大黄水提取物对妊娠早期孕鼠生殖毒性作用及其机理的初步研究

目的:本试验观察大黄水提取物对妊娠早期小鼠的生殖毒性作用并初步探讨其作用机理。方法:给妊娠第3天小鼠连续5 d天灌服不同剂量(7、5、2.5 g/kg)大黄水提取物,对照组灌服0.9%生理盐水,各组于孕第12采血处死小鼠。放射免疫技术测定血清中雌二醇和孕酮水平;ELISA检测子宫组织匀浆中IFN-γ,IL-2和TNF-α含量,石蜡切片后免疫组织化学染色法检测子宫内膜巨噬细胞数量,甲苯胺蓝染色法检测子宫内膜肥大细胞数量。结果:随着大黄水提取物剂量的增加,小鼠的流产率逐渐上升,7 g/kg处理组小鼠100%流产。雌激素和孕激素含量呈下降趋势,细胞因子IFN-γ和TNF-α、IL-2含量不同程度增加,肥大细胞和巨噬细胞数量显著增加(P0.05)。结论:大黄水提取物不仅由于其泻泄作用干扰孕鼠妊娠状态的稳定性,而且可直接影响早期胚胎发育的子宫内膜环境,从而导致流产。     

淫羊藿苷通过HIF-1α/VEGF通路介导的血管生成调节大鼠种植窗期子宫内膜容受性

目的 探究淫羊藿苷通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子（VEGF）通路介导的血管生成调节大鼠种植窗期子宫内膜容受性的机制。方法 取SD雌性大鼠通过灌胃羟基脲+肾上腺素皮下注射的方法建立子宫内膜容受障碍模型，随机分为模型组、淫羊藿苷低剂量（10 mg/kg）组、淫羊藿苷高剂量（20 mg/kg）组、淫羊藿苷高剂量（20 mg/kg）+空载组、淫羊藿苷高剂量（20 mg/kg）+HIF-1α敲低组，每组20只，另选20只SD雌性大鼠灌胃+皮下注射等剂量生理盐水做对照组，将各组雌鼠与雄鼠合笼得到孕鼠并分组处理后，测定各组大鼠性激素[雌激素（E2）、孕酮激素（P）]水平、平均着床胚胎数；免疫组织化学染色检测各组大鼠子宫内膜微血管密度（MVD）；扫描电子显微镜检测各组大鼠子宫内膜超微结构；免疫组织化学染色和免疫印迹检测各组大鼠子宫内膜组织HIF-1α/VEGF通路蛋白表达。结果 与对照组相比，模型组大鼠子宫内膜表面附着大量短细微绒毛，未发现胞饮突，血清E2与P水平、平均着床胚胎数、子宫内膜MVD、HIF-1α与VEGF蛋白表达明显降低（P<0.05）；与模型组相比，淫羊...     

红藤对LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫巨噬细胞的影响

目的:探讨红藤对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的保护作用及其免疫药理机制。方法:昆明种小鼠55只,随机分为对照组(A组,10只)和实验组。实验组又分为LPS处理组(B组)、红藤处理组(C组)、红藤及LPS双处理组(D组),每组各15只。观察妊娠结果,并用酶组织化学、免疫组化、ELISA方法检测子宫非特异性酯酶阳性(α-NAE+)、CD14+、CD204+巨噬细胞和TNF-α的变化。结果:小鼠流产率在B组为100%(P<0.01),胚胎吸收率为100%(P<0.01);而D组流产率降低为13.33%,胚胎吸收率降至12.56%;孕鼠子宫α-NAE+、CD14+巨噬细胞数量,B组子宫各部位与A组相比均显著增多(P<0.01);D组环肌外侧与A组相比显著增多(P<0.01),但环肌内侧、功能层无明显变化,C、D组CD204+巨噬细胞数量与A组、B组相比均显著增多(P<0.01);子宫TNF-α含量B组与A组相比显著增加(P<0.01),而D组接近正常水平。结论:红藤可以对抗LPS所致的小鼠流产,通过影响孕鼠子宫巨噬细胞的数量、分布和亚群,抑制TNF-α的分泌,是其保护胚胎正常发育的机理之一。     

糖尿病大鼠下颌下腺内细胞间黏附分子-1及肿瘤坏死因子-α的表达

目的:观察糖尿病大鼠下颌下腺内细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达变化.方法:链脲佐菌素复制SD雄性大鼠糖尿病动物模型,分别于4周、12周后测体质量和血糖,H-E染色观察下颌下腺形态学变化,免疫组织化学SABC技术,检测ICAM-1及TNF-α蛋白表达变化.结果:糖尿病组大鼠下颌下腺组织萎缩,间质纤维增生.与对照组比较糖尿病组大鼠下颌下腺导管上皮细胞ICAM-1和TNF-α表达均显著增加.结论:ICAM-1及TNF-α参与了糖尿病病理变化过程.     

孕酮对小鼠子宫巨噬细胞数量及膜受体CD14、CD204表达的影响

目的 探讨孕酮对子宫巨噬细胞数量及其膜受体CD14、CD204表达的影响,以及孕酮和巨噬细胞在子宫局部免疫中的作用。 方法 1. 25只正常非孕鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和低、中、高3个不同浓度孕酮处理实验组,每组5只。低、中、高浓度实验组每天分别皮下注射0.4mg、2.0mg、4.0mg孕酮,阴性对照组注射等体积芝麻油,连续注射5d;空白对照组不做任何处理。2.孕4d和5d小鼠各15只,分别随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组,每组5只。实验组分别于当天早晨皮下注射4mg孕酮,阴性对照组注射等体积芝麻油,空白对照组不做任何处理。以上各组均于末次注射后6h取子宫,通过非特异性酯酶（α-NAE）染色和免疫组织化学检测子宫α-NAE⁺ 、CD14⁺ 、CD204⁺巨噬细胞的变化。 结果 与对照组相比,注射孕酮后,非孕鼠子宫内膜、肌层和外膜的αNAE⁺及CD14⁺巨噬细胞极显著减少（P<0.01）,并与剂量呈正相关,但未检测到CD204⁺巨噬细胞;孕4d、5d小鼠子宫α-NAE⁺ 、CD14⁺ 、CD204⁺巨噬细胞均显著增多（P<0.01）。 结论 孕酮可通过调节巨噬细胞数量、分布及膜受体的表达影响子宫局部免疫状态,替代途径活化的巨噬细胞可能介导了妊娠期母胎免疫耐受的维持。     

CD57+自然杀伤细胞在妊娠早期小鼠子宫壁内的分布

目的　探索ＣＤ５７＋ 自然杀伤细胞（ＮＫ细胞,ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ）在小鼠妊娠早期子宫壁内的意义。方法　用小鼠抗人ＮＫ细胞ＣＤ５７单克隆抗体,对未经产小鼠妊娠早期子宫壁内ＮＫ细胞进行免疫组织化学标记。结果　孕０ｄ,小鼠子宫壁内见少量ＣＤ５７＋ 细胞,孕２ｄ 时ＮＫ细胞数量剧增,孕４ｄ 时稍下降。孕６ｄ、孕８ｄ 时数量更少（低于０ｄ 值）。孕６ｄ 和８ｄ 均出现妊娠失败个体,其子宫壁内ＮＫ细胞很多,显著高于正常妊娠６ｄ 和８ｄ 小鼠的数量（Ｐ＜ ０．０１）。从分布区域看,胚胎着床（４．５ｄ）前,ＮＫ细胞多位于子宫肌层,胚胎着床后仅存在于着床点以外的子宫内膜和肌层。在妊娠失败个体,ＮＫ细胞广泛存在于子宫内膜和肌层中。　结论　小鼠交配后子宫ＮＫ细胞增多与子宫炎性反应有关。着床期以后子宫ＮＫ 细胞增多与妊娠失败有一定的相关性。     

针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的影响

 目的：观察针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响。方法：144只孕鼠随机分为对照组（N）、米非司酮组（M）、米非司酮+针刺组（A）和米非司酮+黄体酮组（W）,每组随机再分为6 d组、8 d组和10 d组。其中M组、A组和W组妊娠1 d给予米非司酮-麻油溶液造模,N组则给予等量麻油溶液。同时,每天下午A组固定并行针刺三阴交和后三里,N组和M组仅固定,W组肌肉注射黄体酮,直到处死当天结束。统计孕鼠胚胎着床数,用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜的CD4+Foxp3+Treg细胞的比例,Western blotting和real-time PCR测定着床点的子宫内膜Foxp3的表达。结果：与N组相比,M组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例、着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均明显下降（P<005）;与M组相比,A组和W组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例以及着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均有不同程度地升高。结论: 针刺改善胚胎着床障碍大鼠的胚胎着床可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的调节密切相关。     

妊娠早期小鼠子宫内膜热休克蛋白70的免疫组化研究

目的 :研究妊娠早期小鼠子宫内膜热休克蛋白 70的表达。方法 :采用免疫组织化学方法。结果 :热休克蛋白 70主要存在于子宫内膜固有层的基质细胞及蜕膜细胞 ,内膜上皮、腺上皮中未见表达。与未孕小鼠相比 ,孕鼠热休克蛋白 70免疫反应阳性细胞显著增多 (P <0 .0 1 )且随妊娠日龄的增加而增加 (P <0 .0 1 )。结论 :热休克蛋白70可能参与了子宫内膜蜕膜反应中基质细胞的增殖 ,与蜕膜反应密切相关     

脂多糖活化的大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生的新机制

目的：探讨脂多糖（LPS）活化的肺泡巨噬细胞中低氧诱导因子－1α（HIF-1α）的表达及其在肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α（TNF-α）中的作用。 方法： 应用HIF-1α 诱骗法（HIF-1α decoy）抑制其作用，并用Western blotting、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。 结果： HIF-1α蛋白含量在LPS组（1.95±0.57）和HIF-1α decoy组（1.89±0.59）均明显高于对照组（0.41±0.14，P＜0.05）；HIF-1α mRNA的表达在对照组（0.7838±0.3183）、LPS组（0.7622±0.3387）和HIF-1α decoy组（0.8155±0.3594）之间无显著差异（P>0.05）；LPS刺激24 h后，大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α的产生明显高于对照组（61 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），抑制HIF-1α后TNF-α的产生明显低于LPS刺激组（90 ng/L vs 156 ng/L, P<0.05），但 HIF-1α decoy组TNF-α的产生仍然高于对照组（61 ng/L vs 94 ng/L, P<0.05）。 结论： 大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的刺激下HIF-1α蛋白的稳定性增强使其表达明显上调，并且促进TNF-α的产生，提示HIF-1α在肺部慢性炎症性疾病如COPD的发病机制中可能有重要作用。     

Egr-1基因转染对糖尿病小鼠肾脏炎症反应的影响

目的:观察Egr-1基因转染对糖尿病小鼠肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨Egr-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:制备糖尿病小鼠模型,成模后随机选取10只作为糖尿病组,剩余40只每周1次经尾静脉分别注射空质粒、Egr-1表达质粒和Egr-1 siRNA质粒,并设立正常对照组。实验共4周,于第4周末收集各组小鼠肾组织标本,分别应用western blot和免疫组织化学染色测定肾组织中Egr-1、TNF-α和ICAM-1的表达;应用电镜观察肾小球超微结构的改变。结果:糖尿病小鼠肾组织Egr-1、TNF-α及ICAM-1表达增强,基底膜普遍增厚,系膜区基质增多,上皮细胞足突融合;Egr-1基因转染后上述变化趋势更加显著。siRNA质粒转染组上述变化较糖尿病组明显减轻。结论:Egr-1可上调TNF-α及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,可能是加速肾小球硬化的可能机制之一。