睾酮对3T3-L1脂肪细胞促酰化蛋白受体及下游信号蛋白的影响

目的:观察睾酮对3T3-L1(前)脂肪细胞促酰化蛋白(ASP)受体C5L2-mRNA和细胞表面C5L2蛋白表达的影响,以及睾酮对3T3-L1(前)脂肪细胞Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ蛋白以及ASP刺激的Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ蛋白表达的影响。方法:体外培养3T3-L1细胞,诱导细胞分化,用不同浓度睾酮作用于3T3-L1(前)脂肪细胞,孵育过夜后收获细胞,采用RT-PCR和流式细胞仪检测ASP受体mRNA和蛋白表达情况;采用Western Blot法检测基础状态和ASP刺激的Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ蛋白表达。结果:睾酮呈浓度依赖性均抑制3T3-L1成熟脂肪细胞C5L2-mRNA和蛋白的表达,10-6mol/L时mRNA和蛋白分别减少了60%(P<0.01)和27%(P<0.01)。但前脂肪细胞C5L2-mRNA和蛋白表达水平均无显著性差异。高浓度(10-6mol/L)睾酮在一定程度上抑制ASP刺激的成熟脂肪细胞Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ的表达,分别减少了52%(P<0.05),27%(P>0.05),50%(P<0.01)和57%(P<0.05);在前脂肪细胞,ASP-C5L2下游信号分子Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ表达无明显抑制作用。结论:睾酮抑制成熟脂肪细胞ASP信号分子表达,睾酮诱导ASP抵抗的发生机制与下调脂肪细胞表面ASP受体功能有关,与干扰ASP-C5L2信号转导途径有关。ASP抵抗参与了高睾酮引起的胰岛素抵抗状态的病理生理过程,ASP抵抗可能参与多囊卵巢综合征(PCOS)、肥胖症等多种疾病的病理生理过程。     

促酰化蛋白对3T3-L1脂肪细胞炎性反应的影响

目的 观察3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素抵抗状态下促酰化蛋白(acylation stimulating protein,ASP)对炎性因子(IL-6、MCP-1、MIP-1α和TNF-α)分泌水平以及炎性信号因子(JNK1、IKKβ)蛋白表达的影响。 方法 3T3-L1成熟脂肪细胞分别给予不同浓度(0、0.125、0.5、1.0mmol/L)油酸(C18∶ 1)或棕榈酸(C16∶ 0)温育过夜,诱导胰岛素抵抗,在此基础上给予ASP刺激,用ELISA测定IL-6、MCP-1、 MIP-1α和TNF-α 4种细胞炎性因子的分泌水平,采用Western blot法检测JNK1和KKβ蛋白表达。 结果 油酸诱导的胰岛素抵抗下,ASP刺激的脂肪细胞IL-6和MCP-1的分泌水平轻度下调,但差异无统计学意义;而ASP刺激的脂肪细胞MIP-1α和TNF-α的分泌水平显著下降,MIP-1α和TNF-α的分泌分别下调57%(P<0.05)和48%(P<0.05)(1.0mmol/L油酸组)。棕榈酸诱导的胰岛素抵抗下,ASP刺激的脂肪细胞IL-6分泌水平呈下降趋势,最大下调50% IL-6(P<0.05);22% MCP-1(P>0.05),35% MIP-1α(P>0.05)和38%TNF-α(P>0.05)的分泌。高浓度(1.0mmol/L) 油酸和棕榈酸诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗状态下,ASP刺激的炎性信号蛋白JNK1蛋白表达显著下调,分别为34%(P<0.05)和54%(P<0.01)。但IKKβ蛋白表达差异无统计学意义。 结论 在脂肪酸诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗状态下,ASP在一定程度上调节炎性因子分泌,参与调节JNK、IKK/NF-κB信号通路中重要信号分子的功能,ASP参与了脂肪细胞脂毒性-炎性反应的调控。     

褪黑素受体激动剂Neu-P11对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞IRS-1和GLUT-4表达的影响

目的探讨褪黑素受体激动剂Neu-P11对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞IRS-1和GLUT-4表达的影响。方法用高糖高胰岛素作用3T3-L1脂肪细胞24 h,建立胰岛素抵抗细胞模型。分别采用褪黑素、Neu-P11、褪黑素+luzindole(褪黑素受体拮抗剂)和Neu-P11+luzindole处理细胞,并以未加药细胞作为对照。用葡萄糖氧化酶法检测培养液中的糖含量并计算糖消耗量,用蛋白质印迹分析检测细胞内IRS-1、GLUT-4蛋白表达变化。结果胰岛素抵抗细胞用褪黑素和Neu-P11处理后,糖消耗量较未加药对照组升高(P<0.05),GLUT-4、IRS-1的蛋白表达也增高(P<0.05);褪黑素和Neu-P11分别与luzindole联合作用于细胞后,细胞的上述蛋白表达较单用褪黑素组和单用Neu-P11组降低(P<0.05),而与未加药对照组相比差异无统计学意义。结论褪黑素受体激动剂Neu-P11可提高胰岛素抵抗脂肪细胞的胰岛素敏感性,增加糖消耗量,这种作用可能与上调IRS-1、GLUT-4蛋白的表达有关。     

促酰化蛋白对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响

目的 观察胰岛素抵抗状态下3T3-L1成熟脂肪细胞促酰化蛋白（acylation stimulating protein,ASP）刺激下脂代谢关键酶（LPL、HSL、perilipin、DGAT）基因表达的影响,以及胰岛素经典信号通路（IRS-1、PI₃K）蛋白表达的影响。方法 3T3L-1脂肪细胞给予不同浓度（0、0.125、0.5、1.0mmol/L）油酸及棕榈酸孵育过夜。real-time PCR方法定量检测ASP刺激下脂肪细胞LPL、HSL、perilipin、DGAT基因表达水平。Western blot法检测ASP和INS刺激下脂肪细胞HSL、perilipin、IRS-1、PI₃K蛋白表达水平。结果 ASP促进脂代谢关键酶HSL、LPL、perilipin和DGAT的基因表达。其中0.5mmol/L油酸组增加5倍HSL、1.87倍LPL、6.87倍perilipin、2.5倍DGAT基因表达（P<0.01）。1.0mmol/L油酸组增加3.26倍HSL、2.98倍LPL、5.46倍perilipin、2倍DGAT基因表达（P<0.01）。0.5mmol/L棕榈酸组增加1.98倍HSL、4.63倍DGAT基因表达（P<0.05）。胰岛素和ASP刺激下显著增加脂肪酸孵育的成熟脂肪细胞HSL、perilipin、PI₃K蛋白的表达。胰岛素刺激状态下油酸组增加1.75倍HSL、1.27倍perilipin、2.59倍PI₃K蛋白的表达（P<0.01）,棕榈酸组增加85%（P<0.05） HSL、96%（P<0.05） perilipin、3.66倍（P<0.01） PI₃K蛋白的表达。ASP刺激状态下油酸组增加76%（P<0.05） HSL、86%（P<0.05） perilipin蛋白的表达,棕榈酸组增加76%（P<0.05） perilipin、1.27倍（P<0.01） PI₃K蛋白表达。胰岛素及ASP刺激下脂肪细胞IRS-1蛋白表达差异无统计学意义。结论 胰岛素和ASP可增加脂代谢关键酶HSL、perilipin蛋白及经典胰岛素信号通路PI₃K蛋白的表达。ASP可以从不同程度上增加糖脂代谢关键酶HSL、LPL、perilipin和DGAT基因的表达,通过增加这些酶的表达,提高酶的敏感度,参与调节脂肪细胞糖脂代谢。     

Visfatin对SW872脂肪细胞胰岛素信号分子蛋白表达的影响

目的:观察visfatin对胰岛素抵抗状态下的SW872成熟脂肪细胞胰岛素信号分子胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达的影响。方法:体外培养SW872前脂肪细胞,诱导细胞分化成熟,建立胰岛素抵抗模型,用含有100nmol/L visfatin的无血清培养液孵育1h后收获细胞,采用Western印迹法检测visfatin刺激前后信号分子IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达水平。结果:在正常状态下(正常组内比较),visfatin促进脂肪细胞IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达,分别增加了51.65%(P<0.01)、44.74%(P<0.01)和61.38%(P<0.01)。在胰岛素抵抗状态下,visfatin刺激组的IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达水平,分别比基础状态组增加了26.98%(P<0.05)、35.59%(P<0.05)、27.61%(P<0.01)。结论:在胰岛素抵抗状态下,visfatin通过调节脂肪细胞胰岛素信号分子IRS-1、IRS-2和PI3K蛋白表达而发挥促进葡萄糖转运、改善胰岛素抵抗的生物学作用。     

重组人促红细胞生成素对3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体表达及下游信号通路的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素( rHuEPO)对正常和胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞促红细胞生成素受体(EPOR)表达及其下游信号通路的调控作用.方法 以1μmoL/L地塞米松诱导建立3T3-L1脂肪细胞胰岛索抵抗模型(模型组),以分化成熟的正常3T3-L1脂肪细胞作为对照组.采用细胞免疫荧光法和Western blotting法检测细胞EPOR的蛋白表达,采用Real-TimePCR技术检测细胞EPOR mRNA的表达.分别以rHuEPO、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂(LY294002)及信号转导和转录激活因子5( STAT5)抑制剂对模型组和对照组细胞进行干预,采用Western blotting法检测不同药物干预对EPOR蛋白的表达及其下游分子丝(苏)氨酸蛋白激酶( Akt)和STAT5磷酸化水平(p-Akt和p-STAT5蛋白的表达)的影响.结果 与对照组比较,模型组EPOR蛋白和mRNA的表达均显著下调(P＜0.05).干预实验结果显示:与相应对照组或模型组比较,rHuEPO+对照组或模型组EPOR、p-Akt和p-STAT5蛋白的相对表达量均显著上调(P＜0.05);与相应rHuEPO+对照组或模型组比较,rHuEPO+LY29400或STAT5阻断剂+对照组或模型组的p-Akt和p-STAT5蛋白的相对表达量显著下调(P＜0.05).结论 正常3T3 -L1脂肪细胞上存在EPOR,胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞EPOR蛋白和mRNA的表达下调,rHuEPO可通过EPOR介导激活PDK-Akt和JAK2 -STAT5信号通路.     

促酰化蛋白受体C5L2在前脂肪细胞分化过程和脂肪酸负荷下的表达研究

目的 观察3T3-L1前脂细胞分化和游离脂肪酸（FFA）对3T3-L1（前）脂肪细胞C5L2基因和蛋白表达的影响。方法采用逆转录（RT）-PCR和流式细胞仪检测不同分化时段和FFA处理后（前）脂肪细胞C5L2mRNA和蛋白表达。结果 3T3-L1脂肪细胞C512mRNA表达呈分化依赖性增加,而C5L2蛋白表达水平在分化早期显著增强,诱导分化6hC5L2蛋白表达增加了21％（61％±18％VS51％±15％,P〈0．05）;分化12h达高峰,增加了38％（70％±12％VS51％±15％,P〈0．01）;分化3d基本恢复至0d水平。在3T3-L1成熟脂肪细胞,0．5mmol／L和1．0mmol／L油酸分别抑制46％（0．58±0．21 vs 1．08±0．46,P〈0．05）和84％（0．18±0．04VS1．08±0．46,P〈0．05）C5L2 mRNA表达,而0．125mmol／L油酸即能显著下调36％（35％±8％vs54％±7％,P〈0．01）C5L2蛋白表达。低浓度棕榈酸均能明显抑制C5L2mRNA和蛋白的表达,1．0mmol／L时c512mRNA和蛋白表达分别减少了41％（0．57±0．28vs0．97±0．41,P〈0．05）和55％（24％±13％VS54％±7％,P〈0．01）。油酸和棕榈酸对前脂肪细胞C512表达差异无统计学意义。结论促酰化蛋白／C5L2途径参与了脂肪细胞分化的调控过程。C512mRNA和蛋白表达的下调可能参与了油酸和棕榈酸诱导的成熟脂肪细胞胰岛素抵抗的发生。     

visfatin对体外脂肪细胞胰岛素受体底物和PI3K表达的影响

目的：从胰岛素经典信号传导通路磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）角度探讨内脏脂肪素（visfatin）与2型糖尿病（T2DM）胰岛素抵抗（IR）的关系。方法：复苏、传代和诱导分化人源T2DM前脂肪细胞,构建 visfatin过表达载体,进行载体转化、培养和提取;以4个不同表达梯度（0.0、1.0、2.5和5.0 μg）转染传代脂肪细胞,以0.0 μg组为对照组,其余3组为观察组;Q-PCR法检测visfatin 、胰岛素受体底物1（IRS-1）、胰岛素受体底物2（IRS-2）和 PI3K（P85α） mRNA表达水平,Western blotting法检测visfatin、IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α） 蛋白表达水平及IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化水平,[³H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取法测定细胞葡萄糖摄取率的变化。结果：各组 visfatin mRNA及蛋白表达水平随转染浓度梯度升高而升高（P<0.01）,所构建visfatin过表达载体有效。随visfatin表达增加,各组IRS-1和PI3K（P85α） mRNA和蛋白表达水平以及IRS-1磷酸化程度均明显升高（P< 0.01）,但IRS-2 mRNA和蛋白表达水平未出现明显变化（P>0.05）。脂肪细胞的葡萄糖摄取率随visfatin表达增加而升高（P<0.05）。结论：体外脂肪细胞visfatin过表达可增加IRS-1和PI3K的表达水平。     

脂肪细胞因子adiponectin的研究进展

脂联素（adiponectin）是最近发现的一种由脂肪组织分泌的胶原样蛋白质，其编码基因位于人染色体3q27，称apM 1基因。研究显示：adiponeetin具有抗糖尿病、抗动脉粥样硬化、抗炎等作用，本文对adiponectin与胰岛索抵抗、2型 糖尿病和动脉粥样硬化关系研究综述如下。     

葡萄糖和胰岛素对脂肪细胞内脂素表达的作用

 目的  观察脂肪细胞经不同浓度葡萄糖和胰岛素干预后内脂素表达的改变,探讨内脂素在糖尿病发病过程中的作用。 方法  培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化成成熟脂肪细胞。采用不同浓度葡萄糖、胰岛素孵育脂肪细胞48h,RT-PCR和western blot技术检测3T3-L1脂肪细胞中内脂素mRNA和蛋白的表达水平 结果  与对照组比较,随着葡萄糖浓度的增加,3T3-L1脂肪细胞内脂素mRNA和蛋白的表达量下降（P均＜0.05）;在不同浓度胰岛素作用下,3T3-L1脂肪细胞内脂素mRNA和蛋白的表达量改变无统计学意义（P＞0.05）。  结论  高糖状态可抑制体外培养的脂肪细胞内脂素的表达,胰岛素浓度的改变对内脂素表达无影响。     

2型糖尿病患者脂肪细胞胰岛素抵抗与微炎症的研究

目的:观察2型糖尿病患者脂肪细胞内胰岛素信号转导蛋白:胰岛素受体底物-1(Insulin receptor substrate-1,IRS-1)酪氨酸磷酸化及蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB/AKT)ser473磷酸化水平以及微炎症因子白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)的表达.方法:取2型糖尿病患者(2型糖尿病组)及非糖尿病患者(非糖尿病对照组)腹部皮下脂肪组织原代培养,用免疫沉淀法及蛋白印迹法(Western blot)检测两组脂肪细胞内胰岛素刺激后IRS-1酪氨酸磷酸化及AKT-Ser473磷酸化程度,酶联免疫吸附法检测脂肪细胞培养液中IL-6蛋白的水平.结果:(1)2型糖尿病组脂肪细胞内胰岛素刺激后IRS-1酪氨酸磷酸化及AKT-Ser473磷酸化水平明显低于非糖尿病对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)2型糖尿病组脂肪细胞培养液中IL-6蛋白的水平明显高于非糖尿病对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:2型糖尿病患者脂肪细胞存在胰岛素抵抗和微炎症状态.     

2型糖尿病脂肪细胞胰岛素受体活性的研究

目的：通过脂肪细胞胰岛素受体（ICIR）活性测定,探讨2型糖尿病（DM）部分发病机理。方法：Rodbell法获取游离脂肪细胞,放射受体分析法分别测定2型DM及正常对照组的ICIR。结果：两2型DM组高亲的力ICIR及低亲和力ICIR均明显低于正常对照组,其中低亲和力ICIR减少更甚（P＜0．01）。2型DM伴高胰岛素血症组ICIR数量较不伴高INS血症组减少更甚（P＜0．05）。两糖尿病组INS与受体亲和力减低。结论：2型DMICIR存在数量减少及质的改变,这种改变系原发性缺陷。INS对其受体有下降调节作用,这对2型DMICIR的改变起非主要的作用。     

睾酮的快速非基因组效应对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响

目的 探讨睾酮的快速非基因组效应对3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及分子机制.方法 将3T3-L1前脂肪细胞诱导成熟,用10-9～10-5moL/L睾酮分别预处理0～30 min及24 h,[3H]-2-脱氧葡萄糖掺入法检测葡萄糖摄取率;通过免疫印迹检测胰岛素受体(InsR)/蛋白激酶(Akt)/糖原合成激酶(GSK3B)的活性及表达.结果 有胰岛素刺激时,睾酮预处理30 min的胰岛素促葡萄糖摄取率随睾酮浓度增高而下降,10-5moL/L睾酮组的摄取率的升高倍数(4.2±0.4)显著低于无睾酮组(5.5±0.4),P<0.05;10-6mol/L睾酮预处理3～30 min的InsR/Akt/GSK3β的磷酸化水平较无睾酮组均明显下降(均P<0.05).有胰岛索刺激时,睾酮预处理24 h的胰岛素促葡萄糖摄取率也随睾酮浓度增高而下降,10-5moL/L睾舀耐组的摄取率的升高倍数(4.0±1.0)显著低于无睾酮组(4.5±1.O),P<0.05;10-7～10-6mol/L睾酮预处理24 h的InsR/Akt/GSK3β的活性均明显下降(均P<0.05),但InsR/Akt/GSK3β的表达水平均不受睾酮影响(均P>0.05).结论 高浓度睾酮的快速非基因组效应可能通过抑制胰岛素信号分子InsR/Akt/GSK3β的活性从而在诱导成熟脂肪细胞产生胰岛素抵抗中起重要作用.     

雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物的作用

目的观察雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物(IRS)表达的影响。探讨雌、孕激素对绝经后骨质疏松症的作用机制。方法用半定量RTPCR检测细胞IRS1、IRS2mRNA的表达;分别用免疫印迹和免疫共沉淀检测细胞IRS1、IRS2蛋白表达及磷酸化。结果雌二醇和孕酮均使人成骨细胞IRS2mRNA的表达上调,分别为对照组的421%±68%(P<0.05)和327%±54%(P<0.05),两者联合干预能进一步诱导人成骨细胞IRS2mRNA的表达上调496%±54%(P<0.01),但IRS1mRNA的表达不受影响(P>0.05)。雌二醇、孕酮、雌二醇和孕酮联合干预上调细胞IRS2蛋白的表达,分别为对照组的487%±65%、507%±54%和552%±47%,雌二醇、孕酮、雌二醇和孕酮联合干预使IRS1去磷酸化,分别为对照组的54%±7.6%(P<0.05),37%±4.2%,21.2%±3.0%(P<0.01),对IRS1蛋白的表达无影响。结论雌二醇和孕酮均可使人成骨细胞IRS2mRNA及蛋白的表达上调,并促使IRS2的磷酸化,二者之间存在正性协同效应。虽然二者在转录和翻译水平对IRS1表达无影响,但可促使IRS1蛋白去磷酸化。因而,雌激素与孕激素合用在骨质疏松的防治中可能具有重要的意义。     

吡格列酮和白细胞介素-6对3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA表达的影响

目的观察吡格列酮和白细胞介素-6(IL-6)对3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA表达的影响。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞并诱导其分化成熟,分别以不同浓度的吡格列酮和(或)IL-6干预,在不同的时间段提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术检测细胞中Visfatin mRNA的表达水平。结果IL-6和吡格列酮分别作用于分化成熟的3T3-L1脂肪细胞均能下调Visfatin mRNA的表达,且用吡格列酮预处理或与IL-6共同作用均不能够改善IL-6对Visfatin mRNA的抑制作用。结论IL-6对Visfatin mRNA表达的负调控可能是其引起胰岛素抵抗和糖脂代谢紊乱的机制之一,Visfatin可能并不是噻唑烷二酮(TZD)类药物改善胰岛素敏感性的靶基因。     

一氧化氮和脂肪细胞生理及功能调节

作为能量储存主要物质的脂肪组织具有强大的内分泌功能,瘦素、脂联素、胰岛素抵抗素等都可以由脂肪细胞内源性产生。这些激素在机体生理病理调节中发挥着重要作用。最新研究表明,脂肪细胞也有内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶表达,一氧化氮参与脂肪细胞生成分化及能量分解代谢调节,与脂肪代谢异常相关疾病如胰岛素抵抗、肥胖、糖尿病等关系密切。     

NF-κB信号通路与胰岛素抵抗

NF-κB的信号通路与胰岛素抵抗发生发展的机制NF-κB的信号通路密切相关。NF-κB及其相关基因的异常表达在机体的不同部位会通过不同途径间接或直接的影响胰岛素信号的传导从而引发胰岛素抵抗的产生。本文通过阐述NF-κB信号通路分别在肝脏、骨骼肌及脂肪中对胰岛素抵抗的影响,进一步说明NF-κB信号通路与胰岛素抵抗之间的关系。     

C5a/C5aR通路在硕大利什曼原虫易感小鼠免疫病理发生中的作用及其机制

目的研究C5a/C5aR通路在对硕大利什曼原虫(Leishmania major,L.major)易感的BALB/c小鼠免疫病理发生中的作用及机制探讨。方法以C5aR KO小鼠(BALB/c背景)为模型,观察比较了WT和C5aR KO的BALB/c小鼠在L.major感染后的病变情况,有限稀释法检测了各组感染小鼠体内寄生虫的负荷,并进一步通过FACS检测了相关细胞因子如IL-17和IL-4的产生,来探讨C5a/C5aR通路在L.major易感型BALB/c小鼠免疫病理发生中的作用机制。结果相比WT小鼠,C5aRKO小鼠感染L.major后的病变程度明显减轻(P<0.05),体内寄生虫负荷也显著降低(6.952±0.398vs 4.340±0.434,P<0.01);同时,FACS胞内染色结果表明CD4+IL-4+T细胞亚群百分比显著降低(0.960 0±0.148 3 vs0.314 0±0.042 6,P<0.01),但CD3+IL-17+T细胞亚群的百分比在两组之间无显著差异(0.792 0±0.051 3 vs 0.858 0±0.084 5,P=0.522 3)。结论 C5a/C5aR通路通过调节Th2细胞关键细胞因子IL-4的产生,在L.major易感小鼠的免疫病理发生中发挥作用。