P27^kip1与出核因子CRM1在人淋巴瘤细胞系中的表达及相互关系

目的研究P27kip1与出核因子CRM1在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系。方法运用血清饥饿同步化处理淋巴瘤细胞株Jurkat和Raji,10%血清刺激细胞增殖。Western blot分别检测生长阻滞及增殖的淋巴瘤细胞中P27kip1与CRM1的表达。用核浆分离方法检测P27kip1与CRM1分别在胞核、胞质的定位。免疫沉淀检测P27kip1与CRM1在淋巴瘤细胞中的结合。结果在不同状态的淋巴瘤细胞中,P27kip1与CRM1蛋白水平的表达均表现为负相关,并且P27kip1的核内外分布与CRM1的核内外分布一致。免疫沉淀结果验证在淋巴瘤细胞中P27kip1与CRM1相互结合。结论出核因子CRM1可能通过与P27kip1结合而影响P27kip1的核内外分布及表达水平,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长。     

卵巢癌细胞系C-JUN激活蛋白-1与P27kip1表达的相关性

目的 探讨c-Jun激活区结合蛋白-1（Jab1）与p27kip1在卵巢癌细胞株HO-8910中的表达变化及相互关系。 方法 用血清饥饿及饥饿后释放处理HO-8910细胞,分别用Western blot及核浆分离技术检测Jab1 、p27kip1表达及亚细胞定位;用免疫沉淀方法检测Jab1与p27kip1的结合情况;脂质体介导法将Jab1基因转染HO-8910细胞,Western blot及核浆分离检测p27kip1表达。结果 血清饥饿导致HO-8910细胞生长周期停滞,p27kip1蛋白总量增加,且主要集中于胞核分布;Jab1蛋白总量减少,主要表达于核浆;血清释放后两者呈现相反的表达变化,但是p27kip1主要集中在胞质分布;p27kip1与Jab1在HO-8910细胞中存在相互结合的情况。脂质体转染Jab1后,p27kip1表达下降且定位有明显的胞质改变。结论 Jab1可能通过与p27kip1结合来介导p27kip1出核并影响其表达,从而参与调控HO-8910细胞的生长。     

反转录病毒载体介导的P27kip1促HepG2细胞凋亡简

 目的 研究反转录病毒介导的P27kip1基因过表达对HepG2细胞的影响。 方法 构建携带有人P27kip1基因的反转录病毒载体,经脂质体介导转染PA317包装细胞,G418筛选获得稳定产毒细胞株,病毒感染HepG2细胞,筛选出P27kip1阳性克隆,Western blot检测P27kip1在HepG2中的表达,并通过细胞形态学观察、MTT、FCW等方法,检测P27kip1对HepG2细胞的影响。结果 成功构建了含有人P27kip1基因的pLNCX-P27反转录病毒载体并导入包装细胞获得了稳定产毒细胞株,病毒感染HepG2后P27kip1基因可在细胞内高表达,过表达P27kip1基因的细胞生长速度受阻,较多细胞阻滞于G1期,且凋亡增多。结论 构建的pLNCX-P27载体能稳定高效地将P27kip1基因导入HepG2细胞,过表达P27kip1可抑制细胞生长,加速凋亡。     

磷酸化P27kip1的表达与非霍奇金淋巴瘤的恶性相关

目的探讨P27kip110位丝氨酸(Ser10)和187位苏氨酸(Thr187)磷酸化形式的蛋白质表达水平与非霍奇金淋巴瘤(NHL)恶性程度的关系。方法采用免疫组织化学方法检测88例NHL及15例良性增生淋巴结中Ser10、Thr187磷酸化P27kip1和P27kip1蛋白的表达,结合临床及病理资料进行统计分析。结果两种磷酸化位点的P27kip1蛋白在良性增生淋巴结(不包括生发中心)中的阳性率明显低于NHL,随着肿瘤侵袭性的增加,两种磷酸化位点的P27kip1蛋白表达水平增高,与增殖指标Ki-67呈正相关。Thr187磷酸化P27kip1蛋白的阳性率与P27kip蛋白表达水平呈正相关,Ser10磷酸化P27kip1蛋白的阳性率与P27kip1蛋白表达水平表现为负相关。结论磷酸化的P27kip1与NHL的恶性程度有关,联合检测磷酸化P27kip1与P27kip1蛋白的表达水平可为NHL的临床诊断和治疗提供参考。     

鼻咽癌中p27kip1表达及其与临床病理特征相关研究

目的 检测p27kip1蛋白在鼻咽癌中的表达,分析其与临床病理特征的关系.方法 收集60例手术活检切取的鼻咽癌组织蜡块,与30例非肿瘤鼻咽组织石蜡标本作比较.应用免疫组织化学技术检测鼻咽癌组织中p27kip1蛋白的表达,回顾性研究鼻咽癌患者的临床病理特征.结果 p27ksp1蛋白在鼻咽癌细胞核和细胞质中均有表达.鼻咽癌组织中细胞核表达阳性率为46.7%(28/60),低于非肿瘤鼻咽组织细胞核表达的90%(27/30),P＜0.01;而在细胞质中阳性率为68.3%(41/60),显著高于非肿瘤鼻咽组织的细胞质表达的20%(6/30),P＜0.01.未发现p27kip1蛋白在细胞核和细胞质表达与鼻咽癌原发灶的范围和局部侵犯程度有关,但p27kip1蛋白胞核表达与淋巴结转移、远处转移和TNM临床分期有关;细胞质表达仅与淋巴结转移和TNM临床分期有关,可见p27kip1蛋白胞核表达与临床病理的关系更为密切.结论 与非肿瘤鼻咽组织相比,p27kip1蛋白为细胞核低表达、细胞质高表达.鼻咽癌中p27kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的错误的核质定位,其在细胞核中表达的减少或丢失可能与鼻咽癌的恶性发展有关,提示p27kip1蛋白的异常表达和定位可能涉及鼻咽癌的分期和转移.     

反转录病毒载体介导的P27~(kip1)促HepG2细胞凋亡

目的研究反转录病毒介导的P27kip1基因过表达对HepG2细胞的影响。方法构建携带有人P27kip1基因的反转录病毒载体,经脂质体介导转染PA317包装细胞,G418筛选获得稳定产毒细胞系,病毒感染HepG2细胞,筛选出P27kip1阳性克隆,Western blot检测P27kip1在HepG2中的表达,并通过细胞形态学观察、MTT、FCW等方法,检测P27kip1对HepG2细胞的影响。结果成功构建了含有人P27kip1基因的pLNCX-P27反转录病毒载体并导入包装细胞获得了稳定产毒细胞系,病毒感染HepG2后P27kip1基因可在细胞内高表达,过表达P27kip1基因的细胞生长速度受阻,较多细胞阻滞于G1期,且凋亡增多。结论构建的pLNCX-P27载体能稳定高效地将P27kip1基因导入HepG2细胞,过表达P27kip1可抑制细胞生长,加速凋亡。     

三氧化二砷抑制人肝癌细胞P27kip1 187位苏氨酸磷酸化

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制与P27kipl第187位苏氨酸(P27Thr187)磷酸化的关系.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,2 μmol/L As2O3处理72 h,细胞计数法检测SMMC-7721生长,流式细胞仪检测细胞周期,核质分离、Western Blot及细胞免疫荧光技术检测P27、Thr187磷酸化的P27(p-P27T187)在SMMC-7721细胞中的表达及亚细胞定位.结果 2 ttmoVL As2O3明显抑制SMMC-7721的增殖,细胞周期阻滞在G2/M期.As2O3作用后P27蛋白总量增加,p-P27T187蛋白总量减少,并伴有Cdk2及cyclinE表达下降,同时P27发生从胞质向胞核的易位,p-P27T187核内表达减少.结论 As2O3可抑制P27T187的磷酸化,诱导P27在SMMCa721细胞核中的积聚.     

肝细胞癌中磷酸化p27kip1与JAB1的表达及意义

p27^kip1（p27）是重要的细胞周期负性调控因子,其蛋白表达水平和亚细胞分布改变与肝细胞癌的发生密切相关 。在肿瘤细胞中存在多种转录后途径抑制p27蛋白的表达,磷酸化是最重要的途径之一 。p27主要在细胞核内发挥作用,因此p27的胞质胞核定位与其功能活性密切相关。有证据显示在p27出核降解前必须经历10号位丝氨酸（Ser10）的磷酸化;而JAB1（c-Jun activation domain binding protein1）是与p27出核转运有关的一个接头蛋白。因此,本研究中我们检测了Ser10磷酸化p27、JAB1及p27在肝细胞癌及癌旁中的表达情况并结合临床资料探讨其中的临床病理意义。     

肝细胞癌患者肝组织中JAB1和P27kip1的表达变化及其临床意义

目的 研究肝细胞癌（HCC）组织中c-Jun激活域连接蛋白1（c-Jun activation domain binding protein 1,JAB1）的表达及与P27kip1(P27)间的关系,探讨JAB1与临床病理及预后的关系。方法 免疫组化检测HCC及 相应癌旁肝组织中JAB1和P27的表达。Western blot及免疫沉淀检测JAB1和P27的表达及相互作用。结果 HCC中,JAB1的表达高于癌旁肝组织,P27表达低于癌旁组织。JAB1的表达与组织分化程度、AFP值及转移相关（P<0.05）。HCC中JAB1与P27的表达呈负相关(r=－0.7077, P<0.001),并且能免疫共沉淀。结论 JAB1的表达与P27负相关,JAB1作为P27的负性调控因子,可能与HCC的恶性进展及预后相关。     

尼美舒利对食管癌Eca-109细胞增殖及COX-2和P27kip1表达的影响

目的观察选择性COX-2抑制剂尼美舒利对食管癌Eca-109细胞增殖、凋亡及COX-2表达的影响,并探讨与抑癌基因P27kip1的关系。方法用MTT法测定Eca-109细胞增殖;透射电镜及流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期;RT-PCR法检测Eca-109细胞COX-2mRNA表达变化;Westernblot检测COX-2和P27kip1蛋白表达变化。结果尼美舒利以时间、剂量依赖方式抑制Eca-109增殖,增加G0/G1期细胞比例;呈剂量依赖性诱导细胞凋亡,降低COX-2mRNA和蛋白表达,上调P27kip1蛋白表达。结论尼美舒利可抑制食管癌Eca-109细胞增殖,使细胞周期受阻于G0/G1期并诱导细胞凋亡。其机制可能是通过下调COX-2表达和上调P27kip1蛋白表达水平实现的。     

2型糖尿病患者单核巨噬细胞胆固醇外流的降低与ABCG1表达下调相关

目的 研究2型糖尿病患者巨噬细胞内胆固醇外流的变化及ABCA1、ABCG1和SR-B1的表达情况。方法 选取2型糖尿病患者30例（包括合并冠心病组与单纯糖尿病组各15例）和正常对照组15例。分离外周血单核细胞进行巨噬化培养,应用Real-time PCR与Western blot方法测定细胞ATP结合盒受体A1（ABCA1）、ATP结合盒受体G1（ABCG1）和清道夫受体B1（SR-B1）的mRNA及蛋白表达。以5%自身血清及标准血清为接受体测定巨噬细胞胆固醇流出率。 结果ABCG1在2型糖尿病患者巨噬细胞的mRNA与蛋白表达显著低于对照组,而ABCA1与SR-B1的表达在各组间无差异。2型糖尿病患者巨噬细胞的胆固醇流出率也显著低于对照组（P＜0.01）;ABCG1的mRNA表达与巨噬细胞胆固醇外流率呈显著正相关（r=0.552,r=0.630,P＜0.01）。结论 2型糖尿病患者巨噬细胞的胆固醇外流功能明显降低,与ABCG1表达下调相关。     

BER修复基因多态性与肺癌易感性的研究进展

碱基切除修复(base excision repair,BER)通路是DNA损伤修复的关键通路,通路中的8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因(human 8-oxoguanine glycosylase,hOGG1),人类X线交叉互补修复基因(X-ray repair cross-complementing group 1,XRCC1),MutY homolog(MUTYH)基因的单核苷酸多态性影响BER通路中重要的酶和蛋白质的功能,导致修复障碍,最终引起癌症发生.DNA损伤修复基因单核苷酸多态性和肺癌易感性的研究结果尚存在争议,本文对近年来BER通路基因hOGG1Ser326Cys,XRCC1 Arg194Trp,XRCC1 Arg280His,XRCC1 Arg399Gln,XRCC1-77T>C和MUTYHHis324Gln多态性与肺癌易感性的关系的研究进行汇总,并探讨了多项研究对BER基因多态性与不同肺癌亚型的关系以及与吸烟之间关系.基因多态性与肺癌易感性关系受多因素影响,其相关性尚待进一步探索.     

深圳市2008-2009年A型H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶抑制剂耐药性监测

目的 对深圳市2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂的耐药性进行监测.方法 根据原始临床样本的采集时间,按周抽取了55株2008-2009年分离到的H1N1季节性流感病毒,对其NA片段进行全长测序,选取WHO推荐的疫苗株和部分国内外分离到的H1N1季节性流感病毒作为参考株,运用Mega3.1软件进行种系发生树的构建、耐药相关位点及糖基化位点的分析.结果 对NA片段的序列分析发现2008年有2株(7.1%)出现了H275Y突变,但是2009年则有25株(92.6%)出现了该突变.提示H275Y达菲耐药突变株成为了2009年深圳市社区传播的优势株.同时还发现了一株Q136K变异株,显示对乐感清出现耐药.分子进化分析结果显示,H275Y变异成为了毒株在系统进化树上分布的主要依据.所有的深圳株NA片段上潜在的糖基化位点序列保守.结论 大量H275Y达菲耐药株的出现提示在今后的工作中应当密切关注流感病毒的耐药进展,进一步加强其耐药机制的研究.

Abstract：

Objective To analyze neuraminidase(NA) inhibitor resistance of seasonal H1N1 influenza A viruses isolated in Shenzhen during 2008 to 2009. Methods The NA gene of these viruses were sequenced. Phylogenetic analysis of the sequences was performed with Mega3. 1 software. Results In 2008, most isolates of the seasonal H1 N1 virus were susceptible to neuraminidase inhibitors, but the H275Y mutation in the neuraminidase gene region associated with high-level oseltamivir resistance had been detected in 92.6% of the strains isolated in 2009. Furthermore, a strain with Q136K was found, which showed the resistance to Zanamivir. Conclusion In the light of emerging resistance, close monitoring and understanding of the nature and dynamics of resistance mutations in influenza virus should be a priority.     

H1N1患者心肌标志物及常规生化检测的临床意义

目的:探讨心肌标志物及部分生化项目检测对于H1N1甲型流行性感冒患者(简称"甲流")的临床意义.方法:对54例H1N1甲流患者(包括4例重症甲流死亡患者)和50例正常对照者用电发光免疫分析、全自动临床化学分析检测H1N1甲流患者心肌标志物及常规生化项目.结果:与正常对照组相比,甲型H1N1感染者在治疗前血清肌酸激酶(C...     

神经系统RNA结合蛋白Musashi1 RRM1的初步结晶

目的 对Musashi1发挥功能的 RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法 通过构建Musashi1RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果 通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体。结论 Musashi1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求。     

1995-2007年深圳市H1N1流感病毒血凝素基因的序列分析

目的 研究1995-2007年深圳市流行的H1N1流感病毒血凝素(HA)的基因特性.方法 选取在该期间分离培养到的64株H1N1流感病毒,对其进行HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用Simmonic软件和Mega软件对其进行分析.结果 深圳市H1N1流感毒株在进化树上可以划分为A、B、C三个分枝.部分2005-2006年毒株与2001年毒株在同一分枝上.通过同源性分析发现部分WHO所推荐的疫苗株在时间上滞后于深圳株.深圳H1N1株的4个抗原决定簇及受体结合位点均发生了氨基酸的替换.除1995年外其余年份的毒株均在137位上发生了氨基酸的缺失.结论 1995-2007年深圳市H1N1毒株氨基酸的变异主要集中在抗原决定簇及受体结合部位.并且抗原决定簇的变异活跃区域随时间的推移发生了转移.     

BER修复基因多态性与肺癌易感性的研究进展

碱基切除修复(base excision repair,BER)通路是DNA损伤修复的关键通路,通路中的8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因(human 8-oxoguanine glycosylase,hOGG1),人类X线交叉互补修复基因(X-ray repair cross-complementing group 1,XRCC1),MutY homolog(MUTYH)基因的单核苷酸多态性影响BER通路中重要的酶和蛋白质的功能,导致修复障碍,最终引起癌症发生.DNA损伤修复基因单核苷酸多态性和肺癌易感性的研究结果尚存在争议,本文对近年来BER通路基因hOGG1Ser326Cys,XRCC1 Arg194Trp,XRCC1 Arg280His,XRCC1 Arg399Gln,XRCC1-77T>C和MUTYHHis324Gln多态性与肺癌易感性的关系的研究进行汇总,并探讨了多项研究对BER基因多态性与不同肺癌亚型的关系以及与吸烟之间关系.基因多态性与肺癌易感性关系受多因素影响,其相关性尚待进一步探索.     

多房囊性肾细胞癌18例临床病理分析

目的：探讨多房囊性肾细胞癌（ mu1ti1ocu1ar cystic rena1 ce11 carcinoma,MCRCC）的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断。方法回顾性分析18例MCRCC的临床病理学及免疫表型特征,并复习相关文献。结果18例中男性12例,女性6例,年龄26~68岁（平均55.6岁）。影像学检查均示多囊性占位,边界清楚。眼观：肿瘤切面见大小不等的多房囊腔,内含浆液性或血性液体。镜检：肿瘤囊内壁被覆单层透明细胞、复层上皮或上皮缺如,囊内成分大部分流失,纤维性囊壁或囊腔间隔中见灶状透明细胞,呈Ⅰ级细胞核,其为形态学诊断线索。免疫表型：透明细胞CD10、vimentin、EMA均阳性,Ki-67增殖指数低。18例患者平均随访43个月,均无复发或转移,预后良好。结论 MCRCC是一种罕见的肾细胞癌组织学亚型,预后良好,需与肾透明细胞癌囊性变及良性肾囊性病变相鉴别。     

HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 genes in Japanese multiple sclerosis patients

Japanese MS patients and controls were examined for the distribution of HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1, -DPA1 and -DPB1 alleles using in vitro amplification of genomic DNA and probing with sequence-specific oligonucleotides. No significant difference in frequency of the examined alleles was observed among the two groups. This is in contrast to Norwegian MS patients, where an association to a combination of certain DQA1 and DQB1 alleles has previously been demonstrated.     

结直肠癌中5-氟尿嘧啶代谢酶的表达及临床意义

目的：分析5-氟尿嘧啶（5-F1uorouraci1,5-FU）代谢酶在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系,为进一步探讨其在指导结直肠癌化疗中的潜在意义提供理论依据。方法构建含有72例结直肠癌、56例癌旁远端切缘的组织芯片,采用免疫组化EnVision两步法检测胸苷酸合成酶（ thymidy1ate synthetase,TS）、胸苷酸磷酸化酶（ thymidine phosphory1ase, TP）、二氢嘧啶脱氢酶（ dihydropyrimidine dehydrogenase,DPD）在两种组织芯片中的表达,并分析三者表达与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。结果结直肠癌组织中的TS表达水平低于癌旁远端切缘组织（ P=0.876）;其表达与TNM分期有关（P=0.043）;与患者总生存期呈正相关（P=0.027）。结直肠癌组织中TP表达水平高于癌旁远端切缘组织（P=0.315）;其表达与淋巴结转移有关（ P=0.009）;与患者预后呈负相关（ P=0.040）。结直肠癌组织中DPD表达水平高于癌旁远端切缘组织（P=0.071）;其表达与组织学类型有关（P=0.029）;DPD高表达的患者总生存期显著缩短（P=0.011）。结论在以5-FU为基础化疗的结直肠癌患者中,TS、TP、DPD可以作为预后的重要指标。TS表达与临床分期密不可分,可作为结直肠癌进展的生物学标志。TP表达与淋巴结远处转移及复发密切相关,是影响患者术后复发转移的重要因素。