用PCR的RELP法检测宫颈癌组织中HPV16型的研究

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）和限制性片段长度多态性（ＲＥＬＰ）方法，直接对石蜡包埋的宫颈癌组织切片进行人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１６型的检测。结果表明ＨＰＶ１６型的阳性检出率为６６．７％。该方法简便快速，特异性较强，为ＨＰＶ１６型的检测提供一种较敏感而快速的诊断手段。     

用PCR和RELP法检测宫颈癌组织中HPV16型的研究

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）和限制性片段长度多态性（ＲＥＬＰ）方法，直接对石蜡包埋的宫颈癌组织切片进行人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）１６型的检测。结果表明ＨＰＶ１６型的阳性检出率为６６．７％。该方法简便快速，特异性较强，为ＨＰＶ１６型的检测提供一种较敏感而快速的诊断手段     

宫颈癌组织中HPV16 E6C基因变异的研究

为探讨ＨＰＶ１６肿瘤相关抗原Ｅ６羟基端基因片段（Ｅ６Ｃ）在宫颈癌组织中的变异性以及采用Ｅ６Ｃ做为肿瘤治疗性轩抗原基因的可行性，采用ＰＣＲ方法自１８例单纯ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌组织中扩增ＨＰＶ１６５Ｅ６ＣＤＮＡ，经单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ序列测定法检测其基因变异性。ＳＳＣＰ分析结果显示，１８例宫颈癌组织ＨＰＶ１６Ｅ６ＣＤＮＡ电泳条带与标准对照ＤＮＡ条带一致，提示无基因变异现象存在     

宫颈癌组织中HPV16 E6C基因变异的研究

为探讨ＨＰＶ１６ 肿瘤相关抗原Ｅ６ 羧基端基因片段（Ｅ６Ｃ）在宫颈癌组织中的变异性以及采用Ｅ６Ｃ做为肿瘤治疗性疫苗抗原基因的可行性,采用ＰＣＲ方法自１８ 例单纯ＨＰＶ１６ ＤＮＡ 阳性的宫颈癌组织中扩增ＨＰＶ１６ Ｅ６ＣＤＮＡ,经单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）和ＤＮＡ序列测定法检测其基因变异性。ＳＳＣＰ分析结果显示,１８ 例宫颈癌组织中ＨＰＶ１６ Ｅ６ＣＤＮＡ 电泳条带与标准对照ＤＮＡ 条带一致,提示无基因变异现象存在,ＤＮＡ 序列测定也证实Ｅ６Ｃ编码区内无核苷酸突变。该研究证实采用ＨＰＶ１６ Ｅ６Ｃ端基因片段作为ＨＰＶ疫苗候选基因可行,为进一步研制ＨＰＶ１６ ＤＮＡ 疫苗奠定了基础     

宫颈癌组织中HPV16E7序列多态性分析

目的 探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性。方法 采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变。结果 50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例。33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸。结论 广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846。     

宫颈癌组织中HPV16 E7序列多态性分析

目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性.方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变.结果50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例.33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸.结论广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846.     

宫颈癌组织中HLA-Ⅰ缺失与HPV16、18感染的相关性研究(英文)

目的　探讨宫颈癌与人类组织相容性抗原 (HLA)表达缺失和人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18感染的关系。方法　采用免疫组织化学S -P法检测特异性鼠抗人HLAⅠ类分子单克隆抗体及HPV16、18E6蛋白在宫颈癌组织中表达情况。结果　 6 2例宫颈癌组织中有 4 2例HLAⅠ抗原呈阳性表达 ,2 0例呈阴性表达 ,阴性表达率 32 .3%。有 4 4例HPV16、18E6呈阳性表达 ,阳性率 70 .9% (4 4 / 6 2 )。在HPV16、18E6阳性表达组织中其HLAⅠ抗原缺失明显增加。HLAⅠ抗原阳性表达组织中CD3 T细胞和CD8 T细胞数量明显多于HLAⅠ抗原阴性表达组织 ,肿瘤恶性程度及淋巴结转移与HLAⅠ抗原下调有关。结论　宫颈癌组织存在HLAⅠ抗原部分缺失与HPV16、18感染密切相关。HLAⅠ抗原部分缺失 ,形成了免疫逃逸导致了肿瘤细胞的发生、发展、浸润、转移。     

湖北地区22例宫颈癌组织中HPV 16型LCR基因变异特点分析

目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)16型LCR基因在湖北地区部分宫颈癌组织中的变异特点,通过系统发生学分析探讨宫颈癌患者感染的HPV16型变异株的流行型别及特征。方法:从22例宫颈癌手术切除标本中提取组织DNA,用HPV16LCR特异性引物进行PCR扩增,对扩增的LCR产物片段进行测序,用Paup 4.0软件使用邻接法对HPV16变异株进行系统发生学分析。结果:在22例宫颈癌组织中LCR基因存在着12个位点的基因变异。高频率突变位点有5个。其中第7 521位核苷酸由G变异为A,变异频率为100%;第7 730位核苷酸由A变异为C,变异频率为86.4%,第7 842位核苷酸由G变异为A,变异频率为77.3%,第7 714位由T变异为G,变异频率为31.8%;第7 930位核苷酸由C变异为T,变异频率为31.8%。HPV 16LCR中的5个高频位点,均位于可与多个转录因子结合的区域。对LCR基因进行的系统发生学分析表明,湖北地区流行的HPV16病毒株主要为亚洲型(As)变异体(77.2%),其次为欧洲型(E)(22.8%),没有发现非洲-1型(Af-1),非洲-2型(Af-2)和亚洲美洲型(AA)HPV16变异体。结论:湖北地区宫颈癌组织中LCR存在着一定程度的基因变异,其中一些高频位点与国内、外报道的结果有明显差异,可能是湖北地区LCR的突变热点。     

脊髓灰质炎病毒基因组cDNA限制性核酸内切酶谱的电子计算机分析

脊髓灰质炎病毒灭活疫苗和减毒活疫苗在预防该病的流行方面取得了巨大成功。近年来,国外相继开展了脊髓灰质炎病毒基因工程疫苗的研制,获得了一些进展。我们应用电子计算机,参考国外已发表的脊髓灰质炎病毒基因组核酸序列,分析了可能应用的64种限制性核酸内切酶谱,从而为建立自己建株的病毒基因组cDNA克隆以及组装表达VP_1等抗原蛋白的质粒提供了丰富的资料。     

聚合酶链反应检测宫颈癌组织中HPV16DNA相关序列

从石蜡包埋的宫颈癌组织和宫颈上皮瘤样病变(CIN)组织中提取DNA,用聚合酶链反应体外扩增人乳头瘤病毒16型(HPV16)的E6区,然后检测组织DNA中HPV16相关序列,以探讨人乳头瘤病毒16型与宫颈癌发生的关系。共检测标本28份,阳性率为42.9%(12/28)。其中宫颈癌阳性率为47.8%(11/23),高于宫颈上皮瘤样病变的阳性率。表明人乳头瘤病毒16型与人宫颈癌的发生有十分密切的关系。     

HPV16相关宫颈癌组织中MUC16和E6表达的关系

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)16相关宫颈癌组织中粘蛋白抗原16(MUC16)与E6表达的关系。方法:以HPV16 E6阳性和阴性的宫颈癌细胞系和宫颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织(184例)为研究对象,采用Western blot和免疫组化方法检测HPV16 E6和MUC16的表达。结果:Western blot结果显示:C-33A细胞中HPV16 E6无表达,Ca Ski细胞和Si Ha细胞中可见HPV16 E6表达;C-33A细胞中MUC16的表达低于Ca Ski细胞和Si Ha细胞(P<0.05),Ca Ski细胞和Si Ha细胞中MUC16的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示:HPV16E6阳性的宫颈鳞癌组织中MUC16的表达高于HPV16 E6阴性的宫颈鳞癌组织(χ2=43.670,P<0.001)。结论:宫颈癌细胞系和鳞癌组织中MUC16与E6表达可能有关。     

宫颈癌组织中HPV16 E6基因的检测及其意义

目的：探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6基因的检测及其意义。方法：运用PCR方法扩增HPV16E6／E7基因，分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列，宫颈炎和宫颈癌的确诊依赖于病理学方法。结果宫颈癌组织中HPV16E6基因的检出率为45％，显著高于宫颈炎组织中5％的检出率，两者有统计学差异。HPV16E7基因的检出率在两者之间没有显著性差异。结论：HPV16E6基因在宫颈癌的发病中起到重要的作用。宫颈组织中HPV16E6基因的检测有望成为宫颈癌筛查的新手段。     

宫颈癌组织中HLA-I缺失与HPV16、18感染的相关性研究

目的探讨宫颈癌与人类组织相容性抗原(HLA)表达缺失和人乳头瘤病毒(HPV)16、18感染的关系.方法采用免疫组织化学S-P法检测特异性鼠抗人HLA I类分子单克隆抗体及HPV16、18E6蛋白在宫颈癌组织中表达情况.结果62例宫颈癌组织中有42例HLA I抗原呈阳性表达,20例呈阴性表达,阴性表达率32.3%.有44例HPV16、18E6呈阳性表达,阳性率70.9%(44/62).在HPV16、18E6阳性表达组织中其HLA I抗原缺失明显增加.HLA I抗原阳性表达组织中CD3 T细胞和CD8 T细胞数量明显多于HLAI抗原阴性表达组织,肿瘤恶性程度及淋巴结转移与HLA I抗原下调有关.结论宫颈癌组织存在HLA I抗原部分缺失与HPV16、18感染密切相关.HLAI抗原部分缺失,形成了免疫逃逸导致了肿瘤细胞的发生、发展、浸润、转移.     

人乳头瘤病毒与中国妇女宫颈癌相关性的研究(Ⅳ.子宫颈癌组织中HPV—16基因组亚基因片段的检测)

本研究以a—~(32)P—dCTP标记的HPV—16基因组中三组亚基因片段为探针,应用制(?)内切酶技术和Southern印迹杂交方法进一步分析了9例HPV—16基因组已发生整合宫颈癌组织DNA中HPV—16基因组各亚基因片段存在的情况。结果表明,在整合状态下,PV—1基因组的部分L1 L2区和大部分E2 E4区是缺失的,而HPV—16基因组的E6 E7区■完整地被保留下来。提示HPV—16基因组的缺失区域很可能是其基因组发生断裂整合部位,而HPV—16基因组的E6 E7区可能是其导致细胞恶性转化的致癌基因。     

HPV16/18型病毒检测与宫颈癌的相关性研究

目的:探究HPV16/18型病毒感染与宫颈癌的相关性,分析其临床应用价值。方法:选取2014年1月-2017年1月本院收治的宫颈癌患者90例为观察组,同期来院体检健康者90例为对照组。所有研究对象均采用罗氏Cobas HPV与实时荧光定量PCR检测法测定HPV16/18DNA病毒载量,比较两组的阳性率。结果:观察组HPV16/18NDA载量水平及阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);ROC曲线绘制及Logistics多因素回归分析结果显示,HPV16/18DNA载量水平≥(5.56±1.04)、(5.55±0.06)copies/m L为宫颈鳞癌的独立风险因素(HR=1.004、0.783,P=0.045、0.031)。结论:宫颈鳞癌的发病与HPV16/18型病毒的感染具有一定相关性,建议临床完善高危人群的宫颈癌筛查工作,实现早发现、早诊治的目的,同时提示在宫颈癌癌前病变的过程中注意HPV感染。     

HPV16／18型病毒感染与宫颈癌的关系研究

目的探讨高危型人乳头瘤病毒（human papilloma—virus,HPV）16／18型感染与宫颈癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测176例宫颈癌患者及218例宫颈炎症患者的宫颈分泌物,计算两组HPV16／18型阳性率及各组中HPV—DNA病毒载量拷贝对数值。结果宫颈癌患者组HPVl6／18型阳性率78．41％（138／176）,宫颈炎患者组HPVl6／18型阳性率29．82％（65／218）,两组阳性率经）（2检验,有显著性差异（Х^2=92．06,P〈0．01）;病毒载量前者也显著高于后者（t=2．42,P〈0．01）。结论HPVl6／18型病毒感染与宫颈癌关系密切,实时荧光定量PCR检测可以早期发现、旱期治疗。是预防宫颈癌的有效手段。     

宫颈癌组织中HPV16 E7基因的结构变异及其意义

目的了解宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7基因的结构及其原核表达蛋白的免疫原性.方法运用PCR的方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列,ITPG诱导原核表达HPV16 E7蛋白,ECL Western blot的方法检测表达蛋白的免疫原性.结果宫颈癌组织中HPV16 E7基因的结构中存在两处点突变,分别是第43位密码子由标准株CAA变为TAA,第76位密码子由标准株CGT变为TGT.原核表达的HPV16 E7变异蛋白不能被HPV16 E7单克隆抗体识别.结论宫颈癌组织中HPV16 E7基因存在两个点突变,突变后的E7蛋白失去了免疫原性.将这种变异的HPV16 E7用于疫苗的研究开发,可能因其表达蛋白丧失恶性生物学行为而具有较高的安全性.     

宫颈癌组织中P16和HPV16/18 E7的表达及意义

①目的研究宫颈癌组织中抑癌基因p16 mRNA和蛋白质的表达,以及与HPV16/18 E7表达的关系.②方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测45例宫颈浸润癌组织、12例宫颈原位癌组织和20例正常宫颈组织中HPV16/18的感染情况;采用RT-PCR技术检测上述标本中HPV16/18阳性者E7 mRNA的表达水平及所有标本中p16 mRNA表达水平;采用免疫组化技术进一步检测HPV16/18 E7、P16蛋白的表达情况.③结果宫颈原位癌和浸润癌HPV16/18的感染率、HPV16/18 E7 mRNA和蛋白表达阳性率明显高于正常宫颈组织,差异有显著性(χ2=5.12～15.78,P<0.05、0.01),原位癌和浸润癌组之间比较差异无显著性(χ2=0.119、0.000,P>0.05);原位癌和浸润癌p16 mRNA的相对表达量明显高于正常宫颈,差异有显著性(F=5.412,q=4.125、5.519,P<0.05);HPV16/18 E7阳性组p16 mRNA的表达阳性率明显高于阴性组,差异有显著性(t=4.127,P<0.01);P16蛋白在宫颈原位癌和浸润癌组织中呈现过表达,在正常组织中为阴性表达或弱表达;p16 mRNA的相对表达量与HPV16/18 E7 mRNA的相对表达量呈显著正相关(r=0.813,P<0.05);P16蛋白的过表达与HPV16/18 E7蛋白表达有相关关系(χ2=8.959,P<0.01);HPV16/18 E7 mRNA和蛋白及p16 mRNA和蛋白的表达与肿瘤的组织学分级、淋巴结转移、肿瘤的大小和病人的年龄无关(P均>0.05).④结论抑癌基因p16的过表达发生在宫颈癌的早期和癌前病变阶段,可用于临床筛查和早期诊断宫颈癌.     

宫颈癌及其癌前病变组织中HPV16 E6蛋白的表达及意义

目的：探讨宫颈癌及其癌前病变组织中16型人乳头瘤病毒（HPV16）E6蛋白的表达及其意义.方法：用免疫组化SP法对15例正常宫颈组织、14例低级别宫颈上皮内瘤变（LCIN）、11例高级别宫颈上皮内瘤变（HCIN）以及61例浸润性宫颈癌标本进行了HPV16 E6蛋白表达的检测.结果：HPV16 E6蛋白在正常宫颈上皮、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ及浸润性宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0（0/15）、7.14%（1/14）、36.36%（4/11）、59.02%（36/61）.高级别CIN和浸润性宫颈癌中HPV16 E6蛋白阳性率明显高于正常宫颈组织和低级别CIN（P〈0.05）,HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌临床分期、组织分化和淋巴结转移无关（P〉0.05）.结论：HPV16 E6蛋白的检测可能可作为宫颈癌前病变转归的指标.