结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法的建立

目的建立结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计覆盖rpoB、katG、inhA基因突变区的系列寡核苷酸探针，并检测临床样品中结核分枝杆菌的基因突变情况，以此来判断耐药结果。结果在56个利福平耐药菌株中，有50个菌株都在rpoB基因上榆出有突变，利福平耐药突变检出率为89．3％（50／56）；有30个利福平敏感菌株rpoB基因上都未检出突变。有58个异烟肼培养的耐药菌株中有47个在katG或inhA基因上检出有突变，异烟肼耐药突变检出率为81．0％（47／58）；有30个异烟肼敏感菌株katG或inhA基因上未检出突变。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可用于临床结核分枝杆菌耐药性的检测。     

基因芯片法检测结核分枝杆菌耐药性的可行性分析

目的分析基因芯片法检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的灵敏度、特异度及符合率,为临床提供方便、准确、快速的MTB耐药性的检测方法。方法以DNA测序法为金标准,采用基因芯片法与比例法药敏试验同时对2014年8~12月收治的250例结核病患者的痰液标本分离MTB菌株进行耐药性检测,比较两种方法检测MTB对利福平和异烟肼耐药性的效能。结果基因芯片法与比例法药敏试验检测MTB对利福平的耐药率分别为3.0%、3.5%,对异烟肼的耐药率分别为6.7%、8.2%。以DNA测序法为金标准,基因芯片法检测MTB对利福平与异烟肼耐药性的灵敏度、特异度及符合率均高于比例法药敏试验,且检测时间短于比例法药敏试验,差异均有统计学意义(P0.05)。结论运用基因芯片法检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的灵敏度、特异度与符合率,可以代替比例法药敏试验成为检测MTB耐药性的有效方法。     

基因芯片法用于检测长沙地区结核分枝杆菌耐药性研究

目的了解长沙市中心医院2013年1月1日至2014年9月30日临床分离的1 031株结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性。方法将结核分枝杆菌培养阳性,并经鉴定为结核分枝杆菌的1 031株菌株,采用绝对浓度法进行常规药敏检测,同时应用基因芯片技术检测利福平和异烟肼耐药相关的rpoB、katG和inhA基因上的位点突变,并对2种结果进行比较。结果基因芯片法检测利福平耐药性中,其敏感株896株,耐药株135株;检测异烟肼耐药性为敏感株901株,耐药株130株。与绝对浓度法比较,基因芯片检测利福平耐药结果与其一致的菌株共1 011株(包含敏感株894株,耐药株117株),符合率为98.00%;基因芯片检测异烟肼耐药结果与其一致的菌株共1 005株(包含敏感株890株,耐药株115株),符合率为97.48%。与利福平耐药相关的rpoB基因的突变位点最常见的为531TCG→TTG突变,占耐药株的51.11%;其次为526CAC→TAC突变耐药株的10.37%;526CAC→GAC共11株菌株突变,占耐药菌株的8.15%。异烟肼耐药主要是由katG315AGC→ACC位突变引起,占耐药株的83.85%,inhA-15C→T突变仅占12.30%。结论基因芯片法与绝对浓度法结果高度一致,可成为筛查利福平和异烟肼耐药性的快速有效方法,长沙地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药以rpoB531,526及katG315突变位点为主。     

焦磷酸测序技术检测耐多药结核分枝杆菌

目的利用焦磷酸测序技术,建立结核分枝杆菌菌株耐多药检测方法,并与Bactec MGIT 960药敏法进行比较。方法设计rpoB、katG基因PCR扩增引物和焦磷酸测序引物,建立结核分枝杆菌菌株焦磷酸测序检测方法。利用新确立的焦磷酸测序法检测202株临床分离的耐多药结核分枝杆菌的利福平、异烟肼耐药性。结果与BACTEC MGIT 960法检测药物耐药性结果比较,焦磷酸测序检测多耐药结核分枝杆菌临床分离株的敏感性与特异性为72.8%[95%可信区间(confidence in-terval,CI):66.3%~78.4%]及90.0%(95%CI:80.1%~95.1%)。结论新确立的焦磷酸测序技术可快速检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼的耐药性,其可作为耐多药结核分枝杆菌药敏有效的检测工具。     

DNA微阵列芯片法在海南地区结核病诊断及耐药性检测中的应用

目的 探讨DNA微阵列芯片法在海南地区结核病诊断及耐药性检测中的应用.方法 采用抗酸杆菌涂片法、罗氏培养法、比例法药敏试验及DNA微阵列芯片法对海南地区的2069例疑似结核病患者痰标本进行检测,并对结核分枝杆菌检出率、耐药性及耐药基因突变特征进行分析.结果 DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌检出率为明显高于罗氏培养法和...     

基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的临床应用

目的 评价基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的效果. 方法 选取我院结核科2014年3月至2016年3月收治的涂片阳性的肺结核住院患者238例,取其痰标本,分别用基因芯片、传统的罗氏培养和药敏试验3种方法进行结核分枝杆菌的异烟肼耐药性检测和利福平耐药性检测;把罗氏培养和药敏试验的结果作为金标准,评价基因芯片技术的临床应用价值. 结果 基因芯片技术检测涂片阳性患者痰标本异烟肼耐药的情况与金标准无显著差异(P＞0.05);利福平耐药的情况与金标准相比也无明显差异(p>0.05). 结论 基因芯片能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药情况,是一种值得推广的临床实验室检测方法.     

基因芯片技术检测结核杆菌耐药的临床研究

目的 评价基因芯片技术在结核病防治工作中对结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的检测效果.方法 利用基因芯片技术对38例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏药敏试验为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价.结果 在38例菌株中,用基因芯片法进行异烟肼耐药基因检测,与罗氏药敏的符合率为84.2％,对38例进行利福平耐药基因检测,符合率为89.5％.结论 基因芯片检测异烟肼和利福平的耐药性与罗氏药敏方法具有很好的一致性,具有简便快速,灵敏度高,特异性好的优点,对临床及时准确进行抗结核治疗具有重要意义.     

台州地区结核分枝杆菌分离及耐药特征分析

目的了解台州地区结核分枝杆菌(MTB)和非结核分枝杆菌(NTM)的分离情况及MTB对利福平、异烟肼耐药基因突变位点分布特征,为结核病的诊断和临床用药提供参考。方法采用DNA微阵列芯片法对3 334份临床样本进行分枝杆菌菌种鉴定,并检测384株MTB对利福平、异烟肼的耐药基因。结果3 334份临床样本中MTB阳性837例(25.10%),NTM阳性265例(7.95%),居前3位的依次是胞内分枝杆菌(4.44%)、浅黄分枝杆菌(1.32%)和鸟分枝杆菌(0.75%)。不同性别和年龄患者MTB感染率不同(P0.05)。384株MTB中,对利福平耐药32株(8.33%),对异烟肼耐药27株(7.03%),双重耐药57株(14.84%)。利福平耐药基因突变位点主要是rpoB基因531位点(53.93%)和526位点(26.97%),异烟肼耐药基因突变位点主要是katG基因315位点(91.67%)。结论台州地区MTB感染较普遍,NTM感染也不容忽视。应根据MTB耐药基因检测结果合理用药。     

某区252株结核分枝杆菌耐药性分析

目的：探讨宝安区就诊的肺结核患者结核分枝杆菌耐药状况,为结核病的防治提供依据。方法按世界卫生组织和国际防结核病与肺部疾病联合会制订的《全球结核病耐药监测指南》的要求,采用比例浓度法检测结核分枝杆菌的耐药情况。结果252株结核分枝杆菌中耐药菌株126株,总耐药率为50．0％;耐多药菌株89株,多药耐药率为35．3％。4种抗结核药物的耐药率由高至低依次为利福平（RFP）38．1％,异烟肼（INH）36．5％,链霉素（SM）27．0％,乙胺丁醇（EMB）13．9％。结论结核分枝杆菌耐药情况仍不容乐观,应加强耐药结核病的临床治疗和管理工作。     

结核分枝杆菌培养及耐药监测

目的调查分析衢州市结核分枝杆菌的耐药情况,为预防及临床治疗提供科学依据。方法结核分枝杆菌培养使用Bact／Alert3 D120全自动培养仪,药敏试验采用WHO推荐的比例法。结果74株结核分枝杆菌的总耐药率为31．1％,原发耐药率为19．6％,获得性耐药率为50．0％,获得性耐多药率为7．1％。结论衢州市结核分枝杆菌原发耐药率、耐多药率及获得性耐药率高于全国平均水平,且本地区结核分枝杆菌耐药以耐链霉素、利福平及异烟肼为主。     

刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性

目的用刃天青显色法检测结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物的耐药性,并探讨该法的临床应用价值。方法来自河南省3家结核病医院的共240株结核分枝杆菌分别用刃天青显色法检测异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、硫酸链霉素(SM)的耐药性,并与比例法作比较。结果刃天青显色法检测平均时间为8d,与比例法相比结果一致性好,INH、RFP、EMB、SM 4种药物的折点浓度分别为0.25、2.0、4.0、2.0μg/mL。结论刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、准确等优点,为结核耐药检测提供了一种较好的方法。     

膜芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的研究

目的 验证膜芯片技术在结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药性检测中的应用价值.方法 收集393例临床标本（包括痰液、尿液、胸腔积液、腹水标本）,根据结核分枝杆菌耐药位点的DNA序列,设计用于检测rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因常见突变类型的膜芯片,对上述临床标本进行检测,并将其与传统微生物敏感性试验结果进行比较,对不相符结果用聚合酶链反应产物直接测序（PCR-DS）进行验证.结果 以常规培养法为金标准,膜芯片法扩增结核分枝杆菌的敏感性、特异性、准确性分别为90.4%、98.8%和95.7%,其对结核分枝杆菌RFP、INH、SM和EMB耐药性检测的敏感性分别为92.3%、83.3%、68.8%和83.3%;准确性分别为98.6%、97.3%、96.6%、和98.5%;特异性均达到100.0%.结论 膜芯片法检测结核分枝杆菌耐药性具有较高的敏感性、特异性和准确性,可作为常规微生物敏感性试验的补充.     

肺结核患者耐多药监测结果分析

目的了解结核分枝杆菌耐药状况。方法在监测县收集结核菌株,用比例法进行4种抗结核药物异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)的药物敏感性测定。结果监测质量控制指标完成较好,388株结核分枝杆菌总耐药率为14.7%,耐多药率为4.6%。初始耐药率和获得性耐药率比较差异无统计学意义(P>0.05),初始耐多药率和获得性耐多药率比较差异有统计学意义(P<0.05)。4种抗结核药物的耐药率由高到低分别为INH(9.5%)、SM(7.7%)、RFP(6.7%)、EMB(2.3%)。不同性别组间的耐药率差异有统计学意义(P<0.05)。结论当前结核病控制工作取得一定成效,应继续贯彻以控制结核病传染源为重点,加强质量管理的措施,阻止耐药结核病的流行,定期监测,掌握耐药流行趋势,为评价和制订结核病控制措施提供科学依据。     

MPT64在MTB利福平和异烟肼耐药性检测方法中的应用

目的 建立一种以MPT64为指标的结核分枝杆菌（MTB）耐药性检测的快速方法,探讨MPT64在MTB利福平（RFP）和异烟肼（INH）耐药性检测中的应用。方法 应用胶体金免疫层析法（GICA）分别检测MTB敏感株和耐多药株在含（观察组）与不含（对照组）RFP、INH的Middlebrook 7H9液体培养基上培养3、7、10 d的培养液中的MPT64,通过凝胶成像仪白光源拍照进行条带灰度分析（Image Jab Software 3.0）,比较敏感株和耐多药株间的灰度比值的差异,依据受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）分析确定RFP、INH耐药的灰度比值界值;以比例法检测结果为金标准,评价新建方法的准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果 对照组中,随着培养时间的延长,12株MTB敏感株和11株耐多药株的灰度比值增大;观察组中,敏感株在不同的培养时间的灰度比值没有显著变化,而耐多药株则明显增大。3、7、10 d敏感菌与耐多药菌在药物培养基中MPT64检测灰度比值差异均有统计学意义（P均< 0.05）。依据观察组灰度比值分别绘制以MPT64指示的RFP和INH耐药性检测的ROC曲线,两者的3 d AUC分别为0.84和0.77,灰度比值界值均为0.05;7、10 d AUC均为1.00,7 d的灰度比值界值分别为0.23与0.20;10 d的灰度比值界值分别为0.49和0.48。GICA检测MPT64用于34株MTB的RFP、INH耐药性鉴定的准确度分别为97%和94%,灵敏度分别为93%和86%,特异度均为100%,阳性预测值均为100%,阴性预测值分别为95%和91%。结论 GICA检测MPT64于MTB培养7 d时能准确检测抗结核药物RFP、INH耐药性,MPT64可作为MTB药敏试验的有效检测指标。     

HAIN用于检测原发性耐药结核的研究

目的通过与传统的比例法在新发涂阳病人中对结核分枝杆菌进行耐药检测比较,评价HAIN（线性探针）用于检测原发性耐药结核的可行性。方法随机抽取我院2012年1月至2013年3月新发涂阳病人的痰标本,分别进行HAIN检测和酸性罗氏培养、比例法药敏试验,并对结果进行分析比较,共323例病人被纳入分析。结果以比例法为金标准,HAIN方法对异烟肼（P=0.823）和利福平（P=1.000）的耐药检测结果与金标准的差异无统计学意义,HAIN检测异烟肼耐药的灵敏性为80.4%、特异性为96.6%,检测利福平耐药的灵敏性为95.8%、99.6%。HAIN对原发耐多药结核的检测（P=0.790）与金标准的差异也无统计学意义,灵敏性为78.9%、特异性为97.9%。结论 HAIN技术适用于临床原发耐药结核的快速筛查。     

200例分支杆菌药敏试验的临床意义

目的对结核分支杆菌及非结核分支杆菌培养阳性药物的敏感性及耐药性研究及意义。方法用法国生物梅里埃BacT/ALERT药敏试剂,内含链霉素(SM)、异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)4种药对200例分支杆菌培养阳性的标本做药敏试验。结果通过药敏试验得出痰、胸水、椎体脓液、尿、大便等临床标本对SM、INH、RFP、EMB的敏感性及耐药性比例,以及结核分支杆菌及非结核分支杆菌的耐药程度。结论通过分支杆菌药敏试验对指导帮助临床用药具有重要的意义。     

112例非结核分枝杆菌药敏耐药分析

目的了解分析本院非结核分枝杆菌耐药情况,对2006—2010年非结核分枝杆茼耐药情况进行评价。方法采用绝对浓度法对10种抗结核药物利福平（RFP）、异烟肼（INH）、乙胺丁醇（EMB）、链霉素（SM）、力克肺疾（PNA）、阿米卡星（AMK）、左氧氟沙星（LOFL）、卷曲霉素（CPM）、环丙沙星（CIP）和对氨基水扬酸（PAS）进行药敏试验。结果2925例标本中鉴定出儿2例（3．82％）非典型结核分枝杆菌,总耐药率为100％。结论本院的非结核分支杆菌耐药情况应该引起高度重视。     

2010-2012年浙江省衢州市涂阳肺结核患者结核菌株耐药状况分析

目的 分析结核分枝杆菌的耐药情况与耐药谱,为制订结核病控制对策提供依据。 方法 对2010-2012年期间在浙江省衢州市各个结核病定点医院就诊新发和复治涂阳患者进行结核杆菌培养,鉴定为结核分枝杆菌的菌株采用比例法进行6种抗结核药物[异烟肼(H)、利福平(R)、乙胺丁醇(E)、链霉素(S)、左氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KM)]耐药性测试。 结果 入选1169株结核分枝杆菌中,总体耐药率为22.80%,总体耐多药率为5.13%,广泛耐多药率为0.43%;单耐药谱位于前3位的是异烟肼、链霉素、氧氟沙星,多耐药谱位于前3位的是INH+SM、INH+SM+OFX、RFP +OFX;耐多药谱位于前3位的是INH+RFP+S、INH+RFP+SM+OFX和INH+RFP。 结论 耐药结核病已对衢州市结核病控制造成较大威胁,相关部门必须采取针对性的措施控制耐药结核病的流行。     

新疆结核分枝杆菌临床分离株Spoligotyping基因型的初步研究

目的研究新疆结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型,初步了解其基因型多态性状况及主要流行株。方法在新疆维吾尔自治区胸科医院收集一个连续时间段的结核分枝杆菌临床分离菌株,采用比例法检测进行耐药性检测、间隔寡核苷酸分型(Spoligotyp ing)方法进行分型研究。基因聚类分析采用B ioNum erics 5.0数据库软件,统计学分析采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果共收集到结核分枝杆菌临床分离菌株175株,其中对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇全敏感115株,耐药60株(包括单耐药31株和耐多药29株)。经Spoligotyp ing分型,这些菌株可分为4个基因群49种基因型,最大的1个基因群为北京家族,占68.57%(120/175)。北京家族中,敏感菌株63.87%(76/119),耐药菌株占36.13%(43/119);非北京家族中,敏感菌株68.52%(37/54),耐药菌株占31.48%(17/54),北京家族与非北京家族的耐药率之间差异无统计学意义(P=0.551)。结论新疆结核分枝杆菌临床菌株存在明显的基因多态性,主要流行菌株为北京基因型。北京基因型与耐药性无明显相关性。