狼疮静颗粒对自发性狼疮小鼠肾狼疮样改变抑制作用的实验研究

目的 探讨中药狼疮静颗粒对自发性狼疮(NZB/NZW F1)小鼠狼疮样改变的抑制作用及其机制。方法 应用狼疮静颗粒、泼尼松及狼疮静合泼尼松3组药物,对3月龄雌性BW狼疮模型小鼠进行干预治疗6～12周,观察对各组小鼠病情发展动态变化、CD4^+、CD8^+细胞和CD54表达改变及对肾小球病理变化的影响。结果 中西药物均能改善系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠狼疮样改变的部分症状和血浆CD4^+、CD8^+细胞分布,抑制血清细胞黏附分子-1(ICAM-1)含量升高和外周血淋巴细胞表面CD54的高表达,抑制肾小球萎缩和系膜细胞的增殖,以狼疮静结合泼尼松组效果明显为优。结论 狼疮静颗粒能有效控制并改善模型小鼠狼疮样发病及进程,并能调节模型小鼠细胞免疫功能,抑制过亢的免疫反应,对狼疮样肾炎的病理变化有改善作用,结合西药后可协同发挥疗效并显示出疗效优势。     

狼疮静颗粒对狼疮样小鼠外周血CD4+、CD8+及CD54表达的影响

目的 探讨狼疮静颗粒不同剂量对自发性狼疮小鼠部分免疫调节作用机制。方法 运用狼疮静颗粒3种不同剂量，对3月龄雌性NZB／NzW F1狼疮模型小鼠进行干预治疗6周，观察其对各组小鼠CD4^ 、CD8^ 细胞及CD54表达的影响。结果 中药狼疮静不同剂量有升高模型小鼠外周血CD4^ 、CD8^ 细胞的倾向，能降低血清CD54含量，抑制血浆淋巴细胞表面及单核细胞表面CD54的高表达，其作用以中、高剂量明显。结论 狼疮静颗粒能改善和调节自发性狼疮小鼠细胞免疫功能，抑制过亢的免疫反应。     

中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠外周血CD4、CD8、CD19细胞的影响

目的：研究中药狼疮静颗粒对BXSB狼疮性小鼠外周血CD4、CD8、CD19细胞分布的影响，探讨其免疫调节机理。方法：运用微量全血免疫双荧光染色法及流式细胞仪进行检测。结果：中药狼疮静颗粒可升高BXSB狼疮鼠外周血CD4、CD8细胞及降低外周血CD19细胞分布。结论：中药狼疮静颗粒通过调节T淋巴细胞功能紊乱，降低B细胞分布，抑制了B细胞的异常增生活化，使自身抗体产生减少而达到治疗SLE的目的。     

狼疮静颗粒对NZB/W F1小鼠肾脏组织CD54表达的影响

目的:观察狼疮静颗粒对NZB/WF1小鼠肾脏组织细胞黏附分子-1(CD54)表达的影响,探讨中药狼疮静颗粒治疗活动性SLE的免疫调节机理,进而了解CD54在NZB/WF1狼疮鼠发病机制中的作用。方法:选用先天发病的自发性狼疮模型NZB/WF1小鼠,分别给予中、西药物灌胃治疗,采用免疫组织化学法观察肾脏组织CD54的表达。结果:除狼疮静小剂量组外,各给药组均能明显抑制CD54着色面积和相对着色面积的升高。狼疮静大剂量组的抑制作用优于狼疮静小剂量组,存在量效依存关系;中西药结合组优于狼疮静中剂量组。结论:狼疮静颗粒具有类激素样或抗黏附分子样作用,结合西药后可协同发挥疗效并显示出疗效优势。     

滋阴清热方对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠CD4~＋CD25~＋T细胞亚群及Foxp3表达的影响

目的：探讨滋阴清热方对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠CD4＋CD25＋T细胞亚群及Foxp3表达的影响。方法：选用自发性系统性红斑狼疮（SLE）模型MRL/lpr小鼠40只,随机平均分为4组,即模型组、滋阴狼疮方治疗组（中药组）、强的松治疗组（西药组）、滋阴清热复方＋强的松治疗组（中西药组）。另选用昆明小鼠10只作为对照组。连续用药10周后,流式细胞仪分析外周血CD4＋CD25＋T细胞亚群的百分比及CD4＋CD25highT细胞与CD4＋CD25intT细胞的比率,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA的表达。结果：各组外周血CD4＋CD25＋T细胞、CD4＋CD25highT细胞和CD4＋CD25intT细胞占CD4＋T细胞的百分比组间比较,无统计学差异（P〉0.05）,而CD4＋CD25highT细胞与CD4＋CD25intT细胞的比率和T细胞Foxp3 mRNA表达水平,模型组与对照组比较,明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,各治疗组均高于模型组（P〈0.05）,尤其是中西医结合组（P〈0.01）。结论：中药滋阴狼疮方可上调MRL/lpr狼疮鼠Foxp3 mRNA表达水平,从而调节CD4＋CD25＋T细胞亚群比率,发挥对SLE的免疫治疗作用。     

狼疮方对体外扩增小鼠CD4^＋CD（25）^＋调节性T细胞的影响

目的：狼疮方对体外扩增小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞数量的影响。方法：免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4＋CD2＋5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4＋CD25＋T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4＋CD25＋调节性T细胞;用CFSE法检测CD4＋CD25＋调节性T细胞体外抑制CD4＋CD2-5T细胞的增殖情况。结果：经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4＋CD25＋T细胞数量明显升高,扩增后的CD4＋CD25＋T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4＋CD25＋T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异（P〈0.05）。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4＋CD2＋5T细胞和扩增的CD4＋CD25＋T细胞对CD4＋CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论：狼疮方有助于提高小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4＋CD25＋调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

青蒿琥酯片对狼疮样模型小鼠外周血淋巴细胞表面CD4、CD8、CD54表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯片不同剂量对狼疮样小鼠部分免疫调节作用机制。方法:运用不同剂量的青蒿琥酯对8~10周龄的狼疮样小鼠进行干预治疗8 d,观察其对狼疮样小鼠外周血淋巴细胞表面CD4、CD8、CD54表达的影响。结果:青蒿琥酯片对狼疮样小鼠外周血CD4、CD8的表达有升高的作用,对狼疮样小鼠外周血CD54的高表达有抑制作用,以高剂量组最为明显。结论:青蒿琥酯片可调节狼疮样小鼠的细胞免疫功能,抑制狼疮样小鼠的过度免疫反应。     

中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡的影响

目的：研究中药狼疮静颗粒对BXSB狼疮性小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理。方法：运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡。结果：雄性BXSB小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡加速,中药狼疮静颗粒可明显抑制BXSB小鼠脾脏CD4^+T、CD19^+B细胞凋亡率。结论：中药狼疮静颗粒通过抑制T、B淋巴细胞过度凋亡,可能阻抑了过量核酸抗原释放,从而抑制了B细胞的异常增生活化,使自身抗体产生减少而达到治疗系统性红斑狼疮目的。     

乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠CD4^＋／CD8^及Fas、FasL蛋白表达的实验研究

目的：观察乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠CD4^＋／CD8^及Fas、FasL蛋白表达的影响。方法：采用雌性BALB／c小鼠皮下多点注射小鼠透明带多肽,建立免疫性卵巢早衰模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、己烯雌酚组、六味地黄丸组、乌鳖颗粒大、中、小剂量组。另设正常组和佐剂组,共灌胃给药4周。实验末应用免疫组化法测定脾脏CD4^＋、CD8^,计算CD4^＋／CD8^的比值。应用免疫组化法测定卵巢Fas、FasL蛋白的表达。结果：模型组小鼠脾脏CD4^＋／CD8^比值明显高于正常组和佐剂组（P〈0．05）。乌鳖颗粒各剂量组小鼠脾脏CD4^＋／CD8^比值明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）。模型组小鼠卵巢Fas蛋白表达低于正常组,Fas—L蛋白表达明显高于正常组,卵巢Fas、Fas—L蛋白表达和Fas／Fas—L比值与正常组比较具有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒大剂量组和中剂量组小鼠Fas蛋白表达明显高于模型组,（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒各剂量组Fas—L蛋白表达明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）。乌鳖颗粒大剂量组、中剂量组小鼠Fas／Fas—L比值与模型组比较具有显著性差异（P〈0．01）。结论：乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠具有调节CD4^＋／CD8^比值和Fas／FasL系统的作用。     

肺炎合剂对小鼠CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群调节作用的研究

目的 研究肺炎合剂对CD4^ 、CD8^ 细胞百分数的调节作用。方法：建立免疫低下模型，分别检侧CD4^ 、CD8^ 细胞百分数及CD4^ ／CD8^ 比值的变化。结果：肺炎合剂能显著提高免疫功能低下小鼠CD4^ 、CD8^ 细胞百分比，调整CD4^ ／CD8^ 比值。结论：肺炎合剂有提高和保护CD4^ 、CD8^ 细胞的作用。     

麦门冬汤对BALB／C硬皮病小鼠CD4＋、CD8＋T细胞及腹腔巨噬细胞活力的影响

目的：观察麦门冬汤对BALB／C硬皮病小鼠外周血CD4＋、CD8＋T细胞及腹腔巨噬细胞活力的影响。方法：选8周龄60只BALB／C小鼠,实验前剃去小鼠背部中央区被毛,并随机分为5组,每组12只,分别为正常对照组（正常组）、模型对照纽（模型组）、麦门冬汤大剂量组、麦门冬汤中剂量组、麦门冬汤小剂量组。除正常组外,其他组用博莱霉素（BLM）制作硬皮病模型。使用麦门冬汤大、中、小剂量治疗3周。眼球采血,用流式细胞仪采用单平台操作法检测CD4＋、CD8＋T细胞。进行腹腔灌洗并收集灌洗液,用预冷RP—MI-1640培养液洗涤细胞3次,每次4lCl500rpm离心10min,去上清液,再用预冷的适量RPMI-1640培养液悬浮细胞。用移液器取100pL的细胞悬液,加100pL的胎盼蓝与800μL的RPMI一1640放入1．5mL的离心管中染色,计算腹腔巨噬细胞活力。结果：麦门冬汤小剂量组CD4＋T细胞的含量高于模型组（P〈0．01）i大、中剂量组CD8＋T细胞含量高于模型组（分别为P〈0．01和P〈0．05）。中、小剂量组腹腔巨噬细胞活力均高于模型组（P〈0．01）。结论：麦门冬汤能提高CD4＋、CD8＋T细胞水平,提高模型小鼠腹腔巨噬细胞的活力。这可能是麦门冬汤对SSc模型小鼠发挥作用的机制之一。     

狼疮方对慢性GVHD狼疮样肾炎小鼠模型的作用

目的探讨狼疮方治疗狼疮肾炎的有效性及作用机理。方法采用慢性移植物抗宿主病(GVHD)狼疮样小鼠模型,经狼疮方、强的松治疗后分别检测血清抗ds-DNA抗体、脾细胞CD40表达及肾脏功能,并观察形态学变化。结果(1)血清抗dsDNA抗体为模型组与正常对照组比较差异有显著性(P＜0．01)；狼疮方组及强的松组与正常对照组比较差异无显著性(P＞0．05)。(2)脾细胞CD40表达的平均荧光强度及阳性细胞百分率模型组均显著高于正常对照组(P＜0．05或P＜0．01)；狼疮方组及强的松组与正常对照组比较差异无显著性。(3)肾脏病理学半定量分析显示各治疗组肾小管间质损伤总积分和肾小球硬化指数均明显低于模型组(P＜0．05或P＜0．01),病变较模型组均显著减轻。结论狼疮方具有一定的免疫抑制作用,可能通过干扰CD40信号,减少自身抗体产生,从而对慢性GVHD狼疮样肾炎小鼠模型具有一定的防治作用。     

内异消癥汤对子宫内膜异位症大鼠CD4^＋及CD8^＋ T细胞表达的影响

目的探讨内异消癥汤对子宫内膜异位症模型大鼠CD4^＋、CD8^＋T细胞表达的影响。方法将47只大鼠随机分为对照组,模型组和内异消癥汤高、低剂量组,除对照组外均采用大鼠子宫组织自体移植手术制作子宫内膜异位症模型,灌胃给药4周后用免疫组化方法检测大鼠子宫内膜异位移植物局部CD4^＋、CD8^＋T细胞表达。结果与模型组相比,低剂量组CD4^＋表达显著降低（P〈0.05）,高、低剂量组CD8^＋的表达强度降低更显著（P〈0.01）;高、低剂量组的CD4^＋/CD8^＋比值较模型组增高,低剂量组比值增高尤为明显;高、低剂量组之间CD4^＋、CD8^＋表达比较无显著差异（P〉0.05）。结论内异消癥汤能改善大鼠子宫内膜异位移植物局部组织免疫学变化,降低CD4^＋及CD8^＋表达,并有提高CD4^＋/CD8^＋比值的趋势,可能通过此途径达到治疗效果。     

青蒿琥酯片对狼疮样小鼠外周血淋巴细胞表面CD54表达的实验研究

目的：探讨青蒿琥酯片不同剂量对狼疮样小鼠可能的免疫调节作用机制。方法：运用不同剂量的青蒿琥酯片对狼疮样小鼠进行干预治疗8d，观察其对狼疮样小鼠外周血淋巴细胞表面CD54表达的影响。结果：青蒿琥酯片不同剂量有抑制狼疮样小鼠外周血CD54高表达的作用，以高剂量组最为明显。结论：青蒿琥酯片调节狼疮样小鼠的细胞免疫功能，可能与抑制狼疮样小鼠的过度的免疫反应有关。     

活血化瘀方对小鼠Hepa1-6肝癌转移和生长的作用及机制初探

目的:探讨活血化瘀方抑制小鼠Hepa1-6肝癌转移和生长的作用及其机制。方法:转染萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase gene)的C57BL/6小鼠肝癌Hepa1-6细胞,经筛选获得稳定表达GFP绿色荧光蛋白及荧光素酶基因的小鼠肝癌细胞株Hepa1-6 (luc2/GFP)。采用尾静脉注射及右侧腹部皮下注射的方法分别建立尾静脉肝癌转移模型及皮下肿瘤模型,并分别给予活血化瘀方52、104 g/kg组、索拉菲尼30 mg/kg组。造模后进行小动物成像荧光观测,16天后取皮下肿瘤组织,实时荧光定量PCR (q-PCR)法检测程序性死亡受体-1(PD-1)、白细胞介素-8 (IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;免疫组化(IHC)法检测CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、血小板-内皮细胞粘附分子标记的微血管密度(CD31-MVD)。结果:活血化瘀方能抑制小鼠Hepa1-6肝癌的转移和生长,与模型组比较,活血化瘀方52 g/kg、104 g/kg治疗组可使PD-1、IL-8、TNF-αmRNA的表达明显下调;同时上调CD4~+T蛋白表达、升高CD4~+T/CD8~+T比值,下调CD8~+T、CD31MVD蛋白的表达。结论:活血化瘀方可能是通过调控CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、PD-1、CD31、IL-8、TNF-α等多靶标来抑制小鼠Hepa1-6肝癌的转移和生长。     

扶正中药复方对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠免疫器官和肠黏膜CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋的影响

目的：研究扶正中药复方对环磷酰胺所致免疫功能低下模型小鼠肠黏膜CD3^＋、CD4‘及CD8^＋的影响。方法：小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、香菇多糖片对照组及扶正中药复方大、中、小剂量组，混悬液灌胃给药，免疫组化法测定肠黏膜中的T淋巴细胞（CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋）表达水平。结果：模型对照组小鼠肠黏膜中的T淋巴细胞（CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋）水平出现低表达，与正常对照组比较，差别有统计学意义（P〈0．01）；中药复方可以显著提高环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠模型肠黏膜固有层中CD3^＋、CD4^＋及CD8^＋细胞数量，与模型对照组相比，差别有统计学意义（P〈0．01）。结论：环磷酰胺造成的免疫功能低下不仅抑制全身免疫系统，而且对肠黏膜免疫功能有较强的抑制作用，中药复方通过恢复或者增强环磷酰胺所致免疫功能低下模型小鼠肠黏膜免疫功能。     

狼疮方对体外扩增小鼠CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:狼疮方对体外扩增小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的影响。方法:免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4+CD2+5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞;用CFSE法检测CD4+CD25+调节性T细胞体外抑制CD4+CD2-5T细胞的增殖情况。结果:经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4+CD25+T细胞数量明显升高,扩增后的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4+CD25+T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异(P0.05)。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4+CD2+5T细胞和扩增的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论:狼疮方有助于提高小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

上感颗粒对病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群的影响

目的:观察上感颗粒对病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的影响,探讨其治疗病毒性上呼吸道感染的免疫调节作用。方法:ICR小鼠随机分为正常组、模型组、抗病毒口服液组、利巴韦林组和上感颗粒高、中、低剂量组,分别造模、给药后,观察小鼠肺组织CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。结果:抗病毒口服液组、利巴韦林组小鼠CD4+/CD8+水平降低,与模型组比较具有显著性差异;利巴韦林组CD4+和上感颗粒大剂量组CD4+、CD4+/CD8+水平明显降低,与模型组比较具有高度显著性差异。结论:上感颗粒可抑制病毒性上呼吸道感染小鼠肺组织中CD4+含量,提示其具有免疫调节作用。     

清肠栓对DSS诱导结肠炎小鼠脾CD4~+T细胞CD44、CD62L表达的影响

目的研究清肠栓对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠脾CD4+T细胞CD44、CD62L表达的影响,探讨其免疫调节机制。方法将129S3小鼠随机分为正常组(C组)、模型组(M组)、清肠栓组(QCS组)、美沙拉嗪组(5-ASA组)。除正常组饮用蒸馏水外,余组小鼠采用5%DSS自由饮用制备结肠炎小鼠模型,7天后正常组、模型组给予蒸馏水灌胃,清肠栓组、美沙拉嗪组给予相应药物灌胃7天后处死小鼠。观察指标包括小鼠的一般情况、疾病活动指数(DAI)评分、结肠指数及长度、结肠组织病理学改变及脾脏CD4+T淋巴细胞上CD44、CD62L的表达情况。结果与正常组比较,模型组DAI评分明显升高(P0.05);清肠栓组DAI评分较模型组下降(P0.05)。与正常组比较,模型组脾CD4+效应T细胞(CD4+CD44highCD62Llow)比例增高(P0.01)、脾CD4+记忆T细胞(CD4+CD44highCD62Lhigh)比例下降(P0.01)。与模型组比较,清肠栓组、美沙拉嗪组CD4+效应T细胞比例明显下降(P0.01);清肠栓组脾CD4+记忆T细胞比例较模型组明显升高(P0.01),较美沙拉嗪组亦升高(P0.05)。结论清肠栓可能是通过下调脾脏CD4+效应T细胞、上调CD4+记忆T细胞,从而达到改善溃疡性结肠炎症状的目的。     

狼疮静对NZB/NZW F1小鼠病情发展的动态观察

狼疮静颗粒是由补肾化毒中药组成 ,前期临床研究及部分疗效机理的实验研究已获肯定和证实〔1～ 3〕,为进一步研制和开发新药 ,并提供模型动物症状学改变的实验依据 ,我们运用狼疮静颗粒剂型 ,对 3～ 6月龄雌性 NZB/ NZWF1小鼠 (自发性狼疮小鼠 )显性发病的部分症状及病情变化情况进行了研究观察 ,现将结果总结报告如下。1　材料与方法1 .1　实验动物 :2 8只 3月龄雌性 NZB/ NZWF1小鼠由复旦大学实验动物科学部提供 (从美国 Jacsion实验室引种 ,SPF级环境下繁殖 F1代 )。1 .2　试验药物 :狼疮静颗粒 ,1 0 g/袋装 (南京中医药大学附属…