新型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗的免疫原性研究

目的 观察新型乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原中蛋白（MHBs)核酸疫苗的免疫原性。方法 以新型人体应用载体质粒pSW3891构建MHBs核酸疫苗（pSW3891/MHBs/adr)，对照组和实验组Balb/c小鼠分别基因枪法免疫对照载体质粒（pSW3891)和MHBs核酸疫苗，采用酶联免疫吸附试验检测抗HBs,LDH释放测定法检测小鼠特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）杀伤活性。结果 MHBs核酸疫苗可在体外高效表达，免疫小鼠后可产生高滴度抗HBs，血清阳性终点滴度达1：97200,小鼠脾细胞HBs特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤活性达78.81%。结论 新型MHBs核酸疫苗在Balb/c小鼠实验中表现出良好的体液和细胞免疫原性。     

核酸疫苗pVAX1-F的构建及瞬时表达

目的:构建仙台病毒核酸疫苗pVAXl-F,并在COS 7细胞中表达.方法:利用PCR法以仙台病毒cDNA为模板扩增出F基因,与pMD18-T连接,测序正确后用HindⅢ/EcoR Ⅰ双酶切,将F基因引入经同样酶切的pVAX1载体,构建pVAX1-F表达载体,用PCR法和双酶切法鉴定,并将此重组质粒通过脂质体介导转染COS 7细胞,流式细胞术检测抗原蛋白表达、RT-PCR法检测外源基因的表达.结果:经PCR法和酶切鉴定,目的片段大小与预期相符,经测序目的基因序列与GenBank(EF679198)公布结果一致.重组质粒pVAX1-F转染COS 7细胞72 h后,能够表达抗原蛋白,流式细胞术检测达到58.3%,与对照组3.6%比较差异具有显著性(P<0.01),且F基因mRNA明显表达.结论:成功构建pVAX1-F,并能够在COS 7细胞中瞬时表达,为仙台病毒F基因核酸疫苗进行免疫学评价奠定基础.     

EGFR/HER2联合多肽表位疫苗的构建及体液免疫学分析

构建以乙肝病毒核心抗原(HBcAg)为载体的带有1个EGFR和2个HER2的模拟B细胞表位多肽的融合表达质粒pET28a/HBcAg-△n,表达出融合蛋白并纯化,通过免疫BALB/c小鼠获得抗目的蛋白的抗体。采用PCR法将3个模拟表位插入HBc序列的第78～79位,再将该序列克隆入pET28a载体中,构建重组表达质粒,用大肠杆菌BL21(DE3)作宿主菌表达出融合蛋白HBHE,纯化后免疫BALB/c小鼠,检测小鼠的体液免疫应答。测序结果表明,重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确,ELISA检测到高滴度抗体。以HBcAg为载体的B表位被成功表达和纯化,获得高滴度的与3个B表位结合的抗体,为进一步研究HER家族成员联合多肽表位疫苗的广谱抗肿瘤作用奠定了基础。     

湖北株HPV_(16)E_7基因疫苗的构建及免疫性研究

用 Eco R 和 Hind 双酶切 PWR5 90 -1,所得湖北株 HPV1 6 E7片段克隆入真核表达载体 pcd3.1- ,构建了湖北株HPV1 6 E7基因疫苗 ,皮下注射 BALB/c近交系小鼠 ,体外应用酶联免疫吸附实验 ( Elisa)法和 MTT法分别检测了湖北株 HPV1 6 E7基因疫苗在体内产生特异性体液免疫和细胞免疫的能力。     

塞隆骨提取物对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的治疗作用及机制研究

目的了解塞隆骨水提物(SLG-B)对胶原诱导的小鼠关节炎的治疗作用及治疗机制。方法利用牛Ⅱ型胶原诱导DBA/1小鼠类风湿性关节炎模型即CIA。SLG-B口服给药观察小鼠关节炎指数的变化情况,体外培养关节炎小鼠脾细胞及巨噬细胞,ELISA法测定IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α几种细胞因子。RT-PCR测定SLG-B对关节炎小鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表达的影响。结果SLG-B能明显的抑制牛Ⅱ型胶原诱导关节炎的发生,能够减轻关节炎的各种症状。SLG-B在加抗原和不加抗原的情况下都能够明显的抑制关节炎小鼠脾细胞的增殖同时发现SLG-B能够抑制IL-2、IFN-γ、L-12p40、TNF-α细胞因子的产生还能够抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1、IL-6及iNOS mRNA的表达。这可能是SLG-B在小鼠关节炎中表现治疗效果的分子基础。结论SLG-B对小鼠关节炎有很好的治疗效果,其作用机制主要是通过抑制巨噬细胞及脾细胞产生炎性细胞因子和抑制炎性细胞因子mRNA的表达来达到治疗类风湿性关节炎的作用。     

杆状病毒系统表达的重组H7N9血凝素亚单位疫苗的免疫保护效果

目的 评价流感病毒H7N9血凝素（hemagglutinin，HA）亚单位疫苗在动物中的免疫效果。方法 利用杆状病毒表达系统表达分泌型的HA片段，单独或联合Al(OH)₃佐剂腹腔注射免疫BALB/c小鼠后，对小鼠进行H7N9毒株的攻击。分析重组H7N9 HA（rH7HA）的免疫保护效果。结果 rH7HA 加Al(OH)₃佐剂与rH7HA单独免疫相比，在血清中诱导了更高的IgG滴度。最高剂量（1.500 μg）rH7HA加佐剂组诱导IgG滴度达2¹⁵，单独诱导IgG滴度达2¹³，但两者之间差异无统计学意义，说明免疫小鼠的rH7HA量达到1.5 μg即能够对同源病毒的感染提供保护。结论 杆状病毒系统表达的分泌型HA通过腹腔注射能够保护小鼠抵抗致死性剂量的同源病毒的感染。     

己酮可可碱对2,4,6-三硝基苯磺酸肠炎模型的影响

目的 :观察己酮可可碱 (PTX)对 2 ,4 ,6 三硝基苯磺酸 (TNBS)肠炎模型影响。方法 :通过直肠给予雄性BALB/c小鼠TNBS诱导结肠炎 ,应用PTX对其进行治疗 ,6d后收集结肠标本评价结肠炎症程度 ;采用半定量RT PCR检测肠黏膜IL 18mRNA表达 ,采用免疫组织化学染色显示IL 18阳性细胞。结果 :直肠内给予BALB/c小鼠TNBS后可造成小鼠结肠炎性改变 ;PTX治疗可使小鼠疾病活动指数、结肠重量和炎症指数均显著下降 (P <0 .0 5 ) ,结肠IL 18mRNA和肠黏膜固有层表达IL 18细胞数显著下降 (P <0 .0 5 )。结论 :PTX治疗可使TNBS肠炎模型小鼠肠黏膜局部IL 18表达显著下降 ,肠炎得以减轻。     

IL-12可作为疫苗佐剂

真正有效的疫苗应能激发体液和细胞免疫应答,即能刺激两个主要CD4细胞亚群:TH1细胞和TH2细胞,前者产生白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ),与细胞免疫力有关;后者产生IL-4、IL-5和IL-10,与体液免疫力有关。 美国宾夕法尼亚大学兽医学院和Wistar研究所的研究者曾用硕大利什曼原虫和BALB/c小鼠进行研究,该动物对硕大利什曼原虫感染只产生TH2应答,因此,最终死亡。而C3H/HeN品系小鼠可产生两倍强度的TH1和TH2应答,体内产生的IFN-γ似能保护这类小鼠。但是,BALA/c小鼠摄入IFN-γ并用硕大利什曼原虫攻击     

滋肾通络方对胶原性关节炎小鼠Th17/Treg细胞分化及平衡的影响

目的观察滋肾通络方(ZTF)对胶原性关节炎(CIA)小鼠Th17/Treg细胞分化平衡的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法 DBA/1小鼠随机分为正常对照组、模型组和ZTF组(8.4 g生药·kg~(-1)),造模21 d后每日灌胃给药,连续4周。检测关节炎指数、关节病理改变、血浆IL-10和IL-17水平、外周血和脾脏Th17/Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10、IL-17 mRNA水平。结果 CIA小鼠踝关节病变明显,血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4~+T细胞IL-17 mRNA表达明显升高;血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10 mRNA表达明显降低。ZTF能明显减轻CIA小鼠关节病变,降低血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4~+T细胞IL-17 mRNA表达;升高血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10 mRNA水平。结论 CIA小鼠存在Th17/Treg细胞失平衡,ZTF可调节Th17/Treg细胞比例,重构Th17/Treg细胞平衡,调节相关细胞因子释放,这可能是ZTF治疗类风湿关节炎的机制之一。     

湖北株HPV16E7基因疫苗的构建及免疫性研究

用Eco RⅠ和HindⅢ双酶切PWR590－1,所得湖北株HPV16E7片段克隆入真核表达载体pcd3.1^-,构建了湖北株HPV16E7基因疫苗,皮下注射BALB／c近交系小鼠,体外应用酶联免疫吸附实验（Elisa)法和MTT法分别检测了湖北株HPV16E7基因疫苗在体内产生特异性体液免疫和细胞免疫的能力。     

鸡Ⅱ型胶原对小鼠胶原性关节炎的治疗作用

目的　研究鸡Ⅱ型胶原 (CⅡ )对小鼠胶原性关节炎(CIA)的治疗作用。方法　在建立小鼠CIA模型的基础上 ,观测关节积分变化 ,同时检测脾淋巴细胞增殖反应 ,白细胞介素 1(IL 1)和IL 2。结果　CⅡ 5、10、2 0 μg·kg-1ig× 7d能明显减轻CIA小鼠的关节炎症 ;抑制CIA小鼠过高的ConA诱导的脾细胞增殖反应及小鼠腹腔巨噬细胞IL 1的过度产生 ,降低脾细胞IL 2的产生 ;同时病理检查亦发现CⅡ治疗用药可以减轻CIA小鼠的骨膜增生和炎细胞浸润。结论　CⅡ对CIA具有治疗作用 ,其机制与免疫功能调节有关。     

表达甲型H1N1流感病毒血凝素抗原的DNA疫苗构建及其免疫原性评价

目的 构建表达甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)抗原的DNA疫苗,并在小鼠中测试其免疫原性.方法 运用人密码子优化技术合成甲型H1N1流感病毒HA序列,并转移至DNA疫苗载体,用Western blotting检测其表达效率.采用单纯随机抽样方法把BALB/c小鼠分成DNA疫苗组和对照组.用...     

木瓜苷对小鼠胶原性关节炎的预防作用及初步机制

目的　研究木瓜苷 (GCS)预防用药对小鼠胶原性关节炎 (collagen inducedarthritis,CIA)的影响 ,并探讨其初步机制。方法　昆明种小鼠随机分为 6组 :正常对照组、模型组、木瓜苷三个剂量组和青藤碱组 (SIN) ;鸡Ⅱ型胶原免疫小鼠诱导继发性关节炎 ;足爪容积测定法、关节炎评分法和跖曲踝关节疼痛评分法观察关节炎的发生情况 ;观察胸腺指数、脾脏指数变化 ;3 H TdR参入法检测T、B细胞增殖反应 ;IL 1、IL 2活性的检测采用小鼠淋巴细胞增殖法 ;ELISA法检测血清中抗Ⅱ型胶原抗体水平 ;分光光度法测定局部踝关节PGE水平。结果　小鼠免疫后d 2 4 ,足爪出现红肿 ,继发性炎症高峰期在d 36 ,4 0后炎症逐渐减轻。GCS(6 0、12 0、2 4 0mg·kg-1)和SIN(10 0mg·kg-1)ig对CIA小鼠继发性关节炎有明显的抑制作用 ,降低CIA小鼠踝关节中增高的PGE ;CIA小鼠脾脏指数增加 ,而胸腺指数未见明显的改变 ,GCS能降低增加的CIA小鼠脾脏指数 ,对胸腺指数无明显影响 ;GCS(6 0、12 0、2 4 0mg·kg-1)和SIN (10 0mg·kg-1)使CIA小鼠增高的ConA和LPS诱导的T细胞和B细胞增殖反应降低 ;使T细胞和PMΦ分别产生的高水平IL 2和IL 1降至正常范围 ;并降低CIA小鼠血清中升高的抗CⅡ抗体。结论　GCS和SIN具有明显的抗炎作用 ,此作用可能是通过抑制     

丹皮酚对IL-1β诱导HFLS-RA的保护作用及相关机制研究

目的　探讨丹皮酚对白细胞介素（IL）-1β诱导人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）的保护作用及机制。方法　将HFLS-RA细胞分为空白对照组,10 μg/L IL-1β组及0.1、1、10、100 μmol/L丹皮酚组,采用MTT法检测细胞增殖情况;酶联免疫吸附测定试验（ELISA）法检测HFLS-RA中肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6水平。采用免疫荧光法观察空白对照组、10 μg/L IL-1β组及10 μmol/L丹皮酚组HFLS-RA中核因子（NF）-κB p65细胞核移位情况;Western blot法检测空白对照组,10 μg/L IL-1β组,0.1、1、10 μmol/L丹皮酚组及阴性对照组（仅10 μmol/L丹皮酚处理）的基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-3和Toll样受体-4（TLR4）蛋白表达。将24只雄性DBA/1小鼠随机均分为对照组、CIA组和治疗组,对小鼠进行四肢累计评分,HE染色观察关节组织病理学变化,ELISA法检测滑膜组织中TNF-α、IL-1β水平。结果　丹皮酚对IL-1β诱导HFLS-RA细胞增殖无明显抑制作用。与空白对照组相比,10 μg/L IL-1β组TNF-α、IL-6、NF-κB p65核移位、MMP-1、MMP-3和TLR4蛋白表达水平均升高,而经丹皮酚干预后可逆转这些改变（P＜0.05）。与CIA组相比,治疗组小鼠四肢累计评分明显下降（P＜0.05）;HE染色结果示丹皮酚治疗48 d时踝关节病理变化有所改善,其中炎性细胞明显下降,软骨破坏减轻。治疗组小鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β水平低于CIA组。结论　丹皮酚具有减轻IL-1β诱导HFLS-RA炎性因子表达和缓解CIA小鼠关节炎症状的作用,其机制可能与抑制TLR-4-NF-κB p65通路,减轻炎症反应有关。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型gD糖蛋白核酸疫苗的构建及免疫观察

目的：构建用于防治单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-Ⅱ）引起的生殖器疱疹的DNA疫苗。并探讨其免疫保护作用。方法：利用PCR法从HSV-Ⅱ Say株中扩增出gD糖蛋白基因的全部编码序列，将其插入pcDNA3中，构建HSV-Ⅱ gD核酸疫苗，用PCR法、酶切法和测序法进行鉴定；将重组质粒转染COS-7细胞，用原位ELISA检测表达产物；对BALB／c小鼠进行肌肉免疫，用微量细胞中和试验、ELISA、脾T淋巴细胞增殖反应和病毒攻击试验检测免疫效果。结果：构建的HSV-Ⅱ gD核酸疫苗具有良好的免疫原性，对小鼠具有保护作用。结论：本实验成功构建出了具有免疫防御效应的HSV-Ⅱ gD核酸疫苗。     

重组毕赤酵母HBsAg诱导小鼠细胞免疫应答的研究

目的   研究毕赤酵母表达的重组HBsAg(Pichia-rHBsAg)在小鼠中诱导T细胞免疫应答的能力,评价疫苗的免疫原性.   方法  以rHBsAg免疫雌性BALB/c小鼠,制备小鼠脾淋巴细胞,并在体外以抗原/特异性多肽刺激.采用ELISA法测定抗原特异性T淋巴细胞分泌的细胞因子,酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定CTL频数.   结果 由毕赤酵母表达的rHBsAg可在小鼠中诱导Th1和Th2型免疫应答;加铝佐剂的rHBsAg诱导IFN-γ的水平及CTL克隆明显高于无佐剂抗原;Pichia-rHBsAg刺激小鼠细胞免疫应答的水平强于酵母-rHBsAg,与中国仓鼠卵巢细胞-rHBsAg相仿.   结论   Pichia-rHBsAg可在BALB/c小鼠中诱导较强的细胞免疫应答.     

VISTA和PD-1信号通路联合阻断在小鼠结肠癌放射治疗中的作用机制

目的 探讨T细胞活化V结构域Ig抑制因子(VISTA)和程序性死亡受体-1(PD-1)信号通路联合阻断在大剂量单次X射线照射白化小鼠(BALB/C)小鼠双移植瘤中诱导远隔效应可能的机制.方法 构建BALB/C小鼠双移植瘤模型,采用液相悬浮微球蛋白分析技术检测治疗前后细胞因子表达变化;流式细胞术检测小鼠移植瘤模型治疗前后...     

自身热休克蛋白60和破伤风类毒素及其衍生肽作为肺炎球菌结合疫苗的载体

作者将自身和外源性多肽及其来源的蛋白与4型肺炎球菌( Pn)荚膜多糖( PS4 )结合来诱导抗Pn的T细胞应答。载体分别是自身热休克蛋白6 0 ( HSP6 0 )及其p4 58m片段和外源性免疫蛋白破伤风类毒素( TT)及其T细胞表位肽p30。采用不同品系雌性小鼠( BAL B/ c、BALB/ k、BAL B/ b、C57BL/ 6、CD1、NOD)对与不同载体结合的PS4疫苗进行研究,分析鼠龄、注射次数及抗PS4抗体水平对抵抗致死剂量攻击的影响,同时检测抗载体抗体及疫苗在不同品系小鼠中的效力。　　将PS4与载体按一定的质量比结合,分别制成PS4 - p4 58m、PS4 - p30、PS4 …     

牛蒡子苷元通过SIRT1/NLRP3途径减轻哮喘小鼠气道炎症

目的探讨牛蒡子苷元对哮喘小鼠模型中对气道炎症的疗效以及其机制是否与SIRT1/NLRP3信号通路有关。方法选取40只♀清洁级BALB/c小鼠,分为control组,OVA模型组,ATG组(5、10和20 mg·kg^-1)。HE及PAS染色法观察肺组织病理改变;Diff-Quick染色法对小鼠BALF中细胞分类及计数;流式细胞术测定小鼠肺组织中细胞因子在CD4阳性细胞群中的阳性比例;Western blot测定肺组织SIRT1、NLRP3、caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达;免疫荧光法检测小鼠肺组织中NLRP3荧光强度。结果牛蒡子苷元能抑制OVA诱导的炎症细胞的渗出及杯状细胞增生;牛蒡子苷元抑制小鼠肺泡灌洗液中总细胞数及NEU、EOS、LYM的生成,并升高肺组织中IFN-γ水平的同时降低IL-4的水平;Western blot结果显示,牛蒡子苷元增加SIRT1蛋白表达同时抑制NLRP3、caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达;免疫荧光结果显示,牛蒡子苷元可以减弱肺组织NLRP3的荧光强度。结论牛蒡子苷元通过SIRT1/NLRP3途径减轻哮喘小鼠气道炎症。     

破伤风疫苗在BALB/c与NIH小鼠中的免疫效果比较

目的 对比破伤风疫苗在BALB/c与NIH小鼠中的免疫效果,探讨将BALB/c小鼠用于破伤风疫苗效力实验的可能。方法 将破伤风毒素系列稀释至适当的浓度范围,根据小鼠存活情况摸索合适的毒素浓度,重复实验,测定BALB/c和NIH小鼠的破伤风毒素半数致死量（median lethal dose,LD₅₀）。分别用BALB/c和NIH小鼠的破伤风毒素2 LD₅₀同时攻击BALB/c与NIH小鼠,考察BALB/c和NIH小鼠对破伤风毒素的敏感性。将破伤风疫苗稀释50、100、200倍,分别作为高剂量组、中剂量组、低剂量组免疫BALB/c和NIH小鼠,免疫4周后用50 LD₅₀破伤风毒素攻毒,观察小鼠死亡情况。结果   BALB/c小鼠的破伤风毒素2 LD₅₀为0.16 μg/ml;NIH小鼠的破伤风毒素2 LD₅₀为0.23 μg/ml。用0.16 μg/ml的破伤风毒素分别注射BALB/c和NIH小鼠各3组,每组6只,BALB/c小鼠死亡动物数为3、3、2,NIH小鼠死亡动物数为0、0、0。用0.23 μg/ml的破伤风毒素分别注射BALB/c和NIH小鼠各3组,每组6只,BALB/c小鼠死亡动物数为6、6、6,NIH小鼠死亡动物数为3、2、3。3批破伤风疫苗免疫后的BALB/c与NIH小鼠采用相同攻毒剂量,每组14只,BALB/c小鼠攻毒后,高剂量组存活数为13、14、14,中剂量组存活数为10、10、9,低剂量组存活数为4、3、4;NIH小鼠攻毒后,高剂量组存活数为10、10、10,中剂量组存活数为6、7、6,低剂量组存活数为0、0、1。结论   BALB/c小鼠比NIH小鼠对破伤风毒素具有更高的敏感性,能更好地对破伤风疫苗产生免疫应答,在破伤风疫苗效价测定实验中是一种较为理想的小鼠品系。