细胞凋亡与心脏发育关系的研究进展

心脏的发育是原始心源性细胞分化、迁移,多细胞组合的一个精确、协调一致的过程。此变化过程伴随着细胞的凋亡,并受一系列基因的调控。若基因失调控,将引起凋亡异常,结果将导致胚胎心脏异常发育,甚至致畸。通过研究基因表达对细胞凋亡的影响,探讨细胞凋亡与胚胎心脏发育间的关系及影响,阐明胚胎心脏发育过程中的相关机制,能为临床心脏疾病的诊治提供理论基础。     

不同发育阶段人胚胎脊髓中细胞凋亡的表达及变化

目的:研究人胚胎脊髓生长发育过程中细胞凋亡的变化趋势.方法:采用TUNEL法标记检测从3周至8个月不同胚胎龄段脊髓细胞凋亡的变化规律.结果:3周在神经管上皮即可见到密集的凋亡细胞,5、6周基板、翼板形成后即可在其内见到凋亡细胞,而边缘层内的凋亡细胞出现时间较其他部位晚,9周才可见到,中央管神经上皮的凋亡细胞高峰出现时间较早,5～6周达高峰,3个月后趋于稳定,而腹角内凋亡细胞高峰出现时间在6周,背角内凋亡细胞高峰出现时间为11周,其后随着脊髓的发育,凋亡逐渐减少.结论:脊髓不同部位细胞凋亡出现时间和达到高峰的时间均不同,提示在脊髓的不同部位凋亡并不同步.     

大鼠急性心肌梗死后的心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的变化

目的： 观察大鼠急性心肌梗死（AMI）后的心肌细胞凋亡和caspase-3、Bcl-2和Bax表达的变化。 方法: 105只雌性SD大鼠，随机取78只结扎左冠状动脉建立AMI模型，24 h存活43只作为心肌梗死组（MI组）；另27只设为假手术组（S组）；两组再按观察时点随机分为48 h和4周两亚组，即：MI 48 h（n=11）和MI 4周（n=13）组，S48 h（n=10）和S4周（n=10）组。末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术（TUNEL）和DNA凝胶电泳检测心肌细胞凋亡。免疫组化方法和Western blotting检测caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。 结果： MI 48 h组动脉收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均压（MAP）、左心室收缩压（LVSP）和左心室内压最大上升下降速率（±dp/dt）均显著低于S组（P<0.05, P<0.01），左心室舒张末压（LVEDP）显著高于S组（P<0.05）；MI 4周组除SBP、DBP和MAP无显著差异（均P>0.05）外，上述其它指标的变化与MI 48 h组相同，且LVEDP升高更为显著（P<0.01）；MI 48 h和4周两组梗死/疤痕区、梗死边缘区和非梗死区的心肌细胞凋亡指数均显著升高P<0.05,P<0.01），心肌细胞中“凋亡执行因子”caspase-3和“凋亡促进基因”Bax的表达亦均显著增高（P<0.05,P<0.01），而“凋亡抑制基因”Bcl-2仅在MI 48 h组梗死区心肌细胞中表达增加，“抑制凋亡复合基因”Bcl-2/Bax的比值仅在MI 48 h组降低。 结论： 大鼠AMI后，梗死区及其边缘区和非梗死区均有心肌细胞凋亡发生，伴“凋亡执行因子”caspase-3和“凋亡促进基因”Bax的表达增加；AMI早期，“凋亡抑制基因”Bcl-2在梗死区表达增加，但“抑制凋亡复合基因”Bcl-2/Bax的比值下降。     

糖尿病心肌病变过程中心肌细胞凋亡的变化及意义

目的观察糖尿病大鼠心肌病变过程中是否存在心肌细胞凋亡，探讨细胞凋亡在糖尿病心肌病变中的作用及意义。方法建立糖尿病大鼠模型．分别饲养12周及24周．采用核苷酸末端转移酶介导DUTP缺口翻译法（TUNEL）及透射电子显微镜技术，检测糖尿病大鼠心肌病变过程中左室心肌的凋亡细胞。结果STZ糖尿病大鼠12周时出现心功能异常并可见凋亡的心肌细胞．随病变的加重，24周时凋亡细胞数目明显增多：透射电镜检查，糖尿病大鼠左室心肌组织中亦可见凋亡的心肌细胞（具有凋亡形态学特征）。结论糖尿病心肌病变过程中存在心肌细胞凋亡且有加速趋势．心肌细胞凋亡可能是导致糖尿病心脏功能障碍的重要原因之一。     

人类胚胎心脏体外培养成功

据报道 :沈阳市妇婴医院生殖中心科研人员培养的人类胚胎心脏已经成活 34d。这将为细胞遗传学、分子生物学、组织工程、器官移植和保存提供了更好的研究对象。此成活的心脏能自律收缩 ,目前心房、心室频率同步为 6 0次 /分～ 80次 /分。人们希望将来能对心血管疾病研究提供新的成果。人类胚胎心脏体外培养成功     

大鼠脑缺血过程中神经细胞死亡的研究

通过凝胶电泳及细胞死亡原位末端标记研究了大鼠全脑缺血时细胞凋亡。结果是在轻度缺血时细胞于２４ｈ出现凋亡，重度缺血时１２ｈ出现，高峰时间在４８－７２ｈ，凝胶电泳变化较ＩＳＥＬ异常出现晚，分别在２４ｈ及４８ｈ。重度缺血急性期以坏死为主，忱发性损害期则以细胞凋亡为主，轻度缺血在坏互表现不显著时，仍可见明显的凋亡细胞。结果表明：细胞凋亡参与脑缺血急性期及迟发性神经元损害，轻度缺血神经细胞损害以细胞凋良为主     

球囊损伤血管内皮后平滑肌细胞凋亡及相关基因表达 …

目的：探讨球囊损伤血管内皮后平滑肌细胞（ＳＭＣ）凋亡的机制。方法：采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学技术检测球囊损伤内皮后血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）凋亡及Ｂａｘ,Ｂｃｌ－２蛋白的变化,结果：球囊损伤内皮后第３ｄ,血管中层出现凋亡的ＳＭＣ;损伤后第７ｄ,内膜和中层ＳＭＣ凋亡率最高,凋亡的ＳＭＣ主要分布内膜层;以后爱渐降低,至损伤后第２８ｄ,仅内膜     

内质网应激在创伤致大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激(ERS)在创伤致大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:应用Noble-Collip创伤仪构建机械创伤SD大鼠模型,并将大鼠随机分为伪创伤组(n=6),创伤组(创伤后0 h、3 h、6 h、12 h和24 h各时点n=6)和创伤+ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)组(n=6)。用试剂盒检测大鼠心肌组织凋亡蛋白caspase-3活性;用Western blot检测大鼠心肌组织caspase-3的活化水平,ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和需肌醇酶1α(IRE1α)的表达或磷酸化水平,以及ERS相关凋亡分子C/EBP同源蛋白(CHOP)和caspase-12的表达或活化水平。结果:与伪创伤组相比,创伤组大鼠心肌组织caspase-3活性增强,cleaved caspase-3、GRP78、ATF6、磷酸化PERK、磷酸化IRE1α、CHOP和cleaved caspase-12蛋白水平均显著升高(P<0. 05或P<0. 01);而给予创伤大鼠4-PBA处理后,caspase-3活性...     

胚胎心脏显微解剖及扫描电镜标本的制作方法

胚胎心脏微小,组织脆弱,要观察其内部纪构的变化较为困难,下面结合找们近几年来在研究胚胎心脏发生过程中所取得的一些经验,介绍胚胎心脏显微解剖及扫描电镜标本的制作方法。     

胚胎及新生大鼠胃肠道5—羟色胺及胃泌青免疫反应细胞的形态学研究

本研究用免疫组织ＰＡＰ法，较系统地了５－羟色胺、胃泌素免疫反应细胞在胚胎及新生大鼠胃肠道的个体发生及分布。结果表明：５－羟色胺免疫反应细胞最早见于第１９ｄ胚胎的小肠各段，胚胎第２１ｄ新生期分布于胃肠各段。５－羟色胺免疫反应细胞形态多样，胚胎期胃肠道中胃泌素免疫反应细胞也始见于第１９ｄ胚胎鼠胃的小肠。胚胎第２１ｄ和新生期。胃泌素免疫反应细胞渐多，但也仅见于胃和小肠各段。结肠和直肠中未见胃泌素免疫反应     

哺乳动物胚胎植入前发育的基因表达

本文总结了哺乳动物植入前发育过程中特异基因的表达。对小鼠来说，在４－细胞期大部分检测的特异基因已经开始表达，有部分在２－细胞期就已开始表达。基因转录一旦激活将连续地进行下去，直至囊胚期，在此过程中基因转录产物ｍＲＮＡ不断累积。由于大部分基因表达的时间与３个遗传学形态转变期（紧贴期、成腔期、扩张囊胚期）的时间之间没有明确的相关，因此认为遗传形态改变的调控是在转录和转译的下游进行的。     

RCS大鼠视网膜感光细胞的凋亡

为研究遗传性视网膜变性中感光细胞组织结构的时程变化及调亡，对ＲＣＳ大鼠脑ＳＤ大鼠视网膜进行光镜观察和凋亡细胞ＴＵＮＥＬ检测。结果表明，与同龄ＳＤ大鼠相比，ＲＣＳ大鼠视网膜感光细胞从出生后１５ｄ开始，出现外节膜盘堆积；２０ｄ时，内节排列紊乱，消失，３０ｄ，细胞核固缩，细胞消失，到出生后６０ｄ，仅少许感光细胞保留；１００ｄ，几乎所有感光细胞消失。ＴＵＮＥＬ检测，从出生后２５ｄ开始，ＲＣＳ大鼠视网膜有Ｔ     

运动训练通过诱导自噬、抑制凋亡改善老龄大鼠心脏功能

 目的：观察梯度运动对老龄大鼠心肌细胞自噬及凋亡的影响,探讨运动训练提高老龄大鼠心脏功能的机制。方法：实验分为3组,青年组(young)、老年组(old)和老年运动组（old+Ex）。超声心动图记录大鼠心脏功能,透射电镜观察心肌细胞超微结构变化、自噬体的形成以及线粒体形态学的改变,Westernblotting检测心肌组织自噬相关蛋白5（Atg5）、自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及心肌线粒体细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达,TUNEL方法检测心肌细胞凋亡,分光光度法检测钙诱导的线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果: （1）与young组比较,透射电镜下可见old组大鼠心肌肌原纤维排列不整齐,线粒体基质疏松,线粒体膜有破裂,肌丝间有大量脂褐素颗粒沉积;心肌组织中Beclin 1与Atg5蛋白表达降低,LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低,线粒体Cyt C表达下降,细胞凋亡指数增加,mPTP开放数目增加,左心室收缩末期与舒张末期直径明显增大,左心室射血分数与缩短分数降低(P＜0.05或P＜0.01)。（2）与old组比较,old+Ex组大鼠心肌超微结构观察可见肌节结构清晰,线粒体基质致密,数目增多,自噬体形成增多,脂褐素颗粒沉积明显减少;并且心肌组织Beclin 1与Atg5蛋白表达增加,LC3 I向LC3 II转换增加,细胞凋亡指数减少,mPTP开放数目减少,心肌线粒体Cyt C表达上调,左室功能有明显改善（P＜0.05或P＜0.01）。结论：运动训练通过上调老龄大鼠心肌细胞自噬,抑制细胞凋亡,改善老龄大鼠心脏功能。     

放线菌酮诱导大鼠脾细胞凋亡的电镜观察

利用透射电镜观察了放线菌酮体内诱导大鼠脾细胞凋亡的形态学变化，结果显示，腹腔注射放线菌酮４小时后，大鼠脾细胞发生凋亡，凋亡脾细胞核和胞质发生一系列形态学变化。主要表现为胞核染色质浓缩，重排，呈不同形态，多数凋亡脾细胞的粗面内质网增殖，凋亡小体形成，其线粒体也大量增加，或单个分布或团聚，肿胀，空泡化。结果提示，凋亡脾细胞的主要细胞器主动参与凋亡过程。     

睡眠剥夺促进大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达

探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化,应用原位杂交、Western blot法检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2,bax mRNA,MAPKs表达的变化。结果表明：快眼动睡眠剥夺大鼠海马CAl,CA3区神经元阳性凋亡细胞数明显增多,bcl-2,bax mRNA表达明显增强,ERK活性降低,JNK蛋白表达量较对照组明显增高。提示睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡。与凋亡相关的bcl-2,bax mRNA基因表达及MAPKs活性的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

大鼠胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞是来源于早期胚胎内细胞团或着床后胚原始生殖细胞的一类未分化的全能性（多能性）干细胞，具有无限增殖和全向分化的能力。ES细胞能够自我更新和多向分化的生物学特性具有重要的医学价值，在基因治疗、组织工程学、药学研究等许多领域都具有广泛的应用前景。至今为止人类已建立了数百个小鼠的ES细胞系。但相对大鼠而言．由于其ES细胞在体外培养时较易发生分化，故建系较难。Iannaccone等从大鼠PVG近交系大鼠的囊胚分离克隆了大鼠ES细胞系-RESC-01。本文主要综述了目前分离、培养大鼠胚胎干细胞的技术进展，我实验小组在预实验中得到的结果及面临的问题，讨论其在临床工作中的应用前景。     

人胚胎大脑海马发育过程中凋亡神经元超微结构观察

本文借助电子显微镜技术对 4月胎龄组及 6月胎龄组水囊引产胎儿海马中段部位的凋亡神经元超微结构进行观察、拍照 ,并对结果进行了分析讨论。结果显示 :两组对象中均可见凋亡神经元 ,所见的凋亡神经元的超微结构变化基本相同 ,即细胞核内有明显的染色质边集和凝结成块的现象 ,并可见核膜皱缩和扭曲。另外 ,6月组凋亡细胞的结构变化较 4月组更为明显。在 6月组细胞质内和核内均有小体出现 ,其他细胞器无显著变化。从而更进一步说明在胚胎海马发育中存在着神经元不同性质的死亡现象 -即正常死亡和凋亡。而且提出 6月组显现出更为明显的凋亡神经元形态变化     

细胞凋亡相关基因表达谱与大鼠再生肝的细胞凋亡关系

目的在基因转录水平探讨细胞凋亡相关途径对大鼠肝再生的作用。方法采用大鼠2/3部分肝切除(PH)方法,制备再生肝模型,同时设对照手术(假手术)。用查阅网站资料和相关论文等方法获得凋亡相关基因,用大鼠基因230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,通过比较真、假手术中上述基因的表达差异性确定肝再生相关基因。结果细胞凋亡相关基因中,252个基因与肝再生相关。在肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和结构功能重建期(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为81、231、55和16,总表达的基因数为161、100、733和192,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共上调795次,下调291次,表明肝再生中大部分基因表达增强。它们的表达模式分为35种,表明肝再生中细胞凋亡相关基因的表达情况多样和复杂。结论15条细胞凋亡途径参与肝再生调控。