MB-P对病毒灭活血浆有效成分的影响

目的 探讨亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活对血浆有效成分的影响.方法 使用血凝仪对血浆进行Ⅷ活性和纤维蛋白原含量检测 使用分光光度计测定血浆总蛋白浓度的变化.结果 新鲜冰冻血浆经MB-P病毒灭活后血浆Ⅷ因子活性为（0.66±0.06）IU/ml,比灭活前（0.75±0.07）IU/ml降低,纤维蛋白原含量为（1.31±0.1）mg/ml,比灭活前（2.19±0.2）mg/ml减少,两者比较差异均有显著性（P＜0.05）,总蛋白含量比较差异无显著性（P＞0.05）.结论 在制备冷沉淀时,可考虑先将新鲜冰冻血浆制备冷沉淀后再将血浆进行病毒灭活.灭活后血浆对于临床需要补充血浆蛋白的患者影响不大 对于需要输注Ⅷ因子、纤维蛋白原的患者则会有一定影响.     

病毒灭活新鲜冰冻血浆前后各种成分含量比较

对全血及其成分血进行病毒灭活是保证输血安全的重要措施之一,在临床上新鲜冰冻血浆得到广泛应用,但病毒灭活新鲜冰冻血浆还未得到广泛推广,我站自2010年2月以来临床用血浆全部病毒灭活,采用亚甲蓝光化学法制备病毒灭活新鲜病毒血浆,而病毒灭活新鲜冰冻血浆病毒灭活后总蛋白含量、白细胞残留量、凝血因子(FⅧ:C)含量是病毒灭活血浆的关键指标,本文对病毒灭活新鲜冰冻血浆中总蛋白回收率、白细胞残留量、FⅧ:C回收率采用数学方法进行统计分析,并且和去白细胞新鲜冰冻血浆的总蛋白含量、白细胞残留量、和FⅧ:C含量进行分析比较.     

新鲜冰冻血浆与普通冰冻血浆制备冷沉淀的质量分析

目的通过对新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆制备冷沉淀Ⅷ因子质量测定,来确定普通冰冻血浆是否合适做冷沉淀原料浆。方法随机抽取2009-2010年新鲜冰冻血浆、普通冰冻血浆各10份,制备冷沉淀后,利用凝血法,检测其中Ⅷ因子含量并计算FⅧ合格率。结果新鲜冰冻血浆FⅧ含量为（0．94±0．13）IU／mL,普通冰冻血浆FⅧ含量为（0．42±0．16）IU／mL,两组差异有统计学意义。结论冷沉淀制备需要用新鲜冰冻血浆。     

新鲜冰冻血浆制备时间对冷沉淀凝血因子的质量影响

目的探讨不同制备时间新鲜冰冻血浆对冷沉淀凝血因子(简称冷沉淀)中Ⅷ因子含量(FⅧ)和纤维蛋白原(Fg)含量的影响,以期找到制备冷沉淀凝血因子原料血浆的最佳及最长的制备允许间隔时间。方法以200份的血液样本作为研究对象,分别于全血采集后6、8、13、18h内制备成新鲜冰冻血浆,并标识,将四组不同制备时间段的新鲜冰冻血浆分别制备成冷沉淀凝血因子,检测其FⅧ活性和Fg含量。结果四组不同制备时间段的新鲜冰冻血浆制备成冷沉淀凝血因子FⅧ含量活性随制备时间延长明显下降,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),Fg含量比较差异无统计学意义(P>0.05);其中6h合格率为96%,8h合格率为94%,13h合格率为86%,均满足质控要求的75%受控要求,而18h内制备的新鲜冰冻血浆分离出来的冷沉淀凝血因子合格率只有54%,达不到冷沉淀凝血因子的质量要求,6、8、13h合格率与18h比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论为了保证冷沉淀凝血因子的质量及满足临床用血需求量,用于制备冷沉淀凝血因子的新鲜冰冻血浆最佳选择在采集后6~8h内,最长不宜超过13h分离并速冻的新鲜冰冻血浆作为原料浆。     

血浆制备温度和时间对冷沉淀质量的影响

目的 探讨不同血浆制备温度和时间对冷沉淀质量的影响.方法 将新鲜冰冻血浆分成三个温度组通过虹吸法制备冷沉淀,比较融化时间和冷沉淀中FⅧ活性、Fg的含量.结果 2℃、4℃和6℃的融化时间分别为（96.3±5.9） min、（89.6±4.3） min、（81.2±2.7） min.温度越高,所需的融化时间越短.冷沉淀中FⅧ活性分别为（95.36±4.8）IU、（91.21±3.3）IU、（89.8±3.1）IU;冰冻血浆在2℃条件下融化所得冷沉淀中的FⅧ活性最高,与其他两组比较差异具有统计学意义（t=6.94,P=0.009,t =8.96,P=0.004）,但4℃和6℃条件下融化所得冷沉淀中FⅧ活性差异无统计学意义（t=0.669,P=0.19）.冷沉淀中Fg含量分别为（258.6±12.6）mg、（253.3±8.2）mg、（255.9±9.7） mg;不同血浆融化温度对Fg的含量没有显著影响,三组间两两比较差异无统计学意义（t=0.321,P=0.37;t =0.270,P=0.56;=0.424,P=0.29）.结论 2℃条件下血浆融化所制备的冷沉淀中FⅧ活性最高,但是所需时间也最长;6℃条件下融化血浆所制备的冷沉淀FⅧ活性较低,但是符合质量要求,而且所需时间最短,冷沉淀中Fg含量三个温度组之间没有区别.血站可以采用6 ℃融化冰冻新鲜血浆来制备冷沉淀.     

凝血因子Ⅷ制剂

凝血因子Ⅷ(FⅧ)制剂是治疗血友病甲的最主要血液制品.冷沉淀是这类制剂中最简便的制品,从单一供血者中采集单浆制备冷沉淀成本低且疾病传染性小.中纯度FⅧ制剂比活性为0.2～1.0 IU/mg蛋白,较冷沉淀中Ⅶ活性含量高.高纯度制剂比活性高于1.0IU/mg蛋白.单克隆抗体(McAb)亲和层析和DNA重组技术可制备FⅧ活性4000～28万倍提纯的FⅧ制剂和纯FⅧ制剂.随着非甲非乙型肝炎(NANBH)病毒的分离和FⅧ制剂灭活方法的改进,这类制品将更安全.     

4℃和6℃融化新鲜冰冻血浆制备冷沉淀的比较

目的了解4℃和6℃两种温度融化新鲜冰冻血浆制备冷沉淀对凝血因子Ⅷ含量的影响。方法对30袋新鲜冰冻血浆随机分为两组,分别以4℃和6℃循环水溶箱融化制备冷沉淀,比较融化时间和冷沉淀凝血因子Ⅷ含量。结果 4℃和6℃融化时间分别为(75.9±3.9)min和(55.4±3.8)min(P<0.01);冷沉淀凝血因子Ⅷ含量分别为(95.2±5..7)IU和(93.3±5.2)IU(P>0.05)。结论 4℃和6℃融化新鲜冰冻血浆制备冷沉淀对凝血因子Ⅷ含量没有影响,但6℃比4℃制备的时间显著缩短,血站可采用6℃融化新鲜冰冻血浆制备冷沉淀。     

MB病毒灭活新鲜冰冻血浆中部分有效成分的探讨

目的 探讨经过病毒灭活的新鲜冰冻血浆中部分有效成分的质量变化.方法 采集50袋新鲜血浆,分成A、B两组,分别对其进行检测,内容包括PT,TT,APTT,Fg,TP、ALB及凝血因子FⅧ、FⅤ.结果 病毒灭活冰冻血浆中的TP、凝血因子FⅧ、FⅤ和Fg等的含量均有不同程度的降低.但大都在30%以内,在可接受的范围内.结论 采用MB光化学法病毒灭活血浆不影响临床应用,其利大于弊.     

亚甲蓝光化学疗法病毒灭活新鲜冰冻血浆在广州增城地区的临床应用可行性

目的通过检测新鲜冰冻血浆病毒灭活前后Ⅷ因子含量及病毒灭活效果的变化,探讨病毒灭活新鲜冰冻血浆在增城地区临床应用的可行性。方法将300袋未灭活新鲜冰冻血浆作为对照组,进行Ⅷ因子含量检测;将病毒灭活后上述300袋新鲜冰冻血浆作为实验组,进行Ⅷ因子含量检测,计算病毒灭活后Ⅷ因子含量。将5袋确诊HBV和5袋确诊HCV的新鲜冰冻血浆采用荧光定量PCR检测方法检测亚甲蓝光化学疗法病毒灭活前后,病毒灭活效果的变化。临床随机抽取200例输注病毒灭活血浆的患者,观察病毒灭活血浆输注后是否出现输血不良反应。结果新鲜血浆病毒灭活前后血浆Ⅷ因子含量为(1.097±0.047)IU/m L(0.824±0.027)IU/m L;凝、血因子Ⅷ含量灭活前后差异有统计学意义(P0.01);利用亚甲蓝光化学疗法血浆病毒灭活技术对凝血因子Ⅷ含量有一定的影响,但是均达到GB 18469-2012《全血及成分血质量要求》对病毒灭活新鲜冰冻血浆的质量要求。标本病毒灭活后血浆HBV-DNA及HCV-RNA载量均为1000copies/m L。病毒灭活血浆输注人体后无不良反应发生。结论临床使用较安全,病毒灭活新鲜冰冻血浆能够有效降低经输血传播疾病的危险性,且不良反应较小。在广州增城地区的临床应用是可行的。     

亚甲蓝光化学法灭活病毒的研究--抗坏血酸对血浆凝血因子的保护作用

目的探讨抗坏血酸对亚甲蓝光化学法处理血浆时指示病毒灭活的效果,以及对部分凝血因子的保护作用.方法采用CPE法评价病毒的灭活效果,用Clauss法测定纤维蛋白原的含量和一期法判定FⅧC的凝血活性.结果在单采人血浆中加入1 μmol·L-1亚甲蓝和240 μmol·L-1抗坏血酸,再给以40000 lx荧光强度照射60 min,VSV滴度下降＞8lgTCID50·ml-1,并且纤维蛋白原和FⅧC的回收率分别为83.55%和81.67%,比常规亚甲蓝/荧光光化学法显著提高(P＜0.01),而且凝血酶原时间延长值在正常允许值范围,活化部分凝血酶时间延长值也接近正常允许值范围.加入抗坏血酸和色氨酸可灭活病毒,而甘露醇不能.结论在亚甲蓝光化学法中,抗坏血酸不影响病毒的灭活,而且对部分凝血因子有保护作用.因此,抗坏血酸可以有效提高单份冷冻新鲜人血浆的质量.     

亚甲蓝光化学疗法血浆病毒灭活技术的应用分析

目的根据2012年颁发的GB18469—2012《全血及成分血质量要求》中对病毒灭活新鲜冰冻血浆质量控制项目和要求,分析亚甲蓝光化学疗法血浆病毒灭活技术在血浆灭活过程中对血液成分和功能的影响,探讨亚甲蓝光化学疗法血浆病毒灭活技术的疗效及安全性,为进一步广泛推广应用提供临床参考依据。方法采用称重法、双缩脲法、磁珠法、比色法、荧光定量PCR检测方法检测亚甲蓝光化学疗法病毒灭活前后的血浆量、血浆蛋白含量、凝血因子Ⅷ含量、亚甲蓝残留量、病毒灭活效果的变化。结果新鲜血浆病毒灭活前后血浆容量分别为（235±15．51）g、（230±14．17）g;Ⅷ因子含量为（1．084±0．045）IU／ml、（0．826±0．029）IU／mk血浆蛋白含量为（83．71±3．24）g／L、（79．09±3．21）g/L;凝血因子Ⅷ含量灭活前后差异有统计学意义（P〈0．01）;血浆容量和血浆蛋白在灭活前后无统计学意义（P〉0．05）,亚甲蓝的残留率为（0．0638±0．013）μmol／L;标本病毒灭活后血浆HBV—DNA及HCV—RNA载量均为〈1000copies／ml。结论利用亚甲蓝光化学疗法血浆病毒灭活技术对血浆成分有一定的影响,但均达到GB18469—2012《全血及成分血质量要求》对病毒灭活新鲜冰冻血浆的质量要求。亚甲蓝光化学疗法简便、无毒、能最大程度的减少新鲜冰冻血浆病毒等显著特点,可有效消除临床输血带来的安全隐患。     

滤除白细胞对新鲜血浆多项指标的影响研究

目的探讨滤除白细胞对新鲜血浆多项指标的影响。方法选取2012年8-9月的24袋400mL的新鲜血液为研究对象,将每份均平均分为2份,每份为200mL,其中24份采用滤除白细胞法进行处理者为观察组,另外24份采用亚甲蓝光化学法进行处理者为对照组,后将两组处理前后的FⅡ：C、FⅧ、总蛋白、LDH、TBIL及DBIL水平进行比较。结果观察组处理后的FⅡ：C、FⅧ、总蛋白、LDH、TBIL及DBIL水平变化幅度均小于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论滤除白细胞对新鲜血浆多项指标的影响小于亚甲蓝光化学法,应用价值更高。     

一种抗新型冠状病毒灭活血浆的制备及质量标准的建立

目的  建立一种以新型冠状病毒肺炎(COVID-19)康复者恢复期血浆为原料制备抗新型冠状病毒（2019 novel coronavirus，2019-nCoV）灭活血浆的工艺及其质量标准。方法  采集2020年1—3月期间中国武汉441人份COVID-19康复者捐献的恢复期血浆，开展2019-nCoV、HIV和梅毒螺旋体等病原体的筛查，进行亚甲蓝光照灭活，并通过检测蛋白含量、抗2019-nCoV抗体、凝血因子Ⅷ活性等，判断亚甲蓝光照灭活对血浆的影响并建立质量标准。结果   亚甲蓝光照灭活前后灭活血浆的蛋白含量没有发生明显变化，血浆的凝血因子Ⅷ含量≥0.50 IU/ml，抗体滴度未出现明显下降，各项检测结果均符合质量要求。结论  确立了以COVID-19康复者恢复期血浆制备抗2019-nCoV灭活血浆的关键质量控制及工艺参数。       

从血浆冷沉淀中同时制备因子Ⅷ、纤维结合蛋白和纤维蛋白原方法的建立

目的  建立从血浆冷沉淀中同时制备因子Ⅷ（factor Ⅷ,FⅧ）、纤维结合蛋白（fibronectin,Fn）和纤维蛋白原（fibrinogen,Fg）的方法。  方法  用缓冲液溶解抽提冷沉淀,获得的冷沉淀抽提液通过2次DEAE离子交换层析和1次聚乙二醇沉淀进行分离纯化来同时制备FⅧ、Fn和Fg。采用FⅧ∶C活性测定试剂盒检测制备的FⅧ活性,并计算FⅧ比活和回收率。分别用双向和单向免疫扩散试验对制备的Fn和Fg进行定性和定量检测,并计算回收率。结果   制备的FⅧ的平均活性为16.48 U/ml,平均比活为29.84 U/mg,回收率>60%。制备的Fn和Fg的蛋白纯度均>90%,回收率分别为>80%和>75%。结论  采用建立的方法可从冷沉淀中同时制备FⅧ、Fn和Fg。     

病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆在血浆置换治疗中的效果分析

目的探讨血浆置换中应用病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆的效果差异。方法2012年1-6月洛阳市26例进行血浆置换患者分别采用新鲜冰冻血浆及病毒灭活血浆治疗,并对两组治疗前后的血凝、蛋白等指标进行比较。结果应用病毒灭活血浆组治疗后患者PT、APTT与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．05）,两组治疗前后清蛋白检测差异无统计学意义（P〉0．05）。结论大量应用血浆制品时,病毒灭活血浆安全性仍较高,但若患者有出血倾向则易选用新鲜冰冻血浆（FFP）做置换液,临床效果更佳。     

第四批人凝血因子VIII国家标准品制备和标定

目的:建立经两步病毒灭活工艺制备的人凝血因子VIII国家标准品,以替代第三批人凝血因子VIII国家标准品。方法:按《中国药典》2010年版三部对人凝血因子VIII产品的生产工艺要求和质量标准,制备第四批人凝血因子VIII国家标准品(批号20100101),用WHO第七批人凝血因子VIII国际标准品(批号99/678),采用一期法进行协作标定,采用加速破坏试验进行稳定性考察。结果:批号20100101人凝血因子VIII国家标准品效价为12.1IU/支,稳定性好,其它项目指标均达到国家标准品的要求。结论:建立了符合国家标准品要求、并经病毒灭活的第四批人凝血因子VIII国家标准品。     

短波紫外线对人凝血因子Ⅷ中猪细小病毒灭活的研究

目的 研究短波紫外线(short-wave ultraviolet-C,UV-C)对人凝血因子Ⅷ(human coagulationfactor Ⅷ,FⅧ)中猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的灭活的效果.方法 将PPV作为指示病毒与FⅧ中间品混合,用紫外灭活仪UVivatec分别以200、300和400 J/m2 UV-C进行灭活.将UV-C灭活的FⅧ接种ST细胞并进行培养,采用细胞病变(cytopathic effect,CPE)法检测病毒,并以Reed-Muench法计算病毒滴度.对所有UV-C灭活后未出现CPE的样品盲传3代,验证灭活效果;同时对UV-C灭活前后的FⅧ活性进行检测.结果 3个照射剂量的UV-C灭活后,FⅧ中的PPV滴度降低均不低于每0.1 ml4.62lg半数组织培养感染剂量,所有未出现CPE的样品盲传至第3代均未检到病毒.UV-C灭活的FⅧ的活性无明显降低,且各项质量指标均符合药典的要求.结论 UV-C可有效灭活无包膜病毒PPV,且对FⅧ活性无明显影响.