大鼠延髓和脊髓背角的PKCγ阳性神经元向丘脑胶状核投射

目的 :观察大鼠延髓和脊髓背角内蛋白激酶Cγ亚单位 (PKCγ)阳性神经元向丘脑胶状核的投射。方法 :荧光金 (FG)逆行追踪与PKCγ免疫荧光组织化学染色相结合的双标记技术。结果 :PKCγ阳性神经元主要分布于大鼠延髓和脊髓背角的II层内侧部及II、III层交界处 :将FG注入丘脑胶状核后 ,在延髓背角的I、III层和脊髓背角的I、III、V层及外侧脊核内可见FG标记神经元 ;延髓和脊髓背角I层的部分FG标记神经元呈PKCγ阳性。结论 :大鼠延髓和脊髓背角的PKCγ阳性神经元向丘脑胶状核投射 ,它们可能参与将伤害性刺激信息向丘脑的传递。     

大鼠延髓和脊髓背角的PKCγ阳性神经元向中脑导水管周围灰质的投射

目的　观察延髓和脊髓背角内蛋白激酶Cγ亚单位 (PKCγ)样阳性神经元向中脑导水管周围灰质(PAG)的投射。　方法　荧光金 (FG)逆行追踪与PKCγ的免疫荧光组织化学染色相结合的双标记技术。　结果　PKCγ样阳性神经元主要分布于延髓和脊髓背角的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ层及脊髓的外侧脊核 ;将FG注入PAG后 ,在延髓和脊髓背角的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ层及脊髓的外侧脊核内可见FG标记神经元 ;部分FG标记神经元呈PKCγ样阳性 ,FG PKCγ双标神经元也主要见于延髓和脊髓背角的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ层及脊髓的外侧脊核。　结论　延髓和脊髓背角的PKCγ阳性神经元可能参与将伤害性刺激信息向PAG的传递。     

小鼠脊髓背角神经元向臂旁核及丘脑中线/板内核群的分支投射

目的:观察脊髓背角P物质受体(substance P receptor,SPR)阳性神经元向臂旁核及中线/板内核群的分支投射并为其参与痒觉信息传递提供证据。方法:利用小动物脑立体定位仪向10只8周龄C57BL/6小鼠的臂旁核及丘脑中线/板内核群内分别注射四甲基罗达明(tetramethylrhodamine-dextran,TMR)及荧光金(fluoro-gold,FG),观察小鼠脊髓背角的TMR/FG双标神经元。结合免疫荧光组织化学染色方法观察双标神经元表达SPR和在急性痒模型下表达Fos的情况。结果:脊髓背角I层、脊髓外侧核(lateral spinal nucleus,LSN)及脊髓背角IV～V层均可观察到TMR/FG双标神经元,且部分双标神经元分别表达SPR及Fos蛋白。结论:脊髓背角存在同时向臂旁核及丘脑中线/板内核群发出分支投射的神经元,部分双标神经元表达SPR并参与痒觉信息的传递。     

大鼠孤束核内儿茶酚胺能神经元接受面口部深层组织伤害性信息并向臂旁核投射的形态学研究

为了探讨孤束核(NTS)内儿茶酚胺能神经元是否与面口部深层组织的伤害性信息有关并向臂旁核投射,本研究运用荧光金(FG))逆行追踪,福尔马林刺激咬肌和免疫荧光技术相结合的三重标记方法,在荧光显微镜下观察了大鼠NTS内酪氨酸羟化酶(TH)阳性并表达FOS蛋白的神经元向臂旁核的投射。将2％FG注入一侧臂旁外侧核后,向同侧咬肌内注射2％福尔马林溶液,并行TH和FOS免疫荧光组织化学染色,荧光显微镜下在同侧NTS内的连合、内侧、中间内侧和腹侧亚核中可见重叠分布的FG、FOS、TH单标神经元以及FG／TH、FOS／TH、FOS／FG双标和FG／FOS／TH三标神经元。FG／TH和FOS／TH双标神经元分别占同侧NTS内TH阳性神经元总数的28.6％和34.8％;FOS／FG双标神经元占同侧FG逆标神经元总数的26.4％;FG／FOS／TH三标神经元分别占同侧TH阳性神经元和FG逆标神经元总数的23.7％和8.4％。本结果提示大鼠NTS中的部分儿茶酚胺能神经元接受面口部深层组织的伤害性信息并向臂旁外侧核传递。     

大鼠脊髓神经肽Y、神经降压肽免疫反应神经元向结合臂旁核的投射

用HRP逆行束路追踪法结合免疫细胞化学双标记技术,研究了大鼠颈、胸、腰、骶各段脊髓神经肽Y(NPY)、神经降压肽(NT)免疫反应神经元向结合臂旁核的投射。HRP逆行标记细胞分布于两侧脊髓灰质第Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ层、中央管背侧灰质连合及外侧颈核、外侧脊髓核中,以对侧为主。NPY免疫反应阳性神经元分布于两侧后角第Ⅰ层、第Ⅱ层浅部、外侧颈核、外侧脊髓核及骶髓后连合核中。NT免疫阳性神经元分布于两侧后角第Ⅰ层及第Ⅱ层中。在后角第Ⅰ层、外侧颈核和外侧脊髓核中,可观察到部分NPY-HRP双标记神经元;在后角第Ⅰ层可观察到部分NT-HRP双标记神经元。本研究结果提示,NPY和NT神经元可能参与脊髓-结合臂旁核的痛觉传递。     

5-羟色胺在大鼠腰骶髓后连合核和中间带外侧核参与盆腔内脏炎性痛调控的形态学研究

本研究运用荧光金(FG)逆行束路追踪与5-HT1A受体免疫荧光组织化学染色技术相结合,观察了大鼠腰骶髓后连合核(DCN)和中间带外侧核(IML)内感受盆腔内脏伤害性信息并向外侧臂旁核(LPB)发出投射的神经元呈5-HT1A受体免疫反应阳性。将FG注入一侧LPB后,可在腰骶节段(L6-S2)观察到大量的FG逆标神经元,这些FG逆标神经元主要集中于DCN和IML内,以同侧为主;5%福尔马林注入大鼠结肠后,Fos蛋白阳性神经元主要分布于腰骶髓DCN和IML,以同侧为主,在同侧脊髓背角I层、II层和深层也有少量的分布。另外,在腰骶髓DCN和IML内,还可观察到大量5-HT1A受体阳性的神经元胞体、纤维和终末,同时有部分Fos蛋白阳性的FG逆标神经元呈5-HT1A受体阳性。上述结果提示,大鼠腰骶髓DCN和IML内的5-HT能终末可能对盆腔内脏伤害性信息的传递发挥调控作用。     

大鼠中缝大核向脊髓投射神经元与神经降压素能终末的突触联系

神经降压素(NT)是中枢下行抑制系统的重要神经活性物质。本研究运用免疫组织化学与逆行追踪法相结合的双标技术,在电镜下观察NT能终末与中缝大核(NRM)向脊髓投射神经元的突触联系。在光镜下可见NT阳性纤维和终末散在分布于NRM,但未见NT阳性神经元;将HRP注入腰髓背角后,在NRM内可见比较密集的HRP逆标神经元。在电镜下可见NT阳性终末与HRP逆标神经元的胞体和树突形成以非对称性为主的轴-体突触和轴-树突触。上述结果说明NT可能调控NRM向脊髓背角投射神经元的活动,借此对伤害性信息向中枢的传递发挥抑制效应。     

大鼠三叉神经节内含内吗啡肽2的神经元向延髓背角投射

目的 观察大鼠三叉神经节(TG)内的内吗啡肽2(EM2)阳性神经元向延髓背角(MDH)的投射情况.方法 荧光金(FG)追踪与EM2免疫荧光组织化学染色相结合的双标方法.结果 将FG注入MDH后,TG内可见大量FG标记的大、中、小型神经元;TG内也可见各种直径的EM2阳性神经元;TG内的许多FG标记神经元呈EM2阳性,FG/EM2双标神经元多为中、小型神经元.结论 TG内的EM2阳性神经元向MDH投射.     

大鼠腰骼髓“内脏面”传出和上行投射神经元的定位分布——HRP与荧光金追踪法研究

用HRP与荧光金(FG)结合的示踪法,观察了大鼠腰骶髓“内脏面”副交感节前神经元和上行投射神经元的定位分布。发现FG注入一侧臂旁外侧核或Barrington核后,逆行标记的金色荧光细胞出现于双侧L_5～S_2的“内脏面”,细胞密集于后连合核和中间带外侧核(IML),此外,还出现于双侧的I层及外侧脊髓核(LSN)。HRP注射于一侧盆神经后,逆标细胞出现于术侧的L_6和S的IML,偶见于中介核(IC)。在IML内,HRP标记的副交感节前神经元位于其腹侧份,而FG标记的上行投射神经元主要位于背侧和背内侧部,亦可见少数FG标记细胞混杂在HRP标记细胞之间。本研究结合已有的研究对IML的命名、组成和功能以及LSN的组成进行了讨论。     

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓向丘脑和臂旁核的谷氨酸能投射

本研究用荧光金逆行追踪与免疫荧光组比技术相结合的方法,对大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓向丘脑和臂旁核的谷氨酸能投射进行了观察。磷酸激活的谷氨酸胺酶（PAG）是谷氨酸能神经元的特异性标识物。PAG样阳性胞体主要位于三叉神经脊束核尾侧亚核和颈髓背角的Ⅰ层,少量PAG样阳性胞体也见于它们的Ⅱ层外侧部及外侧网状核。将荧光金注入丘脑腹基底复合体后．荧光金逆标神经元主要见于对侧三叉神经脊束核尾侧亚核和颈髓背角的Ⅰ层及外侧网状核;将荧光金注入臂旁核后,荧光金逆标神经元也主要见于对侧三叉神经脊束核尾侧亚核和颈髓背角的Ⅰ层及外侧网状核。三叉神经脊束核尾侧亚核向丘脑腹基底复合体投射神经元的12．4％,向臂旁核投射神经元的13．2％呈PAG样阳性;颈髓背角浅层向丘脑瓜基底复合体投射神经元的12．7％,向臂旁核投射神经元的14．3％呈PAG样阳性。向丘脑腹基底复合体和臂旁核投射的PAG／荧光金双标神经元分别占三叉神经脊束核尾侧亚核浅层内PAG样阳性神经元总数的13％和24．6％,向丘脑腹基底复合体和臂旁核投射的PAG／荧光金双标神经元分别占颈髓背角浅层内PAG样阳性神经元总数的11．6％和30．1％。外侧网状核内的部分PAG样阳性神经元也向丘脑腹基底复合体或臂旁核投射。Ⅰ层内的双?     

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核和脊髓向丘脑和臂旁核的强啡肽能和一氧化氮能投射

本文用荧光金逆行追踪与免疫荧光组化染色相结合的方法，对大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核和颈髓背角浅层向丘脑腹基底复合体和臂旁核的强啡肽能和NO能投射进行了研究．强啡肽原前体样阳性胞体主要位于尾侧亚核和颈髓背角的Ⅰ层和Ⅱ层外侧部；NOS样阳性胞体主要位于尾侧亚核和颈够背角Ⅱ层，Ⅰ层较少。将荧光金注入丘脑腹基底复合体后，荧光金逆标神经元主要见于对侧尾侧亚核、颈髓背角的Ⅰ层和外侧网状核，Ⅱ层偶见；将荧光金注入臂旁核后，逆标神经元主要见于同侧尾侧亚核和颈髓背角的Ⅰ、Ⅱ层，少量位于外侧网状核。尾侧亚核向丘脑瓜基底复合体投射神经元的16．6％，向臂旁核投射神经元的24．8％呈强啡肽原前体样阳性；颈髓背角浅层向丘脑腹基底复合体投射神经元的19．2％，向臂旁核投射神经元的272％呈强啡肽原前体样阳性。向丘脑腹基底复合体和臂旁核投射的强啡肽原前体／荧光金双标神经元分别占尾侧亚核浅层内强啡肽原前体样阳性神经元总数的7％和18％，分别占颈髓背角浅层内强啡肽原前体样阳性神经元总数的8．1％和21．9％。这些双标神经元多呈大梭形及中等大圆形和梨形。由昆侧亚核向丘脑腹基底复合体投射神经元的5．1％呈NOS阳性，向臂旁核投射神经元的11．8％呈NOS阳性。由颈髓背角浅层向丘脑版?     

Pre- and/or post-synaptic localisation of metabotropic glutamate receptor 1alpha (mGluR1alpha) and 2/3 (mGluR2/3) in the rat spinal cord.

Using immunocytochemical techniques (light and electron microscopy), weakly stained metabotropic glutamate receptor (mGluR) 1alpha immunoreactivity was detected in lamina I of the rat spinal cord. Immunoreactivity for mGluR2/3 was almost undetectable in this lamina and outer lamina II. In lamina II, there was mGluR1alpha immunoreactivity. Strongly stained mGluR2/3 was seen in the inner layer of lamina II and the dorsal part of lamina III. In laminae III X, weakly to moderately stained mGluR1alpha immunoreactive product was demonstrated. Similar staining for mGluR2/3 was also seen in lamina III-VI and in lamina X, but mGluR2/3 immunoreactivities were few in lamina VII-IX. With electron microscopy, mGluR1alpha immunoreactivity was seen in neuronal cell body and dendrites in lamina II of the dorsal horn. In the lateral and ventral horns, only dendrites of neurons were mGluR1alpha immunopositive. Some mGluR2/3 immunopositive dendrites were demonstrated in lamina II of the dorsal horn, lateral and ventral horns. In the ventral horn, mGluR2/3 immunopositive axon and axon terminals were demonstrated. Some mGluR2/3 immunopositive astrocytes were also demonstrated in the three areas and their strongly stained processes wrapped around neuronal cell bodies and synapses.     

大鼠延髓背角Ⅱ层神经元向臂旁区、延髓尾侧腹外侧区和脊髓的投射

将逆行追踪剂荧光金分别注入大鼠一侧臂旁区、延髓尾侧腹外侧区和颈髓第四节段 ,观察到延髓背角浅层 ( 、 层 )向上述部位均有投射 , 层外侧部的投射神经元多于 层内侧部。臂旁区接受双侧延髓背角浅层的投射 ,但以同侧为主 ;延髓尾侧腹外侧区和第 4颈髓接受同侧延髓背角浅层神经元的投射但延髓背角浅层向第 4颈髓投射的神经元数量较少。结合免疫荧光组织化学研究表明 , 层向臂旁区和延髓尾侧腹外侧区投射的神经元部分呈 calbindin-D2 8k样阳性 ,而未见呈 parvalbumin样阳性者。向第 4颈髓投射的 层神经元数量很少 ,未见有呈 calbindin-D2 8K和 parvalbumin样阳性者。本研究结果进一步支持 层有传出投射的观点 ,也提示 层的 calbindin-D2 8K样和 parvalbumin样阳性神经元可能分别属于不同的细胞亚群。     

大鼠脊髓内接受盆腔脏器伤害性刺激神经元的定位分布

本文用Ｆｏｓ蛋白免疫组织化学方法研究了大鼠脊髓内接受盆腔脏器伤害性刺激神经元的分布状况。在对照组，仅偶见Ｆｏｓ阳性细胞出现于Ｌ６、Ｓ１节段脊髓后角（＜２个／片），且染色浅淡。将３％福尔马林经插管分别注入膀胱、阴道和直肠造成伤害性刺激时，Ｆｏｓ阳性细胞数明显增多（１００～２６０个／片，Ｓ１），主要出现于Ｌ６、Ｓ１节段后角Ⅰ层内侧部、后角内侧缘、后连合核和中间带外侧核。少量散在于后角Ⅰ层外侧部、后角外侧缘、外侧脊核和前角背内侧部。为了确定脊髓内Ｆｏｓ阳性神经元是否向上位脑结构投射，将荧光金（ＦＧ）注入一侧臂旁外侧核后，给予膀胱伤害性刺激，结合Ｆｏｓ蛋白免疫组化技术，在后连合核和中间带外侧核发现有ＦＧ／Ｆｏｓ双标细胞。在中间带外侧核，ＦＧ标记细胞与Ｆｏｓ阳性细胞均主要位于核的背侧部，且ＦＧ标记细胞多数同时为Ｆｏｓ阳性，ＦＧ／Ｆｏｓ双标细胞占ＦＧ标记细胞总数的７１．２％（３７／５２），占Ｆｏｓ阳性细胞总数的１４．８％（３７／２５０），提示脊髓内接受盆腔脏器伤害性神经元部分投射至臂旁外侧核。为进一步确定Ｆｏｓ阳性细胞在中间带外侧核定位分布特征，采用ＮＡＤＰＨ脱氢酶反应（显示副交感节前神经元）与Ｆｏｓ蛋白免疫组化相结合?     

部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓 板层可塑性中发挥作用     

大鼠脊髓背角内FOS和NDP阳性神经元的分布与联系(英文)

本文应用还原性尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（NDP）组织化学和原癌即刻早期基因c-fos表达产物Fos免疫细 胞化学方法，观察了大鼠脊髓背角内 NDP和 Fos阳性神经元的分布与联系。一侧足跖部皮下注射福尔马林后，同侧背角内可见大量Fos阳性细胞，而对侧背角内未见或偶见Fos阳性细胞。在背角各层中，大多数Fos阳性细胞分布于Ⅰ层及Ⅱ层外带的内侧部．背角内也可见大量NDP阳性胞体，纤维和终末，密集分布于Ⅱ层内带。双标结果说明部分背用内的Fos阳性细胞也是NDP阳性，双标神经元主要分布于区层的内侧部。在Ⅱ层内，Fos阳性细胞周围常有NDP阳性纤维和终末分布，部分NDP阳性终未直接附着干Fos阳性细胞膜上。本文结果为NO参与脊髓内伤害性刺激信息传递过程提供了形态学证据。     

Presynaptic alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA) receptors modulate release of inhibitory amino acids in rat spinal cord dorsal horn

Local inhibition within the spinal cord dorsal horn is mediated by the neurotransmitters GABA and glycine and strongly influences nociceptive and temperature signaling. Alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid (AMPA) receptors are expressed by inhibitory interneurons and have been shown to modulate GABA release in other regions of the CNS. In the spinal cord, there is morphological evidence for presynaptic AMPA receptor subunits in GABAergic dorsal horn neurons, but functional data are lacking. To determine if AMPA receptors are indeed functional at presynaptic terminals of inhibitory neurons, we recorded evoked and miniature inhibitory postsynaptic currents (mIPSPs) in the superficial dorsal horn of the rat spinal cord. We show that AMPA receptor activation enhances spontaneous release of inhibitory amino acids in the presence of tetrodotoxin onto both lamina II neurons and NK1 receptor-expressing (NK1R+) lamina I neurons. This effect is sensitive to the concentration of extracellular Ca2+, yet is not fully blocked in most neurons in the presence of Cd2+, suggesting possible Ca2+ entry through AMPA receptors. Postsynaptic Ca2+ elevation is not required for these changes. AMPA-induced increases in mIPSP frequency are also seen in more mature dorsal horn neurons, indicating that these receptors may play a role in nociceptive processing in the adult. In addition, we have observed AMPA-induced depression of evoked release of GABA and glycine onto lamina I NK1R+ neurons. Taken together these data support a role for presynaptic AMPA receptors in modulating release of GABA and glycine in the superficial dorsal horn. Because inhibition in the dorsal horn is important for controlling pain signaling, presynaptic AMPA receptors acting to modulate the inhibitory inputs onto dorsal horn neurons would be expected to impact upon pain signaling in the spinal cord dorsal horn.     

一氧化氮合酶阳性神经元及纤维在大鼠脊髓的分布及其来源

用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)脱氢酶反应观察了大鼠脊髓内一氧化氮合酶阳性神经元和纤维的分布。胞体浓染且突起显示良好的类似Golgi染色的阳性神经元分布于亘脊髓全长的中央管周围灰质(X层),胸腰髓(T1-L3)的中间带外侧核、中介核及腰骶髓(L6、S1)的骶髓副交感核和后连合核,少量弥散于后角Ⅳ～Ⅵ层。后角Ⅲ层内可见较多的胞体浓染或淡染但突起短或未见阳性突起的小型神经元。前角内无阳性神经元,但有较多串珠状阳性终末支,并在运动神经元胞体和树突上形成终扣。阳性纤维和终末在后角Ⅰ层和Ⅲ层密集,其它部位稀少。在胸腰段和腰骶段脊髓后角内、外侧缘有行向腹侧的内、外侧阳性纤维束,外侧束集中而粗大,阳性纤维束终止于中间带外侧核和后连合核。切断后根和半横断颈髓的实验表明,后角Ⅰ层的阳性纤维和终末主要来源于脊神经节内一氧化氮合酶阳性细胞的中枢突,而Ⅲ层内的阳性纤维和终末则为Ⅲ层和后角深层阳性细胞的突起。结合文献和本文结果可以推断,一氧化氮在躯体和内脏感觉的传入过程及内脏传出活动中是一种重要的活性物质。