小鼠胚胎成纤维细胞与人胚共培养对胚胎体外发育影响

[目的]评价小鼠胚胎成纤维细胞共培养是否促进d3质量差的人胚胎的囊胚发育。[方法]使用小鼠胚胎成纤维细胞与受精后第3天(d 3)质量差的胚胎共培养,对照组使用Quins囊胚培养液进行序贯培养,观察各阶段囊胚形成率,检测囊胚总细胞数。[结果]d5共培养组12.3％胚胎开始出现早期囊腔化,d 6 7.4％胚胎出现囊腔扩张,4.2％的胚胎d 7孵出。而序贯培养组d 5仅4.2％胚胎开始早期囊腔化,d 6仅1.5％胚胎出现囊腔扩张,d 7仅0.6％的胚胎孵出,表明共培养组囊胚形成率更高,囊胚发育速度快于对照组。此外,共培养组囊胚总细胞数更多,d 6扩张囊胚总细胞数为62.6±13.4,而未扩张囊胚总细胞数26.1±8.9,分别高于序贯培养组。[结论]小鼠胚胎成纤维细胞共培养与 Quins囊胚培养液序贯培养比较,前者更能促进d 3质量差的人胚胎体外发育。     

不同浓度表皮生长因子对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响

目的:研究不同浓度表皮生长因子(ep iderm al growth factor,EGF)对ICR小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响。方法:在mKSOM培养液中添加不同浓度(0.1,1.0,10和100 ng/m l)的EGF对小鼠2-细胞胚胎进行体外培养72 h、96 h,观察囊胚发育率、孵化率和胚胎细胞数的变化。结果:实验组加入四种不同浓度EGF胚胎培养72 h后,其囊胚率分别为93.8%、92.4%、91.8%、91.2%;96 h后其孵出率分别为61.1%、61.8%、63.0%、60.1%,均显著高于对照组(79.9%、43.1%,P<0.05),囊胚细胞数分别为73.1±13.4、73.8±7.0、74.3±12.2、77.6±8.2,与对照组(72.1±6.9)比较,差异无显著性(P>0.05);四个实验组间差异亦无显著性(P>0.05)。结论:EGF浓度在0.1,1.0,10和100 ng/m l范围内可提高体外培养鼠胚的囊胚率与孵出率;胚囊细胞数无变化;不同浓度EGF对早期鼠胚未见有毒性作用。     

胰岛素样生长因子-Ⅱ对小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)对小鼠早期胚胎的影响,为人类胚胎培养系统的优化提供依据.方法 在mKSOM培养基中加入不同浓度的IGF-Ⅱ,Xgd,鼠1-细胞胚胎进行体外培养,观察囊胚发育率、孵化率及胚胎细胞数的变化.结果 小鼠1-细胞胚胎体外培养120 h后,IGF-Ⅱ添加组囊胚发育率、孵化率显著高于对照组,但囊胚细胞计数与对照组无明显差别.结论 添加IGF-Ⅱ对小鼠胚胎发育具有一定的促进作用.     

囊胚期小鼠胚胎体外培养条件的研究

目的探讨体外不同培养条件对小鼠囊胚生长发育的影响。方法将妊娠d4小鼠囊胚分别培养在无血清培养液（组Ⅰ）、有血清培养液（组Ⅱ）和与无血清小鼠子宫内膜上皮细胞的共培养体系（组Ⅲ）中，观察囊胚的脱带率和扩展生长情况。结果组Ⅰ中的囊胚几乎不能脱带、生长，组Ⅱ和组Ⅲ的培养体系可以支持胚胎细胞的生长增殖。培养24h后，组Ⅲ囊胚的脱带率和扩展生长率明显高于组Ⅱ（P〈0.01），且组Ⅲ囊胚出现类似于“植入”的侵入行为。结论囊胚的孵出和生长发育有赖于外界培养条件，而囊胚与子宫内膜上皮细胞的共同培养，更接近体内发育环境，有利于囊胚的生长发育。     

葡萄糖在小鼠胚胎2-细胞晚期诱导活性氧增多抑制胚胎体外发育

目的:测定葡萄糖培养早期胚胎体外发育各阶段的活性氧(ROS)水平,探讨葡萄糖对小鼠早期胚胎体外发育产生阻滞作用的机制。方法:通过在改良的CZB (m-CZB) 培养液中添加不同浓度（分别为0、5、10、15、20、25、30 mmol/L）的葡萄糖培养小鼠早期胚胎,根据其体外发育的不同阶段,用分子探针氢化乙啶(hydroethidine,HE)和紫外分光光度法分别检测小鼠胚胎内、外ROS含量。结果:葡萄糖浓度达到15 mmol/L时囊胚发育率开始出现明显下降(P<0.05),相同浓度培养的小鼠胚胎在2-细胞晚期阶段胚胎内部超氧阴离子(O2-·)和培养液中过氧化氢(H2O2)含量均明显升高(P<0.05),而发育其他阶段胚胎内部的O2-·与对照组(0 mmol/L葡萄糖组)比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:高浓度葡萄糖可能在2-细胞晚期阶段诱导ROS增多,致使小鼠早期胚胎体外发育受阻。     

胰岛素对不同时期ICR小鼠胚胎体外发育的影响

目的研究胰岛素对不同时期小鼠胚胎体外发育的影响.方法收集1-细胞、2-细胞、4-细胞及桑椹胚期鼠胚,分别在含0（对照组）、0.005、0.05、0.5、5、10μg/mL胰岛素的KSOM中培养.结果在1-细胞及2-细胞阶段添加系列浓度时,0.005μg/mL及0.05μg/mL胰岛素组不仅提高囊胚率、孵化率,而且提高囊胚细胞数.4-细胞阶段添加系列浓度时0.05μg/ml胰岛素组能够提高囊胚率、孵化率以及囊胚细胞数;而至桑椹胚阶段再添加系列浓度胰岛素时,囊胚率、孵化率以及囊胚细胞数均无统计学意义（P〉0.05）.结论在ICR小鼠胚胎体外培养时适宜的胰岛素浓度为0.05μg/mL;桑椹胚之前添加胰岛素对小鼠胚胎发育是必要的.在一定发育阶段内,随着胚胎的生长对胰岛素的需求也相应增加.     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养，观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h，0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组，且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

小鼠囊胚体外植入恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞的比较性研究

目的 在已建立的小鼠囊胚-恶性肿瘤细胞体外共培养的基础上,将小鼠囊胚体外植入恶性肿瘤细胞的生物学行为和小鼠囊胚植入单层容受性子宫内膜上皮细胞的生物学行为进行比较性研究。方法 采用体外小鼠囊胚-恶性肿瘤细胞共培养体系和改进的小鼠囊胚-单层容受性子宫内膜上皮细胞共培养体系,光镜下观察小鼠囊胚在单层恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞贴壁、脱带、粘附及植入过程,HE染色,扫描电镜观察和免疫组织化学对两系统中囊胚植入的生物学行为进行比较性研究。结果 小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞Hepal-6、CHO和B16共培养系统中的脱带率、贴附率和扩展率分别是69．74％、81．49％、90．15％;68．63％、79．86％、90．32％和68．94％、80．21％、89．53％。容受性子宫内膜上皮细胞共培养系统中的脱带率、贴附率和扩展率分别是69．52％、81．25％和91．51％,小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞与容受性子宫内膜上皮细胞体外植入比较,其脱带率、贴附率和扩展率差异无统计学意义（P〉0．05）,植入的形态学和滋养层细胞表达的MMP-9差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 在体外贴壁细胞的共培养系统中,小鼠囊胚在恶性肿瘤细胞和容受性子宫内膜上皮细胞共培养系统中的发育和植入行为差异无统计学意义,可能是早期生命在体外高适应和自我组织能力的一种体现。     

GFP小鼠对三维体外着床模型的定位及验证

目的 本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,运用绿色荧光（GFP）小鼠胚胎替代ICR小鼠胚胎,验证三维着床模型的可行性。方法 将孕第4天GFP小鼠及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。观察两组胚胎黏着率的差异。对GFP小鼠囊胚组通过荧光显微镜进行观察,共培养后进行组织学研究。结果 GFP小鼠囊胚及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h后的胚胎黏着率分别为46.6%及54.8%;两组黏着率之间差异无统计学意义（P=0.364）。GFP小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h及40h后均可在荧光显微镜下见到胚胎,组织学研究证实GFP小鼠囊胚可以黏着于ICR小鼠子宫内膜。结论 三维着床模型确实能够实现不同来源小鼠胚胎的黏附着床。运用GFP小鼠胚胎还发现了胚胎与子宫内膜组织之间存在着信息及分子联系。     

小鼠体外受精及其胚胎体外培养的比较研究

目的 通过比较不同品系小鼠体外受精情况以及不同培养液对C57BL/6J小鼠胚胎体外培养效果的实验,进一步完善小鼠体外受精和早期胚胎体外培养体系.方法 对C57BL/6J、DBA/2、FVB/NJ、BALB/c、KM、ICR及BARR Ⅱ小鼠进行超排和体外受精,并对C57BL/6J小鼠体外受精后的2-细胞胚胎用HTF、CZB、KSOM、M16、HECM五种培养液在相同条件下进行体外培养到囊胚,计算4-细胞～囊胚的发育率.结果 各品系小鼠平均排卵数为13.0～38.7个(P＜0.01),体外受精率为70.2%～92.8%(P＜0.05).不同培养液至4-细胞的发育率为60.3%～95.8%,其中KSOM的4-细胞发育率为95.8%,最适合2-细胞向4-细胞的发育.8-细胞发育率为52.8%～91.1%,桑椹胚发育率为40.6%～87.5%,囊胚发育率为5.1%～75.4%,各阶段胚胎发育率均差异显著.其中适合于金黄仓鼠桑椹胚、囊胚发育的HECM-2并不支持C57BL/6J囊胚的发育,其囊胚发育率只有5.1%,CZB最适合其囊胚的发育.结论 遗传背景是影响小鼠超排及体外受精效果的主要因素之一.葡萄糖的存在不利于克服2-细胞发育阻断,胚胎在8-细胞期以前,主要能源物质不是葡萄糖,直到桑椹胚后期,葡萄糖才是主要的能量物质.磷酸盐可引起胚胎发育阻断.氨基酸和EDTA有利于克服胚胎发育阻滞.     

子宫内膜细胞共培养联合序贯成组培养对人早期冷冻胚胎发育的支持作用

 目的 探讨子宫内膜细胞体外共培养联合序贯成组培养对人早期废弃冷冻胚胎发育的影响。方法 获取人子宫内膜细胞并冷冻保存。共培养前,解冻内膜细胞并培养至30%~50%汇合时解冻人早期废弃胚胎,胚胎冷冻年限为3~10年。2~3个胚胎一起转移至已更换胚胎培养液的内膜细胞上行成组共培养,待胚胎发育至8 细胞期更换为囊胚培养液,观察胚胎复苏存活、桑葚胚及囊胚形成情况。结果 人子宫内膜细胞生长良好。采取内膜细胞联合序贯成组培养废弃胚胎33个,总体桑葚胚形成率45.5%,囊胚形成率27.2%,其中Ⅰ~Ⅱ级胚胎桑葚胚、囊胚形成率皆高于Ⅲ~Ⅳ胚胎,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 子宫内膜细胞共培养联合序贯成组培养对人早期冷冻时限较长的胚胎发育具有积极的支持作用,可为充分利用宝贵资源进行胚胎实验室质控、胚胎干细胞研究等领域提供支持性方案。     

Co-culture of early embryo with human decidual stromal cellsin vitro by improvement of early embryo development

Summary An early embryo co-culture system with human decidual stromal cells was established to study its effect on early embryonic cleavage and growth in vitro. Three hundred and eight 2-cell mouse embryos were co-cultured with human decidual stromal cell monolayer in MEM + 0.4 % bovine serum albumin (BSA) and 163 embryos cultured in MEM + 15 % FCS alone as control. Among the mouse 2-cell embryos co-cultured with human decidual stromal cells, 72.73 % developed to the morula stage and 67.21 % cavitated to blastocysts with 59.74 % hatching, as compared with 61.34 % to morula stage, 48.47 % to blastocysts and none hatching in the controls, respectively. Co-cultured embryos cleaved slightly faster than controls and showed no or less fragmentation than those in the control. These results suggested that human decidual stromal cells can support early embryonic development and yield a reasonable number of embryos with good quality up to blastocyst stage.     

Co-Culture of Early Embryo with Human Decidual Stromal Cells in vitro by Improvement of Early Embryo Development

The quality of the in vitro culture conditionsfor human pre--implantation embryos is one of themost critical aspects of successful in vitro fertilization and embryo transfer (IVF--ET) and other biology techniques, such as embryo clone, geneknock--out, pre--implantation genetic diagnosis etc.The culture of pre--im:7lantation mammalian embryos can take place in a range of embryo culturemedia, ranging from simple chemically defined media to more complex media. In vitro pre--implantation embryo …     

Effects of Placental Isoferritin on the Mouse Embryo Development in vitro

To investigate the effect of placental isoferritin （PLF） on mouse embryo development in vitro, mice 2-cell embryos were co-cultured with human first trimester decidual cells at different concentrations of PLF in vitro. The following changes of the above system were observed under an invert microscope and the number of embryos were recorded and the embryos were classified. The results showed there was no significant difference in the percentage of embryos development to 4-cell 8-cell and morula （P〉0.05）. PLF at the doses of 10 and 100 U/mL significantly enhanced more embryos development to the blastocyst and hatching blastocyst （P〈0.05）. PLF at the dose of 1000 U/mL depressed more embryos development from 2-cell to hatching blastocyst, meanwhile such phenomena as cell degeneration and irregular cleavage were observed in part of embryos, but there was no significant difference in statistics （P〉0.05）. It was concluded that PLF at the concentration of 10-- 100 U/mL had no significant effects on the early development of mice embryos, however, PLF could promote the growth, differentiation, and hatching of preimplantion blastocysts.     

应用序列培养系统培养鼠囊胚的效果观察

目的比较序列培养和非序列培养支持鼠囊胚发育和分化的效果。方法应用Q-one培养基培养鼠合子48h后,移至Q-three培养基中继续培养48h;对照组应用Q-one培养基完成从合子至囊胚期的培养。结果序列培养组囊胚发育率及囊胚孵出率均明显高于非序列培养组,分别为89％和12％;38％和0。在序列培养中镜下扩张态囊胚形成好。结论序列培养系统有利于鼠胚从早期胚胎向囊胚的进一步发育和分化。     

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞冻存的影响

目的：：探讨不同冷冻方法对小鼠卵母细胞存活率及其发育潜能的影响。方法：采用玻璃化冷冻技术,选取开放式载体与封闭式载体分别冻存带卵丘细胞(COC)或剥除卵丘细胞(OD)的小鼠卵丘复合体,复苏后分别作体外受精,胚胎培养。结果：开放式载体冻存组存活卵数76.79%略高于封闭式载体冻存组72.98%,无统计学意义(P >0.05);两组内 COC 组的卵子存活率显著高于 DO 组,但有统计学差异(P <0.05),COC 组的受精率、囊胚率略高于 DO 组,无统计学差异(P >0.05)。结论：(1)封闭式载体有效避免了潜在的污染问题,但不同载体对卵子存活率无显著影响。(2)卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中可以起到保护作用,并对胚胎后期的发育有一定的改善。     

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的　探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法　 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果　瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论　瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。