肝癌组织中PTEN蛋白及hTERT表达相关性研究

目的　探讨肝癌组织及癌旁肝组织中 10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶 (PTEN)蛋白的表达与人端粒酶逆转录酶 (hTERT)的相关性。方法　采用免疫组织化学法检测 76例肝细胞癌 (HCC)及癌旁肝组织中PTEN蛋白和hTERT的表达。结果　①HCC中PTEN蛋白的阳性率 (38 2 % )和阳性强度明显低于癌旁肝组织(96 1% ) (P <0 0 1) ,且阳性信号强度与HCC分化程度相关 (P <0 0 1) ,即HCC分化愈差 ,PTEN蛋白表达愈弱。②HCC中hTERT的阳性率 (89 5 % )和表达强度明显高于癌旁肝组织 (7 9% ) (P <0 0 1) ,且阳性信号强度与HCC分化程度有关 (P <0 0 1)。③相关性分析表明 ,HCC及癌旁肝组织中PTEN蛋白表达强度和hTERT呈明显负相关 (P <0 0 1)。结论　提示在HCC发生中 ,可能由于PTEN蛋白表达降低或缺失 ,不能有效地抑制由致癌因子异常激活的hTERT ,从而使肝细胞异常增殖和发生恶性转化。     

原发性肝细胞癌组织中Livin和Smac蛋白的表达

目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)组织中Livin和Smac蛋白的表达.方法:采用免疫组织化学法检测50例HCC组织、25例癌旁组织和15例正常肝组织中Livin和Smac蛋白的表达情况.结果:HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Livin阳性率分别为84.0%(42/50)、32.0%(8/25)和0,与非肝癌组织比较,HCC组织中Livin阳性率较高(χ2=27.840,P<0.01).HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中Smac的阳性率分别48.0%(24/50)、88.0%(22/25)、100%(15/15),与非肝癌组织比较,HCC组织中Smac阳性率较低(χ2=28.373,P<0.01).Livin和Smac蛋白的表达均与HCC组织的分化程度无关(P>0.05).HCC组织中Livin和Smac蛋白的表达呈负相关(rs=-0.236,P<0.05).结论:Smac和Livin蛋白可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环.     

SIAh2与Sprouty2在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨SIAh2与Sprouty2在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况及二者的相关性。方法:通过免疫组化方法检测51例肝癌组织、33例癌旁组织(取距癌灶2 cm的组织)及16例正常肝组织中SIAh2及Sprouty2的表达。结果:SIAh2在HCC中的表达阳性率高于癌旁组织及正常肝组织,且癌旁组织表达阳性率高于正常肝组织,而Sprouty2在HCC中的表达阳性率低于癌旁组织及正常肝组织,差异均具有统计学意义(P<0.05)。SIAh2及Sprouty2在HCC中表达的阳性率与肿瘤分化程度及肿瘤大小呈负相关(P<0.05)。结论:SIAh2在HCC中高表达,而Sprouty2在HCC中低表达,二者呈负相关,SIAh2及Sprouty2可能影响HCC的发生、发展。     

肝细胞癌组织中Skp2的表达及与p27kip1、PCNA蛋白表达的关系

目的:探讨Skp2的表达在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用,及其与p27kip1(p27)和PCNA的关系。方法:收集76例HCC及癌旁组织,l0例肝血管瘤旁肝组织的临床病理档案资料,l0例HCC及癌旁肝新鲜组织,采用免疫组织化学方法及免疫印迹技术检测Skp2、p27及PCNA蛋白在这些组织中的表达。结果:免疫印迹结果显示:Skp2在HCC组织中的表达明显高于对应的癌旁肝组织。免疫组织化学结果显示HCC中Skp2的阳性率(24.08%)显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.001)。Skp2的表达与肝癌组织分化程度,血清AFP值及转移有关(P<0.05)。p27在正常肝组织和癌旁组织中的表达明显高于HCC组织(P<0.001)。HCC组织中PCNA蛋白的表达明显高于癌旁和正常组织(P<0.01)。HCC组织中Skp2的表达与p27呈负相关(P<0.001);与PCNA呈正相关(P<0.01)。结论:Skp2在HCC组织中表达是上调的,可能是通过作用于细胞周期调控蛋白p27,加速了对p27泛素化依赖的蛋白降解,使其表达及代谢发生异常。导致细胞周期失控并促进细胞异常增殖,从而参与了HCC的发生和发展。     

原发性肝细胞癌中p16和cyclin D1蛋白表达及p16突变研究

目的 :研究p1 6和cyclinD1蛋白表达及p1 6基因第 2外显子突变与原发性肝细胞癌 (HCC)发生的关系。方法 :利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应———单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术分别检测 44例HCC及癌旁肝组织p1 6和cyclinD1蛋白表达和 1 2例新鲜手术肝癌组织的p1 6基因突变。结果 :HCC中p1 6蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织 (P <0 .0 1 ) ,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织。 1 2例新鲜HCC标本中p1 6基因第 2外显子突变率为 1 6 .7% (2 /1 2 ) ,癌旁组织未发现p1 6基因第 2外显子突变 ;有p1 6基因突变的HCCp1 6蛋白表达呈阴性。结论 :p1 6蛋白失活或 /和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一 ;HCC存在p1 6基因第 2外显子突变 ,但不是频发事件 ;在HCC形成过程中 ,p1 6基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用     

肝细胞癌组织中P16、P21蛋白表达的临床病理意义

目的　探讨P16和P2 1蛋白表达与肝细胞癌 (HCC)临床病理的关系。方法　应用免疫组织化学SABC法检测 4 6例HCC癌及其配对 38例癌旁肝组织P16和P2 1蛋白的表达 ,结合临床病理资料分析其意义。结果　P16蛋白的表达缺失率 ,在HCC癌组织 (5 8.7% )明显高于癌旁肝组织 (34.2 % ) (P <0 .0 5 ) ;在EdmondsonⅢ～Ⅳ级HCC(78.9% )显著高于EdmondsonⅠ～Ⅱ级HCC(4 4 .4 % ) (P <0 .0 5 ) ,在直径 >3cmHCC(6 5 .0 % )显著高于直径≤ 3cm早期HCC(16 .7% ) (P <0 .0 1) ,但在有无门脉癌栓组间比较则无明显差别。P2 1蛋白的表达缺失率 ,在HCC(80 .4 % )也显著高于癌旁组织 (4 7.4 % ) (P <0 .0 1) ,但在不同分化程度、肿瘤大小及有无门脉癌栓形成组间比较则无统计学差别。结论　P16蛋白的表达缺失与HCC分化程度及侵袭进展密切相关。     

肝细胞肝癌组织中p34cdc2表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的:探讨p34cdc2激酶在肝细胞肝癌(HCC)发生发展中的作用及与增殖和凋亡的关系. 方法:收集HCC(含癌旁组织42)标本47例,正常肝组织10例,采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2激酶的表达并结合增殖与凋亡特征进行分析. 结果:在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织细胞中p34cdc2表达定位于胞质中,在癌组织中过表达,差异有统计学意义(P＜0.01). 肝癌、癌旁组织中的增殖指数(PI)分别为(30.34±4.46)%与(27.88±5.89)%,肝癌组织明显高于癌旁组织(P＜0.05);肝癌、癌旁组织中的凋亡指数(AI)分别为(8.62±2.28)%与(7.38±2.61)%,肝癌组织明显高于癌旁组织(P＜0.05);p34cdc2蛋白阳性组PI(49.26±4.81)%显著高于阴性表达组(23.07±4.15)%(P＜0.05),AI无明显差异(P＞0.05). 结论:HCC中增殖与凋亡均高于癌旁组织;p34cdc2和PCNA一样可作为反映HCC细胞分裂增殖能力的有效指标;p34cdc2并不是HCC凋亡所必须.     

肝细胞肝癌组织中p34cdc2表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的:探讨p34cdc2激酶在肝细胞肝癌(HCC)发生发展中的作用及与增殖和凋亡的关系. 方法:收集HCC(含癌旁组织42)标本47例,正常肝组织10例,采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2激酶的表达并结合增殖与凋亡特征进行分析. 结果:在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织细胞中p34cdc2表达定位于胞质中,在癌组织中过表达,差异有统计学意义(P＜0.01). 肝癌、癌旁组织中的增殖指数(PI)分别为(30.34±4.46)%与(27.88±5.89)%,肝癌组织明显高于癌旁组织(P＜0.05);肝癌、癌旁组织中的凋亡指数(AI)分别为(8.62±2.28)%与(7.38±2.61)%,肝癌组织明显高于癌旁组织(P＜0.05);p34cdc2蛋白阳性组PI(49.26±4.81)%显著高于阴性表达组(23.07±4.15)%(P＜0.05),AI无明显差异(P＞0.05). 结论:HCC中增殖与凋亡均高于癌旁组织;p34cdc2和PCNA一样可作为反映HCC细胞分裂增殖能力的有效指标;p34cdc2并不是HCC凋亡所必须.     

c-IAP1和c-IAP2及Survivin在肝细胞性肝癌中的表达

目的 :探讨原发性肝细胞性肝癌 (HCC)中凋亡抑制蛋白c IAP1,c IAP2和Survivin的表达及其意义。方法 :采用免疫组织化学技术 (S P法 )和图像分析技术检测 38例原发性肝细胞性肝癌、18例癌旁肝硬化组织和 10例正常肝组织中c IAP1,c IAP2和Survivin表达 ,并结合临床病理特征进行分析。结果 :c IAP1和c IAP2在HCC中的表达率分别为 84 2 %和 10 0 % ;在癌旁肝硬化组织中的表达率均为 10 0 % ;c IAP1和c IAP2在HCC和癌旁肝硬化组织中表达强度与其在正常肝组织中的表达强度的差异无显著性 (P >0 0 5 )。Survivin在 73 7% (2 8/38)的HCC中表达 ,在正常肝组织中的表达率为 7 9% ;且在HCC中的表达强度和表达率均高于正常肝组织 (P <0 0 5 )。c IAP1,c IAP2和Survivin在高分化、中分化和低分化肝细胞肝癌中的表达强度的差异均无显著性 (P >0 0 5 )。c IAP1,c IAP2和Survivin在有血管内癌栓形成的HCC中的表达强度高于无血管内癌栓形成的HCC中的表达强度 (P <0 0 5 )。c IAP2在肝细胞性肝癌、癌旁肝硬化组织和正常肝组织中表达强度分别高于c IAP1(P <0 0 5 ) ;而cIAP1高于Survivin(P <0 0 5 )。结论 :Survivin在HCC中的表达率和表达强度增加 ;c IAP2在肝细胞性肝癌中的表达强度最高 ;c IAP1,c IAP2和Survivin     

肝细胞癌p53、bcl-2蛋白及微血管密度的检测及意义

目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织中p53、bcl-2蛋白的表达及其与HCC血管形成及临床病理的关系.方法 应用免疫组织化学SP法,对石蜡包埋的50例HCC癌组织和10例正常肝组织(对照组)标本进行检测. 结果 (1)p53蛋白在HCC癌组织(28/50,56%)的表达显著高于癌旁肝组织和对照组(均为0,P＜0.01),其中癌旁有肝硬化组(25/3,69.4%)显著高于癌旁无肝硬化组(3/14,21.4%,P＜0.01).bcl-2在癌旁肝组织(62%)的表达高于HCC癌组织(24%,P＜0.01).微血管密度(MVD)在癌组织中高于癌旁及正常肝组织.(2)在HCC癌组织p53蛋白表达与HCC低分化及门静脉癌栓的形成呈正相关;MVD与HCC门静脉癌栓的形成呈正相关,且其值在p53阳性组或bcl-2阳性组均明显高于阴性组. 结论 p53和bcl-2对促进HCC新生血管形成有一定作用;p53和MVD对判断HCC患者预后有一定意义.     

肝细胞癌c-fos的表达及其与乙型肝炎病毒的关系

目的 研究肝癌组织中ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｃｏｆ ｍＲＮＡ的表达及其与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的关系。方法 采用免疫组化及原位杂交技术检测５９例肝细胞癌组织及５６例癌旁组织中ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ、ｃ－ｆｏｓ蛋白及ｃ－ｆｏｓ ｍＲＡＮ的表达。结果 癌旁肝组织ＨＢｓＡｇ阳性率为８７．５％（４９／５６）。肝癌组织ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为５９．３％（３５／５９）。肝细胞癌组织、癌旁肝组织ｃ－ｆｏｓ蛋白 阳性率     

膜联蛋白A4在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的观察膜联蛋白A4（Annexin A4）在不同肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达情况,探讨其临床病理意义。方法先应用RT-PCR验证ANX A4在不同类型肝组织中mRNA的表达,再应用免疫组织化学方法检测在15例正常肝组织、15例乙肝后肝硬化组织和63例不同表型肝癌组织标本中的表达,探讨其差异表达与临床病理资料之间的联系及其意义。结果（1）ANX A4mRNA表达水平在肝硬化及肝癌组织中均比正常肝组织上调（P〈0．05）,但肝硬化组与肝癌组差异无统计学意义（P〉0．05）;（2）ANXA4蛋白阳性表达率正常肝组织为20％,乙肝后肝硬化组织为26．67％;在63例HCC中阳性率为49．21％,癌旁组织为61．90％,其中小肝癌阳性率为50．00％,大肝癌为64．29％,多发癌为28．57％,相应癌旁组织阳性率分别为50．00％、64．29％、66．67％。随着肝细胞的恶性转化并进展,ANXA4蛋白呈逐渐上调趋势,但当肿瘤出现侵袭转移时反而下调。与临床病理指标的相关性研究表明Annexin A4与HCC进展及侵袭相关。结论（1）从正常肝一肝硬化一肝癌组织,Annexin A4的mRNA表达水平逐渐上调;（2）ANxA4蛋白在HCC组织中的表达明显失调,其变化可能与HCC进展及侵袭相关。     

肝细胞癌组织中丙型肝炎NS3蛋白对P53蛋白表达的影响

目的探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）及其癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３蛋白对Ｐ５３蛋白表达的影响及其在肝癌发生中的作用。方法用免疫组织化学技术检测４７例乙型肝炎病毒阴性的ＨＣＣ及其癌旁肝组织中ＨＣＶＮＳ３蛋白和Ｐ５３蛋白的表达。结果ＨＣＶＮＳ３蛋白在ＨＣＣ中的阳性率（６２％）明显低于癌旁肝组织（８３％）,Ｐ＜００２５。癌组织中其表达强度与癌细胞分化程度呈相关性（Ｐ＜００２５）。Ｐ５３蛋白在癌组织中的阳性率（８１％）明显高于癌旁组织（４７％）,Ｐ＜００２５;癌细胞分化愈差,表达愈强（Ｐ＜００５）;癌组织中Ｐ５３蛋白表达与ＨＣＶＮＳ３蛋白的表达无相关性（Ｐ＞０５）,而癌旁肝组织中两者表达呈显著相关性（Ｐ＜００１）,ＨＣＶＮＳ３蛋白阳性患者中Ｐ５３蛋白表达明显高于ＨＣＶＮＳ３阴性病例,Ｐ＜００５。结论ＨＣＶＮＳ３蛋白可能是在肝细胞转化早期通过内源性机制间接作用于Ｐ５３基因使其突变导致肝细胞癌变。     

成纤维细胞激活蛋白与慢性乙型肝炎相关性肝病的关系

目的 通过比较乙型肝炎(乙肝)相关性肝癌、乙肝肝硬化以及慢性乙肝患者肝组织中成纤维细胞激活蛋白(FAP)水平,探讨FAP在乙肝相关性慢性肝脏疾病的表达差异及其意义.方法 收集47例乙肝相关性肝癌、29例乙肝肝硬化(S4期)、22例慢性乙肝(S1～S3期)及17例因良性病变行肝切除术的肝组织,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测其中FAP的表达情况;采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测组织及血清中FAP蛋白表达水平.结果 在肝癌、肝硬化、肝炎以及对照组肝组织中,FAP mRNA表达的差异倍数值分别是4.73±1.60、1.86±1.04、0.98±0.80及1.00±0.00,四者比较差异有统计学意义(F=7.156,P=0.000);ELISA结果显示FAP蛋白在肝癌患者组织中1μg总蛋白平均含量为(1 288.28±695.82) pg/mL,而肝硬化组织为(1 176.11±677.43) pg/mL,肝炎组织为(1 044.58±389.48) pg/mL,对照组为(848.70±540.74)pg/mL,差异有统计学意义(F=3.004,P=0.034).结论 FAP在肝炎、肝硬化、肝癌以及对照组的mRNA及蛋白表达水平存在差异,随着疾病的进展,FAP呈渐进性表达.     

原发性肝细胞癌癌组织中p33ING1b与p53基因的表达

目的研究p33ING1b与p53蛋白在原发性肝细胞癌中表达的相关性及ING1b基因在原发性肝细胞癌中的突变率.方法应用免疫组织化学SP方法检测了57例原发性肝细胞癌癌组织、51例癌旁肝组织及12例正常肝组织中p33ING1b和p53蛋白的表达,并分析了原发性肝细胞癌癌组织中乙肝病毒(HBV)的感染率;应用聚合酶链式反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测了28例配对癌及癌旁肝组织中ING1b基因两个外显子的突变情况,对有异常泳动条带的DNA片段分别克隆测序.结果在57例原发性肝细胞癌癌组织中,p33ING1b、p53蛋白的阳性率分别为42.1%和57.9%,p33ING1b、p53表达均呈阳性者有19例(33.3%),且两者在癌组织中阳性分布区域相同;p33ING1b蛋白表达与p53蛋白表达在癌组织中呈显著正相关(r=0.783, P<0.01);配对癌旁肝组织及正常肝组织中p53蛋白表达均为阴性,p33ING1b蛋白在13例癌旁肝组织及2例正常肝组织中呈弱阳性表达;在57例原发性肝癌组织中有35例(61.4%)HBV X蛋白呈阳性,其病理类型均为肝细胞肝癌,在51例癌旁肝组织中检出HBV X蛋白阳性者39例(76.47%),癌组织中HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关(P<0.01);PCR-SSCP结果表明,ING1b基因在原发性肝细胞癌中突变率较低为7.1%(2/28).结论 p33ING1b、p53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达呈显著正相关,p33ING1b的存在可能还有其他不依赖p53蛋白的途径;HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关;基因突变不是p33ING1b丧失抑癌功能的主要因素.     

应用组织芯片技术研究肝癌与乙肝病毒感染的关系

目的　研究肝细胞性肝癌 (HCC)与乙肝病毒感染的关系。方法　制作包含 40例肝细胞性肝癌及相应的癌旁和非癌组织的组织芯片。以免疫组织化学方法 (SP法 )检测 40例肝癌组织及其相应的癌旁组织及非癌组织中的 HBs Ag和 HBc Ag表达情况。结果　 40例肝癌组织及其相应的癌旁组织和非癌组织中的 HBs Ag检出率分别为 7.5 %、40 %和 45 %;HBc Ag的检出率分别为 2 0 %、5 2 .5 %和 6 7.5 %;HCC肿瘤组织中的 HBs Ag和HBc Ag的表达率明显低于癌旁及非癌组织 (P<0 .0 1)。结论　 HCC的发生与 HBV感染有密切关系 ,随着 HCC的发展 ,HBV抗原的表达降低。组织芯片技术是可高效进行肿瘤分子病理研究的技术平台 ,能够在严格、均一的实验条件下 ,高通量、快速、平行地检测大批量组织样本中的一个或多个实验指标。     

肝细胞癌发生中丙型肝炎病毒NS3蛋白对诱导型一氧化氮合酶表达的影响

OBJECTIVE: To investigate hepatocarcinogenesis by detecting the effect of HCV NS3 protein on expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA in hepatocellular carcinoma (HCC) and pericarcinomatous liver tissues(PCLT). METHODS: The expression of HCV NS3 protein and iNOSmRNA was detected by immunohistochemical technique (SP method) and in situ hybridization in specimens of HCC and PCLT from 52 patients with HBV(-). The relationship between the positive rate and the signal strength was tested statistically. RESULTS: The positive rate of HCV NS3 protein in HCC was lower (46.2% vs. 67.3%), and signal strength was weaker than those in PCLT. The signal strength of HCV NS3 protein was correlated with the degree of carcinomatous cells differentiation in HCC (P < 0.01). The positive rates (80.8% and 90.4%) of iNOSmRNA in HCC and PCLT had no statistical difference. Signal intensity of iNOSmRNA in HCC was weaker than that in PCLT. The higher HCVNS3 protein expression level was, the stronger iNOSmRNA signals in PCLT (P < 0.01). In particular, the localization and patterns of HCV NS3 protein were much similar to those of iNOSmRNA in the PCLT of some patients. CONCLUSIONS: HCV NS3 protein may exert its hepatocarcinogenic effect in the early stage on host cells by increasing product of nitric oxide, which may bring about transformation of hepatocytes.     

CD105在原发性肝细胞癌血管内皮细胞的表达及临床意义

目的研究原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织血管内皮细胞CD105表达与根治术后早期复发的关系.方法 HCC行根治性切除术后随访1年以上患者32例(分为1年内有复发组和无复发组),用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测肝癌组织血管内皮细胞CD105的表达情况.结果 CD105在边缘癌组织、癌旁组织及正常肝组织的阳性例数分别为21、8、2例,其差异具有显著性意义(P＜0.01);边缘癌组织CD105的阳性表达率与术后早期复发有关(P=0.004).1年复发组边缘癌组织微血管密度IMVD-CD105(53.69±12.16)明显高于1年未复发组(37.80±16.62),差别有显著意义(t=3.37,P=0.002);而癌旁组织IMVD-CD105的表达在两组之间无统计学意义(t=1.52,P=0.199).中心处癌组织中CD105 mRNA的表达水平为(0.45±0.02),明显高于正常肝组织(0.26±0.02)(P＜0.05);肿瘤边缘处癌组织中CD105 mRNA的表达水平为(0.65±0.08),明显高于中心处癌组织(P＜0.05).边缘癌组织CD105 mRNA高表达与根治术后早期复发有关(t=4.34,P＜0.01);中心处癌组织CD105 mRNA表达与根治术后早期复发无关(t=0.93,P＞0.05);边缘癌组织IMVD、CD105 mRNA表达与患者年龄、癌肿的大小、临床病理分期和病理类型等均无关(P＞0.05).结论 CD105-IMVD与原发性肝细胞癌术后早期复发密切相关,可能是肝细胞癌的一个独立的预后指标;HCC边缘处癌组织CD105 mRNA表达水平明显高于中心处癌组织及正常肝组织,且其表达与肝癌的术后早期复发有关.