N-（5-硝基吲唑-3-甲酰）酪氨酸钠的制备、乏氧增敏与体内分布研究

目的：在硝基吲唑母核上引入酪氨酸并成盐,制备N-（5-硝基吲唑-3-甲酰）酪氨酸钠并考察其乏氧增敏活性和体内分布情况。方法用缩合剂法合成N-（5-硝基吲唑-3-甲酰）酪氨酸钠,通过小鼠移植瘤模型评价其乏氧增敏活性,通过放射性碘标记法考察其在荷瘤小鼠体内的分布情况。结果合成了目标化合物并对结构进行了确证。移植瘤模型增敏实验表明其对H22移植瘤具有一定的乏氧增敏活性,平均放射增敏比为1．5。体内分布实验中其在肿瘤部位与脑和肌肉部位的分布比值均大于5,表明其具有较好的体内分布特性。结论 N-（5-硝基吲唑-3-甲酰）酪氨酸钠具有良好的乏氧增敏活性和体内分布特性,具有进一步开发价值。     

HBV启动子对肝细胞具有特异性转录活性的研究

目的：探讨HBV转录调控核心序列在肝细胞中转录的活性。方法：构建HBV增强子和启动子调控的荧光素酶报告栽体，用脂质体转染法将其转染肝细胞和非肝细胞，双荧光素酶报告基因试验检测其在不同细胞中的转录活性。结果：HBV启动子在2、2.15细胞中转录活性最高，在其他肝细胞中的转录活性显著高于非肝细胞。结论：由HBV启动子构建的载体可能是一种新颖的有前景的靶向性肝癌细胞基因治疗栽体。     

多聚胺阳离子脂质体转染效率及细胞毒性的评价

目的评估四种多聚胺阳离子脂质体的转染效率及细胞毒性,筛选高效低毒的阳离子脂质体。方法多聚胺阳离子脂质TC-Chol、DC-Chol与中性磷脂DOPE分别以1：1、3：1摩尔比制备多聚胺阳离子脂质体,转染以增强型绿色荧光蛋白为报告基因的质粒PIRES2-EGFP入Hela细胞、Hep2细胞,倒置荧光显微镜下检测转染细胞的报告基因表达,筛选出高效的阳离子脂质体,通过MTT法检测转染细胞毒性,从而筛选相对高效低毒的阳离子脂质体。结果所制备的多聚胺阳离子脂质体在透射电镜下呈圆形、椭圆形囊泡样结构,少数呈管状、不规则状,粒径50-200nm,可将质粒PIRES2-EGFP有效转染入Hela细胞、Hep2细胞,其中多聚胺阳离子脂质TC-Chol与DOPE以3：1摩尔比制备的多聚胺阳离子脂质体是一种相对高效低毒的阳离子脂质体,转染效率39．5％～42．1％。结论多聚胺阳离子脂质TC-Chol、DC-Chol与中性磷脂DOPE以一定的摩尔比可制备高效低毒的多聚胺阳离子脂质体,其转染效率和细胞毒性与阳离子脂质的结构和中性磷脂DOPE的比例有关,在基因转染和基因治疗方面具有较广阔的应用前景。     

Tim-3抗体的生物学活性及应用研究

目的：制备抗人Tim-3单抗并评价其生物学活性,为干预Tim-3表达失调引发的疾病提供实验基础。方法制备重组人Tim-3蛋白,常规方法免疫BALB/c小鼠,筛选出阳性克隆,并对其识别、中和活性进行体内外验证,探讨其作为免疫干预手段的可行性。结果①获得一株能够分泌具有较好结合活性的抗人Tim-3单克隆抗体细胞株（克隆号L3D）,其分泌的免疫球蛋白亚型为IgG2a;②流式实验结果表明,该抗体能够结合人U937细胞上的Tim-3分子,且与小鼠RAW 264．7细胞上Tim-3有一定的交叉结合活性;③该抗体能够阻断Gal-9分子诱导的人THP1细胞凋亡,具有良好的体外中和活性;④体内注射L3D,显示该抗体能够显著加重脓毒血症模型小鼠病情,提高炎性因子的表达水平,显示出其良好的体内中和活性。结论成功制备一株分泌抗人Tim-3抗体的细胞株,其良好的结合及中和活性为基于Tim-3表达异常相关疾病的干预提供了实验基础。     

不同粒径石杉碱甲纳米粒的制备及其在小鼠体内分布特性研究

目的研究不同粒径石杉碱甲纳米粒在小鼠体内的分布情况。方法以聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）为载体材料,采用乳化溶剂挥发法制备不同粒径的石杉碱甲纳米粒;采用小动物活体成像技术研究不同粒径纳米粒在小鼠体内的分布情况。结果制备了粒径从43．1nm到316nm的石杉碱甲纳米粒,载药量从0．11％到2．42％。不同粒径纳米粒在小鼠体内的动态分布研究表明,粒径为50nm左右的纳米粒可以分布于全身各个器官,并能透过血脑屏障,且能起到缓释的效果;粒径为100～300nm左右的纳米粒主要分布于肝脏,且较难透过血脑屏障。结论该研究为进一步开发高效、低毒的石杉碱甲新型制剂提供了重要参考。     

HER-2反义寡核苷酸对靶基因抑制作用的时相变化与微观分布研究

目的:研究靶向HER-2基因、具有不同活性的反义硫代寡核苷酸(S-ODNs)在SK-BR-3细胞内的微观分布差异,以及与靶基因转录和翻译抑制作用的关系.方法:运用实时定量PCR和Western印迹方法检测反义寡核苷酸对细胞靶基因转录和翻译抑制的时相性变化,用激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察6-羧基荧光素标记S-ODNs在靶细胞内的分布.结果:反义S-ODNs能够在mRNA与蛋白水平抑制HER-2的表达.不同序列的抑制活性各不相同,但最大抑制强度均出现于转染后48～72 h之间,此后靶基因表达逐渐恢复.高活性序列主要均匀分布于细胞核,且持续时间长,低活性序列呈点状分布于胞质,少量分布于细胞核且持续时间短.结论:活性不同的S-ODNs亚细胞分布有显著区别,且分布变化与对靶基因的抑制效应具有对应关系.     

外源性p27KIP1基因抑制SGC7901细胞的增殖

研究p27^KIP1基因对胃癌细胞的细胞周期及细胞增殖的影响。采用脂质体转染法将p27^KIP1全长cDNA转入胃癌细胞系SGC7901中，通过免疫屯迹分析以及RNA斑点杂交方法检测p27^KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达，细胞活力实验及软琼脂集落形成实验显示转染p27^KIP1基因对细胞增殖的作用；流式细胞仪观察目的的基因对该细胞的细胞周期的影响。结果显示，转染p27^KIP1的SGC7901细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平p27^KIP1的表达；细胞活力检测显示在外加Zn离子48h后细胞生长被抑制42％；转染p27^KIP1的SGC7901细胞的集落形成率较对照组明显减少（P＜0．01）；p27^KIP1的过表达能够显著地增加G1期的细胞数，由33．68％增加到69．29％（P＜0．01）。研究表明，p27^KIP1基因可抑制SGC7901细胞由G1期向S期过渡，从而抑制细胞增殖。     

C6细胞表达的人Angiostatin Kringle(1-3)体外抑制血管内皮细胞生长的研究

为研究人AngiostatinKringle( 1 3) [AK( 1 3) ]抑制血管内皮细胞生长的活性 ,利用脂质体法将带有大鼠血清白蛋白分泌信号的人AK( 1 3)基因导入大鼠C6胶质瘤细胞 ,并用G41 8筛选获得目的细胞株。采用电镜、流式细胞术、免疫组化和Westernblot等方法 ,检测转染前后细胞超微结构、细胞周期及AK( 1 3)蛋白表达情况 ,并用人脐静脉内皮细胞增殖实验检测目的细胞株表达的AK( 1 3)蛋白抑制血管内皮细胞生长的活性。结果表明 ,成功转染人AK( 1 3)基因的大鼠C6胶质瘤细胞可稳定表达AK( 1 3)蛋白 ,且具有抗血管内皮细胞增殖活性的良好作用 ,为进一步进行体内抗血管生成基因治疗奠定了基础。     

载报告基因壳聚糖纳米粒制剂体外转染活性考察

目的 考察壳聚糖纳米粒体外基因转染活性及壳聚糖纳米粒经表面修饰的体外转染活性变化。方法 用复凝聚法制备纳米粒，透射电镜观察粒子形态，体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性，用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察递送不同剂量的基因和转染后不同时间的转染效率，寻找本递送系统较好的转染条件。用纳米粒表面连接PEG以及半乳糖基白蛋白，对纳米粒进行修饰，通过体外转染实验，评价表面修饰对其转染活性的影响。结果 未经表面修饰的载基因纳米粒能够转染人胚胎肾细胞(HEK293)和肝癌细胞(HepG2)，但转染效率仍不如脂质体转染试剂，且在转染实验后约72h较高，递送基因较佳的剂量是4μg，在以上两种细胞中，转染效率也不同。经PEG表面修饰的纳米粒仍保持纳米粒的体外转染活性。连接半乳糖基牛血清白蛋白的纳米粒转染活性却反而略有下降。结论 壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内，并且报告基因能在细胞内表达。因此，可以用作基因递送的载体系统，值得进一步研究。经PEG表面修饰和冷冻干燥处理,保持生物活性．为基因药物制剂化的可能性提供了证据。对于靶向配基的选择．宜继续进行筛选。     

角燕制剂对肿瘤移植小鼠免疫功能的调节作用

目的：观察深海鱼类角燕提取物对肿瘤移植小鼠免疫功能的影响。方法：采用盐溶液抽提,有机溶剂沉淀及分子筛层析等方面从海洋鱼类－角燕的药用部位制备角燕制剂,选用S－180肉瘤移植小鼠实验模型,灌胃给药,观察其对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。结果：角燕制剂明显抑制S－180肉瘤在荷瘤小鼠体内生长,显著提高S－180荷瘤小鼠胸腺指数和脾指数,提高荷瘤小鼠NK细胞活性及腹腔巨噬细胞的吞噬活性。结论：角燕制剂明显提高荷瘤小鼠机体的免疫功能。     

9 9mTC-紫杉醇脂质体的抑瘤作用及体内分布研究

观察＾９９ｍＴＣ紫杉醇脂质体瘤作用及其体内分布,为临床应用提供依据。方法：采用逆相蒸发法制备紫杉醇脂质体,小鼠艾氏癌实体型为实验肿瘤模型。经腹腔分别注入生理盐水,紫杉醇注射液和紫杉醇质体,观察抑瘤率和体重变化率;经尾静脉分别注入＾９９ｍＴｃ紫杉醇脂质体和＾９９ｍＴｃＯ４－洗脱液观察体内分布情况。结果紫杉醇脂质体与紫杉醇注且抑瘤率差异无显著性;同生理盐水相比,紫杉醇脂质体组的体重变化率无统计学意义,     

油酸多相脂质体对Lewis肺癌大小、转移灶及cAMP和cGMP水平的影响

油酸多相脂质体可抑制小鼠Lewis肺癌原发灶瘤体生长,具有明显的浓度效应,最高抑制率为44.7％。给药剂量为50mg/kg,对Lewis肺癌转移灶抑制率为21.6％。该药可使Lewis肺癌组织中cAMP水平升高,而对cGMP没有明显影响。     

99Tc m标记lncRNA HOTAIR反义寡核苷酸探针的制备及其对人脑胶质瘤U87细胞活性的影响

目的:制备新型的靶向长链非编码RNA （lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA (HOTAIR）的反义寡核苷酸（ASON）探针 99Tc m-HYNIC-ASON (HYNIC为联肼尼克酰胺）,探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响。 方法:设计并通过化学修饰合成...     

阳离子脂质体DOTAP介导报道基因转染骨关节病滑膜细胞的实验研究

目的：探索阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ介导目的基因转染骨关节病滑膜细胞的最佳条件。方法：分离培养骨关节病滑膜细胞,使用荧光质粒pＥＧＦＰ－Ｃ３作为报道基因,与阳离子脂质体ＤＯＰＡＰ一起转染骨关节病滑膜细胞;通过设立不同转染时间组、不同表达时间组以及不同ＤＯＴＡＰ剂量组,观察绿色荧光蛋白的表达。结果：使用阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ介导荧光质粒转染骨关节病滑膜细胞,转染时间在 ６ｈ左右, ＤＯＴＡＰ（μｌ）／ＤＮＡ（μｇ）比值在 ７：１左右,可于转染后４８ｈ左右表达出的蛋白量最大。结论：阳离子脂质体ＤＯＴＡＰ介导荧光质粒转染骨关节病滑膜细胞转染条件的优化,为今后骨关节病滑膜细胞非病毒基因转移的研究提供实验依据。     

Technetium-99m galactosyl-neoglycoalbumin: preparation and preclinical studies

Technetium-99m galactosyl-neoglycoalbumin ([Tc] NGA), a labeled analog ligand to the hepatocyte-specific receptor, hepatic binding protein (HBP), was prepared and tested for labeling yield, stability, biodistribution, toxicity, and dosimetry. The ligand was synthesized by the covalent coupling of a carbohydrate bifunctional reagent, 2-imino-2-ethyloxymethyl-1-thiogalactose, to human serum albumin. Testing in mice and rabbits revealed the product to be nontoxic and apyrogenic. Technetium labeling yields in excess of 95%, by the electrolytic method, did not alter the molecular weight profile of the neoglycoalbumin. The NGA-bound activity remained stable for at least 4 hr. Biodistribution studies in rabbits demonstrated the liver as the single focus of tracer uptake. Dosimetry was based on kinetic studies in three baboons. Absorbed doses to liver, small intestine, urinary bladder wall, and uterus were 0.089, 0.28, 0.56, and 0.88 rad/mCi, respectively. Total body, lens of the eye, red marrow, ovaries, and testes were less than 0.06 rad/mCi. High liver specificity imparted by receptor binding combined with high labeling yield, stability, acceptable dosimetry, and safety provide [Tc]NGA with the attributes required for routine clinical assessment of hepatocyte function.     

Preparation and biological evaluation of paclitaxel loaded biodegradable PCL/PEG nanoparticles for the treatment of human neuroendocrine pancreatic tumor in mice

The main aim of this study was to develop and evaluate nanoparticulate system of paclitaxel loaded polymeric biodegradable Poly (ε-caprolactone) nanoparticles for targeting to neuroendocrine pancreatic tumors in mice. Nanoparticles were prepared by simple emulsion technique having surface modification with pluronic F-68. All formulations were evaluated for particle shape and size, zeta potential, encapsulation efficiency and in vitro drug release. Radiolabelling of nanoparticles with (99m)Tc was done for scintigraphy and biodistribution studies. Cytotoxicity studies were performed on BON-1 cell line using MTT cell proliferation assay. The in vivo tumor inhibition study was performed after i.v. administration of paclitaxel nanoparticles. Our results showed that optimized nanoformulation was found to have size range from 100 ± 0.03 nm to 250 ± 0.06 nm with smooth spherical shape. Negative zeta potential value confirmed the surface modification and stability of nanoformulations. The amount of drug released after 24h from the formulation was found to be 73.3% ± 2.7%. More pronounced cytotoxicity was found with nanoparticulate formulation as compared with paclitaxel. The PCL-Ptx nanoparticles reduced tumor volume significantly in comparison with paclitaxel. Higher concentration of Ptx-NPs were found in tumor which was also revealed by high quality scintigraphic image of BON-1 tumor bearing mouse model. In conclusion, polymeric nanoparticulate formulation of paclitaxel was very much efficient for chemotherapy of human pancreatic neuroendocrine tumor in mice.     

葛根素肠溶纳米粒的制备及体外释放度研究

目的制备葛根素肠溶纳米粒,并对其体外释放度进行考察。方法采用离子交联法制备葛根素肠溶纳米粒,HPLC法测定药物的包封率及体外释放度,透射电镜考察纳米粒的表面形态,激光粒度分析仪测定粒径分布。结果制备的纳米粒,粒径较小,分布均一,包封率较高,理化性质合乎要求,并在pH7.2的磷酸盐缓冲液中释放达到70%以上。结论葛根素肠溶纳米粒体外释药良好,能达到良好肠溶效果。     

hTERT启动子调控caspase 3基因的特异性表达及其抑癌作用

目的：探讨端粒酶催化亚基(KFERT)启动子调控caspase3(半胱天冬酶-3)基因在端粒酶阳性肿瘤细胞中表达的特异性及在体内外的抑癌作用。方法：构建hTERT启动子调控的caspase3基因的真核表达载体，通过RTPCR、瞬时转染、MTT法、流式细胞术和动物实验方法，检测hTERT启动子调控caspase3基因表达对肿瘤细胞生长的影响。结果：hTERT启动子调控caspase3基因在端粒酶阳性肿瘤细胞HepG2中有明显表达，而在正常人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast，HEL)中未见表达；caspase3表达能对端粒酶阳性肿瘤细胞HepG2、HeLa、Glc和A549细胞的增殖产生明显抑制作用，抑制率为10．5％-37．9％；同时也可以诱导HepG2、HeLa、Glc和A549细胞发生凋亡，凋亡率为15．39％-35．19％；而对端粒酶阴性的正常细胞HEL没有明显的影响。动物实验结果显示，hTERT启动子调控的caspase3基因转染对HepC2细胞的体内增殖具有抑制作用。结论：hTERT启动子调控的caspase3基因表达载体是一种有应用潜力的肿瘤基因治疗载体。     

Application of a stable cell culture assay for the functional assessment of novel MR contrast agents

The purpose of this study was to apply a new cell culture assay that preserves hepatocyte orientation and differentiation for screening of MR contrast agents with hepatocyte specificity. Cultured hepatocytes were sandwiched between two layers of collagen, preserving both hepatocyte function and morphology over a prolonged period of time. Plain and rhodaminated monocrystalline iron-oxide particles (MION and MION-rh) and asialoglycoprotein receptor-specific rhodaminated asialofetuin coupled to MION (MION-ASF-rh) were prepared. Dose-dependent competition experiments of these agents were performed with D( + )-galactose to determine the specificity of galactose-mediated cell uptake. To assess the impact of cell integrity on cell uptake dose-dependent functional experiments with two hepatotoxins (ethanol and CCl4) were performed. Normal cell cultures showed significantly higher fluorescent-light emission after incubation with hepatocyte-directed ASF-MION-rh than after incubation with MION-rh. Competition experiments of ASF-MION with galactose showed a dose-dependent decrease in calibrated fluorescent-light emission. Cell cultures treated with hepatotoxins demonstrated a dose-dependent reduction in calibrated fluorescent-light emission following incubation with ASF-MION-rh. The validated assay system allows assessment not only of hepatocyte specificity, but also of hepatocyte damage. Because the assay can be applied to cells from any species (rat, pig, human), it may represent an ideal test system prior to clinical trials of new hepatocyte-directed MR contrast agents. Received 31 July 1996; Revision received 25 September 1996; Accepted 26 September 1996     

交错融合脂质体的制备

目的研究交错融合脂质体（IFVs）的制备。方法采用改良方法制备交错融合脂质体（IFVs）,应用激光散射粒度分析仪（PCS）对其粒径大小及分布情况进行测定,利用高压液相色谱仪测定其包封率。结果 IFVs脂质体粒径为100 nm左右。包封率为（69.0±5.4）%,远高于其他类型脂质体,并且性质稳定。结论 IFVs是一种大单层脂质体,其特点是粒径均匀（100 nm）,包封容积大,可达20~25μl/μmol脂质,可以携带足够量药物。