义。肿瘤患者EGFR、MUC1阳性表达者的累积生存率比阴性表达者低(P＜0.01)。结论NF-κB是肝内胆管癌发生的早期事件;NF-κB、EGFR及MUC1过表达在肝内胆管癌发展过程起协同的重要作用,EGFR及MUC1高表达与肿瘤恶性程度以及预后有关。     

NF-κB与慢性移植物血管病

核因子-κB(NF-κB)的活化在慢性移植物血管病(CAV)的发生、发展过程中至关重要.以NF-κB作为预防、治疗CAV的靶点所进行的研究已取得了一定进展.     

NF-κB与慢性移植物血管病

核因子-κB(NF-κB)的活化在慢性移植物血管病(CAV)的发生、发展过程中至关重要。以NF-κB作为预防、治疗CAV的靶点所进行的研究已取得了一定进展。     

大鼠腹主动脉瘤发生与骨桥蛋白及核因子-κB表达的关系

目的 构建大鼠腹主动脉瘤模型并观察大鼠腹主动脉瘤中骨桥蛋白(OPN)及核因子-κB(NF-κB)的表达,探讨大鼠腹主动脉瘤发生的分子机制.方法 将30只大鼠分为3组,每组10只,用酶灌注法灌注30 min构建大鼠腹主动脉瘤模型;测量动脉直径;苏木素-伊红(HE)染色及特殊染色检测主动脉的结构改变及炎性细胞浸润;免疫组织化学技术、Western blot法检测动脉组织中OPN、NF-κB及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达.结果 成功构建大鼠腹主动脉瘤模型;腹主动脉瘤组术后直径扩张率明显高于对照组(P＜0.01),并且中层弹力蛋白明显减少,炎性细胞浸润程度显著增高;免疫组织化学结果显示OPN、NF-κB及MMP-2在腹主动脉瘤组中的表达均明显增加(P＜0.05).Western blot结果同样显示OPN、NF-κB及MMP-2在腹主动脉瘤组中的表达均明显增加(P＜0.01),OPN、NF-κB及MMP-2呈正相关.结论 在大鼠腹主动脉瘤模型中,OPN可能通过NF-κB途径上调MMP-2的表达,进而加速细胞外基质的降解,最终导致主动脉瘤的发生发展.     

NF-κB、EGFR在肝内胆管结石合并肝内胆管癌组织的表达和意义

目的探讨NF-κB和EGFR在肝内胆管结石合并肝内胆管癌组织的表达和意义。方法取中山大学附属第二医院1989年8月至2009年6月期间手术切除肝组织石蜡标本共90例,其中肝内胆管结石合并肝内胆管癌33例为观察组,单纯肝内胆管结石32例为对照组,正常肝内胆管组织25例为正常对照组。采用免疫组化SP法检测胆管细胞中NF-κB及EGFR表达情况,并分析其与肝内胆管结石合并肝内胆管癌临床病理特征及生存率的关系。结果从正常对照组、对照组到观察组,NF-κB与EGFR的表达阳性率逐渐升高(P0.05,P0.01)。EGFR的表达与肿瘤分化程度及肿瘤浸润深度有关(P0.05),与患者的性别、年龄及淋巴结转移无关(P0.05);NF-κB的表达与上述因素均无关(P0.05)。肿瘤患者中EGFR呈阳性表达者,其累积生存率较低(P0.01)。结论 NF-κB的异常表达是肝内胆管癌的早期事件,NF-κB与EGFR过表达在肝内胆管结石致胆管癌的癌变过程中起着协同的重要的作用,EGFR的过表达与肿瘤恶性程度和预后有关。     

NF-κB在急性胰腺炎治疗研究中的进展及前景

急性胰腺炎是胰酶激活后引起胰腺组织自身消化所致的急性炎性介质反应,可诱发全身炎性介质反应,并恶化为多脏器功能衰竭,导致患者死亡.核转录因子κB在急性胰腺炎的发展中占据核心地位,它凋节了炎性因子和免疫蛋白的基因表达.本文就基于NF-κB的胰腺炎治疗作一综述.     

蛋白磷酸酶2A抑制剂通过核因子-κB通路激活胰腺癌细胞外源性凋亡通路的机制

目的 探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)抑制剂通过激活核因子-κB(NF-κB)通路诱导胰腺癌细胞株人胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡的机制.方法 荧光素酶报告基因检测NF-κB通路的激活水平,试剂盒检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8、9活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB通路下游凋亡相关基因表达水平.结果 PP2A抑制剂斑蝥素、冈田酸可激活NF-κB通路,分别使NF-κB转录活性上升(10.11 ±4.09)倍、(16.21 ±5.75)倍.NF-κB通路抑制剂Bay 11-7082预处理,可分别使斑蝥素、冈田酸诱导的NF-κB转录活性上升幅度下降(61.19±6.08)％、(62.09±12.38)％;斑蝥素、风田酸可激活外源性凋亡通路,分别使Caspase-8活性上升(0.55 ±0.12)倍、(0.85±0.21)倍.Bay 11-7082预处理,可分别使斑蝥素、冈田酸诱导的Caspase-8活性上升幅度下降(20.99±7.13)％、(29.07±7.98)％;斑蝥素、冈田酸可激活内源性凋亡通路,分别使Caspase-9活性上升(1.35 ±0.20)倍、(1.18±0.19)倍,但Bay 11-7082预处理,对斑蝥素、冈田酸诱导的Caspase-9活性上升幅度无明显影响;斑蝥素、冈田酸可上调促凋亡基因的表达;Bay 11-7082预处理可抑制斑蝥素、冈田酸诱导的促凋亡基因表达上调.结论 PP2A抑制剂通过NF-κB通路依赖性机制激活胰腺癌细胞外源性凋亡通路,并上调促凋亡基因的表达.     

地氟醚对心脏瓣膜置换术患者NF-κB表达的影响及意义

将30例心脏瓣膜置换术患者，随机分为地氟醚组和对照组，应用流式细胞仪检测围术期血浆核因子（NF）-κB活性，ELISA法捡测围术期血浆TNF-α水平。结果两组NF-κB、TNF-α水平，体外循环（CPB）后较CPB前显著增加（P均〈0．05），CPB后各时点对照组NF-κB相TNF-α活性显著高于地氟醚组（P均〈O05）。提示地氟醚可能通过抑制NF-κB的表达．进而抑制TNF-α活性．减轻了CPB时的全身炎症反应．发挥心脏保护作用。     

藁本内酯抑制星形胶质细胞中NF-κB依赖的细胞因子的表达

目的观察藁本内酯(LIG)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞中促炎性细胞因子表达的抑制作用。方法将原代培养成功的星形胶质细胞随机分成四组,对照组(C组)、LPS组、LIG组、BAY组。C组未加入任何药物刺激细胞;LPS组加入浓度为1μg/ml的LPS刺激细胞6h;LIG组用浓度为50μM的LIG预孵育细胞30min后,再加入LPS刺激6h;BAY组用浓度为20μM的核转录因子(NF)-κB抑制剂BAY11-7082预孵育细胞30min后,再加入LPS刺激6h。采用Real-time PCR方法检测促炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤细胞坏死因子(TNF)-α、IL-6 mRNA的表达;采用Western blot方法检测pNF-κB p65的表达。结果与LPS组比较,C、LIG和BAY组IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达明显减少(P0.05)。与LPS组比较,C、LIG组pNF-κB p65蛋白的表达明显降低(P0.05)。结论藁本内酯可通过抑制原代培养的星形胶质细胞中NF-κB的活化来抑制LPS诱导的促炎症相关的细胞因子的表达。     

NF-κB抑制剂对糖尿病大鼠肾组织ICAM-1和VEGF表达的影响

目的观察核因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯（PDTC）对糖尿病大鼠肾组织细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组（NC组）、糖尿病模型组（DM组）和PDTC干预组（DP组）,每组10只。用链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。第8周末,收集24h尿液,检测各组大鼠尿微量白蛋白,处死大鼠后收集肾组织,使用免疫组织化学方法测定肾组织NF-κB、ICAM-1和VEGF的蛋白表达。结果①与NC组相比,DM组尿微量白蛋白升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;与DM组相比,DP组尿微量白蛋白降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。②与NC组相比,DM组肾组织NF-κB、ICAM1和VEGF蛋白表达升高,差异均有统计学意义（P〈0．05）;与DM组相比,DP组肾组织NF-κB、ICAM-1和VEGF蛋白表达降低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论肾组织局部表达的ICAM-1和VEGF可能通过NF-κB途径参与糖尿病肾脏病的发生发展。