透明质酸刺激因子对成纤维细胞胶原合成的影响

０引言在瘢痕机理的研究中，有学者发现一种相对分子质量（Ｍｒ）为１５０ｘ１０３的糖蛋白能刺激体外培养的成纤维细胞（ＦＢ）产生高浓度透明质酸（ＨＡ），称为透明质酸刺激因子（ＨＡＳＦ）．ＨＡＳＦ参与创伤愈合过程，是导致胚胎早期伤口无瘢痕修复的重要因素之一［１］，而瘢痕的主要基质成分为胶原蛋白，ＨＡＳＦ对于ＦＢ胶原合成的作用尚未见文献报道，我们利用体外培养的正常人皮肤及瘢痕ＦＢ，观察了ＨＡＳＦ对细胞胶原合成的影响．１方法１．１实验仪器与试剂ＬＳ－６５００液问计数仪（Ｂｅｃｋｍａｎ），ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２…     

甲状腺素对血管紧张素Ⅱ所致心肌成纤维细胞胶原合成改变的影响

目的 :以AngⅡ处理培养的心肌成纤维细胞 ,促使细胞中胶原的合成发生改变 ,观测T3对AngⅡ所致细胞胶原合成改变的影响。方法 :以AngⅡ及T3分别或同时作用于培养的大鼠心肌成纤维细胞 ,通过测定3H TdR和3H Leu掺入来了解成纤维细胞增殖率和蛋白质合成率 ,同时用免疫细胞化学方法检测成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结果 :AngⅡ使成纤维细胞3H TdR和3H Leu掺入增加 ,同时细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达也显著增加。T3组成纤维细胞3H TdR和3H Leu掺入虽然也增加 ,但T3组细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达却呈显著性降低。当T3与AngⅡ共同作用于成纤维细胞时 ,与T3组和AngⅡ组比较 ,3H TdR和3H Leu的掺入率没有发生显著性的变化 ;与AngⅡ组比较 ,细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达显著性降低 ,与对照组的表达一致。结论 :T3能降低AngⅡ所致的心肌成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的增加     

脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响

目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响,以阐明LPS在皮肤创伤愈合中的可能作用.方法:体外培养正常人皮肤成纤维细胞,采用3H-脯氨酸掺入法观察不同浓度(0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5和1.0 μg·ml-1)的LPS对成纤维细胞胶原合成的影响.结果:LPS刺激浓度在0.005 μg·ml-1时,皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成增加;随着刺激浓度增加,刺激作用增强;但当LPS浓度为0.5 μg·ml-1时,促胶原合成作用开始降低;当浓度达到1.0 μg·ml-1时则呈现抑制效应.结论:在一定浓度范围内LPS促进成纤维细胞胶原合成,表明LPS在皮肤创伤愈合中可能具有重要作用.     

琥珀酸对人纤维细胞胶原合成的影响

目的探讨琥珀酸对人成纤维细胞胶原合成的影响以及在细菌感染、创面愈合中的作用.方法体外培养人皮肤成纤维细胞,以不同浓度(5、10、20和30mmol/L,pH5.5)琥珀酸刺激,24h后检测琥珀酸对细胞胶原合成及前胶原蛋白mRNA表达的影响,并进行相关性分析.结果随着加入的琥珀酸浓度升高,细胞胶原合成下降,前胶原蛋白mRNA表达下降;当琥珀酸浓度为20和30 mmol/L时,细胞胶原合成Ⅰ型前胶原蛋白mRNA表达明显低于对照组(P＜0.05).结论琥珀酸能抑制成纤维细胞胶原合成,在创面感染时,细菌能通过代谢产生琥珀酸从而抑制创面愈合,使得感染持续存在.     

丹参对成纤维细胞表型影响的体外研究

目的 探讨丹对成纤维细胞生物学行为及其成骨性能的影响。方法 分离,纯化皮肤成纤维细胞,分别应用含丹参,生长因子与丹参的条件培养液进行单独和联合干预培养,采用扫描电镜和微Ｘ线法技术观测成纤维细胞的形态及矿化骨结节成分形成状况的变化。结果 ０．２％丹参能明显促使成纤维细胞由梭形向鳞片形方向转化,细胞量增多,胶原合成分泌增加;并可使细胞因子诱导成纤维细胞形成的矿化结节进一步增大。结论 适当浓度的丹参成纤     

透明质酸对胚胎成纤维细胞胶原网架收缩的影响

目的 探讨羊水中抑制胚胎伤口收缩的成分是否为透明质酸ＨＡ以ＨＡ对胚胎伤口收缩是否有直接的抑制作用。方法 使用一种体外胚胎伤口收缩模型－－含成纤维细胞的胶原网架ＦＰＣＬ），观察ＨＡ深度为１μｇ／ｍ１￣１０ｍｇ／ｍ１对ＦＰＣＬ收缩的影响。结果低深度组（１、５、２０、５０、１００、１０００μｇ／ｍ１）的ＨＡ对ＦＰＣＬ的收缩指数，差异有显著意义（Ｐ〈０．０５）；高深度级（３、６、１０ｍｇ／ｍ１）ｒ ＨＡ     

α,γ—干扰素对人成纤维细胞的生长和胶原合成的影响

近年来，α和γ－干扰素（IFN-α，IFN-γ）在防治肝纤维化中的作用引人注目。体外实验表明，IFN－α和IFN－γ能显著降低成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA水平[1,2]，被认为是有前途的抗肝纤维化药物。本文应用流式细胞仪，3H-脯氨酸掺入和放射免疫法分别测定不同浓度的IFN－α2b     

贝前列素对心肌成纤维细胞胶原交联的影响及机制研究

目的 :观察贝前列素对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激下心肌成纤维细胞胶原交联的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养新生大鼠心肌成纤维细胞,给予贝前列素预处理后,AngⅡ(100 nmol/L)再刺激24 h,测定细胞培养基中胶原含量和交联程度,实时荧光定量PCR和Western blot法测定赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)m RNA和蛋白表达。结果:贝前列素可剂量依赖性地抑制AngⅡ刺激下心肌成纤维细胞胶原分泌,其中10μmol/L作用最强。贝前列素(10μmol/L)预处理4 h后再给予AngⅡ刺激,心肌成纤维细胞胶原分泌明显减少,交联胶原水平下降,交联与非交联胶原比例变低;LOX m RNA和蛋白表达亦明显下降。结论:贝前列素抑制AngⅡ刺激下心肌成纤维细胞胶原交联,机制可能与下调LOX表达有关。     

肝素结合的成纤维细胞生长因子促进鼠皮肤烧伤愈合的研究

目的：探讨肝素结合的成纤维细胞生长因子（FGF）对烧伤愈合的促进作用。方法：于小鼠背部皮肤用20W电烙，电灼20s，烙成直径0.5cm圆形Ⅱ度烧伤伤口，实验组用FGF（含FGF300μg/ml，肝素100μg/ml），对照组用生理盐水，每天换药1次。术后1，3，5，7，10d处死动物，观察伤口愈合情况。结果：FGF明显促进烧伤伤口处毛细血管、成纤维细胞增生（P＜0.01），胶原蛋白的生成，肉芽组织的增生及皮肤的修复。实验组较对照组愈合快4－5d。结论：肝素结合的FGF促进烧伤伤口的内芽组织增生，胶原蛋白及基质的生成，加速愈合过程。     

CTGF-siRNA对低氧诱导肺成纤维细胞胶原合成的影响

目的 观察针对结缔组织生长因子(CTGF)的小干扰RNA(siRNA)对低氧诱导的人肺成纤维细胞胶原合成的影响.方法 应用siRNA表达载体介导的RNA干扰(RNAi)技术,将CTGF-siRNA表达质粒稳定转染人肺成纤维细胞MRC-5, 并将人肺成纤维细胞在低氧条件下(37 ℃, 5%CO2, 1%O2)培养1、2、4、6及12 h.采用定量PCR法测定CTGF及Ⅰ型胶原基因表达,并应用Western blot 法检测CTGF及Ⅰ型胶原蛋白表达变化.结果 低氧培养1 h后,人肺成纤维细胞即可刺激诱导CTGF mRNA表达,其升高水平可持续至6 h.而在CTGF-siRNA表达质粒稳定转染的MRC-5细胞内,低氧诱导的CTGF、Ⅰ型胶原基因及蛋白表达均降低(P<0.05).结论 针对CTGF的siRNA在体外可明显抑制低氧诱导的MRC-5肺成纤维细胞的胶原合成.     

丝裂霉素C对人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响

目的　观察丝裂霉素 C(MMC)对培养的人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响 .方法　用 3H-脯氨酸掺入和原位杂交法观察 MMC对培养人结膜囊成纤维细胞胶原合成活性的作用 .结果　 0 .4g· L- 1 MMC作用 5 min,可使结膜囊成纤维细胞对 3H-脯氨酸的摄取减少 5 5 %以上 (P<0 .0 5 ) ,并降低了 型前胶原 m RNA原位杂交信号 .结论　临床青光眼滤过手术中使用的 MMC剂量与作用时间 ,可减少成纤维细胞胶原的合成 ,有利于青光眼滤过手术成功率的提高     

几丁糖对增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响

目的 :探讨几丁糖对增生性瘢痕成纤维细胞的作用及其机制 ,为临床应用几丁糖治疗增生性瘢痕提供理论基础。　方法 :以增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象 ,正常皮肤成纤维细胞为对照 ,观察不同浓度几丁糖作用下增生性瘢痕成纤维细胞合成和分泌的胶原量及其相应Ⅲ型前胶原mRNA量的变化。　结果 :几丁糖作用后 ,各组 3 H 脯氨酸掺入量均减少 ,且两组间比较差异有显著性意义 (Р <0 .0 5 )。其相应Ⅲ型前胶原mRNA量显著下降。结论 :　几丁糖可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞合成及分泌胶原的功能 ,有望在增生性瘢痕的防治中发挥重要作用     

灌注速率对成纤维细胞在三维支架中生长和胶原合成的影响

为了降低工程化组织体外构建过程中的传质限制,采用自行研制的灌注生物反应器系统,以人皮肤成纤维细胞为模型细胞,以PET(Poly(ethylene terephthalate))为三维支架,构建工程化真皮组织,考察灌注速率对成纤维细胞生长和胞外基质合成的影响。将人皮肤成纤维细胞灌注接种于PET支架,分别以0.02、0.2、0.8 cm/min的灌注速率培养18 d。结果表明,灌注培养能促进细胞增殖,提高细胞在3D支架中均匀分布;与静态培养和0.02 cm/min的灌注速率相比,在0.2 cm/min和0.8 cm/min的灌注速率下进行培养,提高了细胞的葡萄糖比消耗速率,刺激细胞合成和分泌更多的胶原基质,但增加了流失到培养液中胶原的比例,灌注培养是体外构建工程化真皮组织的有效方法。     

丹参对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨丹参对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响，揭示其对瘢痕的作用及机制，方法对瘢痕成纤维细胞进行体外培养，采用倒置显微镜、MTT测定、流式细胞术等方法进行观察、分析，以研究丹参对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响．结果体外培养瘢痕成纤维细胞倒置显微镜、MTT测定、流式细胞术等方法观察和测定结果显示：与相应对照组相比，加入丹参组细胞生长及增殖均受到明显抑制，丹参各浓度组间细胞受抑制程度存在显著性差异（P〈0．05）．结论丹参对瘢痕成纤维细胞的生长、增殖有抑制作用，不同浓度其作用效果有差别．     

表皮生长因子及胶原网架对培养成纤维细胞的影响

目的：观察表皮生长因子（EGF）及胶原网架对体外培养的皮肤成纤维细胞（FB）增殖的影响。方法：酶消化法分离大鼠皮肤FB,以含有10%新生牛血清的DMEM培养液进行培养,采用细胞计数、MTT法、组织学方法测定细胞增殖能力和形态变化。结果：培养液中EGF浓度大于5 μg•L^-1时,FB的增殖活性随EGF浓度的增加而增加,在 20 μg•L^-1浓度时达到最大。植入胶原网架中的FB,随着培养时间的延长,细胞数量增加缓慢。结论：EGF对FB的增殖具有促进作用,而胶原网架对FB的增殖速率具有一定的调节作用。     

体外不同张应力对人牙周膜成纤维细胞胶元纤维合成的影响

目的 观察不同张应力对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)胶元纤维合成总量的影响．方法将体外分离培养的HPDLF在自行开发的膜式动态张应力-体外细胞培养研究体系中进行16h、24h和32h3个时段的不同张应力加载，以^3H—Proline掺入法检测其胶元纤维合成总量。结果 动态张应力组奎(5kPa-2．5kPa-5kPa)HPDLF胶元纤维合成总量的增加最为明显，其次依次为对照组、静张应力组、动态张应力组1(5kPa-0kPa-5kPa)．结论 不同频动范围的动态张应力对HPDLF胶元纤维合成总量的影响截然不同，适当频动范围的动态张应力能更有效地促进胶元纤维的合成。     

DNA干扰对低氧诱导的心脏成纤维细胞结缔组织生长因子的表达和胶原合成的影响

目的 研究慢病毒载体pGCL-GFP介导的结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(CTGF-ShRNA)干扰质粒对低氧诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)CTGF表达、细胞增殖和胶原合成的影响.方法 构建并筛选CTGF-ShRNA干扰质粒,PCR鉴定阳性克隆,重组质粒转染后随机分为4组,正常(Control)组,低氧(Hypoxia)组,低氧+慢病毒空载体(Hypo+pGCL-GFP)组和低氧+CTGF-ShRNA(Hypo+CTGF-ShRNA)组,实时荧光定量PCR及Western blot分析4组CFs CTGF mRNA及蛋白的相对表达水平,WST-1试剂盒和羟脯氨酸检测试剂盒分别检测4组细胞增殖情况和培养基中的胶原含量.结果 成功构建并筛选CTGF-shRNA.与Control组比较,Hypoxia组、Hypo+pGCL-GFP组、Hypo+CTGF-ShRNA组CTGF mRNA相对表达水平升高(P＜0.05),CTGF蛋白相对表达水平升高(P＜0.05),细胞增殖活跃(P＜0.05),胶原合成升高(P＜0.05).与Hypoxia组和Hypo+pGCL-GFP组比较,Hypo+CTGF-ShRNA组低氧诱导的CFs CTGF mRNA表达被抑制(P＜0.01),CTGF蛋白合成降低(P＜0.01),细胞增殖被抑制(P＜0.01),胶原合成减少(P＜0.01).结论 CTGF-ShRNA抑制低氧诱导的CFs CTGF mRNA表达和蛋白合成,抑制低氧诱导的CFs细胞增殖和胶原合成.     

成纤维细胞胶原凝胶培养研究

目的建立一种成纤维细胞的三维培养方法.方法:将胶原、成纤维细胞、血清和培养基在正确的比例下混合,便可形成凝胶.结果:在凝胶中成纤维细胞具有良好的活力,使之形成有一定弹性和抗拉伸能力的凝胶块.结论:真皮替代物培养是研究成纤维细胞与细胞外基质间相互作用的良好模型.