胶体染料斑点兔疫试验法(DIA)检测血吸虫病人血清抗体的进一步研究

本研究对胶体染料斑点免疫试验法(DIA)检测血吸虫病人抗体的有关因素进行了系统的观察,并对实验方法进行了改进.用改进后的DIA检测288份血吸虫病人血清抗体,其中69份急性病人血清,阳性率为95.7%;110份慢性病人血清阳性率为96.4%;19份晚期病人血清阳性率为47.4%;40份华支睾吸虫病人血清,2份阳性,交叉反应率为5%;50份健康人血清,1份阳性,假阳性率2%.敏感性、特异性与酶联斑点免疫试验法相似.改进后的DLA简单、经济、易行,适于现场应用.     

预警哨鼠抗Sj23HD IgG抗体Western blot检测方法的改进及应用

目的改进检测预警哨鼠血清抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）IgG抗体的Western blot方法,并观察其现场应用价值。方法预先制备转印有重组si23HD蛋白的NC膜条,采用化学发光Western blot检测哨鼠血清抗sj23HD IgG,观察方法的稳定性和敏感性,并对2012年江苏省潜在血吸虫感染高风险水域监测预警哨鼠回收后第14、21、35d血样进行检测,同时以ELISA检测方法作为对照,对免疫检测结果与解剖查虫结果进行统计学分析。结果改进后的Western blot操作简便,比常规方法节省142周时间。预制NC膜条至少可低温保存6个月,其敏感性与新鲜制备的NC膜条的敏感性相似。使用改进后的Western blot方法检测预警哨鼠14、21和35d血清标本,阳性率分别为0．90％,3．50％和5．06％,ELISA阳性率分别为0．45％、3．00％和5．06％,差异无统计学意义（P〉0．05）。两种免疫学方法的敏感性均高于解剖查虫法。结论改进后的Western blot操作简便,敏感性高,可用于预警哨鼠血吸虫感染检测。     

DiI标记脂蛋白改良法的建立

为了改进脂蛋白的荧光标记方法 ,本实验采用经超速离心后的离心管底层血清取代商品化的去脂血清作为脂蛋白标记时的介质 ,与荧光染料DiI混合孵育。经超速离心分离后获得DiI标记的极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及β 极低密度脂蛋白。本方法在标记过程中不用去脂血清 ,降低了标记成本并缩短了超速离心时间。配体与受体结合实验结果发现 ,用本方法标记的脂蛋白能以可饱和方式结合体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞和中国仓鼠卵母细胞。表明本方法标记的脂蛋白保持了正常脂蛋白的配体功能 ,适用于脂蛋白受体的研究     

两种试剂在HIV确证试验中的比较

目的为减少艾滋病病毒(HIV)检测中不确定结果的产生,缩短窗口期,寻找一种更准确、灵敏度更高的试剂。方法对已检测的9份HIV早期感染者的血清,及其阳转后的血清,分别用两种HIV抗体确证试剂盒检测并进行比较。结果 MP-WB试剂对9份HIV早期感染标本的检测结果均为HIV-1抗体不确定,RIBA试剂的检测结果为7份HIV-1抗体阳性,2份HIV-1抗体不确定。两种确证试剂对早期感染标本检测时,条带的主要区别在于是否检测出gp41带。两种确证试剂对9份阳转后血清的检测结果均为HIV-1抗体阳性。对RIBA与MPWB试剂的一致率和对gp41带检测能力进行McMemanr检验,差异有统计学意义(P=0.016,P=0.008)。结论与目前常用的MP-WB相比,RIBA试剂可以缩短HIV抗体确证实验的窗口期,减少不确定结果的产生。     

应用全自动微孔板法改进TRUST试验检测梅毒抗体

目的:用全自动微孔法代替传统方法检测梅毒抗体,并对改进法进行对比分析和评价.方法:用全自动酶免分析仪法与传统甲苯胺红卡片试验(TRUST)法对比检测了75例梅毒患者和1 061份献血员的血清,不符合者用螺旋体血球凝集试验(TPHA)法验证.对18 000份献血员标本用改进的方法检测,并与传统方法对比,用TPHA法验证.结果:改进方法与传统方法相比,75例梅毒患者血清均呈阳性结果,但改进方法比传统法的凝集颗粒大而均匀,更易判读.在1 061份献血员血清中,用改进的方法检出2份阳性血清,并经TPHA证实,用传统方法则判为可疑血清.用改进方法在18 000份献血员的血清中的7份标本呈阳性,TPHA方法亦为阳性,而传统方法3例呈阳性;2例可疑,2例阴性.结论:改进的全自动微孔板法比传统方法具有敏感性高、特异性好、自动化程度高、易于标准化等优点,适合献血员筛查和临床大批量梅毒患者标本的检验.     

柯萨奇病毒A组6型抗体中和试验Nt-ELISPOT方法的建立

目的建立快速、高效的柯萨奇病毒A组6型(CVA6)抗体中和试验Nt-ELISPOT检测法。方法取CVA6单克隆抗体(1D5)用HRP标记,以此为检测抗体,基于酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)建立CVA6抗体中和试验Nt-ELISPOT,通过对不同效价血清以及手足口病疑似患者血清标本的检测,比较该方法与传统抗体中和试验(NtCPE)的一致性。结果以CVA6单克隆抗体1D5为检测抗体,建立了快速检测针对CVA6中和抗体的Nt-ELISPOT检测法;该方法与Nt-CPE法相比,其检测时间显著缩短;运用这两种方法分别对4份不同效价血清样品及70份手足口病疑似患者血清样品进行CVA6抗体检测,其中和试验结果的一致性为100%。结论建立的Nt-ELISPOT方法快速、高效,可用于手足口病CVA6感染检测,为CVA6的疫苗免疫原性评价、血清流行病学调查等提供了技术支持。     

日本血吸虫感染动物血清中循环抗体（CAb）及循环抗原（CAg）水平的动态研究

应用膜片固相抗原免疫酶测定法（Ｄ－ＩＥＡ）和ＥＬＩＳＡ检测日本血吸虫感染家兔血清中ＣＡｂ和ＣＡｇ水平时,高峰分别在感染后１０～１２周和１０周,ＣＡｂ和ＣＡｇ水平均与感染度和感染期密切相关。实验结果表明,感染宿主血清中ＣＡｂ／ＣＡｇ水平的消长规律并不一致,宿主在感染中期（感染后１０～２０周）显示ＣＡｂ检测为优势,在感染早期（感染后１０周内）则以ＣＡｇ检测为优势。本项研究可为选用适宜的ＣＡｂ／ＣＡｇ检测途径,提供依据。应用改进方法Ｄ－ＩＥＡ检测血吸虫感染者血清中特异性抗体时,可取得满意效果。     

2-巯基乙醇处理对广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG检测效果的影响

目的探讨2-巯基乙醇处理对广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG抗体检测效果的影响。方法用2-巯基乙醇对感染广州管圆线虫大鼠血清处理后,进行ELISA检测,观察标本阳性检出率的变化。结果改进的方法具有较好的敏感性和特异性。通过用2-巯基乙醇对在感染后8、14、20、28、45天和60天6个时点采集的大鼠感染血清进行处理,可不同程度提高其在ELISA反应中的阳性检出率。结论用2-巯基乙醇处理可提高广州管圆线虫感染大鼠血清特异性IgG抗体的阳性检出率。     

血吸虫病患者血清CIC解离后特异性抗原／抗体检测的研究

将受检者血清免疫复俣物用改进方法解离后，以多克隆、单克隆抗体及呆溶性务虫卵抗原作ＥＬＩＳＡ检测血吸虫特异性及抗体。结果表明，检测ＣＩＣ解离后的Ａｇ和Ａｂ，均显示满意的特异性和敏感性；用抗ＳＥＡ－ＰｃＡｂ与抗ＳＥＡ－ＭｃＡｂ对比检测ＮＦ－ＣＡｇ时，显示相似的检测效果。     

弓浆虫间接血凝试验

弓浆虫病的血清学诊断方法,包括间接血凝试验(IHA)、染色试验(DT)和近年来应用的乳胶凝集试验(LA)。间接血凝试验由英国 Wellcome 公司改进使用乌红细胞作为致敏红细胞后,大大提高了该试验的实用价值。本文作者采用了改进后的间接血凝试验,对244例弓浆虫病等患者的血清,以及实验感染动物的血清进行了检测,并与染色试验和乳胶凝集试验作了对比,考核观察了弓浆虫间接血凝试验的可靠性、稳定性和影     

固相放射免疫(SPRIA)在恙虫病立克次体血清学检测的研究

为了改进和完善恙虫病血清学诊断方法,提高血清学诊断的敏感性,本文将SPRIA运用于小鼠感染血清和流行区人群血清抗体的检测,并与ELISA和IFA进行了比较。从实验结果来看,SPRIA具有能够较早地检出血清中微量抗体、阳性检出率高、滴度高,灵敏度和特异性均较好等优点,可能适用于恙虫病血清学检测。     

ELISA一步法检测乙型肝炎表面抗原假阴性分析

乙型肝炎病毒五项标志物检测,自ELISA一步法试剂盒问世以来,由于具有快速、简便等优点倍受检验人员的欢迎,同时由于步骤的简化和时间的缩短,也出现了一定的弊端,给乙型肝炎的诊断和治疗带来一定困难。本文对40份HBeAg、抗-HBc阳性,HBsAg阴性的标本,按不同倍数稀释后,检测HBsAg,所得阳性结果出现明显差异。 材料与方法 血清40份,取自我院住院和门诊患者,男38例,女2例。ELISA一步法试剂盒购自上海,按产品说明书操作。 结 果40份高浓度的HBsAg未稀释血清检测,HBsAg均阴性,而1:5稀释后阳性34份(85％),1:     

过碘酸钠氧化可溶性虫卵抗原ELISA诊断血吸虫病的研究

目的改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法应用过碘酸钠(sodiumPerodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行比较。结果分别用两种方法检测患者血清,其中慢性血吸虫病64例、华支睾吸虫病34例、卫氏并殖吸虫病33例、囊尾蚴病36例,检测健康人血清119例。SP-SEA-ELISA特异性为99.2％,高于SEA-ELISA,敏感性为98.4％,与SEA-ELISA比较无明显降低。用SP-SEA-ELISA及SEA-ELISA检测治疗后12个月的慢性血吸虫病患者血清,阴性率为89.0％,明显优于SEA-ELISA(42.1％)。结论过碘酸钠处理SEA,可提高免疫诊断特异性,降低交叉反应,有一定的疗效考核价值。     

血清Ca影响测定血清ALT结果的观察

目的了解生化分析仪测定血清Ca是否对测定血清ALT结果有影响，从而改进测定策略，保证结果的准确性。方法测定血清Ca后，再用定值血清测定ALT（检测组）与单独测ALT（对照组）作比较，再设定避免试剂针和试剂交叉污染的方法以及改变测定顺序对观察结果的影响。结果检测组ALT为92．64u／L，对照组ALT为100．16u／L，两者比较差异有统计学意义，试剂针和试剂均存在交叉污染现象，影响实验结果，改变实验顺序，可增强结果的准确性。结论适当改变项目的分析顺序和设定避免交叉污染的程序。     

鼠疫间接血凝微量检测技术的改进与应用

目的 建立一种简便的鼠疫血清学间接血凝微量法.方法 以常规鼠疫间接血凝试验试管法和微量法为基础进行改进.结果 改进后的鼠疫间接血凝试验微量法无论在实验室,还是现场应用结果均与试管法一致,但从操作上更为简便、快速,结果判定客观清晰、易于质控,每次检测血清用量仅10μL,试剂耗材节省.结论 改进后的鼠疫血清学间接血凝微量法可替代常规鼠疫间接血凝试验试管法和微量法.     

日本血吸虫感染兔唾液中循环抗体检测的可行性研究

目的： 探索唾液作为检测日本血吸虫循环抗体样本的可行性。方法： 建立血吸虫兔感染模型, 收集感染后不同时期、再感染及治疗后不同时期的唾液和血清, 用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测其中的循环抗体及其效价, 并将检测结果加以比较。结果： 唾液与血清样本检测的敏感性分别为９４７ ％ 与１００ ％ , 经χ２ 检验, 两者间差别无显著性意义。唾液与血清样本检测的特异性均为９４７ ％ , 两者一致。结论： 唾液作为样本可用于日本血吸虫循环抗体的检测。     

检测IgG_4诊断班氏丝虫感染实验探讨

用ELISA方法检测丝虫病患者血清IgG_4抗体,具有较高的特异性和敏感性。为进一步探讨该方法在丝虫病诊断与检测中的应用价值,本文对实验方法及材料作了一些改进,取得了较好的效果。报告如下。一、材料和方法一、试验对象:经血检确诊的班氏微丝蚴血症者血清87份,采自安徽省霍山县;治愈十余年的原班氏微丝蚴血症者血清60份,采自山东省滕州市;班氏丝虫病流行区健康对照血清(历年来血检微丝蚴均为阴性)55份,采自山东省平邑县;阴性对照血清及肠道蠕虫感染(钩、蛔、鞭虫)血清均采自山东省非丝虫流行区的长     

血清前白蛋白检测对肺结核病中的临床应用

目的探讨检测血清前白蛋白(PA)在肺结核病中的临床应用价值。方法采用免疫透射比浊法分别检测310例健康体检者和287例肺结核病人治疗前后血清PA及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)。结果在肺结核病人治疗前与健康体检者的血清PA检测结果相比较无显著性差异(P>0.05);经抗结核治疗后血清PA的检测结果降低(P<0.05),尤其随着疗程的延长血清PA水平降低更为显著(P<0.01);在抗结核治疗早期血清PA的阳性率为87%,高于ALT和AST的阳性率(34%)。结论血清PA检测可作为抗结核治疗后的常规肝功能指标,尤其适用于抗结核治疗后肝功能早期损害程度的判断。     

血液lncRNA 00707检测在胃癌辅助诊断中的临床价值

目的 探讨外周血液中长链非编码RNA(lncRNA 00707)和癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)检测在胃癌病人中的临床价值。方法 收集经病理确诊为胃癌的病人血清40例,以及同期健康体检者血清标本40例。采用基于实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法检测血清lncRNA 00707的相对表达量,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估血清lncRNA 00707、CEA及CA19-9等指标单独及联合检测对胃癌的诊断效能。结果 RT-qPCR检测lncRNA 00707表达的方法具有较高的重复性和稳定性。胃癌初诊病人血清lncRNA 00707明显高于健康体检者,且lncRNA 00707与CEA联合检测可以提高胃癌的诊断效能。胃癌病人术后血清lncRNA 00707表达水平下降。结论 初诊胃癌病人血清lncRNA 00707的表达水平显著上调,检测血清lncRNA 00707水平可辅助诊断胃癌,有望成为胃癌诊断与治疗的新靶点。     

抗细粒棘球蚴B抗原人源单链可变区抗体临床诊断价值的初步研究

目的评价人源单链可变区抗体(ScFv)诊断细粒棘球蚴病的临床价值.方法用Western-blot检测ScFv识别的抗原表位,并检测该抗体与包虫病病人囊液、血清中循环抗原的结合,与其它肝占位疾病患者血清、正常人血清的交叉反应.结果 ScFv识别囊液抗原位点单一,特异性优于多克隆抗体,交叉反应低,但检测囊液及血清循环抗原的敏感性低于多克隆抗体.结论对临床使用ScFv诊断进行了初步尝试,直接ELISA法检出率不高,应改进为双抗体夹心法或多种抗体铺底捕获法来检测循环抗原.