单克隆抗体对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的影响

我们试图采用ＣＤ11ｂ、ＣＤ18、ＣＤ54单克隆抗体(单抗)调节博莱霉素(ＢＬＭ)大鼠肺纤维化1周的肺泡巨噬细胞(ＡＭ)的靶位抗原表达,观察其分泌ＩＬ8、血小板衍生生长因子(ＰＤＧＦ)、一氧化氮(ＮＯ)水平的变化,初步探讨其改善肺损伤以及抑制成纤维细胞增殖的机制,为通过抗粘附分子的抗炎治疗来防治肺纤维化的发生奠定实验依据。一、材料与方法1ＢＬＭ肺纤维化大鼠模型的制备:用硫苯妥钠(2ｍｇ/100ｇ)麻醉大鼠,固定,逐层暴露气管,将抽取含ＢＬＭＡ5(天津河北制药厂)05ｍｇ/100ｇ或单纯生理盐水(02～03ｍｌ)1ｍｌ经两气管软骨环间隙向心端刺…     

脂多糖对衰老大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对衰老大鼠模型肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)凋亡的影响方法用D-半乳糖(D-galactose,D-gal)复制衰老大鼠模型,实验动物分为老年组和青年组,青老年大鼠分别通过支气管肺泡灌洗和细胞贴壁的方法获取AM,将其分为LPS刺激组和对照组,每组6只,LPS刺激组用10mg/l LPS直接攻击细胞,24h后用AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒进行检测。结果衰老大鼠LPS刺激组细胞凋亡百分率(50.57%±2.29%)高于对照组(17.25%±1.68%,P<0.05);青年大鼠LPS刺激组(28.22%±1.75%)较对照组(14.25%±3.09%,P<0.05)高,青老年对照组之间差异无统计学意义。结论LPS刺激组的AM凋亡衰老大鼠明显高于青年组,老年大鼠对LPS刺激的反应程度大于青年组。     

热电厂锅炉粉尘对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性作用

为了调查热电厂尘肺发病中锅炉粉尘所起的作用，采用大鼠肺泡巨噬细胞体外培养方法，以在郑州热电厂和洛阳热电厂采集的燃烧前的煤粉（简称煤尘）和各个锅炉炉膛内的飘落灰粉（简称灰尘）体外染尘，计数细胞存活率和测定培养液中的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性作为细胞毒性指标。结果：２厂煤尘对肺泡巨噬细胞的毒性均小于２厂灰尘（Ｐ＜００１），郑州热电厂锅炉灰尘对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性大于洛阳热电厂（Ｐ＜００５）。提示：２厂尘肺患病率不同可能与粉尘毒性不同有关。     

矽尘对大鼠肺泡巨噬细胞功能损害观察

免疫细胞功能变化 ,尤其是巨噬细胞功能变化在矽肺发生、发展过程中起重要作用 ,了解巨噬细胞功能改变对于矽肺防治具有重要意义。我们对染尘大鼠肺泡巨噬功能进行检测 ,结果报告如下。材料与方法1.染尘动物模型复制[1] :雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 30只 ,体重2 0 0～ 2 5 0ｇ ,随机分为实验组 2 0只 ,对照组 10只。大鼠乙醚麻醉后 ,进行喉气管插管 ,实验组注入石英粉尘 (石英粉尘颗粒直径≤ 5ｕｍ)生理盐水悬液 5 0ｍｇ/ｍｌ(只 ) ,而对照组仅注入生理盐水 1ｍｌ/只。2 .大鼠肺泡巨噬细胞收集、纯化 :大鼠经 2 .5 %硫贲妥纳麻醉后 ,暴露支气管和…     

纤维状矿物粉尘对肺泡巨噬细胞膜损伤的机制研究

评价来自全国６个不同矿床的６种纤维矿物粉尘的细胞膜毒性,探讨其受损机制,采用体外细胞培养技术及扫描电镜方法观察纤维状矿物粉尘对肺泡巨噬细胞膜的通透性、膜流动性、膜形成的影响。结果纤维硅灰石,斜发沸石无细胞膜毒性,纤状海泡石、纤状坡缕石、纤状水镁石、纤状蛇纹石石棉表现出不同程度的细胞膜毒性。纤维状矿物粉尘对细胞膜毒性与其表面特性有关     

大鼠肺泡和间质巨噬细胞的形态功能差异

目的观察正常大鼠肺泡与间质巨噬细胞形态结构及吞噬功能差异.方法支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,肺组织机械处理结合酶消化法(DNA酶、胶原酶)分离间质巨噬细胞;电镜下比较两种细胞的形态、结构差异,并以无色孔雀绿显色法比较两种细胞吞噬功能以及LPS攻击对它们的不同影响.结果肺内两种巨噬细胞亚群在形态、结构上有明显不同;在功能上,肺泡巨噬细胞的吞噬能力显著强于间质巨噬细胞,体外复合LPS攻击能明显增强间质巨噬细胞的吞噬能力,而肺泡巨噬细胞未受影响.结论肺内两种巨噬细胞亚群间存在异质性,肺间质巨噬细胞不应被单纯看作是肺泡巨噬细胞的前体细胞.     

一项制作巨噬细胞标本的技术改良

传统显示巨噬细胞的方法有几种 ,主要是台盼兰活体染色 ,取肝脏切片或疏松结缔组织铺片 ,然后再进行HE染色 ,这样制作出来的标本 ,不易辨认 ,影响实验课质量。为此 ,我们特采用台盼兰或涕注射染色 ,取材部位选择睾丸 ,经过常规石蜡包埋切片后 ,仅进行伊红染色 ,取得较满意效果 ,现将这项新方法介绍如下。取健康的成年雄性大鼠两只 ,体重 2 50 g左右 ,间天分别给予无毒性的 5%台盼兰水溶液4ml腹腔注射 1次 ,共注射 3次 ,第 6天处死动物 ,取两侧睾丸固定于 0 .2M磷酸盐缓冲液配制的 1 0 %福尔马林中 ,常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片 ,每…     

未修饰纳米SiO2和表面修饰型纳米SiO2对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性研究

目的:比较未修饰纳米SiO2和表面修饰型纳米SiO2对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性.方法:通过支气管肺泡灌洗分离雄性SD大鼠肺泡巨噬细胞.未修饰纳米SiO2(M-5型)及两种表面修饰型纳米SiO2(TS-610型,TS-720型)剂量分别为0,8,40,100,200 μg/cm2,用MTT实验测定对细胞活性的影响,LDH实验测定对细胞膜的损伤,TBA法测定脂质过氧化作用的程度.结果:M-5型纳米SiO2在剂量大于100 μg/cm2时,各指标与对照组相比有统计学意义(P＜0.05),而两种表面修饰型纳米SiO2与对照组相比均无统计学意义.结论:未修饰纳米SiO2对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性较强,颗粒表面被修饰后其毒性明显降低,表明颗粒表面反应性在毒性机制中发挥重要作用.     

鼠肺细胞的分离纯化及原代培养

目的:建立一套可靠的鼠肺细胞分离、纯化和培养技术,用于体外研究间质性肺病的发病机制及治疗方法.方法:采用胰酶消化出生后2 d SD大鼠肺组织块及SD大鼠肺泡灌洗液, 经差时贴壁法, 分离、纯化红皮鼠肺成纤维细胞(lung fibroblast, LF)和SD大鼠肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophage,AM), 并进行原代培养.用波形蛋白(Vimentin)、 CD14细胞免疫荧光染色、蛋白质印迹和电镜对所分离的细胞进行鉴定.结果:所得细胞产量大、纯度高.细胞免疫荧光染色LF细胞波形蛋白染色阳性而CD14染色阴性;AM细胞则相反.扫描电镜观察可见肺成纤维细胞有微绒毛,细胞间连接成网状,蛋白质印迹结果显示波形蛋白表达.结论:该方法是一种可靠的红皮鼠肺成纤维细胞及大鼠肺巨噬细胞的分离纯化培养技术, 可用于间质性肺病(interstitial lung disease, ILD)的发病机制及治疗方法的体外研究.     

石棉粉尘细胞的生物学效应

目的：观察≤５μｍ和≥１０μｍ两组石棉纤维在作用时间和作用剂量上对豚鼠肺泡巨噬细胞生物学效应的关系。方法：采用细胞体外研究方法。结果：细胞死亡率，乳酸脱氢酶活性均随孵育时间延长及作用剂量的增大而毒性亦增加；细胞内钾离子含量则随时间的延长、剂量的增大而浓度降低。结论：结果证明两组石棉纤维均具有明显的细胞毒性作用。     

脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体表达及活性变化

目的探讨脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞24 h内,糖皮质激素受体表达及活性变化特点.方法将原代培养的大鼠肺泡巨噬细胞分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组,采用RT-PCR和Western Blot在mRNA水平和蛋白质水平测定肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体;EMSA测定肺泡巨噬细胞核蛋白中糖皮质激素受体活性.结果脂多糖作用后,糖皮质激素受体mRNA表达下调,24 h恢复正常水平;糖皮质激素受体蛋白质表达降低,4 h降至最低,24 h维持在低水平表达;糖皮质激素受体活性在1 h降到最低,24 h未恢复至正常水平.地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持糖皮质激素受体活性.结论脂多糖(100 ng/ml)作用大鼠肺泡巨噬细胞后,糖皮质激素受体蛋白表达降低,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关;糖皮质激素受体活性被显著抑制,出现糖皮质激素抵抗.     

RNA干扰技术抑制糖皮质激素受体在大鼠肺泡巨噬细胞表达及活性的研究

目的利用RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)基因阻断的大鼠肺泡巨噬细胞模型.方法构建2个针对GR的RNAi表达载体,分别命名为psilencer 3.1-GR1和psilencer 3.1-GR2,经测序确认后,转染大鼠肺泡巨噬细胞.RT-PCR、Western Blot分别检测GR mRNA水平和蛋白水平表达变化;相对荧光素酶活性法检测GR转录激活功能的变化.结果经测序证实:成功构建2个针对GR的RNAi表达载体(psilencer 3.1-GR1和2);转染psilencer 3.1-GR2可明显降低细胞内GR mRNA的丰度及GR蛋白表达,细胞GR转录激活活性明显降低;转染psilencer 3.1-GR1与对照组相比无显著变化.结论成功地构建并筛选出一个特异而高效地阻断GR表达及功能的质粒表达载体,为进一步研究糖皮质激素受体的功能提供新方法.     

山羊肺泡巨噬细胞的分离、培养与鉴定

目的建立一种高纯度的肺泡巨噬细胞分离培养方法,为研究巨噬细胞生物学特性,开展细胞内寄生菌存活机理研究提供材料。方法在无菌环境下以PBS多次灌洗山羊肺脏,收集细胞后,用外周血单核细胞分离液结合密度梯度离心法从混合细胞中分离出羊肺泡巨噬细胞;培养于含10%胎牛血清的细胞培养基中,倒置显微镜下观察细胞形态,并利用其对鸡红细胞的吞噬功能检测细胞活性;采用流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CD14。结果获得的贴壁细胞具典型的巨噬细胞形态学特征,有伪足和突起伸出,呈现圆形及不规则形状,胞浆丰富,胞体较大;培养的巨噬细胞54.5%吞噬了鸡红细胞,具有较强的吞噬活性;在体外连续培养近一个月,仍有93.7%的细胞能特异性表达CD14抗原,具有巨噬细胞特异性免疫表型。结论本研究获得的山羊肺泡巨噬细胞纯度高、生物活性好,为开展细胞内寄生菌的疾病机理研究提供了细胞模型。     

流式细胞术分选小鼠肺泡巨噬细胞及鉴定

目的 建立一种基于流式细胞术分离小鼠肺泡巨噬细胞(AM)的方法.方法 小鼠肺脏在体外经胶原酶ⅣV消化后获得单细胞悬液,再经CD11b和CD11c抗体标记,利用流式细胞仪分选获得CD11blowCD11c+ AM,并经台盼蓝染色计数细胞活力,以及通过Real-time PCR和吞噬功能进行鉴定.结果 流式细胞术分选小鼠肺脏单细胞悬液,获得CD11blowCD11c+细胞,纯度为(93±2)％,细胞活力为(80±5)％;Real-time PCR结果显示过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在该群细胞高表达(P＜0.001);细胞吞噬功能实验结果显示该群细胞具有较好的吞噬活性,吞噬率约为10％.结论 建立了一种基于流式细胞术分选获得AM的方法,该方法获得的细胞纯度高,细胞活性好,可用于功能性实验.     

穿琥宁注射液对内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的作用及机制探讨

目的:研究穿琥宁对内毒素(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞(AM)过度分泌肿瘤坏死因子(TNF-d)的影响及机制.方法:体外培养大鼠AM,分为对照组、LPS组、穿琥宁 LPS组、来立信 LPS组和穿琥宁 来立信 LPS组.测定上清TNF-α水平、上清LPS水平以及细胞中Ⅰ-Kb的表达.并在电镜下观察穿琥宁对LPS结构的影响.结果:经穿琥宁作用后,上清中的TNF-α和LPS含量明显下降,而且电镜下证实LPS已失去其正常结构,同时,Ⅰ-Kb的表达也增加.结论:穿琥宁对LPS诱导大鼠AM过度分泌TNF-α有明显抑制作用.其机制可能与破坏内毒素结构和抑制Ⅰ-Kb的低表达有关.     

Effects of Bilirubin on Alveolar Macrophages in Rats with Emphysema and Expression of iNOS and NO in Them

Alveolarmacrophage (AM )isakeymediatorinthedevelopmentofemphysemabytheirchangesinpopulation ,shape ,andfunctions.TheactivemediaproducedbyAMplaysanimportantrole .Asanewanti oxidantandimmune adjustingagent ,bilirubincanameliorateinjuryinsometissues[1,2 ] ,b…     

全氟化碳对兔肺泡巨噬细胞功能的影响

目的：通过观察全氟化碳（ＰＦＣ）对兔肺泡巨噬细胞（ＡＭ）功能的影响;探讨急性肺损伤（ＡＬＩ）动物应用部分液体通气（ＰＬＶ）治疗后肺部炎症减轻的可能原因。方法：兔ＡＭ暴露于全氟萘烷（ＦＤＣ）后,观察在有效刺激下产生过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）,肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）及一氧化氮（ＮＯ）能力的变化。结果：ＡＭ暴露于ＦＤＣ后产生Ｈ２Ｏ２,ＴＮＦ－α和ＮＯ的量明显降低。结论：在体外ＦＤＣ能明显降低ＡＭ对有效刺激