胎盘脐带血造血干细胞库的建立与临床移植

1　胎盘脐带血干细胞库的建立我国多为独生子女 ,同胞间造血干细胞移植的供者来源日益匮乏 ,因此 ,建立非血缘关系胎盘脐带血库 ( PCBB)具有重要意义。北京大学血液病研究所提供技术 ,北京大学人民医院提供后勤支持 ,北京纬晓生物技术公司提供资金 ,于 1 996年开始筹建非血缘关系 PCBB,到 2 0 0 0年 7月已冻存经过 HLA配型的胎盘脐带血 3744余份。现将部分结果总结如下 :1 .1　库用材料与方法　 ( 1 )胎盘脐带血的采集 :来自经检查符合要求的足月顺产或剖宫产新生儿 ,经CPD- A抗凝。采用密闭式血袋采集法采集 ;( 2 )胎盘脐带血的分离 …     

脐带血相对造血重建能力的研究现状

脐带血移植术中为许多良，恶性疾病患儿带来了新的希望近年有关探讨成人脐带血移植可行性的体外实验表明，一份脐带血的长期造血能力可以满足成人移植的最低需要，而其短期造血能力相对不足，应设法改善。     

外周血造血干细胞体外保存的研究进展

外周血造血干细胞移植 ( peripheralbloodstemcelltransplantation ,PBSCT)近年来在国内外得到广泛发展 ,已成为治疗恶性血液病和多种实体瘤的有效方法。与骨髓移植相比 ,PBSCT有以下优点[1～ 5] :①外周血造血干细胞 (PBSC)收集比较方便 ,供体无需麻醉 ,也无多部位穿刺抽髓的痛苦和不便 ,易被患者接受 ;②移植后受体造血功能重建快 ,免疫功能恢复早 ,感染、出血等并发症少 ,减少了抗生素和成份血的应用 ,降低了移植相关病死率 ,缩短住院时间 ,节约费用 ;③可从外周血管采集造血干细胞 ,对骨髓有浸润、纤维化或接受放疗不能采集骨髓的…     

脐带血血清体外培养的人骨髓间充质干细胞对干细胞移植病人造血重建的影响

目的：观察脐带血血清体外培养体系培养的人骨髓间充质干细胞对干细胞移植病人造血重建的影响及不良反应。方法：用10%脐带血血清体外培养体系培养的人骨髓间充质干细胞联合自体外周血干细胞移植治疗3例恶性淋巴瘤患者,计数BM-MSC的数目,观察其造血重建时间、不良反应。结果：采用10%脐带血血清培养体系培养BM-MSC,回输时达到2.82-3.96×106/kg,3例患者中性粒细胞〉0.1×109/L的时间为移植后第9-12天,血小板〉20×109/L的时间为移植后第9-15天,无明显不良反应。结论：10%脐带血血清培养体系是一种基于临床移植需要的分离、培养人BM-MSC的方法,此法培养的BM-MSC联合APBSC移植治疗恶性淋巴瘤患者,加速了造血重建,未见明显不良反应,具有临床应用价值。     

实体瘤患者外周血造血干细胞的动员与保存

目的 :探讨一种适于晚期恶性肿瘤治疗的自体外周血造血干细胞移植方法。方法 :单用rG -CSF(75μg,q12h×2d)作动员剂 ,用血细胞分离机一次性收集单个核细胞(MNC),4℃贮存。观察WBC、MNC计数、细胞活力及细胞分类 ;用流式细胞仪进行细胞表型检测。结果 :小剂量rG -CSF动员后 ,外周血WBC达(18.71±6.54)×109/L。一次可收集MNC(1.87±0.66)×108/kg。CD34、CD14、CD3 及CD22 细胞分别为4.39 %、3.85 %、4.63 %及3.76 %。CD34 细胞平均约为8.2×106/kg。4℃贮存48～56小时MNC存活率为94.3 %。结论 :对实体瘤尚无骨髓转移的患者 ,用此方法可获得足以重建造血功能的干细胞。     

CD44与造血干细胞归巢的相关性研究进展

CD44属于粘附分子家族的Ⅰ型跨膜糖蛋白,是一种骨髓细胞外基质糖胺聚糖-透明质酸(HA)的主要受体.CD44最初叫淋巴细胞归巢受体,因与淋巴细胞归巢有关而得名.     

CD34+造血干细胞阳性提取进行异基因造血干细胞移植

CD34抗原在造血干细胞中有表达,因而将提取的CD34+造血细胞进行造血干细胞移植是可能的,是合理的,CD34阳性细胞的提取及移植是有其特点的,这样的异基因造血干细胞移植已有不少成功的报告,现将其主要方法介绍如下.     

Human Umbilical Cord Blood for Hematopoietic Progenitor Cells Transplantation

Human umbilical cord blood (HUCB) represents a unique source of transplantable hematopoietic progenitor cells. HUCB from a newborn sibling has been used successfully for hematopoietic reconstitution of more than 50 children with congenital and malignant diseases. Moreover, 13 HUCB transplants have been performed from unrelated donors. Bone marrow transplantation (BMT) has rapidly progressed over the last two decades offering cure and prolonged disease free survival in patients with hemato-oncological malignancies, metabolic and genetic disorders. BMT is limited by the paucity of HLA-matched donors and the morbidity and mortality due to graft-versus-host disease (GVHD). HUCB could alleviate some of the problems associated with BMT and establishment of HUCB bank and registries could become an easily available source of suitable stem cells for transplantation. This review focuses on identifying current scientific problems and clinical achievement as well as noting the most recent developments in the field with special attention to the collection, processing, cryopreservation, and banking of HUCB. Progenitor cells from cord blood may provide an excellent vehicle for future gene therapy. As a result of relative immunodeficiency at birth, it is likely that partially matched unrelated cord blood transplants (CBT) would be successful due to a lower risk of GVHD related problems. Therefore, the establishment of large cord blood banks is of the utmost importance, in the future.     

Ultrastructural Features of CD34+ Hematopoietic Progenitor Cells from Bone Marrow, Peripheral Blood and Umbilical Cord Blood

Hematopoietic progenitor cells from different sources have been widely characterized, but their ultrastructural morphology has never been described in detail. In this study, imunomag-netically separated CD34⁺ cells from normal bone marrow (BM), mobilized peripheral blood (PBSC) and human umbilical cord blood (CB) were studied by transmission electron microscopy (TEM) using a cytochemical method which reveals endogenous myelo-peroxidase (MPO) activity. This technique is particularly suited for detecting early signs of the myeloid commitment. The CD34⁺ cells from PBSC were morphologically very homogeneous and 94.7 ± 4.5% of these cells were MPO^-: these ultrastructural features are generally considered typical of immature cells. The CD34⁺ BM cells were instead more heterogeneous, with 24.6 ± 7.4% showing intense MPO activity. The ultrastructural characteristics of CB cells fell between those observed in PBSC and BM, but there was a high percentage of morphologically immature cells with no evidence of MPO activity (about 83%). The number of apoptotic cells within samples from different sources was also examined both by TEM and flow cytometry. The percentage of apoptotic cells was 0.7% in PBSC, 2.3% in BM, 2.9% in CB from vaginal delivery and 11.6% in CB from cesarean section. These observations confirm the relative phenotypic immaturity of CB in comparison with BM cells; they also suggest that CB collected after cesarean section may be associated with reduced stem cells viability.     

电子垃圾拆解区新生儿脐带血铬水平

背景与目的:探讨电子垃圾拆解区--贵屿镇新生儿铬污染状况及其影响因素.材料与方法:选择2006年5～9月足月健康新生儿152例,其中来自贵屿镇的100例(暴露组),来自周边乡镇的52例(对照组).采用石墨炉原子吸收光谱法检测新生儿脐带血铬水平,通过调查表对产妇进行问卷调查,分析相关影响因素.结果:贵屿组新生儿脐带血铬几何均值为303.38 μg/L,与对照组20.30 μg/L相比,差别有统计学意义(P＜0.01).孕妇从事电子垃圾处理相关工作等因素与新生儿脐带血铬水平呈正相关.结论:电子垃圾拆解区部分新生儿铬负荷处于较高的水平,新生儿的铬负荷水平与当地的电子垃圾拆解业及所造成的铬污染有关,铬污染可能对当地新生儿的健康构成威胁.     

脐血免疫细胞特性的研究

目的：研究单份脐血免疫细胞的表型特征。方法：收集20份脐血，采用6％的羟乙基淀粉沉淀去除红细胞，用流式细胞仪检测脐血免疫细胞的表型特征。结果：CD4+T细胞表达CD(45RA)为(89.95±7.86)％，CD8+T细胞表达CD(45RA)为(99.58±3.46)％，均显著高于成人外周血T淋巴细胞(P＜0.01)。结论：脐血中免疫细胞发育不成熟，免疫原性弱，用于移植时移植物抗宿主病(GVHD)的发生率较骨髓移植(BMT)和自体成人外周血造血干细胞移植(PBSCT)明显降低。     

脐血造血细胞的体外扩增及分化特性 *

了解造血生长因子的不同组合对人脐血CD34 +细胞的扩增效应及分化特性。方法： 采用人脐血单个核细胞(MNC)经rhIL-1,rhIL-3,rhIL-6,rhG-CSF,rhGM-CSF和rhSCF的不同组合进行体外扩增培养, 动态观察了不同细胞因子组合对有核细胞总数的扩增数量,应用流式细胞技术(FACS)动态分析了造血细胞的表面标志, 并对液态扩增后造血细胞的粒 巨噬集落形成率(CFU-GM)进行了动态观察。结果:经上述6种细胞因子培养20 d, 有核细胞总数增殖44倍, 液态扩增培养8 d后, CFU-GM比原代MNC增加14.74倍, 扩增18 d后, CFU-GM明显减少, 仅为原代MNC的6.42倍, 且集落小于前者。扩增培养至6～8 d时, CD34+细胞总数是原代MNC的127.79～196.40倍, 18 d时下降至101.51倍。结论： 外源性造血生长因子可使脐血CD34+细胞及CFU-GM产生明显的扩增效应。     

脐血造血细胞的体外扩增及分化特征

目的：了解造血生长因子的不同组合对人脐血ＣＤ３４＋细胞的扩增效应及分化特性。方法：采用人脐血单个核细胞（ＭＮＣ）经ｒｈＩＬ－１,ｒｈＩＬ－３,ｒｈＩＬ－６,ｒｈＧ－ＣＳＦ,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ和ｒｈＳＣＦ的不同组合进行体外扩增培养,动态观察了不同细胞因子组合对有核细胞总数的扩增数量,应用流式细胞技术（ＦＡＣＳ）动态分析了造血细胞的表面标志,并对液态扩增后造血细胞的粒－巨噬集落形成率（ＣＦＵ－ＧＭ）进行了动态观察。结果：经上述６种细胞因子培养２０ｄ,有核细胞总数增殖４４倍,液态扩增培养８ｄ后,ＣＦＵ－ＧＭ比原代ＭＮＣ增加１４．７４倍,扩增１８ｄ后,ＣＦＵ－ＧＭ明显减少,仅为原代ＭＮＣ的６．４２倍,且集落小于前者。扩增培养至６～８ｄ时,ＣＤ３４＋细胞总数是原代 ＭＮＣ的１２７．７９～１９６．４０倍,１８ｄ时下降至１０１．５１倍。结论：外源性造血生长因子可使脐血ＣＤ３４＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ产生明显的扩增效应。     

自体外周血干细胞、脐血及rhG-CSF在肿瘤化疗致粒细胞缺乏中的应用

[目的]观察自体外周血干细胞、脐血和rhG-CSF在肿瘤化疗致粒细胞缺乏症患者中的作用.[方法]22例不同实体瘤患者因化疗致外周血中性粒细胞低于0.5×109/L时进行综合救治;45例实体瘤患者随机分为3组,采用自身对比的方法,观察预防性使用rhG-CSF、脐血和自体外周血干细胞输注后血象的变化.[结果]22例粒细胞缺乏症的患者化疗后白细胞总数及粒细胞绝对值降至最低值的时间为(12.24±2.08)天,其中,粒细胞绝对值低于0.1×109/L者5例,低于0.5×109/L者17例,经采用G-CSF、脐血及预防性使用抗生素后,没有1例发生感染;应用外周血干细胞输注,脐血输注和预防性使用rhG-CSF的三组患者,骨髓抑制的程度治疗周期小于对照周期,恢复至正常的时间也明显缩短.[结论]在粒细胞缺乏症的临床救治中,外周血干细胞输注、脐血输注及rhG-CSF都能加速骨髓造血功能恢复.     

人脐血来源树突状细胞的体外培养及鉴定

目的建立脐血来源树突状细胞（dendritic cells，DC）的体外培养方法，为进一步研究DC的功能、特性及临床应用提供了技术方法。方法取正常人脐血，分离获得单个核细胞，利用贴壁法去除悬浮细胞后，加入1000U／mL rhGM-CSF、500U／mL rhlL-4，至d7再加入500U／mLTNF-α进行培养，收集培养至d10的DC，分别从形态学、免疫表型和功能上加以鉴定。结果体外培养的d10，大量细胞出现典型的树突状形态；经流式细胞仪检测，高表达HLA-DR、CD80、CD83、CD1a、CD11c；混合淋巴细胞反应显示其在体外能有效刺激同种淋巴细胞增殖。结论在合适的细胞因子组合下，能够在体外利用脐血成功诱导出成熟DC。