脂质过氧化在再灌流性肝损伤中的作用

采用低流率-再灌流模型研究脂质过氧化在再灌流性肝损伤中的作用,肝脏经过90min低速率灌流未见明显损伤,当灌流速率恢复到正常后中心静脉周围区(PC区)细胞发生迅速不可逆损害,并伴有丙二醛生成率大幅度上升,低速率灌流期间,灌流液中黄嘌呤与次黄嘌吟浓度由原来的1.5和3.6μmol·L~(-1)逐步升高至5.5和11.5μmol·L~(-1),自由基清除剂儿茶酸能使再灌流期丙二醛生成率由295 nm01·g~(-1)·h~(-1)下降至109 nmol·g~(-1)·h~(-1),并使LDH释放率减少约50％,PC区细胞死亡率减少89％,再灌流初期用氮饱和灌流液冲洗3 min,使再灌流所致的LDH释放下降约50％,PC区细胞死亡率减少84％,别嘌吟醇(2～6mmol·L~(-1))对防止再灌流性肝损伤表现出明显的剂量效应关系。 与预计结果相反低浓度别嘌呤醇(0.5～1mmol·~(-1))能增加再灌流性肝损伤,400μmol·L~(-1)黄嘌呤则使再灌流性肝损伤明显减轻,其代谢产物尿酸对降低再灌流时丙二醛生成率以及细胞损害均表现出明显的剂量反应关系。     

3,4′,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖甙抑制凝血酶非依赖花生四烯酸途径诱导兔血小板聚集作用及机理

3,4’,5-三羟基芪-3-β-单-D-葡萄糖甙(PD)0.33,0.56,0.95,1.63,2.79mmol·L~1能显著抑制2.3mmol·L~1·s~1凝血酶诱导的家兔洗涤血小板聚集,呈良好的量效关系,PD对1 min和最大血小板聚集抑制率IC_(50)分别为0.57和1.16 mmol·L~1,并能使血小板聚集延迟相延长,血小板聚集速度减慢,PD0.33～1.63mmol·L~1对血小板聚集时TXA_2释放无明显影响,仅在浓度为2.79mmol·L~1时,才明显减少TXA_2释放,PD的作用与阿司匹林不完全相同.这可能与它们的作用机理不同有关,本文还观察了PD0.33 mmol·L~1有抑制凝血酶诱导兔血小板胞浆游离钙离子浓度升高的作用。     

诱导血红素氧化酶表达对乙醇所致人原代肝细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨乙醇暴露与诱导血红素氧化酶(HO 1)表达之间的关系。方法　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察 10 0mmol·L- 1乙醇暴露 9h后谷胱甘肽 (GSH) ,谷草转氨酶 (GOT) ,乳酸脱氢酶 (LDH)和丙二醛 (MDA)的变化以反应人原代肝细胞的氧化损伤 ,用RT PCR及Western印迹方法检测乙醇对人原代肝细胞HO 1mRNA及蛋白表达的影响。结果 10 0mmol·L- 1乙醇暴露 9h后可导致人原代肝细胞明显的氧化损伤 ,肝细胞中的GSH明显降低 ,而MDA明显升高 ,GOT和LDH ,此外 ,急性乙醇暴露下 ,HO 1表达开始应激升高 ,随后慢慢降低 ,肝细胞经HO 1诱导剂预处理后再与乙醇作用 ,能减轻乙醇对肝细胞的氧化损伤作用 ,并且这种作用可被HO 1抑制剂所抵消。结论　诱导HO 1对乙醇所致人原代肝细胞的氧化损伤有保护作用。     

6种黄酮类化合物拮抗肝细胞毒性作用的比较

目的观察芹菜素、木犀草素、白杨素、高良姜素、山奈酚、黄芩素6种结构相近的黄酮类化合物对肝毒性物质诱导的人正常肝细胞株L-02细胞及小鼠原代肝细胞损伤的保护作用,并对其保护肝细胞损伤活性的强弱进行比较及结构分析。方法培养的L-02细胞及小鼠原代肝细胞分别给予10mmol·L~(-1)四氯化碳(CCl_4)、500μmol·L~(-1)牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)、2μmol·L~(-1)川楝素(toosendanin,TSN)和25μmol·L~(-1)千里光碱(senecionine,SENE)诱导细胞凋亡。6种黄酮类化合物(100μmol·L~(-1))分别与细胞预孵15min后,加入肝毒性物质,48h后MTT法检测细胞存活率。结果与空白对照组相比,4种肝毒性药物都能明显降低肝细胞的存活率(P<0.01)。黄酮类化合物处理后,黄芩素和山奈酚能不同程度地提高肝细胞损伤模型组的细胞存活率(P<0.01)。其他4种黄酮类化合物对肝细胞存活率无显著作用。结论黄芩素和山奈酚具有抑制肝毒性物质诱导的L-02细胞和小鼠原代肝细胞毒性的作用,有潜在的抗氧化保肝活性,而芹菜素、木犀草素、白杨素、高良姜素无明显的拮抗肝毒性作用。     

肝细胞凋亡模型的建立

目的　建立体内、外肝细胞凋亡模型 ,为进一步研究药物对肝细胞凋亡的调控作用奠定基础。方法　 (1)采用D GalN +LPS小鼠腹腔注射建立体内肝细胞损伤模型 ;(2 )采用H2 O2 (0 0 5～ 0 4mmol·L-1)与原代大鼠肝细胞共培养建立体外肝细胞损伤模型 ,分别用形态学、DNA电泳和流式细胞术检测等方法。结果　 (1)D GalN(70 0mg·kg-1,ip) +LPS(1μg·kg-1,ip)可明显升高小鼠血中TNF水平和MDA含量 ,使肝线粒体Mn SOD活性降低 ,小鼠肝细胞皱缩变小、核染色质凝聚和DNA片段化 (DNA梯状条带 ) ;(2 )H2 O2(0 1mmol·L-1,1h)可致大鼠肝细胞增殖受抑、肝细胞MDA含量升高 ,肝细胞DNA的AO荧光染色变亮 ,DNA电泳呈片段化 ,流式细胞术肝细胞DNA亚G1峰 (即凋亡峰 )明显升高。结论　采用D GalN +LPS与低浓度H2 O2 可分别建立较理想的体内、外肝细胞凋亡模型     

瑞舒伐他汀与阿托伐他汀治疗老年高胆固醇血症的疗效和安全性比较

目的比较瑞舒伐他汀10 mg·d~(-1)与阿托伐他汀20 mg·d~(-1)治疗老年高胆固醇血症病人的疗效和安全性。方法采用单盲随机对照的前瞻性研究。经4 wk调脂药物洗脱的老年病人67例,空腹血脂符合低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)≥4.14 mmol·L~(-1)且≤6.50 mmol·L~(-1)、三酰甘油(TG)<4.52 mmol·L~(-1)入组标准,随机分为瑞舒伐他汀组(n=33,瑞舒伐他汀10 mg·d~(-1))和阿托伐他汀组(n=34,阿托伐他汀20 mg·d~(-1)),疗程4 wk,观察2药的疗效和安全性。结果治疗4 wk后,瑞舒伐他汀组病人血清LDL-C显著降低[(3.4±s0.9)mmol·L~(-1) vs(2.8±0.8)mmol·L~(-1),P<0.05],总胆固醇(TC)亦显著降低[(5.5±1.1)mmol·L~(-1)vs(4.8±0.9)mmol·L~(-1),P<0.051,HDL-C和TG无明显改变(P>0.05);阿托伐他汀组病人血清LDL-C水平也显著降低,[(3.3±1.2)mmol·L~(-1) vs(2.4±0.7)mmol·L~(-1),P<0.05],TC降低明显[(5.2±1.2)mmo]·L~(-1)vs(4.5±0.6)mmol·L~(-1),P<0.05],HDL-C和TG无显著改变(P>0.05)。2组间比较各指标均无显著差异(P>0.05)。研究期间未发现与药物有关的严重不良事件。结论瑞舒伐他汀和阿托伐他汀均为安全快速降低老年人群LDL-C的候选药物。     

粉防己碱对四氯化碳损伤的肝细胞的保护作用(英文)

目的:研究粉防己碱(Tet)对四氯化碳损伤的肝细胞的保护作用。方法:培养细胞中直接加入CCl_410mmol·L~(-1)造成损伤模型。膜流动性及胞内钙离子浓度分别用DPH,Fura 2-AM进行测定。结果:Tet(1-1000nmol·L~(-1))可以明显抑制CCl_4引起的肝细胞存活率降低和LDH的释放。结论:Tet具有保护肝细胞的作用。Tet的这种作用与其抑制肝细胞的脂质过氧化,稳定钙离子浓度,维持细胞膜流动性有关。     

苦参碱、青蒿素和粉防己碱对豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响

目的:比较苦参碱、青蒿素和粉防己碱对分离的豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响。方法:用酶解法急性分离的豚鼠心室肌细胞先用Fluo 3-AM负载,然后用激光扫描共聚焦法检测单个豚鼠心室肌细胞胞浆钙的荧光强度。结果:(1)KCl 60mmol·L~(-1)可升高心室肌细胞胞浆钙荧光强度,其荧光强度从299±19升高到1389±325(P<0.01)。(2)苦参碱和青蒿素在浓度为100μmol·L~(-1)可使KCl 60mmol·L~(-1)引起的外钙内流增多,其荧光强度分别从301±14和299±16升高到1495±320和1646±308(P<0.05)。(3)粉防己碱1、10及100μmol·L~(-1)和维拉帕米10μmol·L~(-1)可抑制KCl引起的外钙内流。(4)在正常细胞外液中,苦参碱1、10和100μmol·L~(-1)可使细胞内荧光强度增强,其荧光强度分别从303±27,300±32,296±19上升到441±96,504±112,643±126(P<0.05)。(5)在无钙细胞外液中,粉防己碱1和10μmol·L~(-1)可明显抑制咖啡因20mmol·L~(-1)引起的胞浆钙升高(P<0.05)。结论:苦参碱、青蒿素和粉防己碱对豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响不同。青蒿素和苦参碱可加强电压依赖性钙内流,而粉防己碱与维拉帕米作用相似,抑制这种钙内流。苦参碱本身可以促进外钙内流。     

Ebselen拮抗H_2O_2对HL-60细胞的毒性及DNA损伤作用(英文)

目的:以H_2O_2造成人白血病HL-60细胞的氧化损伤,研究含硒化合物Ebselen(Ebs)对氧化性损伤的影响。方法:MTT比色法测定细胞增殖,TBA法检测膜脂过氧化水平,单细胞电泳法确定DNA损伤程度,并用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧自由基(ROS)水平的变化。结果:H_2O_2(100μmol·L~(-1)~)可显著抑制HL-60细胞增殖,引起膜脂过氧化水平升高,Ebs对此表现出浓度依赖性的抑制效应,Ebs20μmol·L~(-1)对H_2O_2 100μmol·L~(-1)引起的膜脂过氧化水平抑制率达56.4％;同样,Ebs对H_2O_2 100μmol·L~(-1)造成的DNA损伤和细胞内活性氧水平的升高均有拮抗效应,也呈明显量效关系。结论:含硒化合物Ebs对由活性氧诱发的细胞毒性和DNA损伤有强的防护效应。     

川芎嗪对血管内皮细胞损伤的保护作用

用 H2 O2 (75μmol· L-1,4h)诱导人胎儿脐静脉内皮细胞 (HUVECs)损伤 ,研究川芎嗪对血管内皮细胞损伤的保护作用 .噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性 ,放射免疫法测定细胞培养液中的内皮素样免疫反应物 (ir- ET)水平及前列环素代谢物6-酮前列腺素 1α(6- keto- PGF1α)含量 ,硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量 ,生化自动分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性 .结果显示川芎嗪 0 .3- 1 .2 mmol·L-1对正常 HUVECs具有促进增殖作用 ,并浓度依赖性拮抗 H2 O2 抑制增殖作用 .川芎嗪 0 .3和 0 .6mmol· L-1使细胞培养液中 6- keto- PGF1α含量升高 ,ir- ET含量降低 ,说明增加前列环素释放 ,减少内皮素基础释放量 ,并部分拮抗 H2 O2 损伤HUVECs所致 LDH,内皮素释放增加 ,前列环素释放减少和 MDA生成增加的作用 .提示川芎嗪具有保护 H2 O2 致血管内皮细胞损伤的作用 ,其机理可能与其抗脂质过氧化作用有关     

牛磺酸抗脂质过氧化作用与调节Ca~（2＋）作用

在培养心肌细胞缺氧－再给氧模型上，发现牛磺酸（２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，终浓度）能显著降低细胞内脂质过氧化物（ＬＰＯ）荧光强度；剂量依赖性地提高心肌细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；以荧光比率法（荧光探针为Ｉｎｄｏ－１－ＡＭ）在粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）上测定细胞内游离Ｃａ２＋荧光比率，结果显示缺氧及再给氧后细胞内Ｃａ２＋荧光比率明显升高，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１牛磺酸能显著减少Ｃａ２＋荧光比率；分别以２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１、０．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｃａ２＋及０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米处理细胞，牛磺酸能降低高Ｃａ２＋引起的细胞搏动加快；而提高低Ｃａ２＋及维拉帕米处理后的细胞搏动。提示牛磺酸对培养心肌细胞再给氧损伤有保护作用，其机理与其提高心肌细胞ＳＯＤ活性、降低细胞内游离Ｃａ２＋浓度及对细胞Ｃａ２＋双向调节作用有关。     

甘草次酸钠对培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

观察甘草次酸钠（ＳＧＡ）对培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。结果：ＳＧＡ０．１０、０．２０和０．４０ｍｍｏｌ·Ｌ－１能减少缺糖缺氧６和９ｈ心肌细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的释放；ＳＧＡ０．１０，０．２０和０．４０ｍｍｏｌ·－１对缺氧再给氧损伤６、９ｈ的心肌细胞有相似的保护作用；ＳＧＡ０．１０、０．２０和０·４０ｍｍｏｌ·Ｌ－１亦可减少氯丙嗪和黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶损伤６，９ｈ及丝裂霉素Ｃ损伤２４ｈ心肌细胞ＬＤＨ的外漏。     

维生素E对氯丁二烯所致大鼠肝损害的预防作用

给大鼠ｉｇ维生素Ｅ１５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，３０ｍｉｎ后ｉｐ氯丁二烯（ＣＢＤ）８０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，持续３ｗｋ，能明显防止由单独ｉｐＣＢＤ而引起的肝细胞色素Ｐ４５０，氨基比林脱甲基酶活性的降低及肝内脂质过氧化产物丙二醛含量升高；还可使线粒休与微粒体α－生育酚含量大幅度升高，并使肝受损指标血清甘胆酸含量下降，病理所见肝细胞变性坏死亦明显减轻。离休肝细胞以ＣＢＤ染毒发现，胞内游离钙浓度明显升高，并有明显的剂量依赖关系。     

度洛西汀对大鼠胸主动脉环舒张功能的影响

目的研究度洛西汀(DLX)对血管舒张功能的影响并探讨其作用机制。方法采用离体血管环灌流装置,观察DLX对大鼠胸主动脉环的作用及不同工具药的影响。结果 DLX对KCl(30 mmol.L-1)和NE(1μmol.L-1)预收缩的血管环具有浓度依赖的舒张作用,对内皮完整和去内皮血管环舒张作用无差异,该舒张作用为非内皮依赖性。在KCl预收缩基础上,加入钾通道阻断剂格列苯脲Gli(10μmol.L-1)、四乙胺TEA(10 mmol.L-1)、氯化钡BaCl2(1 mmol.L-1)、四氨基吡啶4-AP(1 mmol.L-1)和5-HT2受体阻断剂赛庚啶(1μmol.L-1)均不能抑制DLX的舒血管效应;α1受体阻断剂哌唑嗪(1μmol.L-1)组对DLX舒血管作用有抑制作用。在无钙液中,DLX可以明显抑制NE和CaCl2收缩血管的作用。结论 DLX能够浓度依赖性的舒张血管,其机制可能与抑制经由血管平滑肌细胞膜VDC和ROC通道的钙离子内流,拮抗α1受体以及抑制胞质内钙离子释放有关。     

牛磺酸对翻转小鼠离体小肠葡萄糖──钠转运电位的影响

利用翻转小鼠离体小肠囊的方法，观察牛磺酸对葡萄糖－钠转运电位（简称ＰＤ）的影响，借以了解牛磺酸对与糖－钠转运电位密切相关的Ｎａ＋·Ｋ＋－ＡＴＰ酶的影响。结果２．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１和５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的牛磺酸均可提高ＰＤ（Ｐ＜０．０１），而１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１和２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１的牛磺酸则对ＰＤ产生相反的作用（Ｐ＜０．０１），推测不同浓度范围的牛磺酸可对Ｎａ＋·Ｋ＋－ＡＴＰ酶产生双向调节作用。     

吲哚-3-原醇对乙醇损伤性大鼠肝切片的保护作用

目的　采用精密肝切片技术 ,研究十字花科类蔬菜提取物吲哚 3 原醇 (I3C)对乙醇肝损伤的作用及机制。方法　制作大鼠乙醇损伤肝切片模型 ,观察不同剂量I3C对培养液中肝损伤标志酶及肝细胞浆苯胺羟化酶 (ANH)、乙醇脱氢酶 (ADH)活性的影响 ,并进行组织学检查。结果　乙醇5 0mmol·L-1作用肝切片 4h时 ,培养液谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶和谷胱甘肽S 转移酶活性明显升高 ,同时肝细胞浆ANH活性升高、ADH活性降低 ;加入 10 0～ 4 0 0μmol·L-1的I3C后 ,培养液中各酶活性降低的同时 ,肝细胞ANH和ADH活性恢复正常。肝切片病理学检查也证实I3C的保护作用。结论　I3C能有效拮抗乙醇所致的肝损伤 ,其机制与改变乙醇代谢途径有关。     

萘甲异喹对大鼠主动脉平滑肌~（45）Ca转运的影响

萘甲异喹（ＮＩ１，１０μｍｏｌ·Ｌ－１）和硝苯吡啶（Ｎｉｆ０．５μｍｏｌ·Ｌ－１）对大鼠主动脉平滑肌４５Ｃａ溢流无影响，ＮＩ（１～３０μｍｏｌ·Ｌ－１）能浓度依赖地抑制高钾和苯肾上腺素引起的大鼠主动脉平滑肌４５Ｃａ内流，抑制率分别为２７％～８１％和１７％～７７％，ＮＩ（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）尚可明显抑制由苯肾上腺素引起的４５Ｃａ外溢。这些结果提示ＮＩ能抑制平滑肌细胞膜ＰＤＣ和ＲＯＣ两类钙通道及细胞内钙释放。     

过氧化氢对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用及其机理

本文报道了过氧化氢诱发原代培养大鼠肝细胞毒性作用的可能机理．过氧化氢（０．２～１．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）温育６ｈ可以引起大鼠肝细胞坏死性损伤，导致谷丙转氨酶释放增加及细胞存活率下降，加入过氧化氢酶（２５０～１５００Ｕ·ｍＬ－１）及抗氧化剂五味子乙素（１０～１００μｍｏｌ·Ｌ－１）均可降低过氧化氢的毒性作用．加入过氧化氢（０．６和１．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１）可在６ｍｉｎ内使大鼠肝细胞内钙从１８０ｎｍｏｌ·Ｌ－１明显持续升高至７００ｎｍｏｌ·Ｌ－１以上（约３．５倍）．过氧化氢与肝细胞作用３０ｍｉｎ至１ｈ既可导致细胞膜脂质过氧化，表现为丙二醛蓄积及膜流动性下降，明显早于肝细胞发生坏死性损伤的时间．肝细胞胞浆中还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量在加入过氧化氢３０ｍｉｎ后明显降低，可推测肝细胞在后面的温育中对过氧化氢毒性的敏感性增加．以上结果证实过氧化氢诱发的原代培养大鼠肝细胞致死性损伤可能与细胞内钙迅速持续增高，细胞膜脂质过氧化及ＧＳＨ含量下降有关．