短发夹状RNA抑制MDR1基因表达逆转卵巢上皮性癌多药耐药的研究

多药耐药性的产生是导致肿瘤化疗失败的重要原因。多药耐药基因MDR1及其所编码的细胞膜P糖蛋白（P-gp）表达增加介导的耐药在化疗中最为主要、最为常见。在过去20多年中，学者们探求各种逆转多药耐药的方法，如反义寡核苷酸技术、核酶技术等，取得了一定的成果。RNA干扰（RNAi）技术抑制MDR1基因表达是研究逆转多药耐药的新途径。本研究设计并构建针对人MDR1基因特定位置的短发夹状RNA（shRNA）质粒pEGFP-H1／MDR1，观察其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）紫杉醇耐药细胞株MDR1基因和P-gP表达的抑制作用，探索耐药肿瘤基因治疗的有效方法。     

短发夹状RNA对卵巢癌细胞survivin mRNA表达及紫杉醇药物敏感性的影响

目的观察表达短发夹状RNA(shRNA)的mU6/survivin质粒转染卵巢癌细胞株OVCAR3细胞后,对OVCAR3细胞survivin mRNA表达的抑制作用,以及对OVCAR3细胞紫杉醇药物敏感性的影响。方法将表达绿色荧光蛋白的pEGFPC2质粒与脂质体按不同比例转染OVCAR3细胞,流式细胞仪检测其转染效率。根据转染效率最高时pEGFPC2质粒与脂质体的比例,将mU6/survivin质粒转染入OVCAR3细胞。实验分为3组未转染组、脂质体组、转染组,RT-PCR技术检测3组OVCAR3细胞中survivin mRNA的表达,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测3组OVCAR3细胞对紫杉醇的50%抑制浓度(IC50)。结果pEGFPC2质粒与脂质体按1∶2比例转染OVCAR3细胞时其转染效率最高,达23.6%。将mU6/survivin质粒与脂质体也按1∶2比例转染OVCAR3细胞24h后,未转染组、脂质体组、转染组细胞survivin mRNA的相对含量分别为0.81±0.05、0.79±0.12、0.26±0.04,转染组survivin mRNA相对含量下降至未转染组的32%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。转染组转染24h后,细胞凋亡率为(31.9±1.2)%,明显高于未转染组的(4.9±0.7)%和脂质体组的(5.6±0.5)%(P=0.000);转染组细胞周期被阻滞于G0/G1期,G2/M期减少,分别与未转染组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。MTT比色法检测结果显示,未转染组、脂质体组、转染组OVCAR3细胞对紫杉醇的IC50分别为(0.305±0.032)、(0.157±0.031)、(0.019±0.001)μmol/L,转染组OVCAR3细胞对紫杉醇的IC50降低为未转染组的1/16,两组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论shRNA可有效抑制卵巢癌细胞survivinmRNA的表达,并显著提高了卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性。     

AKT2基因沉默抑制卵巢癌细胞侵袭和粘附能力的实验研究

目的:探讨AKT2基因对人卵巢癌细胞A2780侵袭和黏附活性的影响。方法:构建AKT2基因的短发卡状RNA质粒转染人卵巢癌细胞A2780,运用RT-PCR、蛋白质免疫印迹法比较转染前后AKT2表达的差异;用transwell小室检测细胞侵袭人工基底膜的能力;MTT法检测卵巢癌细胞与细胞外基质黏附能力。结果:与对照相比,构建shR-NA表达载体可抑制AKT2 mRNA转录和蛋白的表达;AKT2表达下降后,穿透重组基底膜的细胞数明显下降(P<0.05),且可显著抑制细胞与细胞外基质的黏附(P<0.05)。结论:靶向AKT2 shRNA能有效地抑制卵巢癌细胞中AKT2基因的表达,并抑制卵巢癌细胞体外侵袭和黏附能力。AKT2基因有可能成为治疗卵巢癌的新途径。     

RNA干扰技术沉默survivin基因对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3生物学行为的影响

survivin基因是凋亡抑制蛋白家族（IAP）成员之一,具有肿瘤组织表达特异性,与肿瘤化疗耐药相关,已有研究证明,survivin基因在卵巢肿瘤组织高表达,与肿瘤的恶性程度及预后密切相关.RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术具有很强的转录后基因沉默作用,已广泛用于抗肿瘤的研究中.     

稳定转染短发夹状RNA后子宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒18型E6基因表达的变化

目的探讨宫颈癌细胞株HeLa细胞稳定转染表达短发夹状RNA(shRNA)的质粒后,HeLa细胞中人乳头状瘤病毒18型E6基因(HPV18E6)表达的变化。方法实验组将本实验室前期构建的可遗传性表达HPV18E6shRNA的pE6-1shRNA质粒和含E6基因突变点的pE6-2shRNA质粒分别转染HeLa细胞,对照组以空质粒pSUPER和不加质粒的脂质体分别转染HeLa细胞。稳定转染后,氨基糖苷抗生素(G418)筛选阳性细胞克隆,RT-PCR技术和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法分别检测HeLa细胞中HPV18E6mRNA和蛋白表达的变化。结果稳定转染后,G418筛选,实验组HeLa细胞有新的阳性细胞克隆形成,而对照组HeLa细胞最终全部死亡。实验组转染pE6-1shRNA质粒的HeLa细胞中HPV18E6mRNA表达水平为0·76±0·28,明显低于对照组转染脂质体者(1·14±0·45)和转染pSUPER质粒者(1·12±0·23,P<0·05);HeLa细胞中HPV18E6蛋白阳性表达强度较对照组转染脂质体者弱。实验组转染pE6-2shRNA质粒的HeLa细胞中HPV18E6mRNA和蛋白表达水平分别与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0·05)。结论稳定转染表达HPV18E6shRNA的质粒后,宫颈癌细胞中HPV18E6mRNA和蛋白表达明显受到抑制。     

小分子干扰RNA诱导卵巢上皮性癌细胞凋亡的实验研究

表皮生长因子受体2（HER-2）是HER-2原癌基因编码的一种酪氨酸蛋白激酶，研究表明，过度表达的HER-2基因通过激活瑚等信号分子，导致细胞过度增殖和恶性变，抑制细胞凋亡，与肿瘤的恶性程度和转移能力密切相关。已有研究证明，30％的卵巢上皮性癌（卵巢癌）存在HER．2基因的高表达。RNA干扰（RNA interference，RNAi）是生物进化过程中保留的一种防御机制，可以介导互补基因的靶向性降解。本研究拟应用RNAi技术，合成针对HER-2基因的特异性小分子干扰RNA（small interference RNA，siRNA），转染卵巢癌细胞株SKOV3细胞，探索siRNA诱导卵巢癌细胞凋亡的机制。     

RNA干扰技术抑制卵巢癌细胞系SKOV3.ip1细胞内Her-2/neu基因表达的研究

目的 探讨卵巢癌细胞株SKOV3．ip1细胞转染表达短发卡状RNA（shRNA）的质粒后，SKOV3．ip1细胞中Her-2／neu基因表达的变化，和对SKOV3．ip1细胞凋亡的影响。方法 将针对Her-2／neu基因的shRNA表达载体转染SKOV3．ip1细胞，从mRNA水平、蛋白表达水平和细胞凋亡的变化三个方面评价shRNA表达载体对Her-2／neu基因表达的抑制作用。结果shRNA表达载体可以有效的抑制SKOV3．ip1细胞Her-2／neu基因的表达，使Her-2／neu基因的mRNA和蛋白表达量明显下降，细胞凋亡增多。结论靶向Her-2／neu的shRNA表达载体可以有效抑制Her-2／neu基因的表达。     

RNA干扰技术抑制Her2基因表达对卵巢上皮性癌细胞生物学特性的影响

目的 应用RNA干扰技术,观察稳定转染Her2基因的短发夹状RNA(shRNA)对不同恶性程度的卵巢上皮性癌(卵巢癌)SKOV3和SKOV3.ipl细胞Her2基因表达及细胞生物学特性的影响.方法 将表达Her2的质粒pHer2 shRNA分别转染SKOV3和SKOV3.ipl细胞,经抗性筛选获得稳定转染的细胞系.RT-PCR技术、蛋白印迹法检测转染前后细胞Her2 mRNA和蛋白的表达,体外侵袭实验观察转染前后细胞侵袭能力的改变,裸鼠接种肿瘤细胞观察转染前后细胞成瘤能力的改变.结果 转染前后SKOV3.ipl、SKOV3细胞的Her2 mRNA表达量分别为(99.9±1.3)%和(42.4±2.5)%、(68.0±3.1)%和(40.8±2.0)%.Her2蛋白的表达量分别为(98.2±1.7)%和(40.7±2.1)%、(72.1±3.4)%和(36.4±1.5)%,稳定转染后,两种细胞的Her2基因表达均明显下降,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).稳定转染pHer2 shRNA后,SKOV3.ipl细胞的穿膜细胞数由(36.2±9.7)个下降为(15.7±7.2)个,SKOV3的穿膜细胞数由(7.6±1.1)个下降为(1.8±0.8)个,细胞侵袭能力均显著下降,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).稳定转染pHer2 shRNA后,SKOV3.ip1和SKOV3细胞的成瘤重量分别由(1.55±0.31)g下降为(0.69±0.20)g、(1.14±0.10)g下降为(0.38±0.03)g,两种细胞的成瘤能力均显著下降,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 (1)针对Her2基因的RNA干扰技术可以显著降低卵巢癌细胞Her2基因的表达水平.(2)经RNA干扰作用降低Her2基因表达后,卵巢癌细胞的生物学特性改变,恶性度降低.     

针对Her-2基因的小分子干扰RNA对卵巢上皮性癌细胞生物学行为影响的研究

目的通过小分子干扰RNA(siRNA)对Her-2基因表达的影响,探讨其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生物学行为的影响。方法针对Her-2基因的siRNA质粒和阴性对照质粒在脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选细胞克隆,收集其上清液并感染SKOV3细胞,经过嘌呤霉素筛选得到稳定转染的细胞株SKOV3/siRNA、SKOV3/siRNA-negative,并通过RT-PCR和免疫组化方法鉴定Her-2基因表达的抑制效果。用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖并绘制生长曲线,通过流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡,并将稳定转染的细胞株接种到裸鼠皮下检测成瘤情况。结果(1)SKOV3/siRNA细胞Her-2基因的表达明显减弱。(2)SKOV3/siRNA细胞的G0/G1期细胞占68·6%,S期细胞占15·1%,SKOV3/siRNA-negative细胞的G0/G1期占55·8%,S期占23·3%。(3)SKOV3/siRNA细胞的早期凋亡率为(10·500±0·250)%,而SKOV3/siRNA-negative细胞为(0·340±0·010)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0·01)。(4)与SKOV3/siRNA-negative细胞比较,SKOV3/siRNA细胞的生长速度减慢(P<0·05),接种于裸鼠皮下的肿瘤生长速度明显减慢(P<0·01)。结论siRNA可以有效抑制Her-2基因的表达,抑制卵巢癌细胞的生物学行为。     

RNA干扰技术抑制切除修复交叉互补基因1对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨RNA干扰技术抑制切除修复交叉互补基因(ERCC)1对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞顺铂敏感性的影响。方法体外设计、合成针对ERCC1的小分子干扰RNA(siRNA),并转染卵巢癌细胞ES2,应用RT PCR、蛋白印迹法(westernblot)和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法检测转染siRNA后ES2细胞ERCC1基因和蛋白的表达变化,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测干扰ERCC1后ES2细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染针对ERCC1的siRNA后24、48、72h,ES2细胞ERCC1基因和蛋白的表达水平下降;转染ERCC1siRNA后,ES2细胞对顺铂的半数抑制量从(10.475±1.713)μg/ml提高到(0.194±0.021)μg/ml,ES2细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍。结论RNA干扰技术抑制ERCC1能增加卵巢癌细胞ES2对顺铂的敏感性。     

HER-2小分子干扰RNA对卵巢上皮性癌细胞侵袭和趋化能力的影响

目的 探讨HER-2小分子干扰RNA（siRNA）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞侵袭和趋化能力的影响。方法 选用已知的干扰磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）的特异性位点作为阳性对照,采用蛋白印迹法检测卵巢癌细胞株SKOV3细胞GAPDH蛋白和HER-2蛋白的表达水平,以吸光度（A）值表示。然后在HER-2基因的编码区内根据干涉位点的筛选原则,选择HER-2siRNAⅠ、HER-2siRNAⅡ、HER-2siRNAⅢ3段靶序列,体外转录合成HER-2siRNA。实验分为4组：空白对照组、脂质体组、非特异性转染组（非特异性siRNAⅢ）、特异性转染组（HER-2siRNAⅢ）,以B肌动蛋白（B-actin）作为内参照,用荧光实时定量PCR和蛋白印迹法检测转染前后SKOV3细胞HER-2mRNA和蛋白表达的变化;细胞侵袭实验和细胞趋化实验检测转染前后SKOV3细胞体外侵袭和趋化能力的变化。结果 GAPDHsiRNA能明显抑制SKOV3细胞内源性GAPDH蛋白的表达,空白对照及加入不同剂量（0．5、1．0、1．5、2．0μg）的GAPDHsiRNA转染SKOV3细胞后,其GAPDH蛋白的表达水平分别为0．6855±0．0259、0．5698±0．0275、0．4542±0．0296、0．3341±0．0178及0．1816±0．0180,各剂量间比较,差异有统计学意义（F=198．126,P〈0．01）。HER-2siRNAⅡ、HER-2siRNAⅢ均有抑制HER-2蛋白表达的作用,HER-2siRNAⅡ、HER-2siRNAⅢ转染后SKOV3细胞中HER-2蛋白的相对表达水平（分别为0．2162±0．1589、0．1562±0．0067）,分别与空白对照组、非特异性转染组及转染HER-2siRNAⅠ的SKOV3细胞（分别为0．3674±0．0350、0．3839±0．0188、0．3532±0．0197）比较,差异均有统计学意义（F=69．461,P〈0．01）。不同剂量（0．5、1．0、1．5、2．0μg）的HER-2siRNAⅢ转染后,SKOV3细胞中HER-2mRNA的相对表达水平比较,差异有统计学意义（F=174．53,P〈0．01）;HER-2siRNAⅢ转染后第1、3、6天,SKOV3细胞中HER-2mRNA的相对表达水平分别为0．0506±0．0017、0．0266±0．0011及0．0154±0．0020,不同时间点比较,HER-2mRNA的相对表达水平呈明显下降趋势（P〈0．01）;特异性转染组SKOV3细胞的侵袭和趋化能力均明显低于非特异性转染组及空白对照组,差异均有统计学意义（F=53．707,P〈0．01;F=11．361,P〈0．01）。结论 HER-2siRNA对卵巢癌细胞HER-2基因的抑制作用呈时间及剂量依赖性,HER-2siRNA能显著抑制细胞侵袭和趋化能力,这为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。     

RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌细胞IGF1R基因表达及增强顺铂敏感性的实验研究

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)HO8910PM细胞胰岛素样生长因子1型受体(IGF1R)基因的表达,探讨IGF1R的生物学功能及对顺铂敏感性的影响.方法 将IGF1R基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA)、非特异性siRNA分别转染细胞;转染后48h通过实时PCR、蛋白印迹法(western blot)、流式细胞仪分别测定IGF1R mRNA、蛋白的表达及细胞周期变化;转染后24、48、72、96 h通过细胞增殖/毒性检测试剂cell counting kit-8(CCK-8)测定细胞增殖;于转染后24 h给予不同浓度的顺铂作用24 h,通过CCK-8法测定细胞增殖抑制率;于转染后24 h给予10μg/ml顺铂作用24 h,通过流式细胞仪及蛋白印迹法分别检测细胞凋亡和B淋巴细胞白血病/淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)蛋白的表达.结果 (1)转染后48 h,IGF1R mRNA和蛋白的表达水平均明显下调,转染后IGF1R mRNA的表达水平下调了85.5%(P＜0.01).(2)转染后48、72、96 h,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性分别为1.71±0.13、2.32±0.23、2.79±0.28,与未转染及转染非特异性siRNA的对照细胞比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)转染后48 h有24.37%的细胞处于G2期(P＜0.05).(4)转染后24 h联合不同浓度的顺铂作用24 h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/ml时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率分别为(25.94±0.08)%、(40.25±0.05)%、(59.48±0.03)%、(74.18±0.08)%,差异均有统计学意义(P＜0.01).(5)在转染siRNA 24 h后给予10μg/ml顺铂作用24 h,可使细胞的凋亡率增加至17.95%(P＜0.05),并使Bcl-2蛋白的表达水平下调.结论 通过RNAi技术可有效抑制IGF1R基因在转录和翻译水平的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,出现G2期阻滞,明显提高细胞对顺铂化疗的敏感性.     

卵巢上皮性癌生长抑素受体2表达的研究

生长抑素 (ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｏｎ ,ＳＳＴ)是一种环状多肽类激素 ,具有强大的生物学活性 ,在多种内分泌和外分泌激素分泌过程中发挥重要作用。其生物学活性是通过靶细胞膜上的生长抑素受体 (ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＳＳＴＲ)介导的 ,其中以其亚型 2(ＳＳＴＲ2 )的作用最为重要[1 ,2 ] 。目前已经发现在多种肿瘤细胞中有ＳＳＴＲ2 的表达[3] ,体内外研究均发现生长抑素类似物(ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎａｎａｌｏｇｕｅ ,ＳＳＡ)可通过ＳＳＴＲ抑制肿瘤细胞增殖 ,并发生细胞凋亡。近年来 ,ＳＳＴ抗肿瘤细胞增殖效应…     

RNA干扰技术逆转卵巢上皮性癌细胞多药耐药的研究

目的探讨应用RNA干扰(RNAi)技术逆转卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞多药耐药的可行性。方法将设计合成的针对多药耐药基因MDR1的特异性小分子干扰RNA(siRNA),用脂质体转染具有MDR1基因高表达的卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OVCAR8/TR。用荧光定量RT-PCR技术和流式细胞仪分别测定转染前后细胞MDR1mRNA及糖蛋白P-gp表达的变化;三磷酸腺苷(ATP)生物荧光法检测转染前后细胞对顺铂、氟尿嘧啶、阿霉素和紫杉醇药物敏感性(以ATP抑制率判断)的变化情况。结果转染后24、48、72、96和120h,OVCAR8/TR细胞MDR1mRNA的抑制率分别为26·42%、84·00%、78·43%、45·85%和0;转染后48h MDR1mRNA的抑制率达到最高峰。转染后24、48、72、96和120h,OVCAR8/TR细胞P-gp的抑制率分别为16·71%、49·64%、85·23%、65·98%和9·44%;转染后72h P-gp的抑制率达到最高。转染MDR1siRNA后,能够明显提高OVCAR8/TR细胞对紫杉醇和阿霉素的敏感性,在紫杉醇的作用下,转染前后OVCAR8/TR细胞的ATP抑制率分别为(25·8±3·1)%和(78·0±9·8)%,转染前后比较,差异有统计学意义(P<0·05)。结论在OVCAR8/TR细胞中,针对MDR1合成的siRNA能够有效地抑制MDR1mRNA和P-gp的表达,并能恢复其对紫杉醇和阿霉素的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的多药耐药。     

慢病毒介导短发夹状RNA沉默生存素基因对人异位内膜细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shR-NA)对人异位内膜细胞中survivin基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向survivin基因的shRNA慢病毒表达载体,将重组慢病毒感染原代培养的异位内膜细胞,以未转染及空载慢病毒感染异位内膜细胞为对照。采用RT-PCR、Western blot法分别检测各组异位内膜细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖,Cy5-Annexin V/PI双染标记流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:与未转染细胞及空载慢病毒转染细胞相比,shRNA慢病毒感染人异位内膜细胞后survivin mRNA及蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA及蛋白表达抑制率分别为64%和59%。转染后1～5天实验组细胞生长速度较阴性对照组及空白对照组明显减慢,除第1天外,差异均有统计学意义(P0.01);阴性对照组及空白对照组细胞生长速度的差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪分析显示,实验组细胞凋亡率为(41.61±3.64)%,明显高于阴性对照组的(9.14±1.88)%和空白对照组的(7.07±1.16)%(P0.01),后两组的差异无统计学意义(P0.05)。结论:慢病毒介导survivin基因特异性shRNA可有效沉默异位内膜细胞中survivin基因表达,明显抑制异位内膜细胞的增殖并促进细胞凋亡。     

卵巢上皮性肿瘤EDNRB基因甲基化状态的研究

卵巢上皮性癌（卵巢癌）是一种严重威胁妇女生命的恶性肿瘤,绝大多数卵巢癌患者早期症状不明显,约有70%的患者诊断时已届晚期,病死率较高,研究卵巢癌的发病机制,阻断其发生过程中的关键环节,寻找新的治疗靶点至关重要.     

MDR1及MDR3基因沉默逆转卵巢上皮性癌细胞对紫杉醇耐药的实验研究

目的 研究多药耐药基因——MDR1及MDR3基因沉默逆转卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞A2780／taxol对紫杉醇耐药的作用。方法 用真核质粒介导的针对MDR 1及MDR3基因的短发夹状RNA（shRNA）转染A2780／taxol细胞（分别为MDR1组、MDR3组）,空质粒转染作为对照（空载体组）。流式细胞仪分别检测细胞早期凋亡、罗丹明123（Rh123）积聚情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法（TUNEL）检测细胞晚期凋亡情况,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度（IC50）,RT-PCR技术检测MDR1及MDR3mRNA的表达,蛋白印迹法（western blot）检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白的表达。结果转染后,MDR1组及MDR3组A2780／taxol细胞的早期凋亡率分别达（20．21±0．56）％和（10．87±1．24）％。MDR1、MDR3组A2780／taxol细胞内的Rh123平均荧光强度分别为116．6±8．1、98．4±3．8,显著高于空载体组的40．2±1．6,差异有统计学意义（P〈0．05）。TUNEL检测显示细胞发生了晚期凋亡。MDR1、MDR3组A2780／taxol细胞对紫杉醇的IC50明显下降,分别与空载体组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。转染48h后,A2780／taxol细胞中MDR1和MDR3mRNA的表达水平分别下降了（73．3±0．8）％和（51．6±0．4）％;MDR1、MDR3组细胞caspase-3的表达量分别为（80．8±2．6）％、（72．0±4．7）％,均较空载体组增加。结论 MDR1及MDR3基因沉默能恢复A2780／taxol细胞对紫杉醇的敏感性并诱导细胞凋亡,从而逆转A2780／taxol细胞对紫杉醇的耐药性。     

研究C-erbB-2、P53在卵巢上皮性肿瘤中表达及临床意义

目的　探讨癌基因C -erbB - 2 ,抑癌基因P5 3在卵巢上皮性肿瘤发生发展中的作用及临床意义。方法　采用免疫组化技术对 6 7例卵巢上皮性肿瘤组织、其中 1 0例良性肿瘤 ,1 4例交界性卵巢瘤、 4 3例卵巢癌的石蜡包埋的卵巢组织进行C -erbB - 2和P5 3蛋白表达的检测。结果　①在卵巢恶性肿瘤、交界性肿瘤、良性肿瘤之间C -erbB - 2的表达差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;C -erbB - 2的表达率及表达强度与组织分化程度有显著相关性 (P <0 0 5 ) ,C -erbB - 2的过度表达见于恶性程度高 ,组织分化差的肿瘤中。②在卵巢恶性肿瘤、交界性肿瘤、良性肿瘤之间P5 3的表达差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;其表达强度与组织分化程度及临床分期有显著相关性 (P <0 0 5 )。在恶性程度较高 ,组织分化差 ,较晚期的肿瘤P5 3的表达较强。结论　癌基因C -erbB -2及抑癌基因P5 3在卵巢癌组织中广泛存在 ,并与其临床病理指标之间有一定的相关性 ,提示这些基因在卵巢癌的发生发展中起一定作用。对各基因之间复杂的相互作用 ,协同作用有待进一步研究     

缺氧诱导卵巢上皮性癌细胞形成拟态血管的前期研究

目的探讨缺氧在卵巢上皮性癌细胞系SKOV3和ES2细胞拟态血管形成过程中的作用及西罗莫司对其的抑制效应。方法建立人工基底膜基质凝胶Matrigel三维培养系统,分别在常氧(常氧组)、缺氧(缺氧组)、缺氧时加入西罗莫司(缺氧+西罗莫司组)等条件下诱导,观察SKOV3和ES2细胞形成拟态血管的能力;应用相差显微镜和扫描电镜观察拟态血管的形态及其立体结构的特点;用RT-PCR技术检测不同条件下缺氧诱导因子(HIF)1αmRNA的相对表达量。结果培养7d后,缺氧组SKOV3和ES2细胞出现变形、伸展,形成腔样、管状、分支和网络状等管道结构;而常氧组及缺氧+西罗莫司组,部分细胞出现伸展但不形成管道结构。缺氧组SKOV3和ES2细胞的HIF-1αmRNA表达量分别为0·801±0·034和0·736±0·059,显著高于缺氧+西罗莫司组(分别为0·025±0·007和0·231±0·035;P<0·01,P<0·05)和常氧组(分别为0·010±0·004和0·011±0·002;P均<0·01)。结论缺氧是卵巢上皮性癌细胞形成拟态血管的重要诱导因素,西罗莫司通过抑制HIF-1αmRNA的表达阻断拟态血管的形成。