萜类化合物的合成研究(Ⅰ)

研究目的探索具有抗癌活性的萜类化合物的合成方法。方法选择类似结构单元的化合物,采用事先引入所需官能团,利用硫稳定的负碳离子与卤代径亲核取代反应将片断偶联为所需化合物．结果以香叶醇为起始原料,经过4步反应合成出一种新的化合物．结论此合成路线方法简便且收率高,为天然萜类化合物合成提供了行之有效的方法。     

植物萜类化合物的生物合成途径及其关键酶的研究进展(续完)

(上接《江西中医学院学报》2 0 0 3年第 1期第 51页 )3　萜类合成酶基因的研究萜类合成酶合成是萜类次生代谢最终产物的关键酶 ,人们对萜类生物合成研究也将重点转移到关键酶基因的克隆、分离、特性分析和基因调控的领域 ,萜类合成酶基因的克隆、分离、表达和调控成为研究热点。自 1992年开始有植物合成酶基因克隆的报道 ,迄今为止 ,已有 3 0种以上的植物萜类合成酶的cDNA被克隆[6 8] ,包括烟草[53,6 9] 、薄荷[52 ] 、番茄[70 ] 、辣椒[71 ] 、红豆杉[72 ] 、松[73,74 ] 、冷杉[4 0 ,73～ 80 ] 、天仙子[81 ] 、棉花[82 ,82 ] 、蓖麻[83]…     

药用植物5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因研究进展

药用植物萜类成分是一类重要的天然产物。随着一些具有重要经济价值的萜类化合物需求扩大,其生物合成中的关键酶也备受关注。5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶（1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate reductoisomerase,DXR）是2-甲基-D-赤藻糖醇-4-磷酸（MEP）途径上的第2个关键酶。综述了DXR生物学意义、基因结构及其催化机制、药用植物DXR基因克隆及进化情况,并且介绍了紫杉醇、银杏、丹参等重要药用植物中DXR基因的研究进展,旨在为其他药用植物DXR基因的克隆和深入研究提供参考。     

几种二萜类化合物对自由基诱导的线粒体损伤的保护作用(英文)

目的：了解冬凌草甲素（Ｏｒｉｄ）及其它香茶菜属二萜类化合物香茶菜醛（Ａｍｅ）毛叶香茶菜醇（Ｉｓｏ）是否与冬凌草甲素同样具有抗氧化作用。方法：用分光光度法测定脂质过氧化物丙二醛（ＭＤＡ）含量及线粒体肿胀度。用荧光分光光度法测定线粒体膜流动性。结果：Ｏｒｉｄ，Ａｍｅ，Ｉｓｏ４０，８０，１６０μｍｏｌ／Ｌ抑制铁 半胱氨酸（Ｆｅ２＋ Ｃｙｓ）引起的肝线粒体ＭＤＡ形成，并呈剂量－依赖关系。Ｏｒｉｄ１６０μｍｏｌ／Ｌ抑制肝线粒体膜流动性下降。（Ｐ值分别为０２９７±０．０２２，Ｆｅ２＋ Ｃｙｓ的Ｐ值为０４２３±０．０１４）；Ａｍｅ１６０μｍｏｌ／Ｌ还可抑制脂质过氧化引起的肝线粒体肿胀。结论：Ａｍｅ，Ｉｓｏ与Ｏｒｉｄ同样可能通过抑制脂质过氧化而产生抗氧化作用。     

N-(9-芴甲氧羰基)-O-(2,3,4,6-四苄基-α-D-半乳糖基)-L-丝氨酸的合成

目的得到全苄基保护的糖氨基酸,用于各种糖肽的合成。方法以半乳糖为起始化合物通过5步反应得到全苄基保护的半乳糖硫苷(5),并将5与Fmoc-Ser-OAllyl进行糖基化,再脱去烯丙基得到目标糖氨基酸(1)。结果中间体及目标化合物结构均通过NMR、MS等光谱确证,得到目标糖氨基酸。结论合成方法具有操作简便、通用性好及保护基易脱除等特点,目标糖氨基酸适用于各类糖肽的合成。     

四环素类似物的新合成途径

科学杂志2005年308期发表论文介绍美国哈佛大学的研究人员成功创造了一种新途径，合成四环素类似物，可以杀死对于其他抗生素有抗药性的细菌。     

抗瘤酮A_(10)类似物的合成及抗癌作用

抗瘤酮A_(10)是从人尿中提取的内源性抗癌物质,具有抗瘤谱广、低毒、刺激提高免疫力的特点。本文采用酸醉交换法、L-谷氨酰胺法,合成抗瘤酮A_(10)的 4个类似物,即:①3-苯甲酰胺基2,6-哌啶二酮;②4-甲氧基3-苯甲酰胺基2,6-哌啶二酮;③3-苯丙酰胺基 2,6-哌啶二酮;④4-甲氧基3-苯乙酰胺基2,6-哌啶二酮。并通过对艾氏(EAC)腹水癌体外抗癌活性试验,显示类似物3、4具有明显的抗癌作用。     

1-(4-甲基苄基)-2-甲基-八氢异喹啉盐酸盐的合成

化合物1-(4-甲基苄基)-2-甲基-八氢异喹啉盐酸盐(1)是制备新型镇咳药磷酸二甲啡烷的关键中间体。对化合物1的合成工艺进行研究,以4-甲基苯乙酸为原料,采用氯化亚砜氯代制得4-甲基苯乙酰氯,再与2-环己烯基乙胺反应,再经环化、还原、N-甲基化和成盐酸盐纯化得到目标产物1,总收率约54%,纯度大于98%。该工艺具有原料易得、操作简便、产率和纯度高、成本低等优点,适合工业化生产。     

3种樟属植物茎皮非极性成分的GC-MS分析(英文)

目的:首次对缅甸产樟属两种植物Cinnamomum multiflorum,C.bejolghota(钝叶桂)茎皮中的非极性成分进行定性及定量研究,并与中药肉桂(C.cassis)进行比较。方法:使用GC/MS法,对这3种植物的乙醚提取物进行定性、定量分析,根据IR及MS图谱对所含化合物进行鉴别,根据峰面积计算化合物的相对含量。结果:在鉴定的62个化合物中,C.multiflorum的主要成分为单萜及其衍生物(53.18%),其中桂皮醛的含量(29.57%)甚至高于肉桂(22.36%)。C.bejolghota的主要成分为倍半萜及其衍生物(58.18%),其中丁香酚含量为三者最高。结论:首次明确了C.multiflorum与C.bejolghota的挥发性、半挥发性成分的化学组成,提示C.multiflorum、C.bejolghota可作为肉桂的代用品。本研究结果同时还为该属植物的化学分类提供了参考。     

一种合成人血小板因子4基因的简便有效方法(英文)

目的:用一种简便有效的方法合成hPF4基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达。方法:根据hPF4基因的序列,用touch-down PCR的方法合成hPF4基因,将合成的基因片断克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建了重组质粒pGEX-4T-1-hPF4,并将之转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达由谷胱甘肽转移酶和hPF4组成的融合蛋白。结果:用touch-down PCR的方法成功合成了hPF4基因。融合蛋白形成包含体,表达量约为全菌体蛋白的30%。结论:Touch-down PCR方法可作为合成其它目的基因的简便有效方法。BL21(DE3)/pGEX-4T-1表达系统能高效表达合成的hPF4基因,为下一步hPF4的纯化与生物学活性研究打下了基础。     

黄花蒿SRAP-PCR反应体系的建立与优化

目的用序列相关扩增多态性(SRAP)这一新的分子标记技术建立稳定可重复的黄花蒿Artemisia annua的SRAP最佳反应体系。方法以黄花蒿DNA为模板,分析了SRAP反应体系中的一些重要参数对PCR扩增的影响。结果建立了稳定可重复的SRAP反应体系;25μL反应体系中,模板DNA为30～105ng,MgCl2为2.0mmol/L,dNTP为0.25mmol/L,Taq酶为1.0U,引物为2.0μmol/L;扩增程序:94℃预变性3min,94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸1min,5个循环;94℃变性1min,50℃复性1min,72℃延伸1min,35个循环,72℃延伸7min。结论本研究建立的黄花蒿SRAP体系重复性好,稳定性强。     

青蒿鲨烯合酶基因打靶研究

目的通过代谢途径工程调整代谢流向,试图增大转基因青蒿Artemisia annua植株中的青蒿素产量。方法利用青蒿鲨烯合酶(SS)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因和胞嘧啶脱氨酶(CodA)基因构建基因打靶载体,并通过冻融法将载体导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens。以叶盘法转化青蒿,采用"分段选择法"筛选转基因再生植株。结果对表达GFP基因后发出绿色荧光的转基因植株,采用PCR及PCR产物杂交法,在1棵转基因植株中检测到外源GFP基因,而未检测到内源SS基因。初步证据显示,在转基因青蒿植株中,突变型SS基因已取代野生型SS基因。结论青蒿鲨烯合酶基因打靶已取得初步成功。     

黄花蒿的化学成分研究进展

黄花蒿为传统中药，具有清热解毒、除蒸截疟的功效。近年来采用现代中药研究方法，如HPLC、GC-MS、LC-MS等从黄花蒿中分离出多种有效成分。黄花蒿的化学成分主要有倍半萜类、黄酮类、香豆素类和挥发油类，其中倍半萜类和甲氧基黄酮类成分较为丰富，且甲氧基黄酮类对黄花蒿的抗疟活性具有促进作用。     

青蒿丛生芽诱导影响因素的研究

目的 对影响青蒿丛生芽诱导因素进行基础性研究。方法 把常规的植物组织培养技术应用于调控青嵩中次生代谢产物青蒿素的生物合成代谢。结果 青蒿的基因型，激素和基本培养基对丛生芽的发生有显著影响，而光强在1000～6000 1x和温度在20℃～30℃对丛生芽的发生影响不大；在5种基因型的青蒿中，025丛生芽的诱导率最高；诱导丛生芽的激素组合是6-BA 2．0mg／L和NAA 0．15mg／L；另外，离子在青蒿丛生芽的诱导和青蒿素的生物合过程中起着非常重要的作用。结论 组织培养条件下，青蒿丛生芽的诱导及青蒿素的生物合成可以通过理化因子有效地进行调控。     

青蒿组分的体外抗氧化活性研究

目的 研究青蒿水提取物抗氧化活性及物质基础,为天然抗氧化剂开发利用提供理论依据。方法 采用传统加热回流提取法,用水作为提取溶剂对青蒿中抗氧化成分进行提取,并利用溶剂萃取、D101大孔树脂等分离手段对水提取物进行组分划分,进行DPPH自由基清除活性评价及铁离子还原能力、亚铁离子螯合能力、总酚酸和总黄酮的测定。结果 从青蒿水提取物中制备得到11个组分,且70％乙醇洗脱液（S10）、乙酸乙酯萃取物（S6）、大孔树脂20％乙醇洗脱液（S9）的抗氧化活性较高,与其所含的总酚酸和总黄酮密切相关。结论 本研究明确了青蒿中大孔树脂70％乙醇洗脱液（S10）、乙酸乙酯萃取物（S6）、大孔树脂20％乙醇洗脱液（S9）为青蒿水提取物抗氧化活性物质基础,为今后青蒿资源在天然抗氧化剂的开发和应用奠定基础。     

稀土元素镧对黄花蒿光合作用及青蒿素积累的影响

目的 探讨叶面喷施稀土元素镧对黄花蒿植株光合作用及青蒿素积累的影响。方法 采用 LI-6400 便携式光合作用测量系统测量黄花蒿 Artemisia annua 叶片净光合速率 (net photosynthetic rate, Pn),采用脉冲调制叶绿素荧光仪测定 Fv/Fm、Fv/Fo 等荧光参数,采用 UPLC 法测定青蒿素量,使用 SPSS 13.0 分析软件进行统计。结果 不同浓度 LaCl3 处理 22 d,黄花蒿地上部分生长速率无显著性变化;20～80 μmol/L LaCl3 处理促进青蒿素积累,而 160 μmol/L 处理抑制其积累;20～80 μmol/L LaCl3 处理表现出促进 Pn的优势,而 160 μmol/L 处理 Pn 低于对照;20～80 μmol/L 处理 2 d 后,Fv/Fm、Fv/Fo 显著提高,160 μmol/L 处理 2 d,Fv/Fm 显著提高,Fv/Fo 无显著性变化。结论 适宜浓度 (20～80 μmol/L) LaCl3 可促进黄花蒿体内青蒿素积累及提高 Pn,Pn提高可能与 PSⅡ原初光能转化效率及 PSⅡ潜在活性的提高有关。     

人RANTES基因在转基因青蒿植株中表达的测定

目的 为了增强青蒿的特异药理活性，探讨人β-趋化因子RANTES基因在青蒿细胞中表达的可能性。方法 将克隆的RANTES基因经Ti质粒衍生的双元表达载体pRPKII导入根癌农杆菌LBA4404菌株，通过叶盘共培养法已获得一批表现卡那霉素抗性的转基因青蒿植株。结果 PCR和Southern印迹杂交分析表明，RANTES基因已导入并整合到青蒿基因组中；RT-PCR、Northern印迹、Western印迹杂交结果证实，RANTES基因已在转基因青蒿植株中成功表达。结论 首次报道了RANTES基因在转基因青蒿植株中的表达，为基因工程改造青蒿打下了良好的基础。     

Protective capacity of Artemisia annua as a potent antioxidant remedy against free radical damage

ObjectiveTo evaluate the antioxidant capacity of four leaf-derived solvent extracts of Artemisia annua (A. annua), a medicinal plant widely touted for its vast phyto-therapeutic potential.MethodsA. annua leaves were extracted with four solvents (absolute ethanol, absolute methanol, 70% ethanol and 70% methanol), and extracts obtained studied by five complementary in vitro antioxidant test systems using ascorbic acid (vitamin C) and rutin as standard references.ResultsThe extracts remarkably inhibited lipid peroxidation (79.81%-86.70%), and erythrocyte haemolysis (40.02%-49.91%). Their IC₅₀ values for hydroxyl, nitric oxide and hydrogen peroxide radical scavenging activities ranged from 2.39–3.81 mg/mL (superior to the standards), 107.24–144.49 μg/mL and 28.53–53.20 μg/mL, respectively. 70% alcohol extracts generally showed better antioxidant activity than absolute alcohol extracts.ConclusionsThe results indicate that A. annua leaf extracts have potent antioxidant activities that would have beneficial effect on human health, and aqueous organic solvents are superior to the absolute counterparts in yielding extracts with better antioxidant potential.     

青蒿中青蒿素提取工艺的优化及含量测定

目的优化青蒿中青蒿素的提取工艺,并为工业化提取青蒿素建立快速测定原料青蒿中青蒿素的含量测定方法。方法使用超声提取法,采用正交设计法优化提取工艺,制得样品溶液;含量测定采用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(体积比68∶32),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为210 nm。结果青蒿素在1～40μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为98.59%,RSD值为1.34%(n=6)。结论本提取工艺简便易行;含量测定方法简便、准确、重复性好,适用于青蒿素工业化提取原料的质量控制。     

不同采收期青蒿黄酮和酚酸含量的动态变化研究

目的研究不同采收期青蒿中黄酮和酚酸类含量的动态变化规律,确定青蒿最佳采收期。方法通过正交试验设计,确定青蒿黄酮和酚酸类化合物的最佳提取条件,采用UV法,测定不同采收期青蒿中黄酮和酚酸类动态含量变化。结果不同采收期青蒿黄酮和酚酸类含量呈现规律性变化,即营养期〉初花期〉结实期〉盛花期。结论如以黄酮和酚酸类化合物作为青蒿药材质量的指标性成分,则青蒿药材最佳采收期应为营养期,该结果为青蒿药材采收期的确定和质量评价提供一定的科学依据。