汉防己甲素对成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

目的探讨汉防己甲素预防和治疗增生性瘢痕的可行性.方法对增生性瘢痕中的成纤维细胞进行培养,然后加入不同浓度的汉防己甲素,培养后继续观察成纤维细胞合成胶原蛋白的能力的变化.结果汉防己甲素可以抑制成纤维细胞合成胶原蛋白.结论汉防己甲素对成纤维细胞胶原蛋白的合成具有抑制作用,因此它可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用.     

汉防己甲素对增生性瘢痕基质胶原酶活性的影响

目的观察汉防己甲素对瘢痕胶原酶活性的影响，进一步阐明其抗瘢痕作用的机理。方法将汉防己甲素的实验浓度控制在低于细胞增殖抑制范围之内，采用加胶原蛋白底物的SDS—PAGE电泳法分离胶原酶，胰蛋白酶激活后利用湿胶密度扫描仪分析胶原酶的活性。同时采用改良的氯胺T法测量细胞外胶原蛋白量，并分析两者的相关关系。结果在不抑制细胞增殖的情况下，汉防己甲素可显著提高胶原酶的活性，使细胞外胶原蛋白减少，两者呈显著的负相关，此作用强于激素。结论增强胶原酶降解胶原蛋白的活性，减少细胞外胶原沉积是汉防己甲素抗瘢痕作用机理之一。     

汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞MMP-1 mRNA表达的影响

目的观察汉防己甲素对增生性瘢痕来源的成纤维细胞的MMP-1 mRNA表达的影响。方法培养增生性瘢痕来源的成纤维细胞，然后分别按终浓度为1、5、10mg／L加入汉防己甲素，继续培养24h，提取细胞内的RNA，经RT—PCR获得cDNA，再用MMP-1的特异性引物，通过PCR扩增，得到MMP-1的mRNA，并以β—actin为内参照物，进行琼脂糖凝胶电泳，最后用Band—scan扫描系统测定各产物密度值，用凝胶自动成像仪拍照。结果在汉防己甲素的作用下，成纤维细胞的MMP-1 mRNA表达增加。结论汉防己甲素可使增生性瘢痕来源的成纤维细胞的MMP-1的mRNA转录增加。从而增加了MMP-1的合成，因而可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用。     

汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞MMP-1 mRNA表达的影响

目的观察汉防己甲素对增生性瘢痕来源的成纤维细胞的MMP-1 mRNA表达的影响.方法培养增生性瘢痕来源的成纤维细胞,然后分别按终浓度为1、5、10 mg/L加入汉防己甲素,继续培养24 h,提取细胞内的RNA,经RT-PCR获得cDNA,再用MMP-1的特异性引物,通过PCR扩增,得到MMP-1的mRNA,并以β-actin为内参照物,进行琼脂糖凝胶电泳,最后用Band-scan扫描系统测定各产物密度值,用凝胶自动成像仪拍照.结果在汉防己甲素的作用下,成纤维细胞的MMP-1 mRNA表达增加.结论汉防己甲素可使增生性瘢痕来源的成纤维细胞的MMP-1的mRNA转录增加,从而增加了MMP-1的合成,因而可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用.     

汉防己甲素、川芎嗪和苦杏仁甙对人肾成纤维细胞的影响

目的 观察汉防己甲素、川芎嗪和苦杏仁甙３种中药成分对人肾成纤维细胞（ＫＦＢ）的影响。方法 采用ＥＬＩＳＡ法、四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法、流式细胞仪、免疫组织化学法分别检测汉防己甲素、川芎嗪、苦杏仁甙对人ＫＦＢ分泌的Ｉ型胶原酶活性、人ＫＦＢ增殖、凋亡、Ｉ型胶原表达的影响。结果 汉防己甲素、川芎嗪、苦杏仁甙３种中药提取成分在各自的最佳浓度范围和作用时间内均能提高人胚ＫＦＢ分泌的Ｉ型胶原酶活性、抑制人胎     

汉防己甲素对肾小球硬化大鼠肾单位的影响

目的 :探讨中药汉防己甲素 (Tetrandrine)对单侧肾切除加两次注射阿霉素肾小球硬化大鼠肾单位的作用。方法 :将实验动物分为 :正常对照组、汉防己甲素治疗组、氨氯地平治疗对照组和模型组 ,于第 12周留取尿标本。肾组织病理学检查、图像分析肾单位变化 ,用Northernblot杂交检测TGF - βmRNA表达。 结果 :汉防己甲素治疗组和氨氯地平治疗对照组肾小球ECM明显减少 (肾小球ECM /GA为 0 .2 4± 0 .0 2、0 .2 9± 0 .0 1,比模型组 0 .39± 0 .0 2 ,(P <0 0 5 ) ,肾病理损伤减轻 ,肾皮质TGF - βmRNA表达下调 ,汉防己甲组和模型组肾小管上皮细胞高度无明显差异 (P <0 0 5 )。结论 :汉防己甲素治疗机理为通过下调肾皮质TGF - βmRNA表达参与了延缓肾小球硬化的机理。     

汉防己甲素防护环孢素A肾毒性的实验研究

本文观察了中药钙拮抗剂汉防己甲素对大鼠环孢素A肾毒性（CsA－NT）的防护作用。雄性Wistar大鼠用CsA50mg·kg－1／d灌胃7天导致急性CsA－NT，表现为血清肌酐（Cr）升高34．8％，内生肌酐清除率（Ccr）下降39．4％，组织学检查发现近曲小管大片空泡变性。同时，肾皮质丙二醛（MDA）含量显著升高，超氧化物歧化酶（SOD）活性显著下降。大鼠每日用CsA灌胃前30分钟，给予汉防己甲素10mg／kg腹腔注射，能使上述指标明显改善，组织学损伤也明显减轻。实验结果提示汉防己甲素能从功能和形态上防护大鼠急性CsA－NT。     

汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤的作用及意义

目的：探讨汉防己甲素（Tet）对急性脊髓损伤（ASCI）的保护作用及作用机制。方法：81只大鼠随机分为三组：生盐水对照组（NS组）、汉防己甲素治疗组（Tet组）和甲基强松龙治疗组（MP组），每组27只，用加速型Allen′s打击法制成脊髓急性损伤模型，监测大鼠ASCI后及用药后的血压变化，测定损伤区脊髓Ca^2 、MDA含量；采用氢清除法测定脊髓伤区血流量（SCBF）的变化；连续观测6周ASCI后运动功能评分情况，ASCI后4h,8h、6周取伤区标本进行组织病理检查，结果：ASCI后10s各组动物的MABP显著升高，1min内迅速降至正常水平，之后Tet组舒张压，平均动脉明显降低（P＜0．05），而收缩压降低不明显（P＞0．05）；ASCI后SCBF下降，但Tet组和MP组的SCBF较NS组高（P＜0．05）；损伤区Ca^2 及MDA含量Tet组和MP组均较NS组低，神经功能评分均较NS组高。结论：Tet能改善微循环，防止SCBF的减少；抗脂质过氧化损伤，减少脂质过氧化物MDA的生成；减轻Ca^2 的局部积聚，防止钙超载，阻断继发性损伤的链式反应，减轻组织继发性损伤。对实验性急性脊髓损伤有保护作用。     

汉防己甲素对肾病综合征大鼠肾小球细胞外基质的作用

目的探讨中药汉防己甲素(Tetrandrine)对单侧肾切除加两次注射阿霉素肾病综合征大鼠肾小球细胞外基质(ECM)的作用.方法将实验动物分为(1)正常对照组、(2)汉防己甲素治疗组、(3)氨氯地平治疗对照组和(4)模型组,于第12周留取尿标本,肾组织病理学检查和图像分析肾小球细胞外基质变化,计算ECM/肾小球面积(GA).结果汉防己甲素治疗组和氨氯地平组肾小球ECM均明显减少(ECM/GA为0.24±0.02、0.29±0.01比(4)组0.39±0.02)(P＜0.05)、球囊粘连减轻.结论汉防己甲素能减少肾病综合征大鼠肾小球ECM沉积,延缓肾小球硬化.     

粉防己碱对瘢痕成纤维细胞DNA和胶原合成的影响

目的探讨粉防己碱对瘢痕成纤维细胞DNA和胶原合成的影响.方法以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将粉防己碱(5～80mg/L)加入细胞培养液中进行干预并与对照组比较,用3H-TdR掺入法和3H-脯氨酸掺入法分别测定各组瘢痕成纤维细胞3H-TdR掺入值与3H-脯氨酸掺入值,以反映其DNA和胶原合成水平的变化.结果粉防己碱预处理浓度由5mg/L升至80mg/L时(1)瘢痕成纤维细胞3H-TdR掺入值(min-1)由对照组的1740±165分别降至1162±226、412±82,抑制率达76.32%,组间差异有非常显著意义(P＜0.01);(2)瘢痕成纤维细胞3H-脯氨酸掺入值(min-1)由对照组的1126±193分别降至535±141、341±89,抑制率达69.71%,组间差异有非常显著意义(P＜0.01).结论粉防己碱对体外培养的瘢痕成纤维细胞DNA和胶原合成具有抑制作用,呈剂量依赖关系,具有防治增生性瘢痕的应用前景.     

培养的正常和瘢痕角质形成细胞上清液对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 研究培养的正常角质形成细胞、瘢痕角质形成的细胞的上清液对增生性瘢痕成纤维细胞生物活性和胶原合成的影响。方法 采用MTT、^3H-脯氨酸掺入法、Ⅲ型前胶原放免试剂盒测定不同来源、不同浓茺培养的角度形成细胞上清液，对增生性瘢痕成纤细胞增殖和胶原合成的影响。结果 正常角质形成细胞上清液，可抑制瘢痕成纤维细胞增殖，对细胞内胶原合成有一定的促进作用，但却抑制细胞内胶原向细胞外分泌。瘢痕角质形成细胞上清液，对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用不明显，甚至还有促进的趋势，对细胞内外胶原合成、分泌皆有明显的促进作用。结论 正常角质形成细胞与瘢痕角质形成细胞分泌的物质对瘢痕成纤维细胞具有不同作用。     

粉防己碱对瘢痕成纤维细胞活性功能的影响

目的　观察粉防己碱对体外培养的巨噬细胞介质介导瘢痕成纤维细胞活性功能的调控作用 ,并探讨其在瘢痕防治中的意义。方法　取 5例手术切除的人增生性瘢痕组织标本行瘢痕成纤维细胞体外培养 ,于传代培养至第 4代的成纤维细胞 (5× 10 4)中分组加入巨噬细胞介质、粉防己碱继续培养 ,然后分别用3 H TdR和3 H 脯氨酸脉冲标记 ,放射性核素液闪烁仪定量检测各组3 H TdR和3 H 脯氨酸掺入值。并采用三维培养方法测定体外模拟瘢痕样组织的收缩指数变化。结果　粉防己碱 3mg/L不抑制细胞DNA合成时 ,即可明显减少瘢痕成纤维细胞 3 H 脯氨酸掺入值 ,由对照组的 94 5± 191减少至6 82± 2 0 5 (P <0 .0 5 ) ;并能显著降低巨噬细胞介质介导的瘢痕成纤维细胞3 H TdR掺入值和3 H 脯氨酸掺入值 ,由单纯介质组的 2 75 6± 2 4 4、1384± 2 93分别降低至 194 8± 2 82、10 34± 14 2 (均P <0 .0 1)。粉防己碱 1mg/L即可降低体外瘢痕样组织的收缩指数 (P <0 .0 1)。结论　粉防己碱对体外培养的巨噬细胞介质介导瘢痕成纤维细胞增殖、胶原合成以及收缩三方面具有抑制效应 ,可望在增生性瘢痕的防治中发挥重要作用。     

褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控

目的 探讨褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控.方法 分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用四氮唑复合物/硫酸酚嗪甲酯(XTT/PMS)法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中β1转化生长因子(TGF-β1)含量和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原ⅢmRNA表达,评价褪黑素和褪黑素受体拮抗剂(luzindole)对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响.结果 褪黑素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,抑制效果呈浓度依赖性(P＜0.05);高浓度褪黑素(10-3 mmol/L)可降低增生性瘢痕成纤维细胞产生TGF-β1 (P＜0.05)和α-SMA mRNA、胶原Ⅰ mRNA的表达(P＜0.05);褪黑素受体拮抗剂能阻断褪黑素对细胞产生TGF-β1和α-SMA、胶原Ⅰ mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);但褪黑素对该细胞胶原ⅢmRNA表达无影响(P＞0.05).结论 褪黑素可通过与受体结合调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物学活性.     

内毒素对人正常皮肤成纤维细胞表型变化的影响及意义

目的：研究细菌内毒素（LPS）刺激后的正常皮肤成纤维细胞的表型改变,探讨其与增生性瘢痕形成的关系.方法：体外培养增生性瘢痕患者瘢痕组织和正常皮肤成纤维细胞,正常成纤维细胞分别经不同浓度LPS（0、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500、1.000 μg/ml）刺激,并对刺激后细胞进行传代,通过病理学、免疫组化染色、电镜观察等方法,观察成纤维细胞表达增殖细胞核抗原（PCNA）、α1（Ⅰ）前胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白的规律及透射电镜下超微结构的变化,并以相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照.结果：瘢痕组织成纤维细胞光镜下核浆比例大;免疫组织化学染色显示PCNA、α1（I）前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达阳性细胞比例分别为0.88±0.15、0.42±0.11和0.38±0.13;电镜下显示细胞形态多样化,核膜不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体多,伴微丝、微管及肌微丝出现.正常皮肤成纤维细胞PCNA阳性细胞比例为0.37±0.09,未见α1（I）前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达.正常皮肤成纤维细胞经LPS刺激后,随着刺激浓度的增加,光镜下核浆比例逐渐增大;免疫组织化学染色显示PCNA、α1（I）前胶原蛋白阳性细胞和α平滑肌肌动蛋白表达阳性细胞逐渐增多;电镜下显示细胞形态发生多样化,核浆比例增加,核膜变得不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体进一步增多,微丝微管增加,肌微丝出现.上述变化在LPS 0.1ug/ml时最明显[PCNA、α1（I）前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白阳性细胞比例分别为：0.91±0.15、0.40±0.15和0.44±0.13],接近瘢痕组织成纤维细胞,表明成纤维细胞逐渐向增殖表型、合成型或收缩表型变化.此后,随着LPS浓度继续升高,上述表型标志的表达和细胞形态均趋向于正常成纤维细胞.结论：LPS刺激后皮成纤维细胞表型变化规律,提示LPS可能与增生性瘢痕形成有关.     

瘢痕成纤维细胞的钙网蛋白表达研究

目的观察钙网蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮肤成纤维细胞内的表达情况。方法采用免疫细胞化学染色和原位 ELISA 技术对体外培养的瘢痕及正常皮肤成纤维细胞进行 CRT 分布定位及表达水平研究。结果瘢痕和正常皮肤成纤维细胞在处于增殖生长状态时,胞浆及核内均有不同程度的 CRT 表达,其中瘢痕成纤维细胞表达 CRT 水平(A:1.97±0.15,ELISA492nm)明显高于正常皮肤成纤维细胞水平(A:1.43±0.12),差异有非常显著意义(P<0.01);而在已融合的瘢痕和正常皮肤成纤维细胞内则均无 CRT 表达。结论瘢痕成纤维细胞内 CRT 的丰富表达对促进细胞迁移、信号传递及钙存储等方面均有着积极作用。     

神经酰胺在Fas介导的信号通道中的作用

目的：判断瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas介导的死亡信号通道是否有阻断及阻断的具体位点,检测和比较FasMcab作用后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞内神经酰胺的变化。方法：取手术切除的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织各6例,通过细胞培养4－6代后,不同浓度梯度的FasMcab处理增生性瘢痕及瘢痕产假瘩成纤维细胞,在一定的反应体系内,抽提细胞内神经酰胺,与外源性32P-ATP反应,通过放射自显影,闪烁记数等半定量,定量地反应胞内神经酰胺的含量。结果：增生性瘢痕成纤维细胞随着FasMcab 浓度的梯度的增高,其胞内神经酰胺的含量不断增高;瘢痕疙瘩成纤维细胞在各种浓度梯度下,胞内神经酰胺的含量无增加,各组间差异无显著性意义。结论：作为Fas介导的死亡信号通道中的第二信使,神经酰胺在瘢痕疙瘩成纤维细胞内的产生有缺陷。因此,Fas介导的瘢痕疙瘩成纤维细胞死亡信号传导阻滞是“上游”事件。     

大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及细胞周期作用的实验研究

目的观察大黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞周期的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法将切取于增生性瘢痕患者的瘢痕组织标本分成A（对照组）、B、C、D四组,每组6个标本,行体外成纤维细胞培养,采用0、50、100、200μg/ml的大黄素依次对A、B、C、D组的成纤维细胞进行干预,应用MTT比色法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期的变化。结果B、C、D组标本中成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制于G0/G1期（P〈0.05）,与A组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。而且大黄素在50～200μg/ml的范围内,对成纤维细胞增殖的抑制有浓度的依赖性。结论大黄素具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗人增生性瘢痕的有效药物。