载5-氟尿嘧啶聚乳酸纳米微粒对人眼球筋膜囊成纤维细胞抑制作用的研究

目的 探讨载5-氟尿嘧啶(5-FU)聚乳酸纳米微粒(5-FU-PLA-NPs)对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的抑制作用.方法 为实验研究.噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量(0.1、1.0、10.0、100.0和1000.0 mg/L)的空载聚乳酸纳米微粒(PLA-NPs)在不同时间点(48和72 h)对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的影响,MTT比色法检测不同剂最(0.1、1.0、10.0、100.0和1000.0 mg/L)5-FU纳米药物和5-FU原药在1～7 d内共7个时间点对成纤维细胞生长的抑制作用,计算并比较两者在7个时间点对成纤维细胞的抑制率.RT-PCR分别检测剂量为100.0 mg/L的5-FU纳米药物和5-FU原药作用成纤维细胞1、5、7 d后Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达情况.对同一天各浓度A值的比较用单因素方差分析,同一天相同浓度5-FU原药组A值与5-Fu-PLA-NPs组A值的比较用两独立样本t检验分析,采用单因素方差分析分别比较不同时间点各组COI3的相对A值.结果 空载聚乳酸纳米微粒对成纤维细胞的增殖没有影响.载5-FU纳米微粒和5-FU原药均抑制成纤维细胞的增殖,并使Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达水平降低,该抑制作用具有时间和剂量依赖性.作用初期各剂量组5-FU纳米微粒的抑制作用低于原药,随时间延长抑制作用超过原药,差异有统计学意义(P<0.05).结论 聚乳酸(PEA)具有良好的生物相容性与安全性,可作为眼部用药的载体.载5-FU聚乳酸纳米微粒具有一定的缓释功能,可长期释放药物,随着作用时间的延长,5-FU纳米药物对成纤维细胞的抑制作用超过原药,其可作为靶向缓释药物载体.(中华眼科杂志,2009,45:26-31)     

汉防己甲素及地塞米松对兔结膜成纤维细胞增殖的抑制作用

目的　观察汉防己甲素 (tetrandrine,Tet)对体外培养的兔结膜成纤维细胞 (rab-bit conjunctival fibroblasts,RCF)增殖的抑制作用 ,探讨其与地塞米松 (dexamethasone,Dex)联合应用的价值 ,并对二者的抑制作用进行比较。方法　应用 MTT法 ,测定不同浓度的 Tet、Dex及 Tet联合 Dex对 RCF增殖的抑制作用。结果　浓度为 1 0 0、80、2 0、5、1 .2 5、0 .3 1 2 5mg· L-1的 Tet对 RCF的增殖均有抑制作用 ,其抑制率分别为 86.0 0 %、78.1 5%、62 .89%、3 0 .1 9%、1 8.0 4%、9.2 1 %,与对照组相比有显著性差异。半数抑制量(ID50 ) 2 0 0 mg·L-1的 Dex在联合 5mg· L-1的 Tet后 ,对细胞生长的抑制率为 49.2 5%.结论　 Tet对 RCF的增殖有抑制作用 ,且与药物浓度成正相关。 Dex联合 Tet有协同抑制作用。 Tet可能成为一种新型的抗眼部增殖性疾病的药物     

阿魏酸钠对高糖环境下人视网膜内皮细胞表达的影响

目的:研究体外环境下高糖培养的人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCEC)经过不同浓度的阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)作用后的增殖以及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:对眼科手术新鲜的人角膜移植术后眼球进行取材并进行HRCEC的原代培养。进行实验的为生长良好的第3～4代细胞,实验分为空白对照组、低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度阿魏酸(1mg/L,2mg/L,3mg/L,4mg/L)组,用噻唑蓝比色法(MTT)检测48h后不同浓度的阿魏酸钠对其增殖的抑制作用。免疫细胞化学法用于检测低糖对照组、高糖对照组和不同浓度阿魏酸(1mg/L,2mg/L,4mg/L)组HRCEC中VEGF的表达。结果:MTT比色法结果表明:48h后不同浓度的阿魏酸钠分别作用于原代培养的HRCEC细胞增生抑制率分别为46.97%,61.55%,76.91%和83.47%。一定质量浓度范围内阿魏酸钠对高糖环境下HRCEC具有明显的增殖抑制作用(P<0.05)。低糖对照组与高糖对照组吸光度A结果相比,差异无统计学意义(P=0.068>0.05)。低糖对照组、高糖对照组与浓度分别为1mg/L,2mg/L,4mg/L的阿魏酸钠作用组作用于HRCEC 48h后免疫细胞化学背景灰度值与阳性灰度值之差分别为28.27±1.62,93.67±0.81,72.67±2.89,53.73±1.70,30.93±3.72。通过48h后加药组和高糖对照组相比,VEGF表达下降明显,且均有统计学意义(均为P<0.05),具有质量浓度依赖性。与低糖对照组相比,高糖对照组VEGF的表达明显增加(P<0.05)。结论:阿魏酸钠对体外培养的高糖环境下HRCEC的增殖及高糖引起VEGF表达具有抑制作用。     

维拉帕米抗人巩膜成纤维细胞增殖的实验研究

目的，评价维拉帕米(verapamil，Ver)对人巩膜成纤维细胞(human scleral fibroblasts, HSF)增殖的影响． 方法：培养的HSF分别加入不同浓度的Ver及5-FU，肝素(heparin，Hep)、地塞米松(dexamethasone，Dex)，用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法，在酶联免疫测定仪上测540nm处吸光值，计算出各药物浓度条件下的净增抑制率．实验数据行t检验． 结果：Ver在20mg/L以上使细胞增殖率显著下降；60mg/L以上使部分细胞生存受到影响．将Ver分别与不同浓度的5-FU，Hep、Dex合用，抗增殖作用明显增强。结论：Ver对HSF增殖有抑制作用，并能增强5-FU、Hep、Dex的抗增殖作用效果． （中华眼底病杂志，1996，12：98-100）     

苦参碱对体外培养的人角膜成纤维细胞增殖的影响

目的 研究苦参碱对体外培养的人角膜成纤维细胞增殖的影响.方法 将分离培养的人角膜成纤维细胞纯化后,用四唑盐比色试验（MTT比色法）分别测得培养0～8 d的人角膜成纤维细胞的光吸收值（A）,绘制出其生长曲线并计算出群体倍增时间.设立阴性对照组、溶媒对照组及阳性药物对照组（地塞米松160 mg/L）,不同浓度（10、20、40、80、160、320 mg/L）的苦参碱干预体外培养的人角膜成纤维细胞,在用药后的不同时间（24、48、72 h）,用MTT比色法测定各处理组的细胞光吸收值,计算出其抑制率,并分别对相应数据采用单因素方差分析或LSD-t检验进行统计分析.结果 体外培养的人角膜成纤维细胞的生长曲线近似＂S＂形,其群体倍增时间为52.17 h.不同浓度（10、20、40、80、160、320 mg/L）的苦参碱作用于人角膜成纤维细胞后24 h,其抑制率分别为5.08%、10.19%、18.66%、31.89%、48.93%、75.49%;作用48 h后,其抑制率分别为7.66%、15.58%、27.95%、43.45%、64.70%、89.70%;作用72 h后,其抑制率分别为11.57%、22.66%、35.50%、52.75%、70.66%、94.62%：随着作用时间的延长和浓度的增加,其抑制率均逐步增加,其抑制作用呈时间-剂量依赖性,与溶酶对照组两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05）.地塞米松作用于人角膜成纤维细胞24、48、72 h后,抑制率分别为37.15%、50.81%、56.99%,显示出时间-效应依赖关系;且各时间段相同浓度（160 mg/L）的地塞米松与苦参碱对人角膜成纤维细胞的抑制率两两比较,苦参碱组均高于地塞米松组（P〈0.05）.结论 在10～320 mg/L浓度范围内,苦参碱对体外培养的人角膜成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,其抑制作用呈时间-剂量依赖性,且160 mg/L苦参碱对人角膜成纤维细胞增殖的抑制作用强于同浓度的地塞米松.     

维生素E琥珀酸酯抑制人翼状胬肉成纤维细胞生长作用的研究

目的: 探讨维生素 E 琥珀酸酯(VES) 对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响, 寻找辅助治疗翼状胬肉和预防翼状胬肉复发的新方法。方法: 翼状胬肉成纤维细胞原代、传代培养,观察 VES 对细胞生长曲线的影响,四甲基偶氮唑盐(MTT) 法检测不同质量浓度 VES 对细胞增殖的影响。结果: 与对照组相比,VES 使细胞生长曲线下移,用10, 20mg/L VES 处理细胞 2, 4, 7d 后,细胞生长抑制率分别为 33.2%和 46.7%、67.9%和 76.8%、81.7%和 89.3%。MTT 法显示 VES 对细胞增殖抑制作用在一定范围内呈剂量 - 效应依赖性。结论: VES 可有效抑制翼状胬肉成纤维细胞的增殖活性。     

抗CD81抗体对培养大鼠RPE增殖性的影响

目的:观察抗CD81抗体EAT2和H121对培养大鼠视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepithelium,RPE)增殖活性的影响。方法:分别将2,10mg/L抗CD81抗体EAT2与H121加入体外培养大鼠RPE中,7d后以MTT法测定细胞生长抑制率。结果:加入抗CD81抗体后RPE增殖活性下降,10mg/LEAT2对RPE的细胞生长抑制率达72.7%。抑制作用的强弱随抗体种类及抗体浓度的不同而不同。结论:抗CD81抗体EAT2和H121可以抑制培养大鼠RPE的细胞增殖活性。     

粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增生作用的研究(英文)

目的:观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblast,HPF)增殖的影响,研究粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用,寻找辅助治疗翼状胬肉的新方法。方法:用不同浓度(0 ～160μmol/L)Tet作用体外培养的HPF,观察24 ～96h Tet对HPF的影响。MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学法检测Tet干预前后HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:在Tet20, 40, 80, 160μmol/L浓度作用24 ～72h范围内,可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。Tet干预后PCNA蛋白表达下降,当Tet的浓度在20 ～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)结论:Tet可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,在一定浓度和时间范围内抑制作用呈剂量与时间依赖性。但在高浓度时( >160μmol/L)可能存在细胞毒性作用。     

银杏叶提取物对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：研究不同浓度的银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,GBE）对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPFs)增殖和凋亡的影响。 方法：用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度(12.5,25.0,50.0,100.0mg/L) GBE在不同作用时间(24,48,72h)对体外培养的HPFs增殖的影响。用流式细胞仪检测HPFs的细胞周期及凋亡率。 结果：MTT结果显示,GBE浓度为12.5mg/L组作用24h后对HPFs的增殖无明显抑制作用（P>0.05）,其余各时间段各组均可见明显抑制HPFs的增殖,且各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测发现GBE作用48h后G₀/G₁期细胞比例增加,S期细胞比例下降,计算不同浓度GBE作用下凋亡率分别为4.37%,8.14%,11.09%,15.18%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：GBE对HPFs的增殖有明显抑制作用,并与用药剂量和持续时间有关。     

丹参酮ⅡA对抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的研究

目的:观察丹参酮ⅡA对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:用0～320mg/L丹参酮ⅡA作用体外培养的HPF,24～96h后MTT法检测药物对HPF的影响,免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性。结果:80mg/L丹参酮ⅡA作用48h后能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。丹参酮ⅡA在80～320mg/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可显著抑制HPF的增殖。     

人胚胎和兔结膜成纤维细胞对抗肿瘤药物敏感性的比较

比较了体外培养条件下人胚胎和兔结膜成纤维细胞对5种抗肿瘤药的敏感性。结果表明长春新碱和阿霉素在0.001~10mg/L、5-FU在1~1000mg/L、顺铂在0.01~10mg/L的浓度范围内时，人胚胎结膜成纤维细胞对这几种药物的敏感性显著低于兔结膜成纤维细胞（P＜0.01）；两种细胞对VP-16的敏感性差别不明显（P＞0.05）.提示在进行眼内增殖性疾病防治药物的体外筛选时，用人结膜成纤维细胞较好；将动物实验结果用于临床时，要考虑种属之间的药物敏感性差异。 （中华眼底病杂志，1994，10：223-225）     

受体蛋白质酪氨酸激酶抑制剂影响兔晶状体上皮细胞增生的研究

目的　研究受体蛋白质酪氨酸激酶 (receptorprotein tyrosinekinase,RPTK)抑制剂染料木黄酮对兔晶状体上皮细胞增生和胞膜RTPK活性的影响 ,探讨使用染料木黄酮防治后发性白内障发生的机制。方法　培养兔晶状体上皮细胞 ;测定 5、10和 15mg/L染料木黄酮作用晶状体上皮细胞 3d的氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷 (tritiatdethymidine,3 H TdR)掺入率 ,以无染料木黄酮作用的晶状体上皮细胞作为对照组 ;应用Casnetllie改良法检测不同浓度染料木黄酮作用 2 4h后 ,兔晶状体上皮细胞膜RTPK活性的变化。结果　 5、10和 15mg/L染料木黄酮作用晶状体上皮细胞 3d的3 H TdR掺入率分别为 6 30± 137、4 89± 16 6和 314± 98,与对照组比较差异均有显著意义 (P <0 0 5 ) ,且细胞增生抑制率随浓度增加而升高 ;不同浓度染料木黄酮作用 2 4h后兔晶状体上皮细胞中RTPK的活性均明显下降 ,其中 10和 15mg/L染料木黄酮作用的晶状体上皮细胞RTPK单位活性与无染料木黄酮作用者比较 ,差异均有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　染料木黄酮在体外可通过抑制细胞膜RTPK的活性而抑制兔晶状体上皮细胞增生     

干扰素α—2b对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖抑制

目的:本文评价干扰素α-2b(IFNα-2b)在青光眼滤过性手术中抗纤维化治疗的作用。方法:用MTT法检测它对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用,并与5-氟脲嘧啶(5-FU)、高三尖杉酯碱(H.H)和丝裂霉素C(MMC)的抑制作用进行对比。结果:IFNα-2b、5-FU、H.H和MMC作用于成纤维细胞48小时的半数有效抑制量IC_(50)值分别为60.578mg/L、5.447mg/L、0.531mg/L和1.329mg/L。结论:IFNα-2b对成纤维细胞的生长具有抑制作用,但远不及抗代谢药物强。干扰素对伤口愈合多环节抑制的其他作用机制有待进一步探讨。眼科学报1998;14:195～198。     

染料木黄酮对体外人LECs增生的抑制作用

目的研究染料木黄酮对人晶状体上皮细胞（LECs）增生的影响。方法通过集落实验和四唑溴盐（MTT）比色法观察不同质量浓度染料木黄酮作用12、24、48、72h后对LECs增生的影响，流式细胞仪检测其对人LECs周期的影响及凋亡的诱导作用。结果12．5、25、50、75mg／L组对细胞集落形成均有抑制作用（P〈0．05），随质量浓度增加，集落形成率减少。作用12h、24h组质量浓度75mg／L、48h组质量浓度12．5、25、50、75mg／L以及72h组各质量浓度对LECs的抑制作用与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪结果显示随质量浓度的增大，S期细胞明显增多。作用12h、24h诱导凋亡不明显；48h组12．5mg／L组出现凋亡峰，50mg／L组凋亡明显；72h组6．25mg／L组出现凋亡，随质量浓度的增加凋亡细胞数量增加。结论不同质量浓度的染料木黄酮可以抑制LECs的增生，有剂量效应关系和时间效应关系；作用一定时间，达到一定浓度可诱导人LECs凋亡。     

Effect of brief exposure to mitomycin C on viability and proliferation of cultured human Tenon's capsule fibroblasts.

PURPOSE: The purpose of this study is to determine why a single intraoperative dose of mitomycin C (MMC) appears to promote the success of glaucoma filtration surgery. METHODS: Human Tenon's capsule fibroblasts were exposed to MMC and 5-fluorouracil (5-FU) in vitro at the concentrations and durations of exposure used clinically. Cell proliferation was assessed by quantification of 3H-thymidine uptake. Cell viability was studied using a sulfarhodamine B cell protein stain and by trypan blue exclusion. RESULTS: Neither MMC (0.4 mg/ml) nor 5-FU (40 mg/ml) were cytocidal. Both 1- and 5-minute exposures to MMC were antiproliferative. A 1-minute exposure to 0.4 mg/ml inhibited 3H-thymidine uptake by 77%. For the 5-minute exposure, 3H-thymidine uptake was inhibited by 50% at 0.06 mg/ml and by 90% at 0.4 mg/ml. For 5-FU, 3H-thymidine uptake was inhibited by 50% at 10 mg/ml and by 64% at 40 mg/ml. CONCLUSIONS: Mitomycin C probably does not improve the success of filtration surgery by killing fibroblasts. The ability of a brief exposure to MMC to improve filtration surgery may be due to an almost complete inhibition of proliferation. Alternatively, it may be due to sustained tissue binding, effects on other components of wound healing, such as cell migration and extracellular matrix production, or effects on the vasculature. A 1-minute exposure may be as effective as a 5-minute exposure.     

Antiproliferative Wirkung von Genistein auf kultivierte retinale Pigmentepithelzellen vom Schwein

The isoflavonoid genistein is known as a potent inhibitor of proliferation in endothelial cells and in some tumor cell lines in vitro and in vivo. Cell growth arrest is mediated by inhbitor of the tyrosine-kinase receptor, a target for many growth factors such as fibroblast growth factor, platelet-derived growth factor, epidermal growth-factor and vascular endothelial growth factor, which may play a role in the development of proliferative vitreoretinopathy (PVR). In this study we report on the antiproliferative effect of genistein on retinal pigment epithelial cells (RPE), which is the major cell type involved in PVR. METHODS: Cell culture experiments using porcine RPE treated with different concentrations (5 up to 100 microgram/ml) of genistein in minimum essential medium +10% fetal calf serum. Inhibition of proliferation was demonstrated by two different methods: (1) uptake of 5-bromo-2-deoxyuridin (BrdU) in S phase after different exposure times (2) expression of proliferating cell nuclear antigen 72 h after scratching confluent RPE. RESULTS: Exposure of RPE to genistein resulted in a concentration-dependent inhibition of cell proliferation at concentrations over 25 microgram/ml geinistein. BrdU incorporation was reduced to 65% after 24- and 48-hour treatment with 100 microgram/ml genistein in comparison with the untreated cells. Proliferation of RPE growing into the artificial wound was inhibited when cells were exposed for 72 h to more than 25 microgram/ml genistein. CONCLUSIONS: Genistein at concentrations over 25 microgram/ml inhibits RPE proliferation. Further studies will be required to determine the applicability of genistein or other phytoestrogens in order to prevent uncontrolled wound healing processes such as PVR.     

Effects of 5-fluorouracil and mitomycin C on cultured rabbit subconjunctival fibroblasts

The authors investigated effects of two antimetabolites, 5-fluorouracil (5-FU) and mitomycin C (MMC), on proliferation and motility of cultured rabbit subconjunctival fibroblasts. Both drugs caused dose-dependent inhibition of fibroblast proliferation. These effects were reversible at lower doses (0.33 mg/l of 5-FU, 1.0 X 10(-3) mg/l of MMC) and at an early stage of treatment, but became irreversible at higher doses or after longer treatment times. The degree of growth inhibition reached a plateau after 7 days of treatment. Neither drug altered fibroblast migration in the agarose droplet motility assay or on the intra-cytoplasmic actin distribution by epifluorescent-light microscopy. These results indicate that 5-FU and MMC inhibit subconjunctival fibroblast function predominantly by their effect on cell proliferation rather than on cell motility. The clinical implications of these results may possibly support the use of a much lower total dose of subconjunctival antimetabolite than used in the 5-FU clinical trial.     

锗132对体外培养翼状胬肉成纤维细胞的增殖抑制作用观察

观察锗１３２对体外培养翼状胬肉成纤维细胞的抗增殖作用,寻找辅助治疗翼状胬肉和预防翼状胬肉复发的新方法。方法将翼状胬肉成纤维细胞行体外原代和传代培养;观察不同浓度锗１３２及丝裂霉素Ｃ对成纤维细胞生长曲线的影响及培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用和毒性作用;采用免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达,结果锗１３２可抑