微小RNA 375通过靶向PAX6对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响#br# #br#

目的探讨微小RNA 375（miR 375）和人类配对盒基因6（PAX6）在宫颈癌顺铂耐药株HeLa cisR中的表达及耐药逆转作用并初步探讨可能机制。 方法采用实时定量PCR（QPCR）检测28例正常宫颈组织、30例宫颈癌组织（14例顺铂敏感和16例顺铂不敏感）和不同顺铂敏感性细胞HeLa、HeLa cisR中miR 375、PAX6 mRNA水平,采用脂质体法向HeLa和HeLa cisR细胞转染含miR 375模拟物（mimics）的寡核苷酸探针（过表达组）和阴性对照NC（阴性对照组）,以不行任何转染的为空白对照组。采用QPCR检测转染后HeLa和 HeLa cisR细胞中miR 375和PAX6 mRNA水平,采用MTT法检测不同浓度顺铂（1、3、10、30、100 μmol／L）处理后的增殖情况并计算半数抑制浓度（IC50）以评价顺铂敏感性,Western blotting检测PAX6蛋白水平,双荧光素酶报告基因试验评价miR 375对PAX6的靶向调控作用。 结果宫颈癌组织中的miR 375水平低于正常宫颈组织（0714±0341 vs. 1006±0299）,PAX6 mRNA水平高于正常宫颈组织（1855±0928 vs. 1011±0257）,miR 375水平与PAX6 mRNA水平呈负相关（r=-0416, P＜005）。与化疗敏感组相比,化疗不敏感组的miR 375水平降低,而PAX6 mRNA水平升高（P＜005）。HeLa cisR细胞的miR 375水平低于HeLa细胞（0365±0098 vs. 1032±0135）,而PAX6 mRNA水平高于HeLa 细胞（3154±0957 vs. 1067±0168）,差异均有统计学意义（P＜005）。与其余两组相比,过表达组转染后的miR 375水平升高,PAX6蛋白和mRNA水平均降低,差异有统计学意义（P＜005）。miR 375过表达可降低顺铂IC50（P＜005）,先转染 miR 375 mimics 24 h后再转染过表达PAX6的pCMV PAX6质粒后细胞的IC50与未转染细胞的差异无统计学意义（P＞005）。 结论miR 375通过靶向PAX6参与了宫颈癌细胞的顺铂耐药,miR 375有望成为逆转宫颈癌顺铂耐药的靶点。     

下调微小RNA 3917对肺腺癌A549细胞#br# 增殖及PER2表达的影响#br#

目的 探讨微小RNA 3917（miR 3917）对肺癌细胞增殖及对生物钟基因Period2（PER2）表达的影响。方法 取复苏后的肺腺癌A549细胞培养至对数生长期,采用脂质体法向A549细胞转染10、20、50 nmol／L靶向miR 3917的 siRNA表达载体pEGFP miR 3917 siRNA质粒,转染48 h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达;根据实验设计分为对照组、空载体组和干扰组,空载体组及干扰组的质粒浓度均为50 nmol／L,采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测转染48 h后的miR 3917相对表达量,QPCR和Western blotting分别检测转染48 h后的PER2 mRNA和蛋白水平,采用CCK 8法检测各组转染24、48、72 h的A549细胞增殖抑制率,双荧光素酶靶标实验验证miR 3917与PER2的相互关系。结果 QPCR检测发现对照组、空载体组和干扰组的miR 3917相对表达量依次为1007±0.018、1.068±0.084和0.171±0.052,干扰组的miR-3917相对表达量低于对照组和空载体组,差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组、空载体组和干扰组的PER2 mRNA相对表达量依次为1060±0.129、1.086±0.229和2.920±0.927,蛋白表达量依次为0.204±0.046、0.183±0.043和0.512±0.117,干扰组的PER2 mRNA和蛋白水平均高于对照组和空载体组,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组和空载体组比较,干扰组的A549细胞增殖能力下降,转染24、48、72 h后的增殖抑制率依次为（34.192±5.268）％、（33.527±6.603）％和（30.591±7.788）％,均高于其余两组,差异有统计学意义（P＜0.05）。miR 3917可显著抑制野生型PER2 3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性,而对突变型PER2-3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 下调miR-3917可抑制肺癌细胞增殖并升高PER2水平,miR-3917对PER2有靶向调控作用,可作为肺癌防治的新靶点。     

X射线对人肺癌A549细胞Bmi-1表达的影响

目的：研究X射线照射对人肺癌A549细胞株中Bmi-1 mRNA和蛋白表达的影响。方法：用不同剂量（0、2、4、6Gy）的X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测照射0、6、12、24、48和72 h后Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,2、4、6 Gy X射线照射A549细胞后48 h内Bmi-1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）;（2 Gy 48 h组除外）,2 Gy组照射后6 h、4 Gy组12 h、6 Gy组24 h升高最显著（P〈0.05）。照射后48 h内蛋白表达升高（4Gy除外）,48 h后蛋白表达逐渐下降,至72 h时接近未照射组水平。各时间点（除4 Gy 48 h和72 h外）的蛋白表达与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,2～6 Gy剂量X射线照射48 h内可使人肺癌A549细胞Bmi-1表达升高,之后表达逐渐降低。     

miR 21表达与胃癌细胞阿帕替尼敏感性关系的实验研究#br# #br# #br# #br#

目的探讨miR 21表达与胃癌细胞对阿帕替尼敏感性的关系以及可能作用机制。 方法体外培养人胃癌AGS细胞和耐药AGSAR细胞,分别转染miR 21 inhibitor或miR 21 mimics。采用荧光定量PCR（QPCR）检测AGS和AGSAR细胞miR 21表达水平;QPCR检测不同浓度（0、2、5、10 μmol／L）阿帕替尼对AGS和AGSAR细胞p VEGFR2和p Akt mRNA表达水平的影响,以及不同miR 21表达对AGS和AGSAR细胞p VEGFR2、p Akt、PTEN mRNA表达水平的影响;采用MTT法和划痕实验检测阿帕替尼对AGS、AGSAR细胞增殖和迁移的影响。 结果AGS细胞中miR 21、p VEGFR2和p Akt表达量分别为082±009、073±009和068±008,均高于AGSAR的035±010、033±007和025±004,差异有统计学意义（P＜005）;经阿帕替尼处理后,AGSAR细胞的增殖和迁移活性明显高于AGS细胞（P＜005）。10 μmol／L阿帕替尼处理24 h后,阴性对照组AGS细胞的存活率和迁移距离分别为（3948±745）％和（7044±1157）μm,明显低于miR 21 inhibitor转染AGS细胞的（8063±827）％和（10846±1039）μm,差异有统计学意义（P＜005）;阴性对照组AGSAR细胞存活率和迁移距离（7882±814）％和（9315±986）μm,明显高于miR 21 mimics转染AGSAR细胞的（2995±674）％和（6143±985）μm,差异有统计学意义（P＜005）。转染miR 21 inhibitor后,AGS细胞中p VEGFR2和p Akt mRNA相对表达水平分别为112±013和082±010,明显高于阴性对照组的073±011和064±011,而PTEN mRNA表达水平则下调（018±004 vs. 051±008）,差异均有统计学意义（P＜005）。转染miR 21 mimics后,AGSAR细胞p VEGFR2和p Akt mRNA相对表达水平分别为017±004和012±003,明显低于阴性对照组的030±004和025±002,而PTEN mRNA表达水平则上调（053±006 vs. 044±003）,差异均有统计学意义（P＜005）。 结论上调miR 21表达可增加VEGFR 2和Akt磷酸化水平,从而提高胃癌细胞对阿帕替尼的敏感性。     

EGFR和TGF-α在肺癌细胞放疗增敏中的作用

目的 研究表皮生长因子受体（EGFR）、转化生长因子-α（TGF-α）与肺癌细胞不同放疗分割剂量的关系及可能作用机制。方法 对A549细胞采用常规分割（2 Gy／天）和大分割（4、8 Gy／天）照射，DT=8 Gy，采用实时荧光定量 PCR （QPCR）、酶联免疫吸附测定（ELISA）法、Western blotting分别检测A549细胞中EGFR、TGF-α基因和蛋白表达，另采用免疫荧光法测定γ-H2AX表达。结果 4 Gy／天和 8 Gy／天分割组A549细胞中EGFR、TGF-α mRNA表达水平均显著低于2 Gy／天组（P＜0.05）；4 Gy／天和 8 Gy／天分割组A549细胞中EGFR、TGF-α 蛋白表达均显著低于2 Gy／天组（P＜0.05）。免疫荧光法结果显示，4 Gy／天和 8 Gy／天分割组A549细胞中γ-H2AX表达明显高于对照组和2 Gy／天分割组。结论  大剂量分割放疗后EGFR、TGF-α 表达明显下调，增加A549细胞对放射线的敏感性，其机制可能与DNA损伤修复组蛋白γ-H2AX表达上调有关。     

纳米Fe3O4/C225复合物对结直肠癌LoVo细胞放射增敏作用的初步研究

目的 探讨纳米Fe3O4/C225复合物（简称复合物）对结直肠癌LoVo细胞放射增敏性的影响。方法 采用MTT法观察不同浓度复合物（0、3.125、6.25、12.5、25、50、100mg/L）作用24h后的增殖抑制率,根据实验设计分为单纯照射组、C225+照射组及复合物+照射组,采用克隆形成实验检测3组经0、2、4、6、8和10Gy X线照射后的存活分数（SF）,流式细胞仪检测3组经4Gy X线照射24h后的细胞周期情况,采用Western blotting检测经4Gy X线照射24h后的表皮生长因子受体（EGFR）蛋白水平及其相关信号通路中p-P38和p-Akt蛋白水平。结果在3.125～100mg/L范围内,随复合物浓度增加,LoVo细胞的增殖抑制率升高,0、3.125、6.25、12.5、25、50、100mg／L的增殖抑制率依次为0％、（8.950±0.086）％、（14.760±0.011）％、（29.860±0.001）％、（41.750±0.017）％、（59.770±0.010）％和（78.710±0.017）％,组间差异有统计学意义（P＜0.05）;复合物+照射组的SF、S期细胞比例及p-Akt、EGFR蛋白水平均低于C225+照射组和单纯照射组,G0／G1期、G2／M期细胞比例及p-P38蛋白水平均高于C225+照射组和单纯照射组,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 纳米Fe3O4／C225复合物可抑制LoVo细胞增殖并具有放射增敏作用,可能与G0／G1期阻滞及EGFR相关信号通路受抑制有关。     

微小RNA 507靶向调控VEGFC表达及对肝癌细胞生物学行为和PI3K／Akt通路的影响#br# #br#

目的探讨微小RNA 507（miR 507）对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移能力及PI3K／Akt信号通路的影响并分析miR 507对血管内皮生长因子C（VEGFC）的靶向调控作用。 方法采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测2014年1月至2017年3月经病理确诊的90例肝癌患者的癌组织及癌旁组织中的miR 507和VEGFC mRNA水平;采用脂质体法向人肝癌细胞HepG2转染miR 507 模拟物（过表达组）或阴性对照（NC组）,QPCR检测转染48 h后的miR 507水平,MTT法比较不同处理时间（0、12、24、48 h）各组细胞的增殖情况,Annexin Ⅴ FITC／PI流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验比较各组迁移情况,QPCR和Western blotting分别检测VEGFC及PI3K／Akt信号通路中p PI3K和p Akt的mRNA和蛋白水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR 507与靶基因VEGFC间的靶向关系和结合位点。 结果QPCR检测发现肝癌组织中的miR 507水平为0672±0089,低于癌旁组织的1142±0136,VEGFC mRNA水平为1482±0156,高于癌旁组织的1021±0087,差异均有统计学意义（P＜005）。与NC组和对照组相比,过表达组HepG2细胞的增殖活力在转染24～48 h后明显减弱（P＜001）。过表达组的凋亡率为（1726±196）％,高于NC组的（785±087）％和对照组的（813±069）％,过表达组的愈合率为（3965±487）％,低于NC组的（5818±273）％和对照组的（5724±317）％,差异有统计学意义（P＜005）。过表达组的p Akt、p PI3K和VEGFC的蛋白和mRNA水平均低于NC组和对照组,差异有统计学意义（P＜005）。双荧光素酶报告基因实验证明VEGFC是miR 507的直接作用靶点。 结论VEGFC可能通过PI3K／Akt信号通路介导miR 507对肝癌细胞HepG2增殖、凋亡与迁移能力的调控,因此miR 507可作为肝癌潜在的分子治疗靶点。     

shRNA靶向沉默ST8SIA4基因表达对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默α2, 8-唾液酸转移酶4（ST8SIA4）表达对乳腺癌BT549细胞侵袭、迁移的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）和Western blotting检测乳腺癌BT549细胞和乳腺正常上皮MCF-10A细胞中ST8SIA4 mRNA和蛋白水平。采用LipofectamineTM2000向BT549细胞随机转染成功构建的靶向沉默ST8SIA4表达的shRNA载体片段（沉默组）或无义shRNA片段（对照组）,转染48 h后采用QPCR检测ST8SIA4 mRNA水平,Western blotting检测ST8SIA4、磷酸化丝／苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）、神经纤毛蛋白2（NRP2）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达情况,Transwell实验和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力。结果 与MCF-10A细胞相比,BT549细胞的ST8SIA4 mRNA和蛋白水平均升高（P＜0.05）。转染48 h后,沉默组的ST8SIA4 mRNA和蛋白水平分别为0.19±0.02和0.13±0.02,均低于对照组的0.98±0.11和0.52±0.05（P＜0.05）;沉默组的侵袭细胞数、迁移率及p-Akt、NRP2和TNF-α蛋白相对表达量分别为（39.5±4.2）个、（16.9±1.3）％、0.22±0.03、0.31±0.04和0.27±0.06,均低于对照组的（91.3±8.5）个、（38.4±3.9）％、0.58±0.07、0.55±0.05和0.46±0.05,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ST8SIA4基因在乳腺癌BT549细胞中高表达,沉默其表达可抑制侵袭和迁移过程,可能与上调p-Akt、NRP2和TNF-α蛋白表达有关。     

微小RNA 99a 5p靶向调控IGF1R表达及对肝癌HepG2细胞侵袭迁移的影响#br# #br#

目的探讨微小RNA 99a 5p（miR 99a 5p）对肝癌细胞HepG2侵袭和迁移的影响及对胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）的靶向调控作用。 方法收集本院2014年1月至2017年3月经手术切除的90对癌组织及癌旁组织,采用实时定量PCR（QPCR）检测以上组织中miR 99a 5p及IGF1R mRNA水平;采用脂质体法向HepG2细胞分别转染miR 99a 5p模拟物（过表达组）和miR 99a 5p阴性对照（NC组）,采用QPCR法检测转染48 h后各组的miR 99a 5p水平以评价转染效率;分别采用Transwell和划痕实验比较各组的侵袭和迁移情况;QPCR和Western blotting检测各组的IGF1R mRNA和蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR 99a 5p对IGF1R的靶向作用。 结果QPCR检测结果显示,癌组织的miR 99a 5p水平为0823±0039,低于癌旁组织的1016±0013,而癌组织的IGF1R mRNA水平为1329±0024,高于癌旁组织的1035±0026,差异均有统计学意义（P＜005）。过表达组转染48 h后的miR 99a 5p水平为1487±0027,均高于对照组的1021±0013和NC组的1019±0025,差异有统计学意义（P＜005）。对照组、NC组和过表达组的愈合率分别为（605±24）％、（584±33）％和（421±29）％,穿膜细胞数分别为（921±37）个、（952±49）个和（367±45）个,过表达组的愈合率和穿膜细胞数均少于其余两组（P＜005）;过表达组的IGF1R mRNA和蛋白水平均低于其余两组（P＜005）。双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR 99a 5p显著抑制野生型IGF1R 3’ UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜001）,但是对突变型IGF1R 3’ UTR荧光素酶活性无显著影响。 结论miR 99a 5p在肝癌中表达降低,且可抑制肝癌细胞的侵袭迁移过程,可能是通过靶向调控IGF1R来实现,可作为肝癌的潜在治疗靶点。     

微小RNA-149靶向调控FOXM1的表达及其对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-149（miR-149）在非小细胞肺癌（NSCLC）中调控细胞增殖和凋亡的相关机制。方法 采用Lipofectamine脂质体法将miR-149模拟物（mimics）及其对照载体转染至A549细胞并分为miR-149转染组和miR-149对照组,同时以未转染的A549细胞作对照（未转染组）。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测各组miR-149水平以评价转染的效果,采用MTT法和Annexin V-FITC／PI流式细胞术检测转染后各组细胞增殖和凋亡情况。QPCR检测各组FOXM1基因的表达情况,Western blotting检测FOXM1蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与FOXM1之间靶向作用关系。结果 QPCR检测转染48 h后miR-149转染组的miR-149相对表达量为2.493±0.380,高于未转染组的1.077±0.321和miR-149对照组的1.283±0.273,差异均有统计学意义（P＜0.05）; miR-149 转染组转染24、48、72 h的增殖抑制率分别为（16.51±2.49）％、（22.90±3.65）％和（31.43±5.27）％,均高于其余两组,差异均有统计学意义（P＜0.05）; miR-149 转染组转染48 h的凋亡率为（29.17±4.48）％,高于未转染组的（5.34±1.72）％和miR 149对照组的（7.62±1.59）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR-149 转染组转染48 h后的FOXM1 mRNA和蛋白水平分别为0.624±0.102和0.349±0.065,均低于未转染组的0.976±0.076和0.654±0.074及miR-149对照组的0.920±0.117和0.718±0.077,差异均有统计学意义（P＜0.05）;双荧光素酶报告基因实验表明 miR-149可显著抑制野生型 FOXM1-3’UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-149可能是通过靶向FOXM1调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,可作为NSCLC分子治疗的有效靶点。     

宫颈癌CT灌注参数变化对放疗敏感性的评估分析

目的探讨宫颈癌CT灌注参数变化对放疗敏感性的评估价值。 方法收集2014年2月至2016年7月宫颈癌患者120例,均进行CT灌注扫描并计算相关参数［血流量（BF）、血容量（BV）、表面通透性（PS）和平均通过时间（MTT）］;同时给予调强放疗,盆腔照射每次18～20 Gy,每周5～6次,总照射剂量40～45 Gy。放疗4周后评价疗效。采用Logistic回归模型分析影响放疗敏感性的因素。 结果120例患者均按计划完成放疗,获完全缓解34例,部分缓解46例,稳定20例和进展20例,放疗敏感率为667％（80/120）。敏感组年龄、体重指数、肿块直径、病理类型、FIGO分期和分化程度与不敏感组的差异无统计学意义（P＞005）,两组淋巴结转移的差异有统计学意义（P＜005）。敏感组BF低于不敏感组［（5922±1630）ml／（min·100 g） vs.（7204±1294）ml／（min·100 g）］,而BV［（1214±281）ml／100 g vs.（568±193）ml／100 g］、PS［（2056±852）ml／（min·100 g） vs.（910±184）ml／（min·100 g）］与MTT［（1172±448）s vs.（1034±622）s］高于不敏感组,差异均有统计学意义（P＜005）。Logistic多因素分析显示,BV为影响宫颈癌放疗敏感性的独立因素（P＜005）。 结论宫颈癌CT灌注参数能反映和评估调强放疗的敏感性,BV为影响放疗敏感性的主要因素。     

宫颈癌CT灌注参数变化对放疗敏感性的评估分析

目的探讨宫颈癌CT灌注参数变化对放疗敏感性的评估价值。 方法收集2014年2月至2016年7月宫颈癌患者120例,均进行CT灌注扫描并计算相关参数［血流量（BF）、血容量（BV）、表面通透性（PS）和平均通过时间（MTT）］;同时给予调强放疗,盆腔照射每次18～20 Gy,每周5～6次,总照射剂量40～45 Gy。放疗4周后评价疗效。采用Logistic回归模型分析影响放疗敏感性的因素。 结果120例患者均按计划完成放疗,获完全缓解34例,部分缓解46例,稳定20例和进展20例,放疗敏感率为667％（80/120）。敏感组年龄、体重指数、肿块直径、病理类型、FIGO分期和分化程度与不敏感组的差异无统计学意义（P＞005）,两组淋巴结转移的差异有统计学意义（P＜005）。敏感组BF低于不敏感组［（5922±1630）ml／（min·100 g） vs.（7204±1294）ml／（min·100 g）］,而BV［（1214±281）ml／100 g vs.（568±193）ml／100 g］、PS［（2056±852）ml／（min·100 g） vs.（910±184）ml／（min·100 g）］与MTT［（1172±448）s vs.（1034±622）s］高于不敏感组,差异均有统计学意义（P＜005）。Logistic多因素分析显示,BV为影响宫颈癌放疗敏感性的独立因素（P＜005）。 结论宫颈癌CT灌注参数能反映和评估调强放疗的敏感性,BV为影响放疗敏感性的主要因素。     

miR 375与胃肠间质瘤细胞伊马替尼敏感性关系的实验研究#br# #br#

目的探讨miR 375与胃肠间质瘤细胞对伊马替尼敏感性的关系以及可能的作用机制。 方法收集2017年1月至2018年2月在河南省肿瘤医院病理科存档的石蜡包埋45例胃肠间质瘤（GIST）组织标本和对应的癌旁正常胃黏膜组织标本。向GIST T1细胞中分别转染miR 375 mimics（转染组）或空质粒（阴性对照组）,采用MTT法和流式细胞术检测两组细胞增殖和凋亡活性。采用荧光定量PCR法（QPCR）分别检测GIST组织中miR 375水平和GIST T1细胞中miR 375、p VEGFR2、p Akt、PTEN表达水平。 结果GIST组织和癌旁正常黏膜组织中miR 375 水平分别为0673±0078和1000±0101,差异有统计学意义（P＜005）。13例GIST组织中miR 375表达呈阳性,阳性表达率为289％。经不同浓度伊马替尼（2、5、10 μmol／L）处理后,转染组细胞增殖抑制率和凋亡率分别为（2451±210）％、（5239±423）％、（8457±464）％和（1795±366）％、（3542±357）％、（6347±324）％,与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P＜005）。经613 μmol／L伊马替尼作用后,GIST T1细胞miR 375表达量为2439±0056,显著高于未经伊马替尼处理的1000±0037,差异有统计学意义（P＜005）。经miR 375 mimics转染后,GIST T1细胞中p VEGFR2和p Akt表达水平分别为212±007、182±009,明显高于阴性对照组,而PTEN mRNA表达水平为045±012,显著低于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜005）。miR 375与p VEGFR2、p Akt mRNA表达水平呈正相关性（r=0689,0465, P＜005）,与PTEN mRNA呈负相关性（r=-0523, P＜005）。 结论上调miR 375可增加VEGFR 2和Akt磷酸化水平,从而提高GIST细胞对伊马替尼的敏感性。     

局部进展小细胞肺癌患者放疗靶区勾画的临床观察

目的探讨局部进展小细胞肺癌患者放疗靶区勾画对疗效与毒副反应的影响。 方法选择2012年10月～2014年10月间收治的初始行化疗治疗后局部进展的小细胞肺癌患者128例,随机分为对照组（n=64）和观察组（n=64）。通过增强CT定位扫描勾画靶区,两组PTV T均为化疗后残留原发灶外扩获得。对照组PTV N为阳性淋巴结引流区外扩摆位误差,观察组PTV N为GTV N外扩摆位误差,PTV T、PTV N处方剂量60 Gy／30次,2 Gy／次,每周5次。比较两组平均肺剂量（MLD）、双肺V20、有效率（RR）,并随访患者3年内肿瘤复发情况以及毒副反应。 结果观察组MLD和双肺V20分别为（955±228）Gy和（2165±376）％,均低于对照组的（1275±243）Gy和（2532±423）％,差异具有统计学意义（P＜005）。观察组RR为672％（43／64）,对照组为719（46／64）,两组差异无统计学意义（P＞005）。两组3年复发率均为1000％。对照组45例患者放射野内复发,19例患者放射野外复发;观察组48例患者放射野内复发,16例患者放射野外复发,两组差异无统计学意义（P＞005）。观察组3级以上的血液学毒性、急性放射性肺炎、体重减轻发生率分别为47％、266％和234％,均低于对照组的188％、547％和516 ％,差异均有统计学意义（P＜005）。 结论PTV N靶区勾画可有效减少化疗后局部进展的小细胞肺癌患者MLD以及双肺V20,对临床疗效和肿瘤复发无影响,并可显著降低毒副反应。     

局部进展小细胞肺癌患者放疗靶区勾画的临床观察

目的探讨局部进展小细胞肺癌患者放疗靶区勾画对疗效与毒副反应的影响。 方法选择2012年10月～2014年10月间收治的初始行化疗治疗后局部进展的小细胞肺癌患者128例,随机分为对照组（n=64）和观察组（n=64）。通过增强CT定位扫描勾画靶区,两组PTV T均为化疗后残留原发灶外扩获得。对照组PTV N为阳性淋巴结引流区外扩摆位误差,观察组PTV N为GTV N外扩摆位误差,PTV T、PTV N处方剂量60 Gy／30次,2 Gy／次,每周5次。比较两组平均肺剂量（MLD）、双肺V20、有效率（RR）,并随访患者3年内肿瘤复发情况以及毒副反应。 结果观察组MLD和双肺V20分别为（955±228）Gy和（2165±376）％,均低于对照组的（1275±243）Gy和（2532±423）％,差异具有统计学意义（P＜005）。观察组RR为672％（43／64）,对照组为719（46／64）,两组差异无统计学意义（P＞005）。两组3年复发率均为1000％。对照组45例患者放射野内复发,19例患者放射野外复发;观察组48例患者放射野内复发,16例患者放射野外复发,两组差异无统计学意义（P＞005）。观察组3级以上的血液学毒性、急性放射性肺炎、体重减轻发生率分别为47％、266％和234％,均低于对照组的188％、547％和516 ％,差异均有统计学意义（P＜005）。 结论PTV N靶区勾画可有效减少化疗后局部进展的小细胞肺癌患者MLD以及双肺V20,对临床疗效和肿瘤复发无影响,并可显著降低毒副反应。      

血清白蛋白、前白蛋白与霍奇金淋巴瘤患者近期疗效关系的临床观察#br# #br#

目的探讨血清白蛋白（ALB）、前白蛋白（PA）与霍奇金淋巴瘤（HL）患者近期疗效的关系。 方法收集2010年1月至2016年7月在解放军307医院确诊初治的103例HL患者的临床资料,并进行回顾性分析。根据治疗前ALB和PA水平进行分组,分析其对HL近期疗效的影响。 结果2～6个周期化疗后,103例HL患者中达完全缓解（CR）60 例（583％）,部分缓解（PR）37 例（359％）,总有效率（RR）为942％。ALB＜35 g／L组患者中CR 7例（200％）,ALB≥35 g／L组患者中CR 53例（779％）;PA＜200 mg／L组患者中CR 23例（383％）,PA≥200 mg／L组患者中CR 37例（860％）。与ALB≥35 g／L组比较,ALB＜35 g／L组患者多伴有B症状、分期晚、节外侵犯、IPS评分高及CR率低（P＜005）; 与PA≥200 mg／L组比较, PA＜200 mg／L组患者多伴有B症状、分期晚、节外侵犯、IPS评分高、淋巴结侵犯区域≥3及CR率低（P＜005）。Logistic 多因素分析显示仅ALB是HL治疗获CR的独立因素。 结论治疗前ALB和PA与近期疗效CR相关,对HL的近期疗效有意义。     

微小RNA 320靶向FOXM1调控食管鳞癌放射敏感性的机制研究#br#

目的探讨微小RNA 320（miR 320）对食管鳞癌（ESCC）放射敏感性的影响及可能机制。 方法采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测正常食管上皮细胞株HEEC和ESCC细胞株KYSE 150、TE 13和 Eca 109中miR 320和叉头框蛋白M1（FOXM1）的表达水平。采用脂质体法将miR 320 模拟物（mimics）及其阴性对照（NC）转染至Eca 109细胞,分为转染组和对照组。QPCR和Western blotting检测miR 320 mimics转染后FOXM1的蛋白和mRNA水平以评价miR 320对FOXM1的调控作用。克隆形成实验评价克隆形成能力;免疫荧光实验检测γH2AX荧光焦点数;Annexin Ⅴ FITC/PI双染法测定细胞凋亡;Western blotting测定XIAP、Bax、Bcl 2和cleaved caspase 3的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR 320与FOXM1之间的靶向关系。 结果QPCR检测显示,Eca 109细胞中miR 320相对表达量最低,FOXM1相对表达量最高,故选取该细胞株进行后续实验。转染48 h后,转染组miR 320表达量显著高于对照组;QPCR和Western blotting检测发现转染组FOXM1 mRNA和蛋白水平均低于对照组,差异均有统计学意义（P＜005）。与对照组相比,转染组Eca 109细胞克隆形成能力显著降低,差异有统计学意义（P＜005）;转染组照射处理后1、6、24 h γH2AX焦点数增加,差异有统计学意义（P＜005）。转染组Eca 109细胞的凋亡率高于对照组（P＜005）。与对照组比较,转染组Bax和cleaved caspase 3表达增加,XIAP和Bcl 2表达降低,差异有统计学意义（P＜005）。在野生型 FOXM1 3’UTR质粒转染细胞中,miR 320 mimics转染组Eca 109细胞的荧光素酶活性明显低于对照组（P＜005）;而在突变型质粒转染细胞中,两组细胞的荧光素酶活性的差异无统计学意义（P＞005）。 结论miR 320能增强ESCC细胞放射敏感性,可能与靶向抑制FOXM1表达有关     

Radiosensitization Effect of Overexpression of Adenovirus- mediated SIRT6 on A549 Non-small Cell Lung Cancer Cells

Objective: To explore the radiosensitization effect of overexpression of silent information regulator 6 (SIRT6) on A549 non-small cell lung cancer (NSCLC) cells. Methods: Adenovirus vector Ad-SIRT6 causing overexpression of SIRT6 was established. Western blotting and MTT assay were adopted to detect the level of SIRT6 protein and the inhibitory rate of A549 cell proliferation after different concentrations of adenovirus transduction (0, 25, 50, 100, 200, and 400 pfu/cell) for 24 h. Control group, Ad-null group and Ad-SIRT6 group were designed in this experiment and virus concentration of the latter two groups was 200 pfu/cell. Colony formation assays were employed to test survival fraction (SF) of the 3 groups after 0, 2, 4, 6, 8, 10 X-ray irradiation. Flow cytometry was used to detect the status of cell cycle of 3 groups after 48 h of 4Gy X-ray irradiation and Western blotting was used to determine the expression of apoptosis-related genes of 3 groups after 48 h of 4GyX-ray irradiation. Results: In the range of 25~400 pfu/cell, the inhibitory rate of A549 cell proliferation increased as adenovirus concentration raised. The inhibitory rates under the concentrations of 0, 25, 50, 100, 200, and 400 pfu/cell were 0%, 4.23±0.34%, 12.7±2.57%, 22.6±3.38%, 32.2±3.22% and 47.8±5.58% and there were significantly differences among groups (P<0.05). SF in Ad-SIRT6 group was lower than Ad-null and control groups after 4~10Gy X-ray irradiation (P<0.05) and the sensitization enhancement ratio (SER) was 1.35 when compared with control group. Moreover, after 48 h of 4Gy X-ray irradiation, there appeared a significant increase in G1-phase cell proportion, up-regulated expression of the level of apoptosis-promoting genes (Bax and Cleaved caspase-3), but a obvious decline in S-phase and G2-phase cell proportion and a significant decrease of the level of apoptosis-inhibiting gene (Bal-2) in the Ad-SIRT6 group (P<0.05). Conclusion: The over-expression of adenovirus-mediated SIRT6, which has radiosensitization effect on A549 cells of NSCLC, can inhibit the proliferation of A549 cells and cause G0/G1 phase retardation as well as induce apoptosis of cells.