启膈散协同顺铂抑制食管癌EC9706细胞生长与miR-21的关系

目的:观察启膈散含药血清联合顺铂对人食管癌细胞EC9706的增殖效应,从miR-21探讨其作用机制。方法:制备启膈散含药血清,MTT法筛选其最佳作用浓度;PCR检测miR-21、PDCD4 mRNA和PTEN mRNA的表达情况;Western-blot检测蛋白PDCD4、PTEN的表达水平。结果:5%含药血清的浓度作用效果最为显著(q>1)。与5%对照血清组比较,除5%含药血清PDCD、PTEN mRNA和0.5μg/m L顺铂组的PTEN mRNA表达量下降外,其余各组的miR-21、PDCD4 mRNA和PTEN mRNA表达均升高(P<0.05);顺铂联合含药血清后,两组miR-21表达和联合高浓度顺铂组的PDCD4 mRNA均比其单用下降(P<0.05),而两组PTEN mRNA和联合低浓度组的PDCD4 mRNA的表达则升高(P<0.05)。与对照组相比,各组PDCD4蛋白表达量升高P<0.05;高浓度顺铂联合含药血清组比单用高顺铂组PDCD4蛋白表达量升高(P<0.05),低浓度顺铂的两组变化不明显(P>0.05);两个浓度顺铂联合含药血清时PTEN的表达量均高于单独使用顺铂(P<0.05)。结论:启膈散能够增加EC9706对顺铂的敏感性,可能是通过miR-21与其调控的下游基因PDCD4与PTEN共同参与完成。     

启膈散对食管癌细胞微丝骨架重排的影响

目的研究启膈散对食管癌细胞微丝骨架的影响,并探讨其抑制转移的机制。方法采用高分化人食管癌细胞TE1、Eca109及低分化人食管癌细胞TE13,将细胞分为对照组(未加药)及启膈散(100μg/mL)组。应用免疫荧光法观察各组食管癌细胞形态的变化,激光共聚焦显微镜观察启膈散对食管癌细胞微丝排列的影响。采用细胞阻抗检测技术检测启膈散对食管癌细胞同基质黏附力及细胞迁移能力的影响。结果启膈散组食管癌细胞TE1、TE13及Eca109中微丝排列更规则,伪足消失,对照组细胞中微丝排列混乱,且以细胞膜微丝排列不规则更为明显,在细胞膜上微丝排列缺乏同向性,向外伸出伪足。与对照组比较,启膈散组食管癌细胞TE1和TE13中形态规则的细胞数目明显增多(P0.05),TE1与TE13细胞经启膈散作用后细胞与基质的黏附力及迁移能力均明显降低(P0.05,P0.01)。结论启膈散能够抑制食管癌细胞发生微丝骨架重排,使食管癌细胞同基质之间的黏附力降低,从而抑制细胞的迁移。     

启膈散对食管癌EC9706细胞miR-133a/PI3K/Akt信号通路甲基化的影响

目的 观察启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌EC9706细胞micoRNA-133a(miR-133a)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路甲基化的干预作用。方法 流式细胞术检测启膈散对EC9706细胞的凋亡的影响;蛋白印迹免疫法(Westernblotting)分别检测采用Akt抑制剂、转染miR-133a模拟物及DNMT1抑制剂后启膈散对DNMT1蛋白表达的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测启膈散对miR-133a及IGF-1R mRNA表达量的影响。结果 与空白对照组比较,启膈散组可增加EC9706晚期凋亡率及总凋亡率(P<0.05),与DNMT1抑制剂组相比,启膈散组、联合用药低剂量组晚期凋亡率差异显著(P<0.05)。与空白对照组比较,启膈散及各联合用药组均能够抑制食管癌EC9706细胞DNMT1蛋白的表达(P<0.05);启膈散与PI3K/AKT信号通路抑制剂联合用药组、启膈散与转染miR-133a模拟物联合用药组均对DNMT1蛋白的抑制呈现一定程度的的协同增效作用。与空白对照组相比,启膈散组、DNMT...     

启膈散对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及miR-133a/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 观察启膈散对EC9706细胞增殖、凋亡的影响和对微RNA-133a（miR-133a）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 采用乙酸乙酯法提取启膈散有效部位;噻唑蓝（MTT）比色法筛选启膈散细胞用药剂量及检测启膈散对EC9706细胞增殖的影响;流式细胞仪检测启膈散对EC9706细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测启膈散对miR-133a及胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测启膈散对miR-133a/Akt/mTOR通路靶蛋白Akt,mTOR的表达。结果 与空白组比较,启膈散可抑制EC9706细胞的增殖（P<0.01）,并呈剂量依赖性,筛选30%抑制浓度（IC₃₀）40 mg·L^-1和半抑制浓度（IC₅₀）80 mg·L^-1进行后续实验;与空白组比较,抑制剂组、抑制剂+启膈散组均可抑制EC9706细胞增殖（P<0.01）,筛选抑制剂0.25 μmol·L^-1进行后续实验;与空白组比较,启膈散80 mg·L^-1组可明显促进EC9706细胞晚期凋亡率及总凋亡率（P<0.05）,启膈散40 mg·L^-1组可促进EC9706细胞晚期凋亡率（P<0.05）,与Akt/mTOR抑制剂联合用药后,可协同增效。与空白组比较,各组均能提高miR-133a表达（P<0.05）,其中抑制剂与中药抑制剂+启膈散组促进作用明显。与空白组比较,各组均能够均可明显降低Akt,mTOR蛋白表达（P<0.05）,与单独用药比较,抑制剂与中药联合应用组Akt,mTOR的蛋白表达有所降低。结论 启膈散能够抑制食管癌EC9706细胞的生长,促进EC9706细胞的凋亡,其抑制机制可能与调控miR-133a的表达,影响其下游Akt/mTOR信号通路有关。     

启膈散乙酸乙酯部位提取物通过抑制TGF-β1信号通路干预食管癌细胞的迁移和侵袭

目的：探讨启膈散(QGS)对食管癌细胞TE-1迁移和侵袭能力的影响机制。方法：利用基因芯片技术筛选正常组和启膈散组差异表达基因,分析差异基因的本体功能和信号通路。噻唑蓝(MTT)比色法检测QGS对TE-1细胞活性的影响。后续验证实验分为空白组、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)组、TGF-β₁+QGS组、TGF-β₁+SB431542组。显微镜观察各实验组细胞形态,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、果蝇母本抗生存因子2(Smad2)和果蝇母本抗生存因子7(Smad7) m RNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞E-Cadherin、Vimentin、p-Smad2/3、Smad2/3和Smad7蛋白的表达。结果：QGS组与空白组之间有1 487个差异基因,其中1 080个下调,407个上调,下调基因占差异基因的72.63...     

启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤对人食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的观察启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤、补气运脾汤各证方对人食管癌细胞株EC9706细胞增殖和凋亡的影响作用。方法体外培养人食管癌细胞株EC9706细胞,分别用启膈散、沙参麦冬汤、通幽汤和补气运脾汤处理细胞,倒置显微镜下观察EC9706细胞增殖和形态变化;MTT法检测各证方对EC9706细胞增殖影响的量效关系;TUENL法和荧光显微镜观察各证方诱导EC9706细胞凋亡的作用;Annexin V FITC/PI双标记流式细胞术检测各证方诱导EC9706细胞凋亡率：结果启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对EC9706细胞增殖的抑制率随药物浓度增加而上升,呈现剂量-效果依赖性关系,在药物浓度为6400μg/ml时,三组抑制率分别为78%、63%、78%。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤不同程度地诱导细胞发生凋亡,各组诱导细胞的凋亡率依次为：沙参麦冬汤组〉启膈散组〉通幽汤组。结论启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤可不同程度地明显抑制人食管癌细胞株EC9706细胞增殖,补气运脾汤对体外培养细胞增殖的直接抑制作用很弱。启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤均可不同程度诱导人食管癌EC9706细胞凋亡。     

常山水提醇沉物对EC9706细胞周期、凋亡、能量代谢的影响

目的从细胞增殖、凋亡、细胞周期、能量代谢角度,研究常山水提醇沉物抗食管癌细胞EC9706的作用及机制。方法用MTT法检测EC9706细胞活性,流式细胞术检测药物对食管癌EC9706细胞凋亡、周期的影响,能量代谢检测系统检测药物对EC9706细胞能量代谢的影响。结果不同浓度常山水提醇沉物作用48 h后能有效抑制EC9706细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.01),可以有效促进细胞凋亡(P<0.05),将EC9706细胞阻滞于S期和G2/M期(P<0.05),并且明显抑制细胞糖酵解及线粒体代谢能力(P<0.01)。结论以上结果表明,常山水提醇沉物可能通过干预细胞周期、凋亡及能量代谢抑制食管癌EC9706细胞增殖。