白藜芦醇甙对HIBD新生大鼠皮层BDNF表达影响

目的了解白藜芦醇甙(PD)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大脑皮层脑源性神经营养因子(BD-NF)表达的影响。方法 52只新生7日龄SD大鼠随机分为假手术对照组(NS组)、阴性对照组(NG组)、缺氧缺血组(HI组)、白藜芦醇甙干预组(PD组);通过结扎左颈总动脉及通入8%的氧气2 h制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型;各组按照造模后24 h、10 d分为2个亚组,免疫组化法测定各组大鼠大脑皮层BDNF的表达。结果免疫组化结果显示24 h、10 d HI组大鼠皮层BDNF表达(0.144±0.011,0.105±0.011)较NS(0.069±0.005,0.068±0.005)和NG组(0.070±0.003,0.069±0.007)增高(P<0.01),10 d PD组皮层BDNF表达(0.131±0.009)较HI组(0.105±0.011)明显增加(P<0.01)。结论白藜芦醇甙能上调HIBD新生大鼠大脑皮层BDNF的表达,对缺氧缺血后的神经元有保护作用。     

孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用

目的探讨孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生鼠神经细胞凋亡及自由基变化的影响。方法90只7日新生Wistar大鼠随机分成3组:假手术组、缺氧缺血组、药物预防组。观察脑组织缺氧缺血性损伤后6,24,48,72 h,5 d细胞凋亡情况,超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性与丙二醛(MDA)含量的变化。结果缺氧缺血组新生鼠脑细胞凋亡率和MDA含量于缺血缺氧后6 h显著高于假手术组(P<0.01),24 h达高峰,以后逐渐降低,72 h仍明显高于假手术组,至5 d时,2组差异无统计学意义。药物预防组神经元凋亡率和MDA含量于缺血缺氧后6,24,48,72 h明显低于缺氧缺血组(P<0.05);而SOD含量和GSH-PX酶活力于缺血缺氧后5 h显著低于假手术组大鼠(P<0.01),24 h下降至最低点,以后逐渐回升,72 h仍明显低于缺氧缺血组(P<0.05)。结论孕酮通过降低新生鼠缺氧缺血时脑细胞凋亡率和MDA含量,升高SOD含量和GSH-PX酶活力,拮抗细胞凋亡和自由基的产生,发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠Caspase-12的表达及参附注射液对其的影响

目的:研究新生大鼠缺氧缺血脑损伤后海马神经元细胞Caspase-12的表达及参附注射液对其的影响,探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后可能的凋亡机制及参附注射液的作用机制。方法:新生7天SD大鼠随机分为假手术组(S组)、生理盐水对照组(C组)、参附治疗组(SF组),每1组均设3、6、12、24 h及3、7天6个亚组,每个亚组8只,用Rice法制备新生大鼠HIBD模型,取右侧海马脑组织匀浆,RT-PCR检测Caspase-12 mRNA的表达,Western-blot检测Caspase-12蛋白表达,TUNEL法检测凋亡形态变化。结果:S组Caspase-12 mRNA表达最低,C组和SF组Caspase-12 mRNA均在12 h达到峰值,SF组Caspase-12 mRNA在6、12、24 h及3天较C组表达明显下降(P<0.01);Caspase-12蛋白表达S组最弱,HI后3hC组和SF组较S组明显增加(P<0.01),24 h达到峰值,7天仍较S组高(P<0.01),SF组表达在12、24 h及3天较C组显著降低(P<0.01);TUNEL法显示HI后3 h C组和SF组脑海马即出现少量凋亡细胞,随时间延长凋亡细胞呈增多趋势,24 h达高峰后开始下降;SF组24 h及3、7天均明显低于C组(P<0.05)。结论:缺氧缺血后脑海马神经元细胞Caspase-12表达增加,细胞凋亡增加,Caspase-12参与了新生大鼠HIBD后神经元损伤的凋亡机制,参附注射液能下调Caspase-12的表达,从而起到对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

不规则趋化因子在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织中的表达及参附注射液干预作用的研究

目的:探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后大脑皮质不规则趋化因子(CX3CL1)活性的变化及参附注射液对其干预作用.方法:参照Rice法制备新生大鼠HIBD模型,7日龄SD新生大鼠随机分为假手术组(S组),生理盐水对照组(C组)和参附治疗组(SF组),每一组按照观察时间点的不同,进一步分为6h、12 h、1天、3天、5天、7天六个亚组,每个亚组8只.C组于造模成功后腹腔注射生理盐水10 ml/kg,1次/天,连用3天,SF组于造模成功后即刻腹腔注射等量参附注射液,S组仅分离右侧颈总动脉后腹腔注射等量生理盐水.免疫组化法和Western-Blot法检测大脑皮质CX3CL1的表达变化.结果:免疫组化法和Western-Blot法显示CX3CL1在S组各时间点表达量均较少,差异无统计学意义(P＞0.05);C组和SF组CX3CL1在各时间点的表达水平较S组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),且在3天达到高峰,随后其表达下降;SF组CX3CL1在各个时间的表达水平均低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05),但高于S组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HIBD时CX3CL1表达增多,参与脑损伤炎症免疫反应,参附注射液能抑制CX3CL1大量表达从而抑制炎症免疫反应,对HIBD后的新生大鼠可能起到脑保护作用.     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元Bax、Bcl-2表达的影响

目的:探讨参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马神经元Bax、Bcl-2蛋白表达的影响及其治疗作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,把实验分成两部分:①观察缺氧缺血后3、7、14、28天各组的体重变化以及各组28天内生存率;②观察缺氧缺血前2h,缺氧缺血后2、12、24h,3、7、14、28天各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达。每组实验随机分为4组:假手术组(S组)、生理盐水对照组(C组)、参附预处理组(P组)、参附治疗组(SF组)。结果:SF组和P组较C组Bax表达明显下调(P<0.05,P<0.01),而Bcl-2表达显著上调(P<0.05,P<0.01),生长发育和生存情况明显好于C组。结论:参附改善了新生大鼠HIBD后的生长发育,提高了其生存率;可明显下调新生大鼠HIBD后海马神经元Bax蛋白表达及上调Bcl-2蛋白的表达。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠半胱氨酸蛋白酶-1的影响

目的:探讨参附注射液(SFI)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白和mRNA的表达。方法:制备新生大鼠HIBD模型,将新生7日龄Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组(S)、生理盐水对照组(C)、参附组(SF),每组按术后观察时间点不同进一步分为3 h、12 h、24 h、6天、14天5个亚组,采用RT-PCR方法检测病变侧大脑皮层Caspase-1 mRNA的表达,用免疫组织化学法行Caspase-1免疫阳性细胞计数。结果:C组和SF组Caspase-1 mRNA和Caspase-1免疫阳性细胞计数在24 h、6天、14天均较S组升高(P<0.01)。24 h开始增加,6天达到高峰,随后开始下降,但14天仍高于S组(P<0.01);SF组Caspase-1 mRNA和免疫阳性细胞计数在24 h、6天、14天较C组减少(P<0.01)。结论:参附注射液(SFI)下调HIBD新生大鼠Caspase-1蛋白和mRNA的表达水平,SFI对新生大鼠HIBD有保护作用。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元Bax、Bel-2表达的影响

目的：探讨参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后海马神经元Bax、Bcl-2蛋白表达的影响及其治疗作用。方法：建立新生大鼠HIBD模型，把实验分成两部分：①观察缺氧缺血后3、7、14、28天各组的体重变化以及各组28天内生存率；②观察缺氧缺血前2h，缺氧缺血后2、12、24h，3、7、14、28天各时间点新生大鼠海马CA1区神经元Bax、Bcl-2蛋白的表达。每组实验随机分为4组：假手术组（S组）、生理盐水对照组（c组）、参附预处理组（P组）、参附治疗组（SF组）。结果：SF组和P组较C组Bax表达明显下调（P〈0．05，P〈0．01），而Bel-2表达显著上调（P〈0．05，P〈0．01），生长发育和生存情况明显好于C组。结论：参附改善了新生大鼠HIBD后的生长发育，提高了其生存率；可明显下调新生大鼠HIBD后海马神经元Bax蛋白表达及上调Bcl-2蛋白的表达。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠eIF2α(p)、ATF4的影响

目的:探讨参附注射液(SFI)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠eIF2α(p)、ATF4的影响。方法:参照Rice法制备新生大鼠HIBD模型,将7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组(S)、生理盐水对照组(C)和参附治疗组(SF),每组按术后观察时间点不同进一步分为HI后6、12、24和72 h 4个亚组。用免疫组织化学方法检测病变侧大脑皮质eIF2α(p)、ATF4水平。结果:C组和SF组eIF2α(p)、ATF4表达水平均较S组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。eIF2α(p)、ATF4在HI后12 h达到高峰。HI后6、12、24、72 h SF组eIF2α(p)、ATF4表达水平均低于相应时间点的C组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HIBD后大鼠病变侧大脑皮质eIF2α(p)、ATF4水平明显升高,SFI下调HIBD新生大鼠eIF2α(p)、ATF4的水平,SFI对新生大鼠HIBD有保护作用。     

参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠eIF2a(p)、ATF4的影响

目的:探讨参附注射液(SFI)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠eIF2ct(p)、ATF4的影响.方法:参照Rice法制备新生大鼠HIBD模型,将7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组(S)、生理盐水对照组(C)和参附治疗组(SF),每组按术后观察时间点不同进一步分为HI后6、12、24和72 h 4个亚组.用免疫组织化学方法检测病变侧大脑皮质eIF2a(p)、ATF4水平.结果:C组和SF组eIF2a(p)、ATF4表达水平均较S组升高,差异有统计学意义(P<0.01).eIF2a(p)、ATF4在HI后12 h达到高峰.HI后6、12、24、72 h SF组eIF2ct(p)、ATF4表达水平均低于相应时间点的C组,差异有统计学意义(P<0.01).结论:HIBD后大鼠病变侧大脑皮质eIF2a(p)、ATF4水平明显升高,SFI下调HIBD新生大鼠eIF2a(p)、ATF4的水平,SFI对新生大鼠HIBD有保护作用.     

参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的干预作用

目的:研究参附注射液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的干预作用。方法:建立新生大鼠HIBD模型,应用HE染色、Annexin V/PI染色法、免疫组化染色法观察正常对照组、假手术组、生理盐水组及参附干预组在缺氧缺血后2 h、12 h、24 h、3天、7天、14天的病理变化、神经细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:①缺氧缺血后生理盐水组海马CA1区病理变化明显,参附干预组上述变化减轻。②正常对照组及假手术组海马CA1区Bcl-2表达较弱,手术后该区Bcl-2表达仍弱,Bax表达增强,出现凋亡细胞,以24 h最明显;参附干预组Bcl-2表达较生理盐水组增强,而Bax表达减弱(P<0.05),凋亡细胞减少。结论:HIBD后Bax蛋白表达增强,细胞凋亡增加。参附可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,使凋亡细胞减少,这可能是参附注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的机制之一。     

促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后VEGF及NF-κB表达的影响

目的对7日龄缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)大鼠进行促红细胞生成素干预,并对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达的变化情况进行检测分析。方法将75只SD新生大鼠按照随机数字表分为三组:1)假手术组取颈部正中切口,接着游离左侧颈总动脉,并进行切口缝合;2)HIBD组分离左侧颈总动脉,接着游离血管并行结扎,缝合后放入含氧量为8%的环境中2h;3)EPO处理组游离并结扎左侧颈总动脉,随后放于含氧量为8%的环境中2h,并腹腔内注射rhEPO 1次(剂量:5 000U/kg)。于6、12、24、72h后分别留取脑标本,并对脑组织中VEGF及NF-κB的表达情况进行检测。结果 1)与假手术组对比,HIBD组和EPO处理组中VEGF的表达有明显增高(P0.05);2)HIBD组NF-κB表达高于假手术组(P0.05),HIBD组高于EPO处理组(P0.05)。结论促红细胞生成素有增高VEGF蛋白表达、降低NF-κB蛋白表达作用,这一机制可能对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤起保护作用的机制之一。     

丹皮酚对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探讨丹皮酚对新生鼠缺氧缺血性脑损伤是否具有保护作用。方法7日龄SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、HIBD组、HIBD＋Pae组，分别以免疫组化和HE染色方法观察各组大脑皮质活性Caspase-3的表达与神经细胞坏死情况。结果与正常对照组比较，假手术组大脑皮质活性Caspase．3阳性细胞数差异无统计学意义（P〉0．05），HIBD组、HIBD＋Pae组差异均有统计学意义（P〈0.01），HIBD组与HIBD＋Pae组比较差异有统计学意义（P〈0.05）；HIBD＋Pae组大脑皮质神经细胞坏死率低于HIBD组（P〈0.01）。结论丹皮酚对新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。     

缺氧缺血新生大鼠脑组织超氧化物歧化酶、丙二醛的变化及高压氧的保护作用

【目的】 探讨高压氧对宫内缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonyldiade-hyde,MDA)的影响及病理影响。 【方法】 按Bjelke法制作HIBD新生大鼠动物模型,随机分为HIBD组、HIBD+HBO组、对照鼠+HBO组和对照组4组,每组30只。HBO组大鼠于术后24 h开始给予2ATA的高压氧治疗,1 h/d,持续14 d。于出生后12 h、第15天各组大鼠随机取10只,分别处死取脑,制作脑组织匀浆,检测脑组织中SOD、MDA水平,并于第15天作HE和尼氏染色观察大鼠脑组织病理学变化。 【结果】 经HBO治疗后,HIBD+HBO组大鼠脑组织SOD升高[(90.43±10.83) U/mgprot]、MDA降低[(16.76±3.80) nmol/mgprot]、海马存活神经元数目增多[(122±10.52)个/0.2 mm²],与HIBD组[(74.18±8.52)U/mgprot、(28.05±4.28)nmol/mgprot、(92±6.51)个/0.2 mm²]比较差异均有统计学意义(P<0.05)。 【结论】 高压氧可通过拮抗氧自由基、减轻脑水肿和减少神经细胞死亡,发挥对HIBD新生鼠脑组织的保护作用。     

参麦注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠IL-18表达的影响

目的:探讨参麦注射液(SMI)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠白介素-18(IL-18)表达的影响,从分子水平了解SMI对缺氧缺血性脑损伤保护作用的机制。方法:建立新生大鼠脑缺氧缺血(HI)模型,①观察缺氧缺血后新生大鼠行为的改变;②采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测新生鼠脑缺氧缺血模型后3、12、24h,3、7、14、28天脑组织匀浆中IL-18的水平;③采用HE染色观察脑组织病理改变;④采用免疫组化法检测缺氧缺血性脑损伤模型后3、12、24h,3、7、14、28d新生鼠缺氧缺血侧大脑皮层中IL-18的阳性细胞数。实验动物被随机分为4组(每组32只):假手术组(S)、生理盐水对照组(C)、参麦预处理组(P)、参麦治疗组(SM),参麦治疗组于脑缺氧缺血(HI)后立即腹腔注射SMI10ml·kg-1·d-1,连用7天。生理盐水对照组生理盐水的用法、用量同参麦治疗组。参麦预处理组在缺氧缺血前连续4天腹腔注射SMI10ml·kg-1·d-1。结果:缺氧缺血后3h出现轻度脑损伤,1天病变最严重,3、7天胶质细胞增生,14、28天出现脑萎缩。生理盐水对照组与参麦预处理组、参麦治疗组相比IL-18水平在3h、28天无明显差异(P>0.05),而在12、24h、3、7、14天均明显升高(P<0.01),生理盐水对照组与假手术组相比除在3h、28天无明显差异(P>0.05)外,在12、24h,3、7、14天有显著差异(P<0.01);预处理组与参麦治疗组比较在各时间段均无明显差异(P>0.05)。IL-18在各组均为12h开始上升,3天达高峰,7天开始下降,28天则基本恢复正常;利用免疫组化法检测左侧大脑半球脑缺氧缺血后表达IL-18的阳性细胞数,生理盐水对照组、参麦预处理组、参麦治疗组与假手术组相比,IL-18阳性细胞数在12、24h,3、7、14、28天均有明显升高(P<0.01),而3h无明显差异(P>0.05);生理盐水对照组与参麦预处理组、参麦治疗组相比在12、24h,3、7、14、28天均有显著性差异(P<0.01);参麦预处理组与参麦治疗组在3、12、24h,3、7、14、28天比较均无明显差异(P>0.05)。结论:参麦注射液可显著降低IL-18水平,对新生大鼠HIBD的保护作用可能与低IL-18的表达有关。     

新生鼠脑缺氧缺血损伤时血红素加氧酶与细胞红蛋白表达的关系研究

【目的】 探讨血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)与细胞红蛋白(cytoglobin,CYGB)表达的关系,为缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的防治提供实验依据。 【方法】 将7日龄新生SD大鼠170只随机分为正常对照组、假手术组、HIBD组、HIBD+Hemin组、HIBD+ZnPP组5组。其中HIBD组、HIBD+Hemin组及HIBD+ZnPP组在HIBD模型制备前12 h,分别腹腔注射生理盐水、Hemin及ZnPP,然后制备HIBD模型。术后于0、24、48 h采用免疫组化染色法分析HO -1及CYGB蛋白表达特点。 【结果】 缺氧后HO -1及CYGB表达随时间增长而递增,而且对于同一时间点HIBD+Hemin组HO -1及CYGB的表达均明显高于HIBD+ZnPP组,HIBD组居中,各组间比较差异有统计学意义;5组海马HO -1及CYGB表达均高度相关,0 h的r为0.687~0.916、24 h的r为0.473~0.903、48 h的r为0.659~0.962,皮质两者的表达亦有相同结果。 【结论】 Hemin诱导HO-1能使CYGB高表达,而ZnPP抑制HO-1则使CYGB表达减少;HO -1及CYGB的表达在HIBD时存在极明显的正相关性;实验证明脑缺氧缺血损伤时HO -1对CYGB的表达可能具有一定的正性调控作用。