细胞外信号调节激酶在血管瘤组织中的表达及活性

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及其活性形式磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)在血管瘤组织中的蛋白表达及其意义。方法:应用免疫组织化学SP法,检测23例增生期血管瘤组织及19例退化期血管瘤组织ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达。结果:增生期血管瘤组织与退化期血管瘤组织ERK1/2的蛋白表达无统计学差异(Z=-0.305,P>0.05);增生期血管瘤组织p-ERK1/2的蛋白表达显著高于退化期血管瘤组织的表达(Z=-4.271,P<0.01)结论:增生期血管瘤组织p-ERK1/2呈高表达,血管瘤的增生与ERK通路的激活有关。     

肝卵圆细胞对肝纤维化大鼠细胞外信号调节蛋白和丝裂原激活蛋白激酶的影响

目的 观察肝卵圆细胞(hepatic oval cell,HOC)对肝纤维化(hepatofibrosis,HF)大鼠肝组织中细胞外信号调节蛋白(extracellular regulated protein kinases,ERK)和丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,P38MAPK)信号通路蛋白的影响.方法 SD大鼠以高脂低蛋白饲养、饮用10%乙醇,皮下注射40%CCl4,隔4 d注射一次,连续8周制备HF模型.HF大鼠采用胶原酶原位灌注法分离,percall纯化原代HOC.HOC悬液0.5 ml(1×109个细胞)经门静脉植入8周HF大鼠的肝脏内,分别于8、15、30d处死大鼠,HE和Masson染色观察HF病理组织学变化,Western blot 法检测肝组织ERK与P38MAPK信号通路蛋白的表达,同时检测ALB、FGF-3、c-kit、HNF-1α、PCNA表达.结果 病理组织学显示,HOC处理组大鼠HF被部分逆转,肝组织胶原纤维增生程度明显减轻,肝组织Ras、ERK、p-ERK、c-fos、c-jun、STAT3、ALB、FGF-3、PCNA蛋白表达显著下降(分别F=91.88,36.28,54.66,93.07,64.76,58.49,52.63,20.45,27.03,均P＜0.05),而HNF-α1和c-kit表达上调(分别F=18.63,25.99,均P＜0.05).结论 HOC抑制HF活化的ERK信号通路而改善肝纤维化程度,在HOC存在条件下p-P38并不激活c-fos、c-jun、STAT3、5表达,c-kit和HNF-1α表达增加,而肝组织结构损害程度明显减轻,肝纤维化程度明显改善.

Abstract：

Objective To observe the influence of hepatic oval cell (HOC) on the expression ERK and P38MAPK signaling pathway protein in liver tissue of murine experimental hepatofibrosis (HF).Method SD rats were fed with 10% ethanol and food with high-fat and low-protein, and were injected subcutaneously with carbontetrachloride once every four days for 8 weeks to establish hepatic fibrosis. HOGs were isolated from male HF rats by collagenase porfusion of the liver. HF rats at 8th week were transplanted with 0. 5 ml HOC suspension medium at a density of 1 × 109 cell /ml via portal vein, and the rats were sacrificed at 8th, 15th, 30th day respectively. Histopathologic changes of liver tissues were observed by HE and Masson. The expression of ERK and P38MAPK signaling pathway protein were determined by Western blotting. Result Hepatofibrosis was reversed and the degree of hyperplasia fibrilcollagen in hepatic fibrosis rats decreased significantly by HOC transplantion. HOC down-regulated the protein expression of Ras, ERK,p-ERK, c-fos, c-jun, STAT3, ALB, FGF-3, PCNA ( F = 91.88,36.28,54.66,93.07,64.76,58.49,52.63,20.45 ,27.03, all P ＜ 0.05 ), up-regulated the protein expression level of HNF-α1, PDGF-Rβ significantly in liver tissues(F = 18.63,25.99,P ＜0.05). Conclusions HOC improves the degree of hepatofibrosis through inhibiting hyperplasia of collagen fibril in liver tissue of hepatofibrosis rats. With the presence of HOC the expression of c-fos,c-jun,STAT3,5 was not activated by p-P38MAPK. The expression of c-kit and HNF-1α increased and that liver tissue injury alleviated, and hepatofibrosis was improved.     

细胞外信号调节激酶对人血管平滑肌细胞的作用及其机制

目的观察磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)对离体培养的平滑肌细胞增殖、凋亡和表型改变的影响。方法培养人大隐静脉平滑肌细胞,实验组培养液中加入PD98059对磷酸化ERK进行阻断后,观测平滑肌细胞的增殖活性,凋亡细胞所占比例以及细胞表型,并与对照组比较。结果实验组与对照组相比,细胞增殖活性明显低于对照组(P<0.01),电镜和荧光染色测定凋亡细胞所占比例明显高于对照组(P<0.01),电镜检测合成型细胞所占比例明显低于对照组(P<0.01),收缩型细胞所占比例较对照组明显为高(P<0.01),α肌动蛋白免疫荧光化学检测显示处理组荧光表达强于对照组。结论对离体培养的人大隐静脉平滑肌细胞磷酸化ERK进行阻断后,平滑肌细胞的增殖受抑,凋亡增加,细胞由合成型向收缩型转变。     

紫杉醇对人胆管癌RBE细胞凋亡及细胞外信号调节激酶表达的影响

目的观察紫杉醇对人胆管癌RBE细胞凋亡及细胞外信号调节激酶 (ERK)表达的影响 ,以了解ERK在其中的作用。方法运用体外细胞培养 ,AnnexinV 异硫氰酸荧光素和碘化丙啶双染法及流式细胞技术观察紫杉醇以及与ERK上游激酶MEK抑制剂PD980 5 9合用 2 4h后RBE细胞的凋亡情况 ,运用蛋白质印迹法观察紫杉醇以及与PD980 5 9合用后RBE细胞的ERK1,ERK2和ERK的活化形式 (pERK)的表达情况。 结果紫杉醇诱导RBE细胞 ,凋亡率为 14 8%± 2 7% (n =6 ) ,明显高于对照组凋亡率 3 4 %± 1 3% (n =6 ) ,(P <0 0 1) ,紫杉醇合用PD980 5 9后凋亡率2 8 2 %± 5 7% (n =6 ) ,明显高于单用紫杉醇组凋亡率 14 8%± 2 7% (n =6 ) ,(P <0 0 1) ,紫杉醇可介导细胞 pERK的表达增加 ,两药合用后细胞的ERK1,ERK2及 pERK的表达降低。 结论紫杉醇可诱导胆管癌细胞凋亡 ,并激活了ERK途径 ,针对ERK的抑制剂可抑制紫杉醇介导的ERK的活化 ,同时增强紫杉醇诱导的凋亡作用。     

异丙酚对小鼠海马脑片细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化水平的影响

目的 观察异丙酚对小鼠海马脑片细胞外信号调节激酶ERK1／2磷酸化水平的影响。方法BALB／C小鼠，体重18～22g，雌雄不拘，迅速断头取脑，取海马用震动切片机切成450μm厚的脑片。量效实验随机将脑片分为空白对照组（C组）及不同浓度异丙酚组[10^-4mmol／L（P1组）、10^-5mmol／L（P2组）、10^-6mmol／L（P3组）、10^-7mmol／L（P4组）、10^-8mmol／L（P5组）、10^-8mmol／L（P6组）]；分别以不同浓度的异丙酚36℃恒温孵育海马脑片1h。时效实验应用5μmol／L异丙酚孵育脑片，分别于孵育即刻、1、2、5、7、9、12、15、30、60min取出脑片；取5μmol／L异丙酚孵育5min后的部分脑片，以人工脑脊液洗出异丙酚，分别于洗出2、4、7、10、25min取出脑片。应用SDS-PAGE和Westem blot生化技术及Gel Doc凝胶成像系统半定量检测小鼠海马p-ERKI／2水平。结果 异丙酚能降低ERK1／2磷酸化水平，降低呈时间、浓度依赖性（P〈0．05）。随异丙酚孵育5min后洗出时间延长，ERK1／2的磷酸化水平逐渐恢复，但洗出25min时仍明显低于药物处理前水平（P〈0．01）。结论 异丙酚能显著地抑制小鼠海马脑片细胞外信号调节激酶ERK1／2磷酸化水平。     

单唾液酸神经节苷脂对大鼠体外循环脑损伤及细胞外信号调节激酶信号通路的影响

目的探讨单唾液酸神经节苷脂（monosialotetmhexosylganglioside,GM-1）对大鼠体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）脑损伤及细胞外信号调节激酶（extrallular signal regulated proteinkinase,ERK1／2）信号通路的影响。方法成年雄性sD大鼠27只,体重350g-450g,采用随机数字表法将其随机分成3组（每组9只）：空白对照组（阴性对照组,S组）、CPB对照组（阳性对照组,B组）、GM-1干预组（实验组,C组）。采用右颈静脉腔房引流、右颈动脉灌注建立大鼠体外循环模型。S组不建模型,穿刺后进行机械通气60min,B组和c组进行CPB 60min,其中C组转流液中加入GM-1（20mg／kg）,B组给予相同体积的生理盐水。于转流前（T0）、CPB转流即刻（T1）、CPB15 min（T2）、CPB45 min（T,）、CPB结束后1h（T4）时记录平均动脉压（mean artery pressure,MAP）及血气分析指标。CPB结束和S组机械通气后3h时断头取脑组织标本,透射电镜观察皮质超微结构变化;原位细胞凋亡检测法[terminal dexynucteotidyl transferase（TdT）-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]标记皮质神经元凋亡数;免疫组化和免疫印迹（Western-blot）法检测ERK1／2蛋白的表达。结果B组和C组转流中平均动脉压、心率、血气、红细胞比容比较,差异无统计学意义;与S组比较,B组和C组皮质神经元损伤严重,凋亡的神经细胞数目分别增加220％和147％,ERK1／2蛋白活性分别升高65％和41％（P〈0．05）;与B组比较,C组皮质神经元损伤明显减轻,凋亡的神经细胞数目减少24％,ERK1／2蛋白活性降低15％（P〈0．05）。结论GM-1对体外循环脑损伤有保护作用,其机制可能与抑制ERK1／2信号通路减少神经细胞凋亡有关。     

细胞外信号调节激酶及其上游激酶在人乳腺癌发生发展中的意义

目的　研究人乳腺癌组织、良性肿瘤以及瘤旁乳腺组织中细胞外信号调节激酶 (ERK1、ERK2 )及其上游激酶 (MEK1、MEK2 )的表达 ,以及术前化疗对MEK1、MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达的影响。　方法　应用蛋白质印迹法检测 5 6例患者乳腺癌组织、8例乳腺良性肿瘤以及相应瘤旁组织中MEK1、MEK2及ERK1、ERK2蛋白的表达情况 ,其中 16例患者术前接受环磷酰胺 ,表阿霉素加 5 氟脲嘧啶或泰素加表阿霉素方案化疗。应用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织及癌旁组织中MEK1、MEK2及ERK1、ERK2蛋白的表达。　结果　 4 0例未行术前化疗的乳腺癌组织中MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达水平高于癌旁组织 ,分别为癌旁组织的 4 76、1 4 8和 2 0 9倍 (t值分别为 7 2 4 4 ,5 95 9,3 735 ,P <0 0 1) ;MEK1水平低于相应癌旁组织 (t=2 2 0 6 ,P <0 0 5 ) ;未行术前化疗的乳腺癌组织中MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达水平高于乳腺良性肿瘤 (t值分别为 2 932 ,2 0 82 ,2 0 2 1,P <0 0 5 ) ;MEK1水平低于良性肿瘤 (t=2 0 75 ,P <0 0 5 ) ;雌激素受体阴性的乳腺癌中MEK2蛋白表达水平高于雌激素受体阳性的肿瘤 (t=2 4 0 ,P <0 0 5 ) ,MEK1蛋白表达水平低于雌激素受体阳性的肿瘤 (t =2 5 8,P <0 0 1) ;术前化疗的乳腺癌组织中MEK2蛋白表达     

靶向细胞外信号调节激酶2短发夹式RNA对人食管癌Eca109细胞增殖的影响

目的 观察靶向细胞外信号调节激酶2(ERK2)短发夹式RNA(shRNA-ERK2)对人食管癌细胞株Eca109细胞增殖的影响.方法 构建重组质粒pGeneClipTM-shRNA-ERK2脂质体介导重组质粒转染人食管癌Eca109细胞,荧光倒置显微镜观察转染效率;噻唑蓝(MTT)比色法检测转染食管癌Eca109细胞后细胞的增殖能力;Western blot检测转染后食管癌Eca109细胞ERK2基因的表达和凋亡抑制基因Survivin的表达.结果 测序证实载体构建成功,荧光倒置显微镜观察转染后72 h转染效率50%～70%;转染重组质粒96 h后食管癌Eca109细胞生长抑制率最高为10.45%,与阴性对照组(非特异性序列对照)和空白对照组比较抑制效果明显(P＜0.05);转染重组质粒72 h和96 h后食管癌Eca109细胞株中ERK2和Survivin的表达与U0126对照组和阴性对照组比较均下降(P＜0.05).结论 重组质粒pGeneClipTM-shRNA-ERK2在食管癌Eca109细胞株中能发挥靶基因沉默作用,影响Survivin基因的表达,抑制食管癌细胞增殖.     

细胞外信号调节激酶在失血性休克后活性变化及其在血管反应性调节中的作用

目的 观察失血性休克后细胞外信号调节激酶(ERK)的活性变化及其对休克血管反应性的影响.方法 采用72只健康成年SD大鼠,复制失血性休克模型,观察休克后不同时期大鼠肠系膜上动脉(SMA)血管组织中ERK活性的变化,同时测定血管反应性的变化;并观察改变ERK活性对休克血管反应性的影响.结果 失血性休克后,大鼠肠系膜上动脉血管组织中ERK活性升高,在休克30 min时达到最高点(为正常组的2.6倍,P＜0.01),随着休克时间的延长,ERK的活性逐渐降低,在休克后2 h降低为正常对照组的56.1%(P＜0.05);失血性休克大鼠的血管反应性变化也呈现休克早期升高、休克晚期降低的趋势.给予AngII处理可使休克2 h血管组织内ERK活性升高为休克2 h组的1.9倍(P＜0.01),同时休克血管反应性明显升高,而ERK的抑制剂PD98059可拮抗AngII诱导ERK活性增加和血管反应性升高的作用.结论 ERK在失血性休克大鼠血管反应性调节中具有重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the changes of extracellular signal-regulated kinase (ERK) activity and its role in regulation of vascular reactivity following hemorrhagic shock. Methods In 72 SD rats, the hemorrhagic shock model was adopted, the activity of ERK in the superior mesenteric artery ( SMA) of rats after shock was measured, and the vascular reactivity of SMA after shock was observed. The effect of altered ERK activity on the regulation of vascular reactivity of SMA after shock was investigated.Results After shock, the activity of ERK in SMA was increased about 2. 6 folds as compared to normal group ( P ＜0. 01) , and it reached the peak at 30 min after shock. The activity of ERK 2 h after shock was reduced to 56. 1 % of normal group ( P ＜ 0. 05 ). At the same time, the vascular reactivity of SMA was also increased at early shock and decreased at late shock. Angiotensin II ( AngII) increased the activity of ERK to 1. 9 folds as compared to shock 2-h group (P ＜0. 01) , and AngII also increased the vascular reactivity of SMA at 2 h shock. PD98059, the ERK antagonist, antagonized the effect of AngII on ERK activity and vascular reactivity of the SMA. Conclusion ERK may play an important role in the regulation of vascular reactivity after hemorrhagic shock.     

反义细胞外信号调节激酶对移植物血管的保护作用

目的探讨反义细胞外信号调节激酶（ERK1／2）基因治疗对移植物血管的保护作用及可能的保护机制。方法建立BN至Lewis大鼠的腹主动脉移植模型。反义ERK1／2治疗组移植前取供者动脉血管段给予经脂质体包装的反义ERK1／2基因转染；腹主动脉移植术后1个月内受者每日从尾静脉或阴茎背静脉注入经脂质体包装的反义ERK1／2寡核苷酸100μl。对照组移植未经任何处理的血管段，移植后也无特殊处理。移植术后60d取移植段主动脉进行组织病理学观察内膜和胶原纤维变化；免疫组织化学法观察移植段血管ERK1／2基因的表达和CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞的浸润情况；ELISA法检测血清中细胞间粘附分子（ICAM-1）的变化。结果移植术后60d，对照组的移植动脉呈慢性移植物血管病表现，血管内膜显著增厚，移植血管中ERK1／2基因高表达，CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞大量浸润；反义ERK1／2基因治疗组移植动脉呈血管内膜炎改变，ERK1／2基因表达不明显，内膜有少量CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞；对照组ICAM-1表达显著高于反义ERK1／2治疗组（P〈0．05）。结论反义ERK1／2基因治疗对移植物血管具有保护作用，可以减缓慢性移植物血管病的发生，这种保护机制可能和减少ICAM-1的表达以及减少移植血管T淋巴细胞的浸润有关。     

氯胺酮对SD幼鼠海马神经元细胞凋亡和NR2B蛋白的影响

目的观察氯胺酮对海马神经元细胞凋亡和N-甲基-D-天(门)冬氨酸受体2B亚基(NR2B)蛋白的影响。方法45只新生第7天SD大鼠随机均分为腹腔注射氯胺酮25 mg/kg组(K1组)、50 mg/kg组(K2组)和生理盐水50 ml/kg组(K0组)。24 h后每组取5只幼鼠处死,用TUNEL法检测海马神经元细胞凋亡,免疫组化法检测NR2B蛋白表达,剩余30只动物喂养至42 d,用Mor-ris水迷宫评价大鼠成年后的空间学习记忆能力。结果在腹腔注射24 h后,海马神经元细胞凋亡数明显增加(K1组9.5±4.2,K2组23.4±7.6,K0组5.3±1.7);NR2B蛋白免疫组化染色切片灰度值K1组为182.36±4.17,K2组为179.11±4.28,K0组为198.25±3.38;但是成年后在Morris水迷宫中的学习记忆能力并没有明显变化。结论单次注射氯胺酮24 h后,诱发新生第7天SD大鼠显著增强的海马神经元细胞凋亡,上调NR2B的表达,但对于成年后的空间学习记忆能力无明显影响。     

氯胺酮对新生大鼠神经功能和海马谷氨酸受体及转运体表达的影响

目的观察新生大鼠氯胺酮麻醉后神经行为和海马谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）R2受体及谷氨酸转运体蛋白Ⅰ（GLAST）的远期改变。方法新生1周Wistar大鼠40只,随机均分为四组,每组10只。K100组腹腔注射氯胺酮100mg·kg^-1·h^-1;K50组腹腔注射氯胺酮50mg·kg^-1·h^-1,均持续麻醉6h;生理盐水组（N组）给予与氯胺酮同体积生理盐水;空白对照组（C组）不予任何干预。麻醉后21d进行旷场实验和Morris水迷宫实验,海马标本行谷氨酸NMDAR2受体及转运体GLAST免疫组织化学染色,共聚焦显微镜观察并采集图象,Image J图象处理软件分析荧光半定量OD值。结果各组大鼠在旷场中央格的停留时间及穿越的方格数差异无统计学意义。水迷宫测试K100组、K50组的逃逸潜伏期均明显高于C组和N组（P〈0．05）,而探索时间短于C组和N组（P〈0．05）,K100组和K50组之间差异无统计学意义。麻醉处理明显增加NMDAR2和谷氨酸转运体GLAST的表达,K100组和K50组之间差异无统计学意义。结论氯胺酮麻醉新生大鼠可引起神经功能和海马谷氨酸NMDAR2受体及转运体GLAST的远期改变。     

咪达唑仑对大鼠海马ERK1、ERK2和CREB磷酸化水平的影响

目的 探讨咪达唑仑对大鼠海马细胞外信号调节激酶1(ERK1)、ERK2和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平的影响.方法 成年雄性SD大鼠80只,体重250～300 g,随机分为2组(n=40):对照组(C组)和咪达唑仑组(M组).采用避暗法测试大鼠认知功能.首先对大鼠进行训练,记录100 s内大鼠不再钻人暗室所需的训练次数.训练前15 min时M组腹腔注射咪达唑仑3 mg/kg(用生理盐水稀释至2 ml/kg),C组注射等容量生理盐水.于训练结束后30 min、1、2、24 h(T1～4)时,记录大鼠在明室停留的时间,即记忆潜伏期.各组于给药后15 min(T0)和T1～4认知功能测试结束后,各处死8只大鼠,分离海马,测定ERK1、ERK2和CREB的磷酸化水平.结果 与C组比较,M组大鼠不再钻入暗室所需的训练次数增加,T2～4时记忆潜伏期缩短,T0,3.4时ERK1磷酸化水平降低,T0～4时ERK2和CREB的磷酸化水平降低(P<0.01).结论 咪达唑仑可抑制大鼠海马ERK1、ERK2和CREB的磷酸化.     

海马AMPA受体在氯胺酮对大鼠抗抑郁效应中的作用

目的 评价海马α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑基丙酸(AMPA)受体在氯胺酮对大鼠抗抑郁效应中的作用.方法 雄性Wistar大鼠30只,2月龄,体重180～220 g,采用随机数字表法,将其随机均分为3组(n=10):对照组(C组)、氯胺酮组(K组)和AMPA受体拮抗剂NBQX组(N组).行强迫游泳实验15 min建立大鼠抑郁模型.于第2天N组腹腔注射NBQX 10 mg/kg;30 min后C组腹腔注射生理盐水1.0ml,K组和N组腹腔注射氯胺酮10 mg/kg.30 min后再次进行强迫游泳试验5 min,记录大鼠不动时间.然后处死大鼠,取海马组织,测定磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)和磷酸化谷氨酸受体1( p-GluRl)的表达.结果 与C组比较,K组不动时间缩短,海马mTOR和GluR1表达上调,N组不动时间缩短,海马mTOR表达上调,GluR1表达下调(P＜0.05);与K组比较,N组不动时间延长,海马mTOR和GluR1表达下调(P＜0.05).结论 海马AMPA受体参与了氯胺酮对大鼠的抗抑郁作用,可能与抑制mTOR和GluR1的活性有关.     

氯胺酮对大鼠海马锥体神经元电压门控型钠通道的影响

目的研究氯胺酮对大鼠海马锥体神经元电压门控型钠通道的影响。方法急性分离 Wistar 大鼠(鼠龄两周)的海马锥体神经元,应用全细胞膜片钳技术记录电压门控型钠通道电流(INa), 加用不同浓度(50、100、200、500、1000、2000μmol/L)氯胺酮后,计算INa抑制率及半数抑制浓度(IC50); 选择100μmol/L氯胺酮作INa稳态激活及失活曲线。结果50、100、200、500、1000、2000μmol/L氯胺酮对INa的抑制呈浓度依赖性,IC50为(794±21)μmol/L;100μmol/L氯胺酮使INa稳态激活、失活曲线均向超极化方向移动,激活曲线的半数最大激活电位从(-51．6±O．9)．mV移至(-58．5±0．8)mV(P< 0．05),斜率因子(κ)分别为2．0±1．0、(3．2±0．9)mV(P<0．05);失活曲线的半数最大失活电位从 (-66．8±0．8)mV移至(-79．9±0．5)mV(P<0．05),κ分别为-6．6±0．7、(-7．0±0．4)mV(P> 0．05)。结论氯胺酮对电压门控型钠通道有抑制作用,与其全身麻醉作用有关。     

ERK1/2信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用.方法 选取符合标准的大鼠海马脑片,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):缺氧无糖组(OGD组)海马脑片进行15 min缺氧无糖处理,即将灌流液改为经95％N2-5％ CO2混合气体饱和的无糖人工脑脊液(aCSF);4％七氟醚后处理组(Sevo组)缺氧无糖处理后用4％七氟醚平衡后的aCSF灌流30 min;ERK1/2特异性抑制剂PD98059组(PD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)的aCSF灌流10 min;二甲基亚砜组(DMSO组)缺氧无糖处理后用含1 mol/L DMSO的aCSF灌流10 min;4％七氟醚后处理+PD98059组(SPD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)并通人4％七氟醚的aCSF灌流30 min,处理完成 后各组均再用正常aCSF灌流1h.采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区的顺向群峰电位(OPS);采用TTC染色-定量比色法评价海马脑片损伤程度.结果 与OGD组比较,Sevo组OPS恢复程度和恢复率升高,海马脑片损伤程度降低(P＜ 0.01),其余3组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,PD组、DMSO组和SPD组OPS恢复程度和恢复率降低,海马脑片损伤程度升高(P＜0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与了七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的过程.     

氯胺酮对神经病理性痛大鼠海马长时程增强维持的影响

目的探讨氯胺酮对神经病理性痛大鼠海马CA1区突触长时程增强(LTP)维持的影响。方法成年雄性Wistar大鼠15只,随机均分为三组:神经病理性痛模型组(NP组)、氯胺酮1组(K1组)、氯胺酮2组(K2组)。采用结扎L4,5左侧脊神经的方法制备大鼠模型,于术前、术后1、2和3周观察大鼠痛行为学及足部形态;于术前、术后1、2和3周测定痛阈;于最后一次痛阈测定结束后3 d记录海马CA1区兴奋性突触后电位(EPSP),以高频刺激(HFS)诱发LTP。K1组于HFS前20 min经腹腔注射氯胺酮25 mg/kg,K2组HFS后60 min腹腔注射氯胺酮25 mg/kg。结果与术前比较,术后三组各时点痛阈降低(P<0.05);与基础值比较,NP组与K2组HFS后各时段EPSP幅值升高(P<0.05),与NP组和K2组比较,K1组HFS后各时段降低(P<0.05)。结论氯胺酮可阻滞神经病理性痛大鼠海马CA1区突触LTP的诱导,但不干扰维持。     

氯胺酮对大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流的影响

目的观察氯胺酮对大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流(IK)的影响。方法酶消化法急性分离Wistar大鼠海马锥体神经元,采用全细胞膜片钳技术测定IK。加用不同浓度(10、30、100、300、1000μmol/L)氯胺酮后,计算IK抑制率,建立氯胺酮的浓度-效应曲线,选择30 μmol/L氯胺酮作IK 稳态激活(及失活)曲线。结果10、30、100、300、1 000μmol/L氯胺酮对IK的抑制率分别为(10±4)%、(19±4)%、(31±5)%、(50±7)%、(54±8)%。IC50为(100±18)μmol/L,Hill系数为1.33±0.48。激活曲线的半数最大激活膜电位(V1/2)(1.82±0.20)mV上升到(9.30±1.03)mV(n=8,P<0.05),K从(20.4±2.3)mV移动到(16.6±4.2)mV(P>0.05);失活曲线的V1/2从(-29±4)mV下降到(-73±6) mV(P<0.01),K从(26±6)mV上升到(53±11)mV(P<0.01)。30 μmol/L氯胺酮使IK的稳态激活曲线向去极化方向明显移动;使IK的稳态失活曲线向超极化方向明显移动。结论氯胺酮对IK通道有抑制作用,氯胺酮的对中枢神经系统的作用可能与IK抑制有关。     

缬沙坦对高糖上调系膜细胞细胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的观察在高糖刺激下，系膜细胞细胞外调节蛋白激酶（ERKI／2）的活性变化以及缬沙坦对其影响，探讨缬沙坦保护肾脏作用的可能机制。方法原代培养大鼠肾脏系膜细胞，随机分为4组：低糖组（NG，d-葡萄糖5．5mmol／L）、高糖组（HG，d-葡萄糖30mmol／L）、甘露醇组（MG，d-葡萄糖5．5mmol／L＋甘露醇24．5mmol／L）和缬沙坦组（HG＋Val，d-葡萄糖30mmol／L＋缬沙坦10μmol／L）。用免疫细胞化学法及Western印迹法对系膜细胞中磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）的表达进行定位及半定量分析；RT—PCR法检测细胞中TGF-β1 mRNA的表达；放射免疫法测定各组细胞上清中Ⅳ型胶原的含量。结果高糖组系膜细胞中P-ERK1／2蛋白的表达较低糖组明显增高，并由胞质向胞核内转移，呈时间依赖方式（P〈0．01）；TGF-β1 mRNA及细胞上清液中Ⅳ型胶原水平均高于低糖组（P〈0．01）。而缬沙坦组上述指标均较同时相点高糖组显著降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。甘露醇组与低糖组各指标间差异均无统计学意义。结论高糖可显著激活系膜细胞ERK信号通路，缬沙坦可抑制高糖的激活作用。