异常瘢痕成纤维细胞在低血清及白介素1_β作用下的细胞凋亡研究

目的　明确低血清及白介素 1β(IL - 1β)对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞诱导细胞凋亡的作用。方法　对 6例瘢痕疙瘩、6例增生性瘢痕及 6例正常皮肤标本采用细胞培养、免疫组织化学及凝胶电泳方法 ,通过检测Bax、Bcl 2蛋白及特异性DNA梯形条带 ,对不同成纤维细胞在低血清中及IL 1β作用后的细胞凋亡进行了研究。结果　①在低血清中 ,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的Bax Bcl 2蛋白表达比值没有明显改变 ,但增生性瘢痕成纤维细胞出现程度较轻的细胞凋亡 ,而瘢痕疙瘩成纤维细胞未见明显细胞凋亡 ;正常皮肤成纤维细胞出现细胞凋亡 ,且Bax Bcl 2比值升高 ,表明发生细胞凋亡。②IL 1β作用下 ,三者成纤维细胞均发生凋亡 ,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕凋亡比正常皮肤严重 ,但Bax Bcl 2比值在瘢痕疙瘩升高 ,在正常皮肤降低 ,增生性瘢痕无明显变化。结论　不同的成纤维细胞特性存在差异。     

干扰素α-2b对瘢痕成纤维细胞凋亡的影响

目的:探讨干扰素α-2b对瘢痕成纤维细胞(fibroblasts cell FB)凋亡的影响。方法:利用免疫组织化学和原位杂交方法检测瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮肤体外培养FB的Bax和Bcl-2蛋白以及DNA的变化。结果:瘢痕疙瘩FB的Bcl-2蛋白表达量减少(P<0.05),瘢痕疙瘩FB的Bax、增生性瘢痕及正常皮肤FB Bax和Bcl-2蛋白表达无显著性变化(P>0.05)。三者FB Bax/Bcl-2b比值无明显差异(P>0.05),DNA检测三者FB未见典型的细胞凋亡的梯形条带。结论:干扰素α-2b不能诱导瘢痕疙瘩和增生性瘢痛FB细胞凋亡。     

细胞信号传导在激素和干扰素诱导的增殖瘢痕成纤维细胞凋亡中的作用

目的 探讨对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞在激素和干扰素α-2b(IFNα-2b)作用后是否产生凋亡,以及相关细胞信号传导通路的激活或抑制是否一致.方法 对6例瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及6例皮肤标本,采用细胞培养、免疫组织化学、凝胶电泳及FACE ELISA方法通过检测Bax和Bcl-2蛋白表达、特异性DNA梯状条带以及激活(磷酸化)的ERK1/2和JNK的吸光度A值,对不同成纤维细胞在地塞米松(0.1 mg/ml)和干扰素α-2b(1000U/ml)作用后的细胞凋亡及相关细胞信号传导通路进行了研究.结果 地塞米松可通过激活ERK1/2和JNK细胞传导通路诱导三类不同来源成纤维细胞发生细胞凋亡;干扰素α-2b不能诱导这三类不同来源成纤维细胞发生明显细胞凋亡,且IFN α-2b抑制增殖瘢痕的ERK1/2通路,而对JNK通路无影响,其不引起正常皮肤成纤维细胞ERK1/2和JNK通路的变化.结论 激素类药物和干扰素α-2b对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的作用机制不同.     

腺病毒介导hIL-24基因对瘢痕疙瘩表达Bcl-2等细胞因子的影响

目的：研究重组腺病毒介导hIL-24基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞表达Bcl—2、IL-6和TGF—β1的影响,探讨IL-24基因对瘢痕疙瘩的生物学作用。方法：体外培养人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞,用含有hIL-24基因的腺病毒载体感染瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ABC—ELISa）检测人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞中的Bcl-2、IL-6和TGF—β1的表达水平。结果：瘢痕疙瘩组的Bcl-2、IL-6和TGF-β1表达水平明显高于正常皮肤组;瘢痕疙瘩感染Ad．IL-24组的Bcl-2、IL-6和TGF-β1表达水平都低于腺病毒空载体组和瘢痕疙瘩组。结论：IL-24基因可抑制瘢痕疙瘩戍纤维细胞表达Bcl-2、IL-6和TGF—β1。     

巢蛋白(nestin)在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达

目的探讨巢蛋白（nestin）在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达。方法采用免疫组织化学技术方法检测8例正常皮肤、7例扁平瘢痕、8例瘢痕疙瘩、8例增生性瘢痕中nestin^＋细胞，计数分析nestin^＋细胞在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达。结果①nestin在8例正常皮肤组织中表皮基底细胞和棘细胞、汗腺、毛囊、皮脂腺、血管内皮细胞和7例成纤维细胞的胞浆中表达。nestin在扁平瘢痕、瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织中表皮基底细胞和棘细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞的胞浆及残留的汗腺、毛囊、皮脂腺中表达。②瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织中nestin^＋表皮细胞、nestin^＋成纤维细胞和nestin^＋血管内皮细胞的数量明显高于正常皮肤和扁平瘢痕（P〈0．05），而正常皮肤与扁平瘢痕组织中nestin^＋细胞的表达差异无显著性（P〉0．05）。结论巢蛋白在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕表皮、成纤维细胞和血管内皮细胞中表达增高提示瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的过度增生可能与巢蛋白相关。     

正常皮肤,增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞培养,生物 …

目的 探讨正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞的体外培养、生物学特征及超微结构、阐明其应用价值。方法 采用成纤维细胞体外培养技术，从正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕，瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖，细胞形态，细胞遗传学特征及细胞超微结构方面进行比较研究。结果 体外培养的正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维生长率和形态学相同，细胞遗传学特征和超微结构相似。结论 据此结果和其他学者的观点，认     

瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞对白介素-1β和白介素-6的反应

目的研究瘢痕疙瘩浸润、增生、老化3个不同部位的成纤维细胞性状。方法以6例瘢痕疙瘩为标本,6例正常皮肤为对照,通过细胞培养的疗法研究了瘢痕疙瘩3个不同部位和正常皮肤的成纤维细胞对白介素-1β(IL-1β)(200U/ml)和白介素-6(IL-6)(100U/ml)的反应。结果 IL-1β抑制瘢痕疙瘩增生部成纤维细胞而剌激正常皮肤的成纤维细胞,对浸润及老化部成纤维细胞无明显影响。IL-6抑制所有的成纤维细胞。结论瘢痕疙瘩不同部位和正常皮肤的成纤维细胞对 IL-1β和 IL-6的反应不尽相同。     

正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞培养、生物学特征及超微结构的比较研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞的体外培养、生物学特征及超微结构,阐明其应用价值。方法采用成纤维细胞体外培养技术,从正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖、细胞形态、细胞遗传学特征及细胞超微结构方面进行比较研究。结果体外培养的正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞生长率和形态学相同,细胞遗传学特征和超微结构相似。结论据此结果和其他学者的观点,认为建立体外培养的正常皮肤成纤维细胞的细胞实验模型,可用于瘢痕防治的研究。     

正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞培养、生物学特征及超微结构的比较研究

目的探讨正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞的体外培养、生物学特征及超微结构，阐明其应用价值。方法采用成纤维细胞体外培养技术，从正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞在细胞增殖、细胞形态、细胞遗传学特征及细胞超微结构方面进行比较研究。结果体外培养的正常皮肤成纤维细胞与增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞生长率和形态学相同，细胞遗传学特征和超微结构相似。结论据此结果和其他学者的观点，认为建立体外培养的正常皮肤成纤维细胞的细胞实验模型，可用于瘢痕防治的研究。     

三羟基异黄酮诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的：探讨三羟基异黄酮（Genistein）诱导体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用及相关机制。方法：体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,不同浓度Genistein作用后,MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot法检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果：在Genistein作用下,增生性瘢痕成纤维细胞的生长受到抑制;细胞凋亡率增加,与对照组相比具有显著性差异（P〈0.05）;Bcl-2的表达下调、Bax、Caspase-3表达增加。结论：Genistein可通过诱导凋亡抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,其作用机制可能与影响Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡调控基因的表达有关。     

Effects of steroids,interferon-2B,or interluekin 1B on apoptosis of fibroblasts from keloid,hypertrophic scars,and normal skin and related signal pathway

Wound healing can lead to hypertrophic scar or keloid formation, characterized by an overabundant extracellular matrix. Current established treatment strategies include surgical resection, triamcinolone steroid injection, pressure therapy, silicone therapy, radiotherapy, etc. Cytokines also play a critical role in the regulation of cellular activities and extracellular matrix metabolism. Interferons (IFN) represent a group of antifibroproliferative agents that inhibit fibroblast proliferation and collagen production, and interleukin (IL)-1β also accelerates hypertrophic scar fibroblasts to produce collagenolytic enzymes, leading to tissue destruction. This study addressed the effects of steroid, IFN α-2b, or IL-1β on apoptosis and cell pathway of fibroblasts from keloids, hypertrophic scars, and normal skins and different responses of different fibroblasts. Six samples of keloid, six samples of hypertrophic scar, and six samples of normal skin were, respectively, collected from patients, and fibroblasts from different sources were cultured in vitro. After different fibroblasts were treated with dexamethasone (0.1 mg/ml) or IFN α-2b (1,000 μ/ml) or IL-1β (200 μ/ml), Bax and Bcl-2 were detected in situ by immunohistochemical staining; deoxyribonucleic acid ladders of different fibroblasts were observed by gel electrophoresis, and relative activated (phospho-) extracellular-signal-regulated kinase (ERK) 1/2 and c-Jun N-terminal kinase (JNK) pathways were detected by the method of fast activated cell-based enzyme-linked immunosorbent assay. In media containing dexamethasone, apoptosis took place in fibroblasts from keloids, hypertrophic scars, and normal skins by gel electrophoresis with increased rate of Bax/Bcl-2. Activated (phospho-) ERK1/2 and activated (phospho-) JNK expressions increased in three different fibroblasts. In media containing IFN α-2b, no apoptosis took place in three different fibroblasts without any change of expressions of Bax and Bcl-2 except for the expression of decreased Bcl-2 in fibroblasts from keloids. Activated (phospho-) ERK1/2 expression decreased in fibroblasts from keloid and hypertrophic scars without any changes of activated (phospho-) JNK expression, and IFN α-2b did not affect both activated (phospho-) ERK1/2 and activated (phospho-) JNK expressions in fibroblasts from normal skin. In media containing IL-1β, apoptosis of fibroblasts from keloids was induced by stimulating activated (phospho-) ERK1/2 and activated (phospho-) JNK pathways; IL-1β could not induce apoptosis of fibroblasts from normal skin (radio of Bax/Bcl-2 decreasing) whose activated (phospho-) ERK1/2 pathway was stimulated without any changes of activated (phospho-) JNK expression. Apoptosis in fibroblasts from hypertrophic scars was induced by activating the JNK pathway and prohibiting the ERK1/2 pathway. The effects of steroid, IFN α-2b, or IL-1β on apoptosis of different fibroblasts were different through different cell signal pathways, although all of them were effective for treatment of abnormal scars.     

激素治疗瘢痕的机理研究

目的　明确类固醇治疗瘢痕的具体作用机理。　方法　用细胞培养、免疫组织化学及分子生物学技术对 6例瘢痕疙瘩 ,6例增生性瘢痕患者及 6例正常人皮肤的成纤维细胞在激素作用下的细胞凋亡进行了研究 ;同时对 6例激素局部注射后的在体增生性瘢痕的成纤维细胞的增殖、生物合成及细胞凋亡进行了研究。　结果　 (1)激素可以诱导体外培养的不同成纤维细胞的凋亡 ,同时伴有Bax/Bcl 2蛋白比率的升高。 (2 )局部注射激素可以通过抑制PDGF基因表达而抑制瘢痕成纤维细胞的在体增殖。 (3)局部注射激素可以通过抑制转录而抑制前胶原基因表达从而抑制在体瘢痕成纤维细胞的I、III型胶原合成。 (4)激素局部注射可引起瘢痕c myc和p5 3基因表达增高从而诱导在体瘢痕的细胞凋亡。　结论　激素治疗瘢痕的疗效是通过抑制增殖及生物合成促进细胞凋亡而实现的。     

瘢痕中肌动蛋白及肌球蛋白的实验研究

目的　探讨增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞中肌动蛋白和肌球蛋白Ⅱ的不同表达情况及其与瘢痕挛缩的关系。方法　取增生性瘢痕15例,瘢痕疙瘩10例,正常皮肤15例,用免疫组织化学方法检测其中肌动蛋白和肌球蛋白Ⅱ的表达情况,同时做细胞培养,用流式细胞术检测成纤维细胞中肌动蛋白和肌球蛋白Ⅱ的表达情况。结果　增生性瘢痕肌球蛋白Ⅱ的免疫组织化学染色呈阳性,而瘢痕疙瘩及正常皮肤肌球蛋白Ⅱ的表达均为阴性。增生性瘢痕肌球蛋白Ⅱ的表达较其它两种组织有非常显著性差异(P<0.01),而瘢痕疙瘩和正常皮肤无显著性差异(P>0.05)。流式细胞术检测增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮肤三种组织中肌球蛋白Ⅱ的阳性率分别为(95.11±2.78)%、(16.86±7.11)%及(5.31±1.79)%,增生性瘢痕肌球蛋白Ⅱ表达的阳性率较其它两种组织有非常显著性差异(P<0.01),而瘢痕疙瘩和正常皮肤无显著性差异(P>0.05)。三种组织中肌动蛋白的免疫组织化学染色均为阳性,无显著性差异(P>0.05)。流式细胞术检测三种组织中肌动蛋白的阳性率分别为(77.77±15.43)%、(88.89±10.29)%及(82.92±13.48)%,其表达的阳性率无显著性差异(P>0.05)。结论　瘢痕挛缩与肌球蛋白Ⅱ密切相关,而肌动蛋白在细胞中除作为细胞的收缩蛋白之一外,同时与细胞的活动及运动有关,是细胞生命活动中必不可少的蛋白之一。     

增殖瘢痕成纤维细胞接触后增殖及生物合成特性对异常瘢痕形成的机理

目的 为明确不同异常瘢痕成纤维细胞在体外完全接触后其增殖活性及生物全成功能的特性。方法 以瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤（各6例）为材料，通过细胞培养、免疫组织化学及分子生物学等方法，对不同成纤维细胞在细胞接触及未接触时通过检测增殖细胞核内抗原、P16、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及前胶原基因表达对成纤维细胞的增殖、抑制及生物合成进行了研究。结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞接触表现为细胞交叉重叠及较高的增殖活性及旺盛的生物合成功能，提示其失去了接触性抑制及密度抑制。皮肤成纤维细胞接触后则增殖及生物合成功能明显下降。增生性瘢痕成纤维细胞接触后表现为旺盛的生物合成功能，但其增殖活性处于瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞之间。结论 不同瘢痕成纤维细胞接触后增殖及生物合成的特性可能是形成不同瘢痕的机理之一。     

PTEN和COX-2在病理性瘢痕中的表达及其相关性研究

目的研究抑癌基因PTEN和COX-2在病理性瘢痕中的表达及其相关性。方法应用免疫组化SP法检测正常皮肤24例、扁平瘢痕20例、增生性瘢痕32例和瘢痕疙瘩16例组织中PTEN、COX-2蛋白的表达。结果病理性瘢痕（瘢痕疙瘩、增生性瘢痕）组织中PTEN蛋白表达显著低于正常皮肤、扁平瘢痕（P〈0．05）,而COX-2蛋白表达显著高于正常皮肤、扁平瘢痕（P〈0．05）;4类组织中PTEN蛋白和COX-2蛋白呈负相关（P〈0．05）。结论COX-2及PTEN是病理性瘢痕发生发展中重要的调控因子,两者呈负相关。     

整合素α5β1在病理性瘢痕中的表达及意义

目的　研究整合素α5β1 在病理性瘢痕中的表达情况 ,探讨其在瘢痕发生、发展中的作用和意义。方法　运用SP免疫组化及SPA 胶体金免疫电镜技术对 15例增生性瘢痕、15例瘢痕疙瘩及 10例正常皮肤进行整合素α5β1 的检测 ,并对结果进行半定量及定量分析。结果　在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纤维细胞中整合素α5β1 呈阳性表达 ,较正常皮肤强 (P <0 0 1) ;在瘢痕疙瘩中的表达较增生性瘢痕强 (P <0 0 1)。结论　整合素α5β1 与病理性瘢痕发生、发展关系密切。设法减少整合素α5β1 在成纤维细胞的过度表达或许是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径     

Fibrillin-1 and elastin are differentially expressed in hypertrophic scars and keloids.

Hypertrophic scars and keloids are two forms of excessive cutaneous scarring. Considering the importance of extracellular matrix elements in tissue repair, a morphological and quantitative analysis of the elastic system components (fibrillin-1 and elastin) was performed in normal skin, normal scars, hypertrophic scars, and keloids. In superficial and deep dermis, fibrillin-1 volume density was significantly higher in normal skin compared with normal scars, hypertrophic scars, and keloids. The fibrillin-1 volume density did not show differences between hypertrophic scars and keloids in superficial or deep dermis. In superficial dermis, elastin volume density was higher in normal skin compared with normal scars, hypertrophic scars, and keloids. In deep dermis, the elastin volume density was higher in keloids compared with normal skins, normal scars, and hypertrophic scars. We showed that the distribution of fibrillin-1 and elastin is disrupted in all kinds of scars analyzed, but there are two patterns: one for normal scars and another for excessive scars.     

TNFR1及Bcl-2在病理性瘢痕组织细胞凋亡中的表达及意义

目的　研究TNFR1和Bcl- 2在病理性瘢痕组织细胞中的表达及其对成纤维细胞凋亡与增殖的影响。方法　取手术切除的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩患者各 15例标本 ,正常皮肤 12例标本 ,应用免疫组织化学方法进行检测 ,分析TNFR1和Bcl- 2的表达及分布规律。结果　TNFR1在正常皮肤、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩中成纤维细胞的表达阳性率分别为 10 .70 %、3.2 3%和 7.72 % ,TNFR1在正常皮肤组中的阳性表达率明显高于增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组 ,而瘢痕疙瘩组阳性表达率却又明显高于增生性瘢痕组 ,三组间阳性表达率相互比较差异均有显著意义 (P <0 .0 1) ;Bcl- 2在增生性瘢痕组 (19.35 % )和瘢痕疙瘩组 (48.33% )的阳性表达率明显高于正常皮肤组 (4.0 7% ) ,三组间阳性表达率相互比较差异亦均有显著意义 (P <0 .0 1)。结论　Bcl- 2的持续过表达可能是瘢痕疙瘩呈瘤样增生的原因之一。介导的死亡受体凋亡通路受阻及TNFR1介导核转录因子NF -kB的激活 ,表明TNFR1对成纤维细胞的增殖与凋亡具有双重的调节作用。