鸦胆子油乳诱导白血病U937细胞凋亡的实验研究

鸦胆子油乳是临床上广泛应用的抗肿瘤中药,为探讨其在白血病中的作用,我们观察了鸦胆子油乳对人白血病U937细胞的生长抑制和诱导细胞凋亡作用及相关基因的改变。材料和方法1　试剂　鸦胆子油乳,沈阳药科大学制药厂产品,每支10ml,含量为10 %。2　细胞培养　U937细胞为人单核细胞白血病细胞株,引自中国医学科学院血液学研究所,常规传代培养。实验时均用对数生长期细胞。3　MTT法检测鸦胆子油乳对U937细胞增殖的影响　实验方法根据文献[1]略加改进,设药物处理组、细胞对照组和空白对照组。每组设3个复孔,在终止培养前4h加入MTT(5mg/ml) ,置…     

Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制

目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化。结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)%和(10.07±1.24)%,均高于对照组的(1.32±0.31)%(P0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P0.05)。流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)%,高于对照组的(9.64±0.91)%(P0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)%,高于对照组的(5.75±1.28)%(P0.05)。荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关。     

硼替佐米联合阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡机制的深入研究

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡的机制。通过细胞计数检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和活性氧（ROS）水平,Westernblot检测凋亡信号通路相关蛋白的表达。结果表明,10nmol／L硼替佐米联合50nmol／L阿糖胞苷对U937细胞有明显增殖抑制作用。两药联合协同诱导细胞凋亡。两药联合较单药处理能明显协同增加U937细胞ROS的水平,并能明显上调U937细胞中p-P38,p-JNK表达,下调p-ERK的表达。结论：硼替佐米联合阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡．其机制可能与R0s的损伤导致JNK、P38通路的激活和ERK的下调,从而影响细胞线粒体途径有关。     

手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937和HL-60细胞凋亡

目的 研究法尼酰基转移酶抑制剂手霉素（Manumycin）诱导白血病细胞凋亡的机制。方法 用2μmol／L手霉素处理白血病细胞系U937和HL-60细胞不同时间，用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、caspase9、caspase8、caspase3的表达。用荧光染料JC-1检测法测定线粒体膜电位（Δψm），并用caspase抑制剂Z—VAD—fmk阻断caspase的活化，探讨caspase在手霉素诱导白血病细胞凋亡中的作用。结果 2μmol／L手霉素处理U937和HL-60细胞16h，Δψm显著下降，相对值分别是0．51±0．07和0．41±0．06（P〈0．01）。手霉素诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质，激活caspase-9、caspase8和caspase-3。50μmol／L的Z—VAD—fmk可完全阻断caspase激活，但仅部分阻断手霉素诱导的U937和HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率分别减少51．69％和56．47％。结论 手霉素通过线粒体途径诱导U937和HL-60细胞凋亡。     

硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷诱导U937细胞凋亡的研究

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷(Ara-C)对U937细胞株的作用及机制。通过细胞计数,细胞形态学检查,流式细胞术和Western blot方法检测硼替佐米(10 nmol/L)和(或)Ara-C(50 nmol/L)处理前后U937细胞的增殖抑制和凋亡及其机制。结果显示,硼替佐米和Ara-C单药均能抑制U937细胞增殖,两药联合的抑制作用更加明显,细胞增殖抑制率在24和48 h分别达(55.00±2.81)%和(70.02±3.33)%;硼替佐米联合低浓度Ara-C能协同诱导U937细胞凋亡,促使线粒体跨膜电位下降,阳性细胞率达(38.70±1.54)%。两药联合应用还能协同诱导caspase-9,-8,-3的活化。结论:硼替佐米联合低浓度Ara-C主要通过线粒体途径、可能还通过死亡受体途径诱导U937细胞凋亡。     

索拉非尼通过抑制WNT信号通路诱导白血病细胞株U937凋亡

本研究观察多激酶活性抑制药物索拉非尼对急性白血病细胞株U937细胞增殖活力的影响及诱导凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。以不同浓度的索拉非尼作用于U937细胞48小时后,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖活力变化;Annexin V/PI染色后通过流式细胞仪观察索拉非尼对U937细胞株的促凋亡作用;PI染色后利用流式细胞仪分析细胞周期中各期细胞比例变化;Western blot检测GSK-3β、β-catenin、Cyclin-D1蛋白表达变化。结果表明,同对照组相比较,索拉非尼以浓度依赖方式抑制U937细胞增殖,使细胞阻滞于G1/G0期并促进其凋亡(p<0.05)。Western blot检测结果显示,与索拉非尼处理前后相比,WNT通路中失活型GSK-3β蛋白、β-catenin及cyclinD1表达均下调,并呈现出浓度依赖性。使用GSK-3β抑制剂氯化锂上调失活型GSK-3β蛋白后仍得出同样趋势(p<0.05)。结论:索拉非尼通过减少WNT信号通路负向调节蛋白GSK-3β失活,进而下调β-catenin,cyclin-D1水平,使U937细胞阻滞于G1/G0期并促进其凋亡。     

阿糖胞苷联合冬凌草甲素诱导U937细胞株凋亡的初步研究

目的:探讨阿糖胞苷联合冬凌草甲素诱导白血病细胞株U937凋亡的作用。方法:用阿糖胞苷和冬凌草甲素单药或两药联合处理U937细胞后,采用细胞计数检测细胞增殖,瑞氏染色观察细胞形态,流式细胞术分析细胞磷脂酰丝氨酸外翻情况和线粒体膜电位变化,蛋白印迹法检测凋亡相关分子表达情况。结果:阿糖胞苷和冬凌草甲素单药均能抑制U937细胞增殖,而两药联合抑制作用更加明显,两者能协同诱导U937细胞凋亡,并明显促进细胞磷脂酰丝氨酸外翻和线粒体跨膜电位下降;两药联合较单药组还能明显诱导Caspase-9、Caspase-3活化及PARP的剪切。结论:阿糖胞苷与冬凌草甲素能够协同抑制U937细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能是主要通过线粒体途径介导。     

大黄素对U937细胞凋亡及细胞周期相关基因的影响

本研究旨在观察中药大黄素（Emodin）诱导人髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡及凋亡时细胞周期相关基因的变化。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测60μmol/L大黄素作用前后U937细胞C-MYC、h-TERT、PIM-2、Survivin、野生型P53、P21、TG Fβ1、MCL-1等基因表达的变化。结果表明：随着大黄素作用时间的延长U937细胞C-MYC、h-TERT、PIM-2、Survivin基因表达逐渐减少,而野生型P53、P21、TGFβ1基因表达逐渐升高,MCL-1基因表达无明显改变。结论：大黄素诱导的U937细胞凋亡是多因素启动和网络调节的结果。     

p73基因在甲氨蝶呤诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中的表达

为了探讨甲氨蝶呤（MTX）诱导U937细胞凋亡过程中p73 mRNA的表达变化，用MTX诱导U937细胞凋亡，凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量及细胞周期的变化等方法；采用半定量反转录PCR（RT－PCR）检测p73 mRNA的表达变化。研究结果显示：MTX可诱导U937细胞凋亡。5μmol/L的MTX作用于U937细胞6小时，可见部分细胞体积缩小，染色质明显浓缩和核碎裂。DNA片段电泳，MTX处理组可见清晰的梯形条带。流式细胞仪检测发现MTX作用于U937细胞，6，8，10小时，细胞的凋亡率分别为5．15％，11．43％和14．7％，并使细胞阻滞在G2／M＋S期，而对照组细胞不发生凋亡。半定量RT－PCR结果显示在U937细胞凋亡前后，p73 mRNA的表达无明显变化。结论提示，在MTX诱导U937细胞凋亡过程中，p73的mRNA水平表达差异无显性。     

干扰素-α对 U937细胞的促凋亡和抗增殖作用及其机制

为了研究干扰素α对白血病细胞U937细胞的抗增殖作用及其机制，用不同浓度的干扰素仪（500U／L、1000U／L、2000U／L、3000U／L、4000U／L）对U937细胞作用不同时间（0、12、24、36和48小时），用MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，RT-PCR方法分析cyclin E mRNA的表达。结果表明：不同浓度的干扰素α处理细胞后，U937细胞生长明显受抑，2000U／L干扰素α能引起细胞凋亡，凋亡率为25．28％-70．54％（P〈0.01），细胞周期相关基因cyclin E mRNA表达降低；干扰素α对U937细胞的抑制率，呈浓度-时间依赖性。结论：干扰素α对U937细胞有明显抗增殖和促凋亡作用，此结果将为干扰素-α在白血病临床治疗方面的应用提供有力的实验证据。     

粒细胞集落刺激因子等三药联用对U937细胞作用机制的研究

目的：研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合低剂量阿糖胞苷(Ara-C)和阿克拉霉素(ACR)(CAG三药联用)体外对单核白血病细胞系U937细胞的作用机制。方法：以U937细胞株为实验模型，进行细胞计数和细胞形态观察，MTT法检测不同药物对U937细胞的抑瘤率，流式细胞仪检测细胞早期凋亡标记膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)，细胞分化抗原CD14以及进行细胞周期分析。结果：经CAG作用48h后，U937细胞数量明显减少，形态显示凋亡小体增多：早期凋亡标记Annexin Ⅴ明显增高．CD14表达轻度升高，与Ara—C联合ACR(CA)组比较，结果差异有显性(P=0．000，0．007)。细胞周期分析显示，CAG作用24h后，与CA组比较，S期细胞比例增高(P=0．032)；48h后比例下降，结果差异无显性(P=0．589)。结论：CAG三药联用的作用机制主要是通过G—CSF促使U937静止期细胞进入细胞周期S期．增加Ara—C、ACR对U937细胞的细胞毒性．以诱导细胞凋亡为主，轻度诱导分化。     

ZSTK474对U937细胞抗白血病活性的研究

目的:探讨PI3K抑制剂ZSTK474对人白血病细胞U937抗白血病的活性.方法:采用MTT、软琼脂克隆形成、流式细胞术、Western blot检测ZSTK474对U937细胞增殖、致瘤性、周期分布、凋亡、PI3K/AKT信号通路中重要因子磷酸化水平的影响;采用Chou-Talalay法检测ZSTK474与Cytar...     

血清对U937细胞分化成熟及细胞周期的影响

目的探讨血清对U937细胞分化成熟及细胞周期的影响。方法应用乙酸肉豆蔻佛波醇（PMA）诱导U937细胞分化,血清作为调节因素,通过倒置显微镜观察细胞的形态与贴壁情况并计算细胞贴壁率并依此作为细胞分化成熟的标志,采用流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果 FCS＋PMA组细胞贴壁生长;其他3组细胞悬浮生长;细胞周期测定结果显示,与FCS组相比,NOFCS、NOFCS＋PMA和FCS＋PMA组的G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少（P〈0.05）。NOFCS＋PMA组经血清恢复后细胞贴壁率明显升高,与FCS＋PMA组相比有显著性差异（P〈0.05）,与NOFCS＋PMA组相比细胞周期无明显差异。NOFCS组经血清恢复后,细胞悬浮生长,细胞周期与NOFCS组相比G1期细胞下降,S期细胞明显增多（P〈0.05）;血清加PMA组在无血清培养与血清培养条件下,细胞都贴壁生长,二者贴壁率没有改变,细胞周期无显著差异。结论血清促进PMA诱导的U937细胞分化成熟并调节细胞周期的变化。     

鱼藤素对U937细胞细胞周期及核孔蛋白Nup98和Nup88的调控作用

目的研究鱼藤素对人类白血病细胞株U937细胞体外抗肿瘤作用，研究其引起细胞周期与核孔蛋白Nup98和Nup88的改变，探讨其抗癌作用的分子机制。方法采用MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞周期分布，激光共聚焦显微镜检测Nup98和Nup88蛋白表达变化，免疫电镜和流式细胞术观测鱼藤素对Nup98和Nup88的调控，Western blot检测鱼藤素对U937细胞Nup98和Nup88蛋白表达的影响。结果①鱼藤素对U937细胞具有明显的增殖抑制作用，其抑制作用呈时间和剂量依赖性。②鱼藤素作用U937细胞后细胞周期发生变化，0、5、10、20、40、80nmol／L鱼藤素处理U937细胞24h，主要使细胞阻滞于S期和G2／M期，而G1／G0期细胞呈浓度依赖性降低。G1／G0期细胞比例依次为73．01％、71．15％、68．42％、52．45％、43．99％和22．82％，S期细胞比例依次为17．18％、16．30％、18．09％、27．56％、31．21％和46．85％，G2／M期细胞比例依次为9．75％、12．31％、13．09％、18．99％、24．83％和27．79％。③鱼藤素可以调节U937细胞Nup98和Nup88的表达，低浓度即可使Nup98表达上调，而使Nup88表达下调。结论鱼藤素能够抑制U937细胞增殖，使细胞阻滞于S期和G2／M期，而G1/G0期细胞呈浓度依赖性降低。其抗肿瘤机制可能通过参与调控U937细胞Nup98和Nup88的表达，使Nup98表达上调，而使Nup88表达下调有关。     

低氧对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响及其作用机制的初步研究

【目的】初步探讨低氧对人单核细胞白血病细胞株U937细胞增殖的影响和作用机制。【方法】将培养的细胞分为常氧对照组、低氧8h组、低氧12h组、低氧24h组。MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western-blot方法分别检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)在mRNA和蛋白水平的表达、激光共聚焦显微镜观察HIF-1α核转位现象。【结果】①相对于对照组,低氧8h组、低氧12h组和低氧24h组细胞存活率明显下降(P<0.01),并且随着低氧时间的延长存活率逐渐下降,各组之间的差异有显著性(P<0.01);②HIF-1α mRNA和蛋白在对照组有少量的表达,随着低氧时间的延长,其表达增加(P<0.05);③相对于对照组,低氧组细胞内HIF-1α的表达增加,并且向核内转移,随着低氧时间的延长核内HIF-1α逐渐增多。【结论】低氧可通过影响HIF-1α的表达和调节其活性而达到抑制U937细胞株增殖的作用。HIF-1α介导的信号传导通路在白血病细胞的发生和增殖过程中可能起到关键的调控作用。     

白血病U937细胞系WT1基因静默的机制研究

本研究探讨白血病细胞系WT1基因的甲基化状况及其与表达的关系.用甲基化抑制剂和组蛋白脱乙酰基酶抑制剂成功诱导WTI表达.用地西他滨、曲古抑菌素处理白血病U937、HL-60、K562细胞系,用RT-PCR、改良的硫化PCR结合限制性内切酶技术检测mRNA表达.结果表明,U937细胞不表达WT1基因,而HL-60、K562和KG1细胞高表达WT1基因;HL-60细胞WT1基因没有甲基化,而K562和U937细胞发生了甲基化.地西他滨、曲古抑菌素单药处理U937细胞不能诱导WT1基因表达,而二药联合作用可以诱导U937细胞系WT1基因重新表达.结论:单纯DNA甲基化不能抑制白血病细胞WT1基因表达;DNA甲基化与组蛋白脱乙酰基共同抑制了WT1基因表达;地西他滨、曲古抑菌素联合作用可以重新诱导WT1基因表达.     

凝血酶诱导VEC和U937细胞TF与uPAR mRNA表达的差异

比较凝血酶对培养的人血管内皮细胞（ＶＣＥ）和Ｕ９３７细胞表达组织因子和尿激酶型纤淀粉产原激活剂受体（ｕＰＡＲ）ｍＲＮＡ的影响,并探讨其机制。方法在凝血酶,无活性的凝血酶（ＤＦＰ－Ｔ）和）（或）抗凝血酶受体（ＴＲ）１４肽多抗作用下,以ＲＴ－ＰＣＲ法测定培养细胞ＴＦ和ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ,进行分析比较。