结缔组织生长因子盖髓剂对牙髓组织形态学的影响及其意义

目的: 研究大鼠牙髓机械损伤经结缔组织生长因子(CTGF/CCN2)覆盖于损伤牙髓处后不同时间点大鼠牙髓的组织形态学变化,阐明其作用机制。方法: 选择20只Wistar大鼠,平均分为5组,随机选取一组为正常组(不做任何处理),其余4组(3、7、14和28 d组)每只大鼠在双侧上颌第一磨牙备洞,左侧为CCN2盖髓剂的实验组,右侧为PBS对照组。分别于3、7、14和28 d处死大鼠并取其牙齿标本,经固定、脱钙、切片和HE染色,观察各标本中牙髓组织的形态学变化。结果: 对照组大鼠3 和7 d时穿髓孔下方炎症较实验组明显;14 d时炎症反应减轻,有散在的修复性牙本质形成;28 d时形成坏死病灶。实验组大鼠3 d时穿髓孔下方聚集大量炎细胞,血管扩张明显;7 d时炎症减轻,淋巴细胞相对于对照组少;14 d时已无明显炎细胞存在,并形成连续完整的钙化桥;28 d时形成大量修复性牙本质。结论: 牙髓组织损伤后,CCN2参与了组织结构的重建,提示CCN2是一种良好的盖髓剂。     

circRNA＿079813调控ROR2和ERK1/2-MAPK信号通路对牙髓损伤大鼠成骨分化的影响

目的:探讨circRNA＿079813对牙髓损伤模型大鼠成骨分化的作用及其机制。方法：将70只SD大鼠随机分为7组，即假手术组、牙髓损伤组、pcDNA3.1空载体（pcDNA-null）+牙髓损伤组、过表达circRNA＿079813(pcDNA-circ)+牙髓损伤组、pcDNA-circ+siRNA-NC+牙髓损伤组、pcDNA-circ+siRNA-ROR2+牙髓损伤组、pcDNA-circ+PD98059(ERK1/2抑制剂)+牙髓损伤组，每组10只。术后3 d采用苏木精—伊红（HE）染色观察牙髓组织病理变化。检测各组碱性磷酸酶（ALP）活性，RTqPCR法检测circRNA＿079813表达，western blotting法检测ROR2、磷酸化（p-）ERK1/2、骨涎蛋白（BSP）、骨钙蛋白（OCN）、ALP、牙本质涎磷蛋白（DSPP）和牙本质基质蛋白-1(DMP-1)蛋白表达。结果：与假手术组比较，牙髓损伤组牙髓组织有明显炎症浸润和损伤特征，circRNA＿079813表达下调（P<0.05）。与pcDNA-null+牙髓损伤组比较，pcDNA-circ+牙髓损伤...     

Er:YAG激光备洞对大鼠牙髓的影响

目的 比较掺铒钇铝石榴石(Erbium:Yttrium-Aluminum-Garnet,Er:YAG)激光备洞与高速牙钻备洞后大鼠磨牙牙髓的病理变化,揭示Er:YAG激光备洞对牙髓的生物学效应.方法 雄性SD大鼠66只随机分为实验组与对照组,实验组大鼠左上第一磨牙用高速牙钻备洞,右上第一磨牙用Er:YAG激光备洞;对照组大鼠磨牙不作任何处理.于术后1 h、1 d、4 d、7 d、14 d、28 d分批处死大鼠,HE染色观察大鼠牙髓在备洞后不同时段的病理变化.结果 Er:YAG激光备洞后7 d牙髓组织病理学改变恢复正常,高速牙钻备洞后28 d牙髓组织病理学改变恢复正常.结论 Er:YAG激光备洞后牙髓组织病理学改变恢复正常要快于高速牙钻备洞.     

Sonic Hedgehog信号通路在大鼠牙髓炎中的作用

目的:观察Sonic Hedgehog(Shh)信号分子在大鼠牙髓炎中的免疫定位,探讨Shh信号通路在牙髓防御和修复中所起的作用。方法:将15只SD大鼠随机分成1d、3d和7d组,每组5只,用穿髓开放法建立大鼠牙髓炎模型,3组大鼠分别于术后1,3,7d处死,取出下颌磨牙,常规组织学处理,免疫组化方法检测Shh,Smo,Ptc,Gli1的表达,并对Shh信号通路在大鼠牙髓炎中的表达进行半定量分析,对照组为大鼠正常牙髓。结果:大鼠牙髓炎模型1,3,7dShh广泛表达于穿髓孔下方牙髓间充质细胞及远离穿髓孔的根髓细胞中,表达量随炎症的进展无显著性提高(P>0.05)。Ptc、Smo、Gli1在大鼠牙髓损伤后1d未见阳性表达,3d和7d均表达于穿髓孔下方牙髓间充质细胞中,且表达量均有显著性提高(P<0.05)。空白对照组中Shh信号通路阴性表达。结论:Shh信号通路在牙髓炎过程中表达,提示其可能被激活,参与牙髓炎症反应。     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞Bcl-2与Bax比值及细胞凋亡的关系

目的:观察大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后不同时间点脊髓神经细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达及神经细胞凋亡的情况. 方法:选取28只SD大鼠,分为对照组(4只)和损伤组(24只),损伤组再分为六个小组,每组4只. 对照组行开椎板术不压迫脊髓,损伤组开椎板压迫脊髓造成大鼠急性损伤模型,损伤组于伤后 4 h, 8 h, 1 d, 3 d, 7 d和14 d 6个时间点取材,做切片备用;免疫组织化学检测Bcl-2, Bax, TUNEL检测细胞凋亡,图像分析各时间段检测结果进行半定量分析;统计学分析各待检数据. 结果:大鼠ASCI后4 h即可见脊髓内TUNEL阳性细胞,8 h表达达高峰,此后表达量逐渐下降,14 d时仍可见少量阳性细胞;大鼠ASCI后凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax出现表达,1 d时达高峰,14 d时仍有表达. Bcl-2/Bax值4和8 h时较低以后逐渐增大到一定值,Bcl-2/Bax值越小凋亡的细胞越多. 结论:大鼠ASCI后脊髓内存在神经细胞凋亡,bcl-2和bax相关基因的表达与细胞凋亡数有相关性.     

牙髓炎模型大鼠血清褪黑素水平及其对牙髓炎症反应的抑制作用

目的：探讨牙髓炎大鼠血清褪黑素水平对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（NLRP3/caspase-1）信号通路的影响,阐明褪黑素对牙髓炎的作用机制。方法：将130只大鼠随机分为对照组（n=40）、牙髓炎组（n=60）和牙髓炎+褪黑素组（n=30）,其中30只牙髓炎大鼠随机分为牙髓炎1 d组、牙髓炎3 d组和牙髓炎5 d组,采用开髓暴露法建立牙髓炎大鼠模型,牙髓炎+褪黑素组大鼠开髓术后腹腔注射褪黑素。HE染色确定各组大鼠牙髓炎建模情况,ELISA法检测各组大鼠血清白细胞介素1β（IL-1β）和褪黑素水平以及牙髓组织中IL-1β水平,RT-PCR法检测各组大鼠牙髓组织中NLRP3和caspase-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠牙髓组织中NLRP3和caspase-1蛋白表达水平。结果：HE染色,对照组大鼠牙髓组织正常,牙髓炎组大鼠牙髓有脓腔形成,可见大量炎性细胞聚集。牙髓炎1 d和3 d组大鼠血清IL-1β水平明显高于对照组（P<0.05）,褪黑素水平明显低于对照组（P<0.05）;牙髓炎3 d组大鼠血清IL-1β水平明显低于牙髓炎1 d组（P<0.05）,褪黑素水平明显高于牙髓炎1 d组（P<0.05）;牙髓炎组和牙髓炎+褪黑素组大鼠牙髓组织中IL-1β水平明显高于对照组（P<0.05）,且牙髓炎+褪黑素组大鼠牙髓组织中IL-1β水平明显低于牙髓炎组（P<0.05）;牙髓炎组和牙髓炎+褪黑素组大鼠牙髓组织中NLRP3和caspase-1mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组（P<0.05）,且牙髓炎+褪黑素组大鼠牙髓组织中NLRP3和caspase-1mRNA和蛋白水平明显低于牙髓炎组（P<0.05）。结论：牙髓炎大鼠血清褪黑素水平降低,褪黑素可通过抑制NLRP3/caspase-1信号通路降低牙髓炎大鼠牙髓组织的炎症反应。     

促红细胞生成素和甲基泼尼松龙对大鼠急性脊髓损伤的疗效比较

目的探讨促红细胞生成素(EPO)和甲基泼尼松龙(MP)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)的疗效。方法按改良Allen′s撞击法制作急性不完全性脊髓损伤的大鼠模型。将60只雄性SD大鼠随机分为3组:EPO组、MP组和对照组,每组20只,在模型制作成功后8h、24h、3d、7d4个时间点取脊髓标本。比较各组在各个时间点上的运动功能评分、凋亡细胞计数、脊髓病理改变等指标。结果 EPO组和MP组在伤后2、8h的运动功能评分和伤后8、24h凋亡细胞计数比较,差异无统计学意义(P>0.05),但均优于对照组(P<0.01);在伤后3、7d时,EPO组的运动评分和凋亡细胞计数优于MP组(P<0.05),且均明显优于对照组(P<0.01)。结论 EPO比MP的抗凋亡作用更强、更持久,能显著减轻继发性脊髓损伤,促进运动功能恢复。     

大鼠颅脑损伤中肿瘤坏死因子-α及核转录因子-κB的变化及其意义

目的:通过观察肿瘤坏死因子(TNF-α)以及核转录因子κB(NF-κB)在颅脑损伤后脑组织中的表达变化,初步探讨两者在颅脑损伤后继发性脑损伤中的意义。方法:健康成年雄性SD大鼠64只,体重230-310g,随机分成对照组8只和颅脑损伤组56只,颅脑损伤组在外伤后1h、3h、6h、12h、24h、3d、7d处死,每组处死8只。取损伤灶周围的脑组织进行含水量以及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的测定,并进行病理切片观察其病理变化,最后用免疫组化法检测脑组织中TNF-α和NF-κB的含量。结果:1成功构建大鼠颅脑损伤的模型,颅脑损伤后的各时间点神经功能评分差异无统计学意义(P>0.05);2颅脑损伤组大鼠的脑组织含水量较对照组显著升高,并且在3d达到高峰,7d时逐渐下降,但仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);3大鼠颅脑损伤后切片表现为有大量的炎症细胞积聚,并有不同程度的脑细胞水肿,随着时间的推移逐渐加重,在第7d时,水肿较之前减轻,但仍有大量的炎性细胞浸润以及少量的纤维组织增生;4大鼠颅脑损伤后1h开始,损伤灶周围的脑组织中MDA的含量显著升高,且在之后的时间内持续升高,在3d时达到高峰,随后下降,7d时表达仍然高于对照组,而损伤组的SOD活性及GSH的活力明显降低,在7d时仍低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);5TNF-α以及NF-κB在颅脑损伤组中含量显著高于对照组,且在颅脑损伤后1h开始升高,在3d左右达到高峰,7d时稍有降低,但仍高于对照组,为高表达状态。结论:颅脑损伤后TNF-α以及NF-κB的变化趋势与继发性脑损伤的临床表现一致,参与了继发性脑损伤的病理过程。     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤组织中肾上腺髓质素表达的影响

目的:观察甲基强的松龙(MP)对大鼠脊髓损伤(SCI)组织中肾上腺髓质素(AM)表达的干预作用.方法:SD大鼠108只随机分为假手术组、MP干预组(MP组)和脊髓损伤组(SCI组),每组36只.假手术组只切除椎板不损伤脊髓,MP组和SCI组采用Allen WD法制作大鼠急性脊髓损伤模型,并于术后1 h经尾静脉分别给予50mg/kg MP和等量生理盐水.于术后2 h、8 h、1 d、2 d、3 d、6 d取骨髓组织(每个时点6只大鼠),HE染色观察脊髓损伤情况,免疫组化染色观察AM的表达,并于术后1 d、3 d、6 d行运动功能评定.结果:HE染色,假手术组各时间点无明显异常,MP组病理变化轻于SCI组.免疫组化染色,假手术组中AM低表达,SCI组AM表达增高并于术后8 h达峰值,以后逐渐降低(P＜0.01),MP组AM的表达在术后8 h、1 d、2 d、3 d均高于SCI组,差异有统计学意义(P＜0.05).运动功能评分:假手术组1 d、3 d、6 d均高于MP、SCI组,MP组在术后3 d、6 d高于SCI组,P均＜0.01.结论:急性脊髓损伤后AM表达代偿性增高并存在动态变化,MP干预可上调AM的表达从而减轻脊髓的继发性损伤.     

促红细胞生成素对大鼠磨牙牙髓血运重建术后SDF-1和VEGF表达水平及疼痛的影响

目的:探讨EPO(促红细胞生成素)对大鼠磨牙牙髓血运重建术后SDF-1、VEGF表达水平及疼痛的影响.方法:48只大鼠随机分为正常组、模型组(磨牙牙髓血运重建大鼠)、EPO-A组(磨牙牙髓血运重建大鼠腹腔注射250IU/Kg EPO)及EPO-B组(磨牙牙髓血运重建大鼠腹腔注射500IU/Kg EPO),采用ELISA...     

正畸治疗的年轻恒牙和成熟恒牙的牙髓组织中VEGF水平比较

目的：探讨正畸治疗的年轻恒牙和成熟恒牙的牙髓组织中血管内皮生长因子（VEGF）水平及其临床意义。方法收集2010年6月-2013年10月在新疆医科大学第二附院口腔科行正畸治疗拔除的无龋健康的第一前磨牙56颗,包括年轻恒牙30颗和成熟恒牙26颗,采用常规免疫组化链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（srteptvadin-bitin complex,SABC）法比较年轻恒牙和成熟恒牙牙髓标本中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达。结果年轻恒牙牙髓成纤维细胞中的 VEGF呈强阳性表达,向冠部和根部表达逐渐减弱;成熟恒牙牙髓成纤维细胞中的 VEGF呈阳性表达,向冠部和根部表达逐渐减弱。与年轻恒牙比,成熟恒牙牙髓成纤维细胞中的 VEGF表达较弱,在冠部和根部的表达较弱。结论 VEGF在人年轻恒牙和成熟恒牙牙髓组织中表达有差异,VEGF 参与恒牙牙根的发育与成熟。     

颌面部撞击伤致牙髓间接损伤的实验研究

目的探讨颌面部撞击伤导致的牙髓间接损伤的特点。方法 18只实验犬随机分为6组,以质量0.26 kg的铁质帽状圆柱体撞击致伤犬右下颌骨体部,但不直接伤及牙齿;分别于伤后6、24 h,3、7 d,24、周处死动物,分别观察右下颌第四前磨牙、第二前磨牙及左下颌第二前磨牙牙髓的组织病理学和超微结构变化。结果右下颌第四前磨牙牙髓损伤较重,但最终没有发生不可逆性坏死改变;右下颌第二前磨牙牙髓损伤相对较轻;左下颌第二前磨牙牙髓仅有轻微的一过性损伤。结论犬下颌骨撞击伤导致的牙髓间接损伤损伤范围较广,损伤程度随着距离的增加而迅速递减,损伤一般是可逆的。     

CCN2 对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

目的探讨CCN2对体外培养的人牙髓干细胞增殖、分化的影响。方法收集在延安大学附属医院口腔修复科因正畸或阻生而拔除的牙齿,酶消化法获得人牙髓干细胞,光镜下进行形态学观察,免疫荧光法检测细胞表面标志蛋白的表达。取对数生长期牙髓干细胞,加入不同浓度的CCN2将其分为CCN26．25、12．5、25、50、100μg/L组,同时设置阴性对照组;采用噻唑蓝（MTr）法检测CCN2对牙髓干细胞增殖作用的影响,通过碱性磷酸酶及Western blot检测CCN2对牙髓干细胞分化的影响。结果人牙髓干细胞呈集落状生长,免疫荧光法检测STRO-1呈阳性表达,CCN26．25、12．5、25、50、100μg／L组OD值分别为（0．78±0．05）、（0．91±0．03）、（1．23±0．09）、（1．57±0．11）、（1．61±0．15）,均高于对照组（0．51±0．02）,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;细胞增殖实验表明,CCN2可显著促进牙髓干细胞的增殖;此外,CCN2可促进牙髓干细胞碱性磷酸酶的活性,并呈现浓度依赖关系,CCN26．25、12．5、25、50、100μg/L组OD值分别为（0．32±0．04）、（0．43±0．04）、（0．61±0．03）、（0．79±0．06）及（0．81±0．07）,与对照组（0．19±0．03）比较,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;Western blot结果表明。CCN2可诱导牙本质细胞特异性标志蛋白的表达。结论CCN2可促进牙髓干细胞向成牙本质细胞的分化。     

酶消化组织块法培养人牙髓细胞

目的建立用酶消化组织块培养人牙髓细胞的方法。方法用酶消化组织块进行人牙髓细胞体外培养,倒置显微镜和透射电镜分别观察牙髓细胞形态、生长情况和超微结构,取第5代牙髓细胞测定生长曲线、免疫组化法鉴定组织来源,并检测其矿化能力。结果用酶消化组织块培养的人牙髓细胞成纤维细胞样,接种4天大部分组织块能有效贴附于培养瓶壁,第7天可见组织块边缘有细胞延展生长,第14天复层生长,呈网状,可顺利传代;牙髓细胞抗波形蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性;细胞I型胶原染色阳性,连续培养的牙髓细胞可形成矿化结节,符合牙髓细胞的形态学特征和生物学特性。结论酶消化组织块培养人牙髓细胞方法简单可行,具有较高的成功率。     

脉冲Nd∶YAG激光对犬牙活髓切断术后组织修复的影响

目的观察Nd∶YAG激光照射狗牙活髓切断术后断面的牙髓组织变化,了解Nd∶YAG激光照射条件与牙髓反应的关系。方法动物的牙分成四组,每组3颗牙。一组为对照,另三组切髓后激光照射断面,条件分别为1W、2W、3W的输出能量,时间均为5s,各组均用Dycal盖髓剂盖髓。分别于3、7、21d处死动物,组织切片光镜观察。结果接受2W输出能量激光照射的牙,术后早期,创伤牙髓的愈合优于对照组;术后21d有程度不同的牙本质桥形成,根部牙髓无明显异常,组织学疗效评价均成功。大能量Nd∶YAG激光用于切髓术有较强的损伤作用。结论适当剂量的Nd∶YAG激光照射具有一定的促进创伤愈合作用。     

经牙本质小管失活牙髓的疗效观察

目的观察牙髓失活剂经牙本质小管使牙髓失活的疗效。方法将２２６例共２４９个慢性髓炎的患牙随机分成两组。观察组１３７个牙,对照组１１２个牙,对照组按传统方法放置牙髓失活剂使牙髓失活;在观察组中,对Ｈｅ面龋坏、点隙龋坏者先刮龋洞内松软的腐烂物质,对单纯邻面颈部龋坏者则在其Ｈｅ面钻洞（深度〉１ｍｍ）,于邻面龋洞内放置丁香油或樟脑酚棉球安扶,将失活剂置于Ｈｅ面洞牙本质中层或牙本质深层,让牙髓失活剂通过牙本质     

人牙髓细胞的体外培养及生物学特性研究

目的:从年轻恒牙的牙髓组织中分离培养牙髓细胞,研究其表型及生物学特性.方法:选取因正畸或阻生拔除的年轻健康双尖牙或第三磨牙,取出牙髓,组织块酶消化法分离培养人牙髓细胞,免疫细胞化学检测第3代人牙髓细胞表面标志,并对体外培养的人牙髓细胞的矿化能力进行研究.结果:体外培养的人牙髓细胞表达Ⅰ型胶原及波形丝蛋白,少数细胞增殖可...     

牙髓干细胞对兔面神经损伤的修复作用及其机制

目的：通过手术建立兔面神经损伤模型,探讨牙髓干细胞对兔面神经损伤的修复作用,阐明其可能机制。方法：分离、培养并诱导牙髓干细胞。45只兔随机分为正常对照组、模型组和实验组,每组15只。除正常对照组外,其余各组兔沿嘴角至耳前处做长约3 cm的切口,离断面神经上颊支,建立面神经上颊支损伤的动物模型。1周后向实验组兔手术术腔部位注入0.1 mL牙髓干细胞悬液（5×10⁶个）,正常对照组兔不作任何处理,模型组兔注射等量磷酸盐PBS缓冲液。术后2周观察各组兔行为表现及面部胡须运动功能评分,HE染色观察各组兔面神经组织病理形态表现,免疫组织化学染色观察兔面神经组织中脑源神经生长因子（BDNF）和睫状神经生长因子（CNTF）阳性细胞数,透射电镜观察兔面神经组织横切片中再生神经纤维数目、纤维直径和髓鞘厚度。结果：成功分离鉴定原代幼兔牙髓干细胞,大多数呈成纤维状、长梭形。HE染色后,第3代干细胞的细胞核呈深蓝色、卵圆形,呈梭形着色深细胞为成纤维细胞样细胞。与正常对照组比较,模型组兔面部胡须运动功能评分降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组兔面部胡须运动功能评分升高（P<0.05）。与模型组比较,实验组兔治疗10周后,再生神经纤维较多,呈束状且紧密。与正常对照组比较,模型组兔面神经组织中BDNF和CNTF阳性细胞数明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组兔面神经组织中BDNF和CNTF阳性细胞数明显升高（P<0.05）。与正常对照组比较,模型组兔面神经组织横切片中再生神经纤维数目、纤维直径和髓鞘厚度明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组兔面神经组织横切片中再生神经纤维数目、纤维直径和髓鞘厚度数均明显升高（P<0.05）。结论：牙髓干细胞对面神经损伤具有一定的修复作用,其机制可能与上调BDNF及CNTF表达有关联。     

BMP2在大鼠牙髓损伤修复中的表达及其对牙髓细胞的生物学效应

目的：从体内体外两方面探讨BMP2在牙髓损伤修复，尤其是牙髓细胞分化过程中的作用。方法：建立大鼠牙髓损伤修复模型和体外人牙髓细胞连续培养，采用免疫组织化学、MTT法和酶动力学等方法，检测BMP2在体内牙髓组织损伤修复过程中的表达，并比较不同浓度rhBMP2对体外人牙髓细胞连续培养各阶段细胞增殖活性及ALP活性的影响。结果：体内牙髓组织损伤修复过程中存在BMP2的表达，牙髓组织损伤修复的不同阶段其表达部位和强度发生变化；rhBMP2可提高体外培养人牙髓细胞的增殖活性，与其本身浓度有关，并可促进人虎髓细胞ALP活性，呈浓度依赖性；结论：BMP2是参与牙髓损伤修复，尤其是牙髓细胞的增殖和分化的重要因子之一。