腹腔降温对心肺复苏后兔海马神经损伤的影响

目的 探讨心肺复苏(CPR)后腹腔降温法是否较其他降温法对新西兰兔海马CA1区神经元细胞损伤更具有保护作用.方法 48只新西兰成年大白兔,采用交流电致颤的方式建立CPR模型,依据降温方式的不同,随机(随机数字法)分为常温组(NT),腹腔内降温组(PC),体表降温组(SC)和头部局部降温组(LC)各12只.观察不同降温方法对自主循环恢复后( ROSC)鼓膜温度和血浆主要电解质的影响,ROSC后72 h取脑组织,计算海马CA1区有活力的神经元细胞数和凋亡神经元细胞数.各组数据依据正态检验结果用单因素方差分析( one-way ANOVA)或秩和检验(Mann-Whitney rank),多重比较用LSD-t检验,ROSC率的比较用用行×列连表x2检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ROSC后PC法能快速诱导亚低温,PC组达到目标温度的时间为(26±7)min,而SC组和LC组达到目标温度的时间分别为(60 ±9)min,(69±12) min;维持亚低温阶段,除NT组外,其余各组鼓膜温度均稳定的维持在33～35 ℃之间.ROSC后各组动物在各观察时间点上组间主要电解质、酸碱、水平衡和肾功能指标之间差异无统计学意义.ROSC后72 h海马CA1区有活力的神经元细胞数分别为NT组(37.07 ±6.43)个/40×、LC组(35.13 ±6.97)个/40×、PC组(55.76±10.13)个/40×和SC组(50.70 ±7.38)个/40× (PC vs.NT,P＜0.01,SC vs.NT,P＜0.01,PC vs.SC,P=0.043,PC vs.LC,P＜0.01,LC vs.NT,P=0.520).凋亡神经元细胞数分别为NT组(44.07 ±6.09)个/40×、PC组(29.88±4.81)个/40×、SC组(33.55 ±5.67)个/40×和LC组(42.27 ±5.20)个/40×(PC vs.NT,P＜0.01; SC vs.NT,P＜0.01; PC vs.LC,P＜0.01; SC vs.LC,P＜0.01,PC vs.SC,P=0.026),LCvs.NT,P=0.364).结论 ROSC后新型腹腔降温法能快速诱导亚低温和维持亚低温,对神经元的保护作用优于体表降温和头部局部降温法.     

乌司他丁对心肺复苏后兔脑损伤和心功能的影响

目的 观察乌司他丁( ulinastatin,UTI)能否抑制自主循环恢复(restoration of spontaneous circulation,ROSC)后新西兰兔血浆致炎因子TNF-α、IL-6水平的升高,改善心功能、保护海马CA1区神经元细胞.方法 建立新西兰兔心搏骤停模型,ROSC后随机(随机数字法)分为对照组和UTI治疗组.观察ROSC后血浆TNF-α和IL-6水平的变化,监测心肌收缩和舒张功能;观察海马CA1区神经元细胞损伤和各主要脏器炎症细胞浸润的情况.依据正态检验结果用t检验或秩和检验( Mann-Whitney rank),多重比较用POST HOC检验,炎症因子和心功能的相关分析采用Pearson相关分析.结果 UTI显著抑制ROSC后TNF-α和IL-6水平的升高,UTI组ROSC后各时间点TNF-α和IL-6水平均低于对照组.UTI组动物ROSC后4、8、12 h的左心室射血分数(EF)、二尖瓣E/A峰比值高于对照组,左心室缩短分数(FS)值在ROSC后4、8h高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析表明ROSC后TNF-α和IL-6水平与EF明显相关.CA1区有活力的神经元细胞数对照组为(13.22 ±0.97),UTI组为(16.89±1.45),差异具有统计学意义(P=0.003);对照组的凋亡神经元细胞数为(15.67±1.37),UTI组为(13.67±1.03),差异具有统计学意义(P =0.019).UTI可以减轻ROSC后肠道、肝脏和肾脏内炎症细胞的浸润.结论 UTI通过减轻ROSC后兔肠道、肝脏和肾脏内炎症细胞的浸润,使血浆致炎因子TNF-α和IL-6水平降低,从而改善心功能和保护海马CA1区神经元细胞.     

提高平均动脉压对猪心肺复苏后脑功能及超微结构的影响

目的 探讨使用去甲肾上腺素提高平均动脉压(MAP)对心肺复苏(CPR)猪脑功能及超微结构的影响.方法 10头猪致心室纤颤(室颤)4min后行CPR及电除颤.将自主循环恢复(ROSC)的猪按随机数字表法分为两组:高灌注组5头以去甲肾上腺素升压,使MAP升至麻醉前基础状态的130%;正常灌注组5头以去甲肾上腺素维持MAP至麻醉前状态.另取2头猪作为假手术组,既不给予室颤、也不给予CPR.持续监测血流动力学指标;ROSC后24 h进行大体神经功能分类(OPC),然后处死动物取缺血敏感部位脑组织(大脑皮质、海马CA1区、小脑皮质、纹状体)进行组织缺失评分(HDS)及细胞凋亡计数[原位末端缺刻标记法(TUNEL)];同时在电镜下观察上述部位脑细胞的超微结构.结果 高灌注组5头猪均有较好的神经功能评分(OPC 1～2分);正常灌注组5头中只有3头获得较好神经功能评分(OPC 1～3分).假手术组各部位脑组织基本正常;高灌注组大脑皮质及海马CA1区HDS(分)明显好于正常灌注组(大脑:1.6±0.5比2.2±0.8,海马:1.8±0.8比2.8±0.5,均P＜0.05);小脑皮质及海马CA1区凋亡细胞(个)较正常灌注组明显减少(小脑:21.2±3.2比38.6±3.8,海马:22.7±7.6比35.0±6.8,均P＜0.05).电镜下观察,坏死神经元主要位于大脑皮质、纹状体及海马CA1区,而凋亡主要发生于小脑颗粒细胞及海马CA1区神经胶质细胞.高灌注组神经元损伤明显减轻.结论 使用去甲肾上腺素提高灌注压可以有效减轻脑损伤,并抑制脑组织细胞凋亡.     

胰岛素对心肺复苏大鼠神经元凋亡及Bcl-2,Bax mRNA表达的影响

目的 探讨脑室内注射胰岛素对心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后大鼠海马CA1区神经元凋亡和对抑凋亡因子Bcl-2,促凋亡因子Bax mRNA表达的影响.方法 实验地点在首都医科大学宣武医院试验动物中心.30只雄性SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组(对照组,n=6)、心肺复苏组(复苏组,n=12)及CPR后胰岛素干预组(胰岛素组,n=12).经食道超速起搏诱发6min室颤制备大鼠CPR模型;以CPR后大鼠恢复室上性心率、收缩压超过60 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)并持续10 min以上,作为自主循环恢复(ROCS)标准;ROCS 10 min后,胰岛素组大鼠经立体定位仪定位,脑室内注射12.5 μL(1 U)胰岛素,其余2组大鼠注射等量生理盐水.维持生命体征,CPR后24,72 h,应用实时荧光PCR (Realtime-PCR)测定海马CA1区神经元Bcl-2,Bax mRNA的表达量;CPR后7d,应用TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;CPR前后监测大鼠静脉血糖变化.计量资料采用均数±标准差(-x±s),组间比较采用单因素方差分析(ANOVA);相关性统计应用Pearson相关分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 ①CPR后24,72 h,胰岛素组大鼠Bcl-2 mRNA表达量均高于复苏组(1.45±0.05) vs.(0.79±0.01);(0.95±0.06) vs.(0.35±0.03),差异具有统计学意义(P＜0.01).组内比较发现,胰岛素组、复苏组72 h表达均低于24 h(P＜0.01).而胰岛素组与复苏组Bax mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),胰岛素组、复苏组72 h与24h比较差异无统计学意义(P＞0.05).②CPR后7d,胰岛素组大鼠海马CA1区神经元凋亡计数,复苏组(124.75±17.35)个/mm2明显高于对照组(5.12±3.26)个/mm2和胰岛素组(92.79±7.49)个/mm2,差异具有统计学意义(P＜0.01).③各组大鼠各时间点外周静脉血糖比较无统计学意义(P＞0.05).结论 脑室内注射1U胰岛素,能够促进CPR后大鼠神经元促凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达,抑制神经元凋亡,具有神经保护作用.脑室注射1U胰岛素不降低外周血糖.     

促红细胞生成素对心肺复苏后心肌功能的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对窒息性心搏骤停大鼠心肺复苏(CPR)后心功能不全的心肌保护作用.方法 经夹闭气管8 min建立窒息性心搏骤停-CPR动物模型.按随机数字表法将24只SD大鼠分为3组,每组8只.CPR组窒息致心搏骤停后8 min予胸外按压和机械通气进行复苏;EPO组于自主循环恢复(ROSC)后3 min股静脉注射EPO 5 kU/kg;正常对照组不予任何处理.持续监测左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张期末压(LVEDP)、左心室内压上升或下降最大速率(±dp/dt max)等血流动力学指标.于观察终点(ROSC后120 min)处死大鼠,采血测定血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)含量;光镜和透射电镜下观察心肌组织病理改变;原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡.结果 CPR组和EPO组ROSC后30、60、90、120 min时LVSP、+dp/dt max和- dp/dt max绝对值均较基线水平明显下降.与正常对照组比较,CPR组和EPO组ROSC 30 min时LVSP(mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa)、+dp/dt max(mm Hg/s)、- dp/dt max绝对值(mm Hg/s)即明显下降(LVSP:119.52±12.68、134.32±15.78比165.82土7.05; +dp/dt max:4 457.14±826.22、6 019.85±1 192.19比10 325.93±773.09; - dp/dt max:-3 956.04±952.37、-4 957.22±838.60比-8 421.33±886.65,均P＜0.01),并持续至ROSC 120 min(LVSP:124.62±8.07、145.61±16.70比162.34±7.63; +dp/dt max:4 977.67±350.40、7 471.62±998.32比9 999.39±727.96;- dp/dt max:-4 145.51±729.77、-5 895.64±787.30比-8 089.75±981.52,均P＜0.01);经EPO处理后ROSC各时间点LVSP、+dp/dtmax和- dp/dtmax绝对值均较CPR组显著升高(均P＜0.05).CPR组和EPO组ROSC 120 min LVEDP(mm Hg/s)均较正常对照组明显升高(22.94±3.94、11.18±2.58比2.89±0.70,均P＜0.01),EPO组LVEDP则较CPR组明显下降(P＜0.05).光镜和电镜下观察,CPR组心肌细胞坏死、炎性细胞浸润,心肌细胞胞膜完整性丧失、线粒体肿胀,心肌细胞凋亡增加[凋亡细胞数(个):314.1±30.7比165.2±45.9,P＜0.01];经EPO干预后心肌病理损伤减轻,心肌细胞凋亡较CPR组减少(凋亡细胞数:242.1±20.0比314.1±30.7,P＜0.05).CPR组和EPO组ROSC 120 min血清cTnI (μg/L)均较正常对照组明显升高(20.70土5.96、16.98±3.81比2.60±0.86,均P＜0.01),而CPR组和EPO组比较无差异.结论 EPO可以改善窒息性心搏骤停大鼠CPR后的心功能,减轻心肌损伤,其机制可能与减少线粒体损伤和心肌细胞凋亡有关.     

心肺复苏后大鼠神经细胞Caspase-3表达与细胞凋亡关系的实验研究

目的 探讨心肺复苏后大鼠脑组织Caspase-3表达与细胞凋亡的关系.方法建立窒息联合冰氯化钾致大鼠心脏骤停/心肺复苏(CA/CPR)的动物模型,于各时相点断头留取脑组织,采用免疫组化的方法观察CPR后脑组织Caspase-3蛋白的表达,TUNEL检测神经细胞凋亡.结果对照组脑组织内仅有少量TUNEL阳性细胞;ROSC后3 h出现表达阳性细胞,ROSC后6 h表达开始增多,ROSC后12 h进一步上升(P<0.05),其后各组均处于高水平表达.Caspase-3表达均在ROSC后24 h显著增加,直至ROSC后72 h,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),Spearman等级相关检验Caspase-3表达与细胞凋亡明显相关(r=0.909).结论CA/CPR后大鼠脑线粒体Caspase-3蛋白高表达可能是细胞凋亡增加的原因之一.     

膈肌下抬挤心脏复苏法对开腹手术中心搏骤停兔血流动力学及心肌细胞凋亡的影响

目的 观察膈肌下抬挤心脏复苏法(cardiopulmonary resuscitation under the diaphragmatic muscle,D-CPR)和常规胸外心脏按压法(standard cardiopulmonary resuscitation,SCPR)对心搏骤停(cardiac arrest,CA)兔CA至自主循环恢复(return of spontaneous circulation,ROSC)时间、血流动力学、ROSC率、6h生存率、心肌细胞caspase3的表达及心肌细胞凋亡的影响,探讨D-CPR的复苏机制,为开腹手术中发生的CA选择更合适的复苏方法提供参考.方法 32只健康新西兰兔随机(随机数字法)分为:D-CPR组、S-CPR组,每组16只.腹腔注射氯氨酮、速眠新合剂,气管切开后插入气管导管,分离右颈内静脉、左侧颈总动脉,于左侧颈总动脉插入静脉留置针,监测动脉压,右侧颈内静脉插入中心静脉()管监测中心静脉压(central venous pressure,CVP),通过体表监测并记录Ⅱ导联心电图;模拟开腹手术操作,待动物生命体征平稳5min后,于呼气末夹闭气管导管,持续8min,制作窒息性CA模型.心电图示无脉性电活动或心室停搏后,不作干预,2 min后采用D-CPR或S-CPR进行心肺复苏,观察两种复苏方法的复苏效果,对比两组动物CA至ROSC的时间、血流动力学变化、ROSC率及6h生存率的不同,检测复苏成功6 h后兔心肌细胞组织形态学改变和心肌细胞caspase3的表达,以及心肌细胞凋亡指数(apoptotic index,AI).结果 ①CA至ROSC时间:D-CPR组显著低于S-CPR组;②CPR 15 min内冠脉灌注压(coronary perfusion pressure,CPP)、平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)变化:D-CPR组CPP、MAP明显高于S-CPR组(P＜0.05).③ROSC后SBP、DBP变化:D-CPR组明显高于S-CPR组(P＜0.05).④ROSC率:D-CPR组的ROSC率显著高于S-CPR组,81％ vs.43％,P＜0.05.⑤6h存活率:D-CPR组6h存活率明显高于S-CPR组,75％ vs.25％,P＜0.05.⑥HE染色:D-CPR组心肌损伤较轻,心肌细胞水肿较轻,细胞界限清楚,S-CPR组心肌损伤较重,心肌细胞水肿,细胞界限不清,片状坏死,伴少许炎细胞浸润.⑦心肌细胞caspase3表达:D-CPR组心肌caspase3阳性细胞累积光密度(integrated optical density,IOD)明显低于S-CPR组(P＜0.05).⑧心肌细胞AI检测:D-CPR组心肌细胞AI明显低于S-CPR组(P＜0.05).结论 ①D-CPR较S-CPR产生更好的血流动力学效果,显著提高CPP、MAP,提高ROSC率及6h生存率,提示在开腹手术中发生CA采用D-CPR可能比S-CPR更为有效.②D-CPR具有较高的ROSC率及6h生存率,可能与其缩短CA至ROSC的时间,减少心肌细胞caspase3表达,减少心肌细胞凋亡,减轻缺血-再灌注后心肌细胞损伤程度有关.     

乌司他丁对心肺复苏后Wistar鼠大脑皮层炎症反应的影响

目的 评价乌司他丁(UTI)对心肺复苏(CPR)后大鼠大脑皮层炎症因子TNF-α和IL-6表达及神经元细胞凋亡的影响.方法 36只成年雄性Wistar大鼠采用交流电致颤的方式诱发室颤(VF),持续7 min后进行CPR,建立VF/CPR模型.自主循环恢复(ROSC)后立即给予乌司他丁100 000 U/kg或等体积的PBS静脉注射.VF前和ROSC后2、4、8h采血检测血浆TNF-α、IL-6水平,并取大脑皮层进行定量PCR和Western blot检测TNF-α、IL-6 mRNA表达和蛋白表达,检测核因子NF-κB p65的核浆转位情况.ROSC后72 h行皮层NISSL和TUNEL染色计数顶叶皮层存活神经元细胞数和凋亡神经元细胞数.结果 ROSC后UTI组2、4、8h血浆TNF-α质量浓度分别为(17.7±1.4)、(21.9±2.1)和(17.1±0.6),低于PBS组(t2h=1.42,t4h =2.93,t8 h =4.22,各组P＜0.05).UTI组2、4、8h血浆IL-6质量浓度(ng/mL)分别为(208.9±14.1)、(281.5 ±25.9)和(251.8±15.3),显著低于PBS组(t2h=3.87,t4h=2.45,t8h=3.74,各组P＜0.05).ROSC后UTI组2、4、8h大脑皮层TNF-α、IL-6 mRNA表达和蛋白表达量均显著低于PBS组.PBS组ROSC后2、4、8h大脑皮层NF-κB p65的核/浆转换率为(1.08±0.08)、(1.02±0.05)和(0.97 ±0.02),高于UTI组.ROSC后72 h UTI组大脑皮层存活神经元细胞数为(22±3)个/400×400像素,多于PBS组的(19±2)个/400×400像素(Z=2.887,P=0.02);凋亡细胞数UTI组为(10±2)个/400×400像素,低于PBS组的(13±3)个/400×400像素(Z =3.751 P=0.01).结论 UTI降低ROSC后Wistar大鼠全身炎症反应,减少大脑皮层NF-κB通路的激活,减少致炎因子TNF-α和IL-6的表达,从而减少神经元细胞凋亡,促进细胞存活.     

硫化氢对大鼠心脏骤停后海马组织bax和bcl-2表达的影响

目的 通过检测大鼠海马组织bcl-2和bax表达来探讨硫化氢(H2S)在心脏骤停(cardiac arrest, CA)后脑细胞凋亡中的作用.方法 雄性SD大鼠160只,初始选择108只随机均分为三组,建立CA/CPR模型.①第1组(36只):在自主循环恢复(ROSC)后予以NaHS干预;②第2组(36只),在自主循环恢复(ROSC)后予以羟胺干预;③第3组为常规复苏组(36只).上述三组根据观察终点又均分为1、3和7 d三个亚组,每个亚组再等分两组分别做相关凋亡的免疫组化和RT-PCR检测.结果 ①三组经历CPR大鼠死亡及备用鼠使用的差别无统计学意义(P>0.05);②在CPR后,三组之间大鼠血清H2S浓度变化的差异有统计学意义(F=189.917,P=0.000),在CPR后各时点上三组之间血清H2S浓度的差异均有统计学意义(P=0.000);③在CPR后,三组之间大鼠海马组织CA1区bax和bcl-2蛋白表达累积光密度变化的差异有统计学意义(P<0.05),在CPR后各时点上三组之间海马组织CA1区bax和bcl-2蛋白表达累积光密度的差异均有统计学意义(P<0.01);④在CPR后,三组之间大鼠海马组织bax和bcl-2 mRNA相对表达量变化的差异有统计学意义(P=0.000),在CPR后各时点上三组之间海马组织bax和bcl-2 mRNA相对表达量的差异有统计学意义(P<0.01).结论 在CPR后,H2S可能通过促进bcl-2和抑制bax表达来影响bcl-2/bax的平衡而参与神经细胞凋亡.     

乌司他丁对大鼠心肺复苏后血清与海马CA1 区S100β蛋白变化的作用

目的 探讨乌司他丁对大鼠心肺复苏(CPR)后脑含水含量、血清S100β蛋白及海马CA1区S100β蛋白表达变化的影响.方法 成年雄性SD大鼠120只,随机分为假手术对照组(n=40)、复苏组(n=40)、乌司他丁组(n=40),每组按气管切开后(对照组)或自主循环恢复(ROSC)后(复苏组、乌司他丁组)0.5 h,3 h,6 h,12 h和24 h分为5个亚组(n=8).复苏组和乌司他丁组采用窒息致大鼠心脏骤停(CA)和心肺复苏(CPR)模型,乌司他丁组于ROSC后2 min内经颈动脉推注注射用乌司他丁(10万u/k).对照组仅行麻醉、气管切开和血管穿刺.分别于各时间点取血和组织标本,以干湿比质量法测定脑组织含水量;ELISA法检测血清S100β蛋白质量浓度,免疫组化测定海马S100β蛋白的表达.数据处理应用SPSS 10.0软件,多组比较采用方差分析.方差齐性检验采用用Levene's 法,方差齐性时采用LSD法,方差不齐时采用Tamhane's检验,相关分析采用Person's法.结果 与对照组比较,复苏组Rose后各亚组脑含水量显著升高(P<0.05或P<0.01),与复苏组比较,乌司他丁组12 h,24 h脑含水量显著降低(P<0.05).与对照组比较,复苏组血清S100β蛋白ROSC后0.5 h起即明显升高,并持续上升至12 h达峰值,24 h有所回落,差异具有统计学意义(P<0.01);与复苏组比较,乌司他丁组ROSC后6 h、12 h、24 h显著降低(P<0.01).免疫组化显示对照组海马CA1区S100β蛋白阳性细胞均维持在较低水平,复苏组ROSC后各时相海马CA1区S100β蛋白阳性细胞数均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);与复苏组比较,乌司他丁组从ROSC后6 h起S100β蛋白阳性细胞表达显著降低(P<0.05).且复苏后各时相海马CA1区S100β蛋白与脑含水量密切相关(r=0.862,P:0.015).结论 乌司他丁能降低大鼠心肺复苏后血清S100β蛋白、海马CA1区星形胶质细胞S100β蛋白表达和脑水肿程度,从而减轻脑损伤.     

硝酸异山梨酯改善猪心肺复苏后的心功能障碍

目的研究硝酸异山梨酯（isosorbide mononitrate,IM）对室颤型心脏骤停猪自主循环恢复（return of spontaneous circulation,ROSC）后的心功能障碍的影响。方法实验于首都医科大学附属北京朝阳医院实验中心进行。20头五指山小型猪随机（随机数字法）分成 IM组（n ＝10）和对照组（n ＝10）,通过程控刺激方法制作室颤型心脏骤停模型,制模成功后8 min 后行 CPR。IM组在 ROSC 即刻给予 IM [2μg／（kg·min）]6 h;对照组则给予等量生理盐水。比较两组实验动物 ROSC 后24 h 内血流动力学及 ROSC 后72 h 心脏超声和心肌超微结构变化。结果IM组和对照组 ROSC 几率相同;IM组平均动脉压（mmHg,1 mmHg ＝0.133 kPa）在 ROSC 后6 h （88.5±5.6 vs.87.8±6.0,P ＝0.790）与24 h （89.3±3.8 vs.86.9±5.0,P ＝0.245）较对照组差异无统计学意义;IM组心输出量（L／min）在 ROSC 6 h （2.40±0.17 vs.1.60±0.14,P ＜0.01）及24 h （2.49±0.12 vs.2.09±0.16,P ＜0.01）较对照组显著升高;复苏后72 h IM组左心室收缩功能较对照组显著改善,射血分数显著高于对照组（0.67±0.08 vs.0.56±0.09,P ＝0.044）;ROSC 72 h IM组心肌超微结构损伤较对照组减轻。结论硝酸异山梨酯可以改善室颤引起的猪心搏骤停复苏后的心功能障碍。     

不同时间迷走神经电刺激对大鼠心肺复苏预后的影响

目的 探讨不同时间迷走神经电刺激(vagus nerve stimulation,VNS)对心脏骤停(cardiac arrest,CA)/心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后大鼠预后的影响.方法 采用改良经皮心外膜电刺激诱导心室颤动方法建立大鼠CA模型.53只雄性SD大鼠随...     

乌司他丁对大鼠心肺复苏后心肌损伤的保护作用

目的 探讨大鼠心肺复苏(CPR)后血清心肌酶的变化、心肌超微结构改变.以及乌司他丁的干预作用.方法 将120只SD大鼠随机分为假手术组、复苏组、药物组,再按气管切开后或自主循环恢复(ROSC)后0.5、3、6、12、24 h分为5个亚组,每个亚组8只.采用窒息法建立大鼠心脏停搏(CA)和CPR模型.药物组于ROSC后2 min内经颈动脉推注乌司他丁100 kU/kg;复苏组给予等量生理盐水.测定各组大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)含量;电镜下观察心肌超微结构改变.结果 复苏组、药物组血清CK-MB含量从ROSC后0.5 h起均明显增高,于12 h达峰值.之后均有所下降;cTnI含量于ROSC后0.5 h起均逐渐增高;两者各时间点均较假手术组明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.01).与复苏组比较,药物组ROSC后3 h起血清CK-MB含量均明显降低,cTnI含量于ROSC后0.5 h起均明显降低(P<0.05或P<0.01).药物组心肌超微结构病理损害明显轻于复苏组.结论 乌司他丁能降低大鼠CPR后血清CK-MB和cTnI含量,减轻大鼠心肌损伤,对心肌具有一定的保护作用.     

Ulinastatin improved cardiac dysfunction after cardiac arrest in New Zealand rabbits

Objective

The present study was designed to evaluate the effects of ulinastatin (UTI) on cardiac dysfunction after cardiopulmonary resuscitation (CPR).

Methods

A total of 48 healthy adult male New Zealand rabbits were untreated for 8 minutes after the induction of ventricular fibrillation (VF) by an external transthoracic alternating current and then treated by CPR. These rabbits were then randomly divided into the control and UTI groups after the return of spontaneous circulation (ROSC) and were observed for 8 hours after the ROSC. Before CPR and after ROSC at 2, 4, and 8 hours, blood samples were collected to determine the levels of tumor necrosis factor α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), malondialdehyde (MDA), cardiac troponin I (cTnI), and N-terminal probrain natriuretic peptide (NT-proBNP), and the left ventricular ejection fraction (EF) was measured by echocardiography.

Results

Nineteen of 24 rabbits in the control group and 18 of 24 in the UTI group were successfully resuscitated. The plasma levels of TNF-α, IL-6, MDA, cTnI, and NT-proBNP were significantly increased, accompanying a deceased EF in the control group, but the cotreatment with UTI decreased the plasma levels of TNF-α, IL-6, MDA, cTnI, and NT-proBNP (P < .05), attenuating the myocardial injury and improving the EF in the UTI group. Only 9 of 19 animals in the control group but 14 of 18 animals in the UTI group survived longer than 8 hours (P = .011).

Conclusions

The progression of proinflammatory responses, oxidative stress, and myocardial injury have been linked to the reduced EF after VF/CPR, and the administration of UTI at a cardioprotective dosage preserved the cardiac function after VF/CPR.     

亚低温对兔心肺复苏后凝血及脑微循环的影响

目的 探讨亚低温治疗对兔心肺复苏后凝血异常及脑微循环血流变化的干预作用.方法 本实验在中山大学卫生部辅助循环重点实验室进行.24只成年新西兰大白兔随机(随机数字法)分为常温(normothermic,NT)治疗组和亚低温治疗(therapeutic hypothermia,TH)组,每组12只,采用交流电致颤的方式建立心肺复苏(CPR)模型,自主循环恢复后(ROSC)NT组动物置于室温下观察12 h,TH组动物采用体表降温的方法诱导亚低温,达到目标温度后维持12 h.所有动物CPR前及ROSC后4,8,12 h分别测定PT,APTT,INR,D-D,血小板计数(BPC);测定抗凝血酶Ⅲ活性(AT-Ⅲ)和血浆蛋白C活性(PC);用PERIMED Multichannel Laser Doppler系统监测大脑皮层微循环血流.各组数据依据正态检验结果用单因素方差分析或秩和检验,多重比较用LSD-t检验,两样本均数的比较用成组t检验,相关性采用Pearson相关性分析,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 NT组动物ROSC后PT,APTT,INR逐渐缩短的趋势,ROSC后12 h APTT明显短于基础值(P=0.025),而AT-Ⅲ和PC活性显著下降.和NT组相比,TH组PT,APTT,INR值显著增大,差异具有统计学意义;但AT-Ⅲ,PC活性、D-D浓度,两组差异无统计学意义.CPR前、ROSC后4,8和12 h NT组大脑皮层血流分别(401.60±11.76),(258.86±34.58),(317.59±23.36)和(371.98±5.79)mL/min,TH组为398.18±12.91.336.19±19.27,347.76±13.80和383.78±3.29 mL/min.ROSC后各时间点TH组大脑皮层血流量明显高于NT组(4 h:t=-6.025,df=16,P=0.000;8 h:t=-2.942,df=12,P=0.012;12 h:t=-3.959,df=8,P=0.004).Pearson相关分析显示ROSC后大脑皮层血流和APTT正相关(4 h:R=0.503,P=0.033;8 h:R=0.565,P=0.035;12 h:R=0.774,P=0.009),与其他凝血指标无关.结论 ROSC后亚低温治疗使凝血功能下降的同时伴随脑微循环血流的增加,CPR后亚低温治疗对ROSC后凝血失衡的影响可能是其发挥脑保护作用的机制之一.

Abstract：

Objective To study the effects of mild hypothermia (MH) on blood coagulation and cerebral microcirculation in rabbits after cardiopulmonary resuscitation (CPR). Method A total of 24 New Zealand rabbits were randomly (random number) divided equally into normothermic group (NT) and MH group. CPR model was established by ventricular fibrillation induced by using alternating current. The rabbits of NT group were observed for 12 h in room temperature after restoration of spontaneous circulation (ROSC). The mild hypothermia was induced in the rabbits of group MH by surface cooling after ROSC, and maintained for 12 h after the aimed low temperature reached. The PT (prothrombin time), APTT (activated partial thromboplastin time), INR (international normalized ratio of prothrombin), D-dimmer (DD) , blood platelet count (BPC) , anti-thrombin Ⅲ activity (AT-Ⅲ) and protein C activity (PC) were measured before CPR and 4 h, 8 h and 12 h after ROSC, and at the same time the cerebral microcirculation was measured by using PERIMED Multichannel Laser Doppler system. One-way ANOVA or Mann-Whitney rank was used to determine the statistical significance between two groups. LSD-t test was used for multiple comparisons,t test for comparisons of means between two independent samples, and Pearson correlation test for correlation analysis. Results The PT, APTT and INR showed a trend of gradually shortening during the course. The APTT in 12 h after ROSC was significantly shorter than that before CPR (23.32 ±5.19 vs. 29.53 ±5.10,P = 0.025), and the activity of AT- Ⅲ and PC were decreased significantly. Compared with the group NT,the PT, APTT and INR in group MH were increased significantly, while there were no differences in the activity of AT- Ⅲ, PC and D-D between two groups. The rates of cerebral microcirculation in group NT before CPR and 4 h, 8 h and 12 h after ROSC were 401.60 ± 11.76 mL/min, 258.86 ± 34. 58 mL/min,317.59 ± 23.36 mL/min and 371.98 ± 5.79 mL/min, respectively, and those in group MT were 398.18 ±12.91 mL/min, 336.19 ± 19.27 mL/min, 347.76 ± 13.80 mL/min and 383.78 ± 3.29 mL/min, respectively. There were significant differences between two groups at each interval after ROSC (4 h: t = - 6.025,df=16, P=0.000;8 h: t= -2.942, df=12, P=0.012;12 h: t= -3.959, df=8, P=0.004). The Pearson correlation test showed that the rate of cerebral microcirculation was positive correlated with APTT after ROSC (4 h:R =0.503,P=0.033;8 h:R=0. 565,P=0. 035;12 h:R=0. 774,P=0. 009), and was not correlated with the other blood coagulants. Conclusions The mild hypothermia led to the inhibition of blood coagulation and improved the cerebral microcirculation concomitantly, which may be one of the mechanism of cerebral protection.     

灌注加权成像技术对猪复苏后亚低温治疗脑损伤效果的评价

目的通过灌注加权成像（PWI）技术研究心肺复苏（ROSC）成功后72h内脑功能、脑灌注的动态变化趋势和亚低温的脑保护作用。方法五指山猪30只,致颤8min后按标准心肺复苏,复苏成功28只,随机分为低温组（14只）和常温组（14只）。低温组在自主循环恢复后运用血管内降温法进行亚低温治疗（33℃低体温维持12h后以0．5℃小波动复温）,常温组不干预体温,动态监测血流动力学变化,于基础状态及ROSC后6、12、24、72h行脑组织PWI检查。结果低温组72h成活率（78．6％与42．9％,P〈0．05）、72h神经功能缺损评分优于常温组（45．27分与119．50分,P＝0．001）,表明复苏后两组平均通过时间均延长,局部脑血流量、脑血容积下降;低温组平均通过时间、局部脑血流量数值变化较常温组幅度小,脑组织缺血程度较常温组轻。结论ROSC后早期脑组织即出现严重的脑损伤,复苏后6h损伤最严重,PWI技术可以对复苏后脑组织循环和灌注进行动态监测,亚低温疗法一定程度上可提高复苏后生存率,改善脑功能恢复,具有较好的脑保护作用。     

大鼠心肺复苏后神经细胞线粒体通透性转换孔变化在细胞色素C释放中的作用

目的 探讨大鼠心肺复苏后神经细胞线粒体通透性转换孔(MPTP)变化在细胞色素C释放中的作用及可能机制.方法 以56只成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠建立窒息加冰氯化钾致心搏骤停/心肺复苏(CA/CPR)动物模型,随机(随机数字法)分为7组,即假手术组、自主循环恢复(ROSC)后3 h,6 h,12 h,24 h,48 h,72 h组,每组8只,分别在各时相点断头处死大鼠,采用差速离心法分离制备大脑皮质内线粒体匀浆.采用分光光度法测定线粒体不同时相MPTP的开放程度,Western blot免疫杂交法检测线粒体细胞色素C释放(CytC).采用SPSS 11.5 for Windows统计软件分析结果.结果 ROSC后6 h内神经细胞MPTP开放程度保持低水平,6 h以后开始迅速大量开放,12 h开放程度达到最大,24 h开放程度略有缩小,至48 h开放程度再次加大,72 h又明显缩小,与对照组相比较差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).正常脑组织线粒体CytC蛋白在相对分子质量14 000处出现一强阳性条带,而胞浆蛋白中CytC蛋白含量甚微,呈一弱阳性条带.ROSC后3 h线粒体CytC蛋白未见显著变化,而胞浆成分中开始增多,至ROSC后24 h大部分CytC已释放至胞浆中,此时线粒体条带明显减弱.结论 大鼠CA/CPR并ROSC后神经MPTP的开放程度与CytC释放的量呈明显的相关性,MPFP的开放促使CytC的释放.