铁皮石斛组培快繁技术研究

目的 通过研究铁皮石斛种子萌发、小苗增殖和生根的适宜培养基,建立一套铁皮石斛组织培养的快速繁殖体系.方法 以铁皮石斛种子为外植体,研究激素（6-benzylaminopurine和1-naphthleetic acid）不同质量浓度配比、天然添加物（马铃薯汁和香蕉汁）对铁皮石斛种子萌发、小苗增殖和壮苗生根的影响.结果 铁皮石斛种子萌发最适培养基为1/2MS ＋0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L马铃薯汁＋25 g/L蔗糖汁,小苗增殖最适培养基为1/2MS ＋0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L马铃薯汁（或香蕉汁）＋25g/L蔗糖汁＋0.5g/L活性炭,壮苗与生根最适培养基为1/2MS＋ 0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L香蕉汁＋25 g/L蔗糖汁＋0.5g/L活性炭.结论 建立了一套铁皮石斛组培快繁体系,可用于大规模生产铁皮石斛组培苗.     

珍稀濒危药材铁皮石斛组培快繁关键技术研究

目的研究珍稀濒危药材铁皮石斛组织培养快速繁殖技术。方法以铁皮石斛茎段为试材,比较植物激素浓度配比、人工光源、炼苗驯化方法等对铁皮石斛组培快繁的影响,摸索出一套可进行组培快繁工厂化生产的技术体系,优选出铁皮石斛组培快繁的最适条件。结果 (1)组培各阶段最佳培养基:原球茎诱导:MS+BA 2.5 mg/L+IBA0.2 mg/L;原球茎分化:MS+BA1.5 mg/L+NAA1.2 mg/L+5%香蕉汁;壮苗生根:MS+NAA 0.15 mg/L+5%香蕉汁、MS+NAA 0.20 mg/L+7.5%香蕉汁、MS+NAA 0.25 mg/L+10%香蕉汁(分阶段补加);(2)人工光源:组培特定光谱节能灯;(3)炼苗方法:水培驯化炼苗。结论通过上述技术的应用,缩短了种苗组培育苗周期,解决了从组培苗到大量栽培的技术,该方法简便易用,且降低了生产成本。     

贡菊组培苗壮苗生根的研究

【目的】探讨不同因子对贡菊组培苗壮苗和生根的影响,为贡菊离体快繁体系的建立提供试验依据。【方法】以贡菊组培苗为材料,采用在MS培养基中添加不同添加物的组织培养技术。【结果】壮苗培养基配方中150 mL／L大量元素有利于贡菊组培苗的生长;添加100 g/L椰子汁对贡菊组培苗的生长有明显促进作用;生根培养基中加入活性炭有利于组培苗根系的形成;添加一定浓度α-萘乙酸（NAA）与3-吲哚丁酸（IBA）能促进组培苗根系数量增多和根的生长。【结论】提高大量元素、降低培养基中琼脂浓度、添加椰子汁和生长激素有利于贡菊组培苗的壮苗生长;最佳生根培养基为1/2MS+0．05 mg/L NAA+0．05 mg/L IBA。     

台湾金线莲丛生芽诱导和组培研究

台湾金线莲（Anoectoehilus formosanus）为兰科开唇兰属植物，又称“宝石兰”，分布于中国、日本、斯里兰卡等国，是一种珍贵的药用植物。本文研究了濒危植物台湾金线莲（Anoeetoehilus formosanus）种子播种材料丛生芽诱导的途径，初步建立了台湾金线莲试管苗的组培快繁流程。研究结果表明，培养基最佳pH为5．1～5．4。丛生芽诱导的培养基为1／2MS＋6-BA5．0（mg／L）＋NAA1.0，继代培养采用液体培养基1／2MS附加6-BA2．0（mg／L），振荡培养2个月，可使其生长旺盛。添加0．2％活性碳和150g／L香蕉汁对其发根具有良好的效果。     

萘乙酸浓度对铁皮石斛组培苗生长发育的影响

目的 研究培养基中添加不同浓度的萘乙酸(NAA)对诱导铁皮石斛组培苗的影响.方法 以铁皮石斛种子为材料,在4种培养基(Ⅰ ～Ⅳ)中诱导出原球茎,再以预实验优选出的1/2MS+活性炭1.0g/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L为基本培养基,配制成0～5.0 mg/L的6种不同NAA浓度的培养基(Ⅴ ～Ⅹ)进行原球茎增殖分化和继代培养,筛选促进组培苗根茎叶生长发育最佳的NAA浓度和培养基配方.结果种子在Ⅳ号培养基中的萌发率最高,达94.2％以上;在NAA添加量为4.0 mg/L的Ⅸ号培养基中,原球茎分化后根长、叶长、叶宽、株高、茎粗、单株鲜重分别为1.516 cm、0.943 cm、0.365em、2.991 cm、0.264 cm、0.102 g,各指标均显著优于其它NAA浓度的培养基.另外,在Ⅸ号培养基中添加100 g/L土豆和80g/L香蕉能够显著地促进生根壮苗阶段组培苗根茎叶的生长发育,各指标可增加1～3倍.结论培养基1/2MS+NAA0.2 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂7.0g/L最适宜铁皮石斛种子萌发,当NAA浓度为4.0 mg/L时更能促进组培苗根茎叶的生长发育.     

铁棒锤快速繁殖体系的建立

目的 建立铁棒锤高效快速繁殖体系。方法 以铁棒锤越冬芽为外植体,用不同的培养基、激素和附加物组合培养。结果 培养基MS＋2, 4-D 2.0 mg/L＋NAA 0.4 mg/L＋活性炭（AC）1.5 g/L＋聚乙烯吡咯烷酮（PVP）1 g/L有利愈伤组织的形成;培养基MS＋6-BA 2.5 mg/L＋NAA 0.2 mg/L＋AC 1.5 g/L＋PVP 1 g/L有利于成芽;培养基MS＋6-BA 3.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋2, 4-D 0.1 mg/L＋AC 1.5 g/L＋PVP 1 g/L有利芽增殖;培养基1/2 MS＋NAA 0.2 mg/L＋AC 1.5 g/L＋PVP 1.0 g/L有利于根的生成。结论 以种子发芽苗为外植体进行离体培养,可以实现铁棒锤种苗的工业化快速繁殖。     

稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响

目的研究稀土微肥对铁皮石斛试管苗壮苗的影响。方法通过正交试验,以石斛小苗为外植体,培养在附加了3种不同稀土元素组合的1/2MS 20%的香蕉提取物的培养基上进行培养。结果3种稀土元素中的镧(La)对试管苗增质量、叶绿素b、总叶绿素和石斛多糖的量都有显著的影响;3种稀土元素都对试管苗的叶片数、根数、分蘖数以及叶绿素a的量影响不显著。结论为铁皮石斛试管苗的壮苗以及品质的提高提供了科学的依据。     

水半夏组培快繁体系的建立

目的 建立水半夏的组培快繁体系,为快速、大量生产水半夏种苗提供基础。方法 利用不同植物激素配比的培养基,以水半夏块茎为外植体进行试验。结果 愈伤培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋KT 1.0 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L可成功诱导水半夏愈伤组织;丛生芽培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋6-BA 2.0 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L诱导不定芽效果较好,增殖倍数高;生根培养基1/2 MS＋NAA 0.2 mg/L＋IBA 0.4 mg/L＋KT 0.2 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L＋AC 0.3 g/L,有利于水半夏不定根的快速形成,12～14周即可获得再生水半夏植株。培养基MS＋NAA 0.2 mg/L＋6-BA 1.5 mg/L＋蔗糖3 %＋琼脂6 g/L为诱导水半夏分化一次性成苗的最佳激素配比,5～6周可形成试管苗,10周后可用于炼苗。结论 建立的水半夏组培快繁体系为水半夏优良品种的快速繁殖奠定基础,且可应用于工厂化生产水半夏种苗。     

铁皮石斛快繁技术体系研究

目的 以铁皮石斛Dendrobium officinale带芽茎段为材料,对铁皮石斛的组织培养进行系统研究,以期建立铁皮石斛的快繁技术体系。方法 采用植物组织培养的方法对铁皮石斛外植体的消毒方法、原球茎的诱导、增殖、分化、幼苗生根及瓶苗移栽等进行研究。结果 铁皮石斛外植体最佳的消毒方式为75%乙醇消毒30 s,再用0.1% HgCl₂消毒10 min;铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA＋2 g/L AC,诱导率达到34.98%;原球茎增殖的最佳培养基为MS＋0.5 mg/L 6-BA＋0.8 mg/L 2, 4-D＋2 g/L AC,增殖率达到89.6%;原球茎分化的最佳培养基为MS＋1.2 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L IBA＋2 g/L AC,分化率达到89.6%;幼苗生根的最佳培养基配方为1/2 MS＋2.5 mg/L NAA＋15%土豆汁＋2 g/L AC,生根率达到90.4%～92.8%;瓶苗移栽最佳方式为大苗、树皮块苔藓草做基质、基质中添加0.03 mg/L赤霉素,并接种适量菌根真菌Epulorhiza sp.。结论 建立了铁皮石斛的快繁技术体系,为铁皮石斛的工业化生产奠定技术基础。     

南方红豆杉愈伤组织生长动力学及紫杉醇代谢动力学研究

目的 通过愈伤组织细胞生长及其紫杉醇代谢动力学的研究,筛选确定南方红豆杉愈伤组织培养生产紫杉醇的最佳培养基配方与最佳收获期。方法 以改良MS为基本培养基添加不同质量浓度的IBA、6-BA、GA₃组合诱导培养南方红豆杉愈伤组织,通过测定愈伤组织鲜质量进行生长动力学研究,采用HPLC法检测不同生长阶段愈伤组织中紫杉醇的积累量,进行紫杉醇代谢动力学研究。结果 改良MS＋0.2 mg/L IBA＋0.05 mg/L 6-BA＋0.3 mg/L GA₃、MS＋0.2 mg/L IBA＋0.01 mg/L 6-BA＋0.7 mg/L GA₃及MS＋0.2 mg/L IBA＋0.1 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L GA₃培养条件均较有利于南方红豆杉愈伤组织的诱导培养,且紫杉醇的积累量也较高,最高可达0.037 76%。结论 在添加IBA及6-BA的基础上适当增补GA₃可使南方红豆杉愈伤组织诱导提前启动,缩短出愈时间,促进生长,降低褐变程度,增加愈伤组织中紫杉醇的积累量。愈伤组织的生长曲线呈S型,紫杉醇的积累呈线型增加,是一个逐渐积累的过程,但积累到一定程度就不再增加,且伴随着愈伤组织不断褐变。     

不同产地广藿香药材薄层色谱指纹图谱研究

[目的]研究不同产地广藿香指纹图谱的差别.[方法]取不同产地广藿香样品6个,采用薄层色谱法对其化学成分进行检测.[结果]不同产地广藿香挥发油部位中成分的薄层行为相似,而甲醇提和石油醚提部位中的成分则存在较大差别,主要为高要产广藿香与其他产地的差别,可用于广藿香的产地鉴别.[结论]薄层色谱指纹图谱可作为简便、快速、稳定地区别不同产地广藿香的指标.     

广东省广藿香土壤生态适宜性评价

[目的]分析广藿香的适宜生长区域,为确定广藿香种植产区以及合理规划生产布局提供科学依据.[方法]通过在作物环境需求数据库--Ecocrop 1 中筛选重点土壤生态环境因子作为评价指标,以地理信息系统空间分析技术为手段,对广藿香的土壤生态适宜性进行分析和评价.[结果]在珠江三角洲以及粤东粤西的沿海区域仍然存在适宜广藿香生...     

广藿香质量控制研究进展

本研究综述了近年来有关广藿香质量控制的研究现状及进展,介绍和评述了,广藿香专属性鉴别及其主要成分质量控制方法的特点、用途及发展方向,为广藿香的合理开发与质量控制提供参考。广藿香药理作用的有效发挥取决于广藿香醇、广茬香酮和黄酮类化合物等,故在广藿香的质量控制方面,应包括上述3种成分的定性、定量标准,此外,广藿香指纹图谱的专属性鉴别对广藿香真伪鉴定及种属鉴别的应用也是广藿香质量控制的重要进展     

广藿香辐射诱变筛选抗病突变体的研究

【目的】将辐射诱变与离体选择相结合,筛选广藿香抗青枯病突变体,为广藿香抗病育种奠定基础。【方法】观察60Coγ射线辐射对广藿香离体再生的影响;以辐射诱变的广藿香为材料,以青枯菌粗毒素为选择压力,筛选抗青枯病植株。【结果】在进行抗性芽及抗性植株筛选中,分别以1.34×108cfu(菌落形成单位)/mL及2.48×108cfu/mL青枯菌制备的粗毒素作为选择压力,可能筛选到抗性的材料。60Coγ射线辐射对广藿香离体再生有明显的影响,随着辐射剂量的增加,外植体存活率及再生芽的能力显著下降。最终选取剂量为40 Gy和60 Gy进行辐射诱变,结合离体培养筛选抗病突变体,获得了24株抗性植株。【结论】建立了筛选广藿香抗病突变体的方法,为广藿香抗病育种提供了有价值的种质材料。     

广藿香药用部位成熟结构及有效成分分布研究

目的：揭示广藿香根、茎和叶的成熟结构及挥发油在其内的分布部位，为合理的评价和采收该药用植物提供科学的理论依据。方法：石蜡切片法、半薄切片法、组织化学法。结果：在根的成熟结构中，挥发油主要分布在木薄壁组织细胞中；在茎中，主要分布在皮层和韧皮部薄壁细胞中；在叶中，主要分布在叶肉组织和叶脉的韧皮部薄壁细胞中。结论：广藿香全草均含挥发油；另外，根内木质部的粗度、茎皮和叶片的厚度可作为评价广藿香品种优良的3个指标。     

广藿香青枯病菌培养特性的研究

目的 对青枯菌的培养特性进行研究,为更有效地防治广藿香青枯病提供病原菌基础生物学方面的参考.方法 通过测定悬浮培养菌液的吸光度A600,考察青枯菌的生长状态、温度和pH值对青枯菌生长的影响,以及菌体对不同碳源和氮源的利用情况.结果 青枯菌的最适生长温度范围为33～35℃,生长的最适初始pH值为6.5;菌株能利用9种供试...     

广藿香MSAP分析技术体系的优化及引物筛选

目的首次利用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术开展广藿香表观遗传多样性研究,建立并优化广藿香MSAP技术分析的反应体系。方法对MSAP技术中关键的步骤,包括酶切反应中的酶切时间和基因组DNA酶切量．预扩增反应中连接产物的稀释倍数、选择性扩增中预扩增产物的稀释倍数等条件进行了优化。同时,利用优化的条件,对81对引物进行初步的多态性筛选。结果分步酶切,以1000ngDNA量进行EcoR Ⅰ（30U）酶切5h,纯化反应产物,再各取15此的EcoR Ⅰ酶切纯化产物进行Msp Ⅰ／HapⅡ（10U）酶切5h,可完全酶切。优化后的反应体系得到条带清晰、特异性好、背景涂布少的选择性扩增产物。结论建立了MSAP反应体系,保证MSAP图谱稳定、清晰：初步筛选出的32对引物组合,可用于后续广藿香DNA甲基化模式的相关研究。同时,也为其他药用植物提供甲基化敏感扩增多态性研究的依据。     

UPLC-MS/MS同时测定5种南药中药材中10种农药残留

目的 建立同时测定广藿香、益智、巴戟天、肉豆蔻、丁香等5种南药中常见的10种农药残留的方法.方法 采用安捷伦1290-6460超高效液相色谱质谱联用仪(UPLC-MS/MS).色谱柱:安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×150 mm,1.8μm),柱温40℃,梯度洗脱,流速0.4 mL/min;采用电喷雾离子源(AJS ESI),多反应离子监测(MRM)扫描方式.结果 10种农药检测质量浓度线性范围为0.5~100μg/kg(r>0.9986),各被测物质的方法定量限(LOQ)为0.005~0.1μg/kg,加样回收率范围为72.8%~108.8%.结论 所建立的方法简单、快速、准确度及灵敏度高、专属性好,可用于5种南药中药材中常见的10种农药残留的测定.     

市售广藿香的挥发油成分及药材应用状况研究

目的：测定不同市场销售的广藿香药材挥发油含量及成分，确定其商品规格，为广藿香的合理、有效利用确立科学依据。方法：以挥发油测定法测定挥发油的含量，运用GC—MS联用技术测定挥发油中各组分的含量，并与牌香、肇香、南香作相似度比对。结果：不同市场广藿香药材挥发油含量有一定差异，10个指标成分百分含量相当，相似度比对显示市售药材为南香或湛香。结论：应增加牌香、肇香的种植面积，注重广藿香药材的质量监控及合理利用。