分离亲水气单胞菌外毒素的聚丙烯酰胺凝胶色谱填料

由丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺在水油悬浮液中共聚得到聚丙烯酰胺凝胶 (ZSP)系列 ,并用红外、溶剂吸收实验等对合成的ZSP的结构进行了研究。以商品葡聚糖凝胶SephadexG 10 0为对照 ,研究了ZSP 10对使中华鳖致病的亲水气单胞菌外毒素的分离性能。结果表明 :ZSP 10对毒素分离效率高 ,洗脱峰不拖尾 ,且结构和膨胀度可调 ,成本低廉 ,不易染菌霉变。经SephadexG 10 0和ZSP 10提纯的外毒素蛋白均保留了生物活性。根据SDS -PAGE的分析 ,确认经提纯的毒素蛋白的分子量为 3.2× 10 4     

凝胶过滤层析分离蛋白质实验中三种过滤介质分离效果的比较

目的 探讨凝胶过滤层析分离蛋白质的最佳实验效果。方法 分别采用不同规格的凝胶过滤层析介质Sephadex G-50、G－75、G－100，通过凝胶过滤支析法分离已知分子量的混合蛋白质。结果 混合样品得到分离，呈现三组分离榈的层析图。结论 从大分子物质中除去小分子物质时应选用交联度大的介质G－50。进行中等蛋白质分离时，选用G－75较为合适，将小分子物质浓缩而除去大分子物质时，应选用交联度小的介质，如G－100或G－200。     

广西产圆斑蝰蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

目的 从蝰蛇蛇毒中分离纯化神经生长因子(NGF)。方法 粗毒采用CM52阳离子交换柱层析，DEAE Sephadex A-50阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤进行分离纯化。洗脱峰利用PCI2细胞测定活性，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦圆盘电泳(EFG)等方法，进行理化性质的鉴定。结果 从粗毒6．0g中得到电泳纯的神经生长因子3．64mg，分子量为36kD，由两个亚基通过二硫键交联组成二体结构。等电点pI为6．7，在0．5～5．0μg／mL时，对PCI2细胞有良好的促进分化作用。结论 本法可从广西产圆斑蝰蛇毒粗毒中得到电泳纯的神经生长因子。     

福建产眼镜王蛇毒神经毒素的分离及活性测定

目的 从眼镜王蛇蛇毒中分离神经毒素，测定其活性和毒性。方法 应用CM—Sephadex C-50离子交换色谱，阶段梯度洗脱分离粗毒；用Sephadex G-50凝胶过滤纯化组分；用大鼠体外膈神经-膈肌标本鉴定分离组分对神经-肌肉接头的作用性质；观察神经毒素对乙酰胆碱(Ach)引起蛙体外腹直肌收缩的量效曲线的影响；以Meier法测定神经毒索对小鼠的半数致死量(LD50)。结果 眼镜王蛇粗毒经阳离子交换色谱后获得A～N共14个蛋白峰，经鉴定E、F、G，H、I、K等6个蛋白峰具有阻断神经一肌肉接头传导的作用，被鉴定为神经毒素，约占粗毒的48．3％；通过凝胶过滤对E、G和K组分进行初步纯化；E、G和K组分可使Ach引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移，它们与N2-胆碱受体(N2-AchR)的解离常数(KD)分别为：145．87，73．53和20．04ng／mL；E、G和K组分小鼠静脉注射的LD50分别为：0．884，0．749和1．58mg／kg。结论 眼镜王蛇粗毒经离子交换色谱获得6个神经毒索组分，经鉴定E、G和K组分为N2-AchR的竞争性拮抗剂。     

两种不同抗原在幽门螺杆菌临床诊断中的比较

采用Sephadex一G200凝胶层析和酸性甘氨酸提取法,制备了两组不同的HP抗原,并分别以此为包被抗原,用SPA—ELISA方法检测了经临床生物学特性鉴定,确定为HP感染的阳性标本26例,阴性标本18例.结果以Sephadex—G200凝胶层析和酸性甘氨酸提取的抗原,对HP感染的阳性检出率分别为92%和62%.提示以Sephadex—G200凝胶层析提纯的抗原,在幽门螺杆菌临床诊断中的特异性明显的优于酸性甘氨酸提取的抗原.     

两种分离人血清蛋白质电泳技术的比较研究

目的比较双向电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离人血清中蛋白质的效果。方法双向电泳直接分离人血清中的蛋白质；采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离去除白蛋白的人血清样品。结果双向电泳图谱显示，样品在分子量为10k-20kDa可以分离出较清晰的蛋白质点，但在8000Da以下没有分离出清晰的蛋白质点，且在20kDa以上的蛋白质点，凝胶背景模糊不清。而采用改进后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示，可有效分离10kDa以下的小分子蛋白质。结论两种电泳技术各有所长，需根据目的蛋白的特点选择适合的方法。     

NADH-细胞色素b_5还原酶的研究

采用硫酸铵分级分离、Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-cellulose 离子交换层析以及5′-AMP-Sepharose 4B 亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的 NADH-细胞色素 b_5还原酶,提纯倍数为750～800,总回收率为40％左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,最大吸收波长273,390和460nm,在415和475nm 处有一肩峰,A273/A460比值为5.8。荧光光谱分析该纯酶含 FAD 基团。在 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带。分子     

舟山眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的分离纯化、理化及酶学性质

目的 从舟山眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶(LAO),测定其理化和酶学性质.方法 应用Sephadex G-100凝胶色谱和POROS CM20离子交换色谱分离纯化LAO;Wellner和Lichtenberg法测定LAO活力,SDS-PAGE法测定相对分子质量.结果 舟山眼镜蛇蛇毒经Sephadex G-100凝胶色谱和两次POROS 20离子交换色谱后,获得LAO纯品(暂定名NA-LAO).NA-LAO在非还原和还原条件下相对分子质量均为58 kD左右;其反应最适pH为8.0,最适温度为60℃,对L-苯丙氨酸的米氏常数(Km)为3.08 mmoL/L.结论 应用凝胶过滤色谱和离子交换色谱可从舟山眼镜蛇毒中分离纯化LAO.     

小鼠肝脏免疫抑制蛋白质的分离和纯化

我们应用硫酸铵分段盐析,结合多种离子交换柱层析和羟磷灰石柱层析,从正常小鼠肝浸液中分离纯化出一种免疫抑制蛋白质,在体外它能很强地抑制小鼠T和B淋巴细胞对促有丝分裂原和同种异型抗原的增生反应。纯化的免疫抑制蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳及等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其pI值在7.5～7.8之间。Sephadex G-100凝胶层析测得纯化蛋白质的分子量为78,000,SDS-PAGE测得此蛋白质亚基的分子量为38,500。同时经初步鉴定,此纯化的蛋白质既非糖蛋白又非脂蛋白。     

鼻咽癌细胞株HNE-1蛋白质二维电泳图谱的建立

目的 建立及优化聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术，结合分析软件，全面展示鼻咽癌细胞株HNE—1的蛋白质表达谱，为进一步开展鼻咽癌的蛋白质组学研究奠定了基础。方法 大规模培养HNE—1细胞，利用优化的蛋白质抽提技术获得HNE—1细胞的总蛋白。选用线性及非线性的不同pH梯度固相(IPG)干胶条对细胞总蛋白等电聚焦以及聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，初步建立了HNE—1细胞株总蛋白质的二维电泳(2—DE)图谱。结果 采用不同pH梯度范围的IPG胶条和优化的2—DE技术能够有效展示HNE—1细胞全蛋白质表达谱。结论 重叠窄pH梯度范围的IPG胶条提高了2—DE中蛋白质的分离效果。     

牛脑脑型腺苷三磷酸—肌酸磷酸转移酶的提纯

本文报道了用乙醇、硫酸铵分级,然后用磷酸纤维素、DEAE-纤维素离子交换柱层析以及Sephadex G-100凝胶过滤等方法,提纯了牛脑脑型肌酸激酶。酶制剂比活性提高约33倍,活力回收0.72%。在聚丙烯酰胺凝胶电泳染色,只显示一个区带。     

妊娠区带蛋白(PZP)的分离、纯化及其鉴定

本文采用人胎盘后血为原料,经Sephadex G 200,DEAE-Sephadex A-50层析,等电聚焦电泳,Sepharose 4B负亲和层析技术,从胎盘后血清中分离、纯化出PZP纯品,经8.0％聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳,免疫电泳和双向免疫交叉试验,证实其为单一的成份。     

人心肌肌凝蛋白轻链的分离提纯与鉴定研究

参考采用Schoβler方法并加以改进,分别应用等电点沉淀法、快速蛋白质液相层析(FPLC)及SDS聚丙烯酰胺凝胶制备电泳三种方法分离提纯肌凝蛋白轻链(CMLC),其各具有不同的优缺点,并对CMLC做了鉴定。同时证明在-20℃条件下,冻存时间较长或蛋白浓度较低的CMLC容易降解。     

大鼠储精囊切除对受精作用的影响及其分泌蛋白的分离与纯化

本文描述:①用切除大鼠储精囊方法观察储精囊对大鼠性行为、排精能力和受精能力的影响。②分离纯化储精囊分泌液中主要组分SVPⅡ,SVPⅣ和SVPⅤ。分离纯化的方法是,用含有EDTA作为凝固酶剂抑制的Tris缓冲液注射器,抽出储精囊分泌液,经离心,Sephadex G-100柱层析,硫酸铵沉淀和CM—Sephadex C-25离子交换柱层析及含有尿素、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳作纯化蛋白质纯度的鉴定。这些纯化的蛋白质对抗体的制备,结构分析,功能研究及其相应结构基因DNA序列的鉴定具有一定意义。     

日本血吸虫组分蛋白SjR47的大量纯化、收集和鉴定

从日本血吸虫感染兔红细胞上分离的SjR47和SjR12两种组分蛋白能诱导宿生产生明显的抗病免疫效应。为大量纯化、收集该两种组分蛋白，我们采用了聚丙烯酰胺凝胶大柱制备电泳技术，并对该法收集蛋白的纯度及其生物活性进行了鉴定。结果表明，该技术不仅可使蛋白收集量达到毫克级水平，而且蛋白纯度较高，还可保持较高的天然蛋白生物活性，经透析处理后蛋白生物活性更高，用以免疫家兔后可获得高效价的多克隆抗体，为今后进一步深入研究该两种蛋白分子的特性奠定了基础。实验结果进一步表明聚丙烯酰胺凝胶大柱制备电泳技术是一种有效的蛋白纯化方法。     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的：从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE，用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量，用皮内出血实验测定其出血活性。结果：从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶，它的相对分子质量为25000，没有出血活性，在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白，相对活性为粗毒的3．2倍。结论：从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性，而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。     

高效液相色谱法提纯和分离酵母苯丙氨酸tRNAphe ASL

通过用特殊树脂Nucleogen-DEAE阴离子交换柱可有效地提纯和分离酵母苯丙氨酸tRNA^phe不同核苷酸的聚核苷酸。经反相高效液相色谱进行定量核苷组分分析，确认是否掺入了修饰的核苷，用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度检查。     

蝮蛇毒硷性纤溶酶的性质研究

用 DEAE—纤维素(DE_(52))柱层析从蝮蛇A.b.brevicaudus 毒中分离得到至少10个具有酪蛋白水解活性的峰,其中8个显示纤维活性。将硷性纤维酶进一步用磷酸纤维素柱层析及SephadexG—75柱层析提纯,经 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,显示一条区带。硷性纤溶酶     

江西蝮蛇毒纤溶酶的纯化和性质的研究

江西蝮蛇毒经Sephadex G_(50)分离,试验洗脱液对BAEE的作用检出其中的精氨酸酯酶活性。纤溶酶通过两次DEAE-纤维素离子交换层析得以分离和纯化。聚丙烯酰胺凝胶电泳指出它是均一的。该酶的分子量已由SDS—凝胶电泳所测定约为40,000,等电点在4.0左右。     

人早幼粒白血病细胞衍生的淋巴细胞凝集物质的部分纯化及特性

人早幼粒白血病细胞(HL60)衍生的淋巴细胞凝集物质已经用DEAE Sephadex A25离子交换层析和Sephadex G 200凝胶过滤层析进行了纯化。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明该物质是一种分子量为70KDa的蛋白质。~3H—TdR掺入实验表明,该物质能够抑制PHA刺激的人外周血淋巴细胞的增殖反应。结果提示,这种与集落刺激样因子有别的凝集物质可能是一种抑制免疫反应的物质。