北虫草中腺苷和虫草素的分离纯化和鉴定

本文旨在寻找合适的从北虫草中纯化出虫草素和腺苷的提取分离方法,从而为开发北虫草提供依据。1仪器和试药FW—400A型倾斜式高速万能粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司制造);RES299—1型旋转蒸发器(巩义市英峪予华仪器厂);干燥器;TU—1901型紫外—可见分光光度计;布鲁克TENSOR—27型红外分光光度计;YRT—3熔点仪(天津大学精密仪器厂);五氧化二磷;NaOH;盐酸;柱层析用硅胶(青岛海洋化工厂);层析用分离柱(4cm×80cm)。2实验方法2.1核苷类化合物的分离人工培养北虫草子座干品500g,粉碎成粗粉,按1∶10的比例加入蒸馏水,80℃水浴温浸提取2…     

HPLC法测定北冬虫夏草和常见食用菌中腺苷和虫草素

目的 建立一种HPLC法快速测定北冬虫夏草和几种常见食用菌中腺苷和虫草素的方法.方法Welch Material XB-C18色谱柱(250mm×4.6mn,5μm),以水-甲醇(85∶15)为流动相,体积流量1.0mL/min,检测波长258 nm,柱温40℃.结果腺苷在0.023 2～0.464 0μg、虫草素在0...     

HPLC测定虫草培养基中腺苷和虫草素的含量

目的测定虫草培养基中腺苷和虫草素的含量。方法采用HPLC法,色谱柱为W aters Nova-Pak C18柱(300 mm×3.9 mm,4μm);流动相为水-甲醇-醋酸(185:14:1);流速1.0 m l.m in-1,检测波长260 nm。结果腺苷的线性范围为2.5~50.0μg.m l-1(r=0.9999),回收率为104.5%,RSD=1.32%;虫草素的线性范围为6.5~130.0μg.m l-1(r=0.9999),回收率为106.1%,RSD=1.46%。结论该方法灵敏、快速、准确,适用于虫草培养基中腺苷和虫草素的检测。     

HPLC 测定虫草破壁灵芝孢子粉中虫草素与腺苷含量

目的 建立虫草破壁灵芝孢子粉中腺苷虫草素含量测定方法.方法采用 HPLC 法测定虫草破壁灵芝孢子粉中腺苷、虫草素的含量,色谱柱为LK PN C18 柱,流动相为甲醇-水 （12：88） 流速为 1 ml/ min,检测波长为 260 nm.结果 腺苷和虫草素进样量与峰面积在 10 μg/ min~80 μg/ min 范围内均呈良好线性关系,相关系数r 分别为0.9988 和0.9992;平均回收率分别为99.6% 和99.9%.RSD 分别为0.54%,0.58% （n=6）.结论 本方法操作简便、快速、结果准确,可作为该制剂中腺苷和虫草素的质量控制监测.     

北虫草中虫草素和虫草多糖的提取纯化研究

目的研究北虫草中虫草素和虫草多糖的提取纯化工艺。方法采用正交实验法研究提取工艺,采用柱分离法,以虫草素和虫草多糖的含量为指标,考察流速、上样体积和洗脱剂浓度对纯化工艺的影响。结果提取的最佳工艺为:加10倍量水,回流提取3次,每次1h。优化的纯化工艺为:将提取液浓缩至1mL,相当于北虫草粉0.1g,以2BV·h~(-1)的流速上样,上样体积为0.6BV,先用2BV的水洗脱,再用4BV体积分数为40%的乙醇溶液以1～2BV·h~(-1)的流速洗脱,收集乙醇洗脱液。结论该提取纯化工艺经验证实验证明可行。     

真菌诱导子对北虫草深层培养的影响

目的研究4种真菌诱导子对北虫草液体培养菌丝体干重和虫草素产量的影响。方法在北虫草培养时,加入真菌诱导子,并与空白对照组比较。结果 0.02%的番茄灰霉对北虫草中菌丝体和虫草素的促进作用最明显,菌丝体干重为对照组的1.16倍,虫草素产量为对照组的5.02倍。0.02%番茄灰霉通过延长北虫草的对数生长期,提高了菌丝体干重和虫草素的产量。酵母菌对北虫草无明显作用,而其他两种真菌诱导子对菌丝体和虫草素的产量都有不同程度的抑制作用。结论 4种真菌诱导子对北虫草深层培养有不同程度的影响。     

RP-HPLC法测定北虫草发酵培养物中虫草素的含量

目的:建立测定北虫草发酵培养物中虫草素含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为DIAMONSIL-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲醇(5∶90∶5),流速为0.8mL·min-1,柱温为40℃,检测波长为259nm。结果:虫草素检测浓度在2.56～51.20μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率为98.35%,RSD=2.71%(n=6)。结论:本方法灵敏、快速、准确,适用于北虫草发酵培养物中虫草素的检测。     

人工蛹虫草子实体多糖的提取与含量测定

目的 建立人工蛹虫草子实体多糖的提取与含量测定方法.方法 采用正交试验筛选提取条件,苯酚-硫酸法测定多糖的含量。结果 多糖的最佳提取条件为80倍量纯化水,45 ℃提取1次,每次10 min;线性范围为10～100 μg·mL^-1,r= 0.999 8,加样回收率为99.41%,RSD= 2.36%。3批供试品中多糖的平均含量为22.12%。结论 该提取和测定方法操作简单,重复性好,结果准确可靠,可用于人工蛹虫草中多糖的提取与含量测定。     

HPLC法测定虫草被孢菌胶囊中腺苷的含量

目的 建立虫草被孢菌胶囊中腺苷含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定虫草被胞菌胶囊中腺苷的含量.采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:磷酸二氢钾溶液(0.05 mol·L-1)-甲醇(85∶15)为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长为260hm.结果 腺苷在1.011～ 50.55μg·mL-1范围内线性关系良好,线性方程为:A=60901C-2347.7,r=1;平均回收率为100.49％(n=6,RSD=1.1％).结论 本法操作简便,不受杂质干扰,精密度好,结果准确可靠,可用于虫草被孢菌胶囊的质量控制.     

人工蛹虫草子实体化学成分

目的　研究人工培养蛹虫草（Cordyceps militaris）干燥子实体的化学成分。方法　利用各种色谱技术进行分离纯化,通过理化方法及光谱（UV,IR,HRMS,EIMS,¹HNMR,¹³CNMR,FGCOSY,DEPT,FGHMQC和FGHMBC）分析鉴定其化学结构。结果　从人工培养蛹虫草干燥子实体的乙醇提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为: 3′-脱氧腺苷（3-deoxyadenosine, 1）, 腺苷（adenosine, 2）, N⁶-甲基腺苷（N⁶-methyladenosine, 3）, O^5′-乙酰基虫草素(O^5′-Acetylcordycepin, 4), N⁶-［β-(乙酰胺甲酰)氧乙基］腺苷（N⁶-［β-(acetylcarbamoyloxy) ethyl］ adenosine, 5）,虫草环肽A(cordycepeptide A, 6)和麦角甾醇过氧化物（ergosterol peroxide, 7）。结论　化合物(5）和(6)为两个新化合物,并首次归属这些化合物波谱信号。     

人工培养蛹虫草子座中核苷类化合物的提取工艺研究

目的: 研究人工培养蛹虫草子座中核苷类化合物的提取条件和分离方法.方法: 采用正交设计法优化核苷类化合物的提取条件,用色谱方法分离核苷类化合物.结果: 最佳的提取条件为蒸馏水80 ℃水浴温浸提取2次,每次5 h.结论: 本法从人工培养蛹虫草子座中提取、分离得到腺苷和虫草素两种核苷类化合物.     

人工北虫草指纹图谱研究

目的:建立人工北虫草TLC和HPLC法指纹图谱。方法:TLC法以三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水(5∶2∶6∶0.6)为展开剂,磷酸氢二钠制备的GF_(254)板展开;HPLC法以乙腈-水梯度洗脱,检测波长260nm。结果:HPLC法精密度、重复性、稳定性试验中共有峰面积、保留时间的RSD均小于3.0%;不同产地的人工北虫草相似度大于0.9。结论:该方法简便可靠,可作为控制人工北虫草质量的依据。     

HPLC法测定灵芝子珍珠口服液中腺苷的含量

目的:建立灵芝珍珠口服液的含量测定方法,有效的控制该制剂的内在质量。方法:采用HPLC法测定腺苷的含量。以磷酸盐缓冲液(pH6.5)—甲醇(10:1)为流动相,Hypersil ODS C_(18)(5μm,250×4.6mm)色谱柱,260nm为检测波长。结果:测得线性范围0.08～0.4μg(r=0.9996),平均回收率为99.9％,RSD为0.92％(n=5)。结论:本方法可作为该制剂的质控指标。     

山东不同产地北虫草中麦角甾醇提取工艺与含量测定的研究

目的：建立北虫草子实体质量评价的HPLC方法,研究和比较山东区域不同产地的北虫草子实体中麦角甾醇的提取工艺和含量。方法：采用正交试验设计筛选北虫草中麦角甾醇最佳提取工艺,利用HPLC法定量分析10个不同产地北虫草子实体中麦角甾醇的含量;采用色谱柱为Promosil-C18柱,流动相为甲醇,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为282 nm。结果：北虫草中麦角甾醇的最佳提取最佳工艺为A2B3C2,即料-液比为1∶40,40℃时超声提取75 min;不同产地的北虫草中麦角甾醇含量范围为0.25%~0.68%。结论：本方法操作简便,结果准确可靠,可用于北虫草子实体中麦角甾醇的含量测定,为北虫草的质量评价提供了参考。     

冬虫夏草和北虫草研究进展

本文对虫草研究和开发中存在的混乱和谬误进行了探讨。还介绍了国外文献对虫草素的研究概况。     

蛹虫草菌丝体多糖与子实体多糖体外免疫调节活性的研究

目的 分析蛹虫草菌丝体多糖（mycelia polysaccharides of Cordyceps militaris,MPS）与蛹虫草子实体多糖（polysaccharides from fruiting body of Cordyceps militaris,FPS）的体外免疫活性。方法 以RAW264.7细胞株为受试对象,从细胞增殖、中性红吞噬能力、NO释放水平角度系统考察不同浓度的MPS与FPS的免疫调节活性,并分析其量化关系。结果 MPS与FPS均可明显促进RAW264.7细胞株的增殖、对中性红的吞噬能力和NO释放水平,且均呈现出浓度依赖性的特征。二者对RAW264.7细胞株增殖的促进作用无显著性差异,但在免疫调节最佳作用浓度方面却存在一定差异,MPS在100μg·mL^-1时表现出最好的细胞吞噬能力,而FPS在200μg·mL^-1时表现出最高的细胞吞噬能力。结论 MPS与FPS均具有显著的体外免疫活性。     

九州虫草的核苷类成分及不同部位两种活性成分含量的分布九州虫草的核苷类成分及不同部位两种活性成分含量的分布

目的快速测定九州虫草中的部分核苷类成分及其主要活性成分虫草素与腺苷的含量，并考察九州虫草不同部位虫草素和腺苷含量的分布。方法用高效毛细管区带电泳法确定野生和人工九州虫草中的核苷类成分,测定虫草素和腺苷的含量，并比较它们在九州虫草不同部位含量的分布。结果蒙山九州虫草中含有至少8种核苷或碱基，其中抗肿瘤活性成分虫草素的含量远高于冬虫夏草和蛹虫草,且人工栽培九州虫草中虫草素的含量又显著高于野生九州虫草。腺苷主要存在于九州虫草子座中，而虫草素则不仅在九州虫草子座中含量甚高，人工栽培九州虫草虫体中虫草素含量也较高。结论天然和人工九州虫草及其不同部位的核苷和碱基成分存在一定差异，九州虫草中的虫草素含量高，具有良好的栽培、药用与开发前景。     

HPLC测定凉山虫草中的腺苷

目的 测定凉山虫草中腺苷的含量.方法 采用HPLC法,Diamonsil C_(18)色谱柱为(200 mm×4.6 mm,5μm),以磷酸盐缓冲液(pH6.5)-甲醇(80:20)为流动相,流速0.6 mL·min~(-1),柱温30℃;检测波长260 nm.结果 腺苷1～40μg·mL~(-1)与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9994);平均回收率为101.89%,RSD=3.11%(n=9).测定了10批样品中腺苷的含量,含量范围为0.0367～0.0590 mg·g~(-1).结论 所建方法准确、快速、简便,适用于凉山虫草中腺苷的测定.     

反相高效液相色谱法同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素、肌苷含量方法的研究

目的建立同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素、肌苷的HPLC方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱：Agilent C18柱（250 nm×4.6 mm,5μm）,甲醇与水梯度洗脱,柱温：30℃,流速：1.0 mL.min-1,检测波长：260 nm。结果腺苷进样量在0.200 8~1.004μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=2 876X＋0.458 8,r=0.998 7,平均加样回收率为100.5%,RSD为2.33%;虫草素进样量在0.202 2~1.011μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=2 018X＋8.726,r=0.999 2,平均加样回收率为99.3%,RSD为2.03%;肌苷进样量在0.201 4~1.007μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=5 845X-5.685,r=0.999 4,平均加样回收率为100.2%,RSD为1.44%。结论本方法简便、准确,重复性好,可用于同时检测冬虫夏草中的腺苷、虫草素及肌苷的含量测定。