核糖核酸的聚丙烯酰胺制备电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳设备简单,操作方便,样品用量少,分辨能力高,是分离蛋白质、核酸大分子化合物的好方法。此技术除用于分析鉴定核酸及其酶促降解片断外,还可制备纯核酸制剂.制备核酸样品通常是直接从分离的凝胶中切下所需的区带,再从中抽提核酸。此法繁杂,回收率低.我们采用了一种简便的凝胶制备电泳装置,用以分离纯化4S、5S RNA和18S、28S RNA,结果比较满意。     

核糖核酸酶保护法MD-2探针的制备

目的 构建用于核糖核酸酶保护法的MD-2转录质粒并制备反义RNA探针。方法 PCR扩增目的片段，并定向亚克隆至pSP72质粒T7启动子下游的多克隆位点，以T7 RNA聚合酶转录合成反义RNA探针。结果 亚克隆插入的片段经测序、酶切鉴定，序列及方向完全正确，成功制备了用于的反义RNA探针。结论 成功地制备了用于核糖核酸酶保护法的MD-2转录模板和探针，为深入研究内毒素信号受体相关机制以及MD-2的基因表达创造了必要的条件。     

核糖核酸酶抑制因子的提纯及抗血清制备

核糖核酸酶抑制因子 (ＲｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＲＩ)是一种存在于胞浆中的酸性糖蛋白 ,分子量为50ｋＤａ。ＲＩ是核糖核酸酶 (ＲＮａｓｅ)的抑制剂 ,它与ＲＮａｓｅ紧密结合 ,形成马蹄形的立体结构。在ＲＩ的结构中 ,有 11对二硫键和 8个游离的巯基。巯基是ＲＩ的活性必需集团 ,巯基的氧化会导致ＲＩ的失活。作为ＲＮａｓｅ的抑制剂 ,ＲＩ在体外实验中可以保护ｍＲＮＡ免受ＲＮａｓｅ的降解。最近关于ＲＩ的研究又有新的报道 ,血管形成因子 (ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ)是ＲＮａｓｅ超家族的一员 ,ＲＩ可以与其结合 ,并抑制…     

重组大鼠α突触核蛋白的制备与鉴定

目的克隆编码大鼠α-突触核蛋白的cDNA,探讨α-突触核蛋白基因在原核细胞中的表达过程并制备基因重组型α-突触核蛋白。方法设计合成含适当酶切位点的DNA片段作为引物,采用RT-PCR法从Wistar大鼠脑总RNA中扩增编码α-突触核蛋白的cDNA并亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),使其表达以谷胱甘肽S转移酶(glutathione-S-transferase,GST)为标签的融合蛋白质。用凝血酶定点分解融合蛋白,再用谷胱甘肽-琼脂糖4B和Superdex S200纯化基因重组型α-突触核蛋白。结果核酸序列测定表明克隆的cDNA含420 bp编码140个氨基酸,重组质粒pGEX-raSYN在原核细胞中表达为可溶性组分并受IPTG诱导,纯化的目的蛋白质在SDS-PAGE上表现为单一条带,推测其相对分子质量约为18 000。每升细菌培养液可纯化目的蛋白质3 mg。Western blot分析结果表明纯化的目的蛋白质可以被抗α-突触核蛋白识别。结论大鼠α-突触核蛋白基因在原核细胞高效表达,可制备高纯度基因重组型大鼠α-突触核蛋白。     

大鼠肝纤维化模型中基质金属蛋白酶-2及其抑制物的表达

目的了解基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）及其组织型抑制剂（ＴＩＭＰ－２）在纤维化过程中的变化,分析它们在始动阶段的作用。方法用免疫组化和酶图法,在异种血清诱导的大鼠肝纤维化模型不同阶段,作肝细胞内ＭＭＰ－２、ＴＩＭＰ－２、酶降解底物Ⅳ型胶原（ＣｏｌⅣ）以及结蛋白（Ｄｍ）定位和半定量研究。结果实验鼠于４周末形成细胞间隔,８周末发展为肝纤维化,含细胞－纤维间隔或纤维间隔,１２、１６周仍为纤维间隔。酶图法表明４周末ＭＭＰ－２活性升高２．５倍左右,８周末仍高于对照鼠。免疫组化显示４周末ＭＭＰ－２阳性细胞数最多,连续切片观察ＭＭＰ－２与Ｄｍ阳性细胞（活化的肝星状细胞）几乎重叠。８周末阳性细胞数有所减少,１２周末明显减少。半定量变化趋势与酶图法一致。ＴＩＭＰ－２于８周末表达开始升高,１２周末达最高。２周末ＣｏｌⅣ表达开始上升,４周末达高峰,以后缓慢下降。结论肝纤维化早期ＭＭＰ－２活性增高,继而ＴＩＭＰ－２分泌过多,ＭＭＰ－２活性受抑,ＥＣＭ降解受阻,纤维化进一步发展。     

围生期孕妇D-二聚体、血浆组织因子及其抑制物检测的临床意义

目的探讨围生期孕妇血清D-二聚体、血浆组织因子（TF）及组织因子抑制物（TFPI）检测的临床意义。方法随机选取围生期孕妇116例（其中82例为健康妊娠女性,34例为妊高征孕妇）及非妊娠健康女性47例,分别作为正常围生期组、围生期妊高征组及正常对照组。采用免疫比浊法测定各组血清D-二聚体浓度,酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血浆TF及TFPI浓度,分析其对围生期孕妇的临床意义。结果正常围生期组及围生期妊高征组血清D-二聚体、TF及TFPI的浓度要明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。围生期妊高征组血清D-二聚体、TF及TFPI的浓度要明显高于正常围生期组,差异有统计学意义（P〈005）。结论对围生期孕妇血清D-二聚体、血浆TF及TFPI进行监测,有利于及时发现妊高征等妊娠并发症,对于预防弥散性血管内凝血的发生及治疗也具有重要意义。     

离体肝切除联合自体肝移植大鼠模型的建立

目的建立稳定的大鼠离体肝切除联合自体肝移植模型。方法采用门静脉、肝后下腔静脉单线连续缝合法、胆管支架重建法及无损伤切肝法等技术,建立SD大鼠的离体肝切除联合自体肝移植模型。结果大鼠无肝期(20.14±1.53)min。60例SD大鼠术后成活率91.7%,1周以上存活率80%。结论大鼠离体肝切除联合自体肝移植模型,成活率高,重复性好,可作为离体肝切除联合自体肝移植有关实验研究的可靠、稳定的动物模型。     

核糖核酸酶抑制因子的研究进展

核糖核酸酶抑制因子(RI)是一种存在于胞浆中的酸性糖蛋白,它广泛存在于哺乳动物的组织器官中,以人胎盘组织中含量最丰富。目前,对于RI的应用已越来越受到人们的关注。本文对近年来所研究的核糖核酸酶抑制因子的结构、功能、作用机制及其应用进行综述。     

核糖核酸酶L的功能研究进展

核糖核酸酶L（ribonuclease L,RNase L）属于2-5腺苷酸（2-′5′oligoadenylate,2-5A）系统,以往研究表明干扰素（interferon,IFN）抗病毒作用以及前列腺癌等多种疾病的发生都与RNase L有关,近期研究表明此酶有诱导凋亡的功能,这一功能是其控制病毒感染以及抵抗肿瘤作用的基础。关于RNase L功能的研究在国外已受到关注,但国内报道尚不多。本文就RNase L的结构及功能作一综述。     

人珠蛋白信使核糖核酸的制备及其体外翻译

本化以新生儿ABO血型不配溶血换得的血网织红细胞为材料,用酸—氯仿提取及Oligo(dT)纤维素亲和层析制备了人珠蛋白mRNA。直接酚提取适用于网织红细胞<30％情况,若以中期引产胎血为材料,则可先制成聚核蛋白体存于液氮至足量时再行酚提取。在变性条     

人类核糖核酸酶P的研究进展

人类核糖核酸酶P是具有酶活性的核糖核蛋白复合体。根据靶RNA设计的外部引导序列（EGS）能与靶RNA碱基互补结合,形成类似前体tRNA的二级结构,从而引导人类核糖核酸酶 P对靶RNA进行特异切割。因此,基于人类核糖核酸酶P的EGS技术能在mRNA水平抑制病毒及肿瘤靶基因的表达,在抗肿瘤、抗病毒等基因治疗领域具有广阔的应用前景。     

核糖核酸抗肝纤维化的作用

腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)诱发大鼠肝纤维化,分别用国产RNA(4mg/kg)和C_0Q_(10)(2.5mg/kg)治疗,另设正常对照和病理对照组。治疗后30、60和90天活杀,作血清酶学、氨基酸检测,胶原纤维定量及电镜检查,结果表明RNA和C_0Q_(10)治疗组AST,γ-GT均在正常范围,A/G比值与病理对照组同期比较明显降低(P<0.01),RNA组ALT,MAO和ANG明显下降(P<0.01),血清氨基酸水平升幅较小(P<0.01),光镜检查也显示RNA治疗组肝细胞变性坏死程度,以及胶原纤维定量代表的肝纤维化程度都比较轻,有显著意义。电镜检查从超微结构水平也证实了上述结果。RNA有降酶保肝和抗肝纤维化的作用。     

联合诱导法制备大鼠肝S9及蛋白含量的测定

目的测定联合诱导法和多氯联苯诱导法制备的大鼠肝S9的蛋白含量并对这两种方法进行比较。方法采用苯巴比妥与β—萘黄酮合并诱导所获S9作为诱导剂制备大鼠肝S9,并采用Bradford法测定所制备的S9蛋白含量。结果成功制得大鼠肝S9,并测定其蛋白含量为26.73 mg/ml。结论联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9。     

大鼠DNA多聚酶β基因克隆及其腺病毒重组体构建

目的 构建大鼠DNA多聚酶β基因克隆及其腺病毒介导的表达载体。方法 提取大鼠脑组织总RNA．用逆转录PCR扩增DNA多聚酶β（POLB）的编码区,与T载体连接,作DNA测序后,酶切POLB基因并连入腺病毒穿梭质粒pAdTraek-CMV,电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。酶切鉴定,重组腺病毒质粒（pAd-polb）Lipofectamine2000转染293细胞,用293细胞扩增重组腺病毒。结果 8个TA克隆中有2个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLB cDNA序列完全一致。DNA序列正确的POLB重组腺病毒质粒Ad-polb转染293细胞后,荧光显微镜下可见绿色荧光。结论 用TA克隆和AdEasy系统,成功构建了大鼠DNA多聚酶β的腺病毒重组体。     

大鼠肝内皮细胞脂酶特性的研究

碘代乙酰胺、乙酰咪唑、醋酐-醋酸钠和1,2-环已二酮的预处理对肝内皮细胞脂酶HEL)活性无显著影响,而N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)和二异丙基氟磷酸(DFP)预处理分别抑制HEL活性75.2％和68.1％。Ca~(2 )能激活HEL,0.005mol/L Ca~(2 )的激活作用最大。但氯丙嗪可显著地抑制Ca~(2 )的激活作用。HEL在-20℃很稳定,但在室温及4℃都较不稳定。0.1％tritonX-100对HEL活性有显著保护作用。实验结果提示①HEL中组氨酸和丝氨酸残基可能参与HEL活性中心。②Ca~(2 )对HEL的激活作用可能通过钙调控蛋白(Calmodulin)     

核糖核酸联合冬虫夏草制剂对慢性肝炎血清肝纤维化指标的影响

肝纤维化是慢性肝炎发展至肝硬化的必经阶段，是影响其予后的重要因素之一。故对慢性肝炎患者进行早期的抗肝纤维化治疗，具有十分重要的意义。我们应用核糖核酸联合冬虫夏草制剂对慢性肝炎患者进行抗肝纤维化治疗，认为此疗法对抑制肝纤维化具有一定的作用。１对象和方法...     

肿瘤病人与正常人血中核糖核酸酶及核糖核酸酶抑制因子活性的比较

核糖核酸酶(RNase)是降解 RNA 的酶,核糖核酸酶抑制因子(RI)能抑制 RNase 的活力,使 RNA 降解速度减慢,延长其半衰期,故使蛋白质合成增加。核糖核酸酶及其抑制因子的活性与衰老密切相关。本研究比较了肿瘤病人血中与正常人血中核糖核酸酶及 RI 的活性。结果发现,肿瘤病人的 RI 活性明显低于正常同年龄组,而 RNase 活性明显高于正常组。